酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究

酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究作者摘要關鍵詞實驗目的認識生物體中酶的存在和催化作用，便于我們了解生物體系中酶存在下的合成或分解與普通的有機合成的不同和相同之處，認識一些生物化學過程的特殊性。掌握生物活性物質的提取和保存方法，學會使用儀器分析的手段研究催化反應特別是生物化學體系中催化過程的基本思想和方法。實驗原理許多復雜的有機物合成與分解反應需要在高溫、高強酸堿或減壓等苛刻條件下才能進行，而在生物體內，即使在十分溫和的條件下，如常溫、常壓和近中性溶液中，許多復雜的化學反應卻能順利進行，其根本原因就是由于生物酶的存在。生物酶是一種生物催化劑，按照它的組成，可分為兩類，一類是簡單蛋白質，其活性取決于它的結構，如脲酶、淀粉酶等；第二類的結合蛋白質酶，它需要加入某些非蛋白質組分（稱為輔助因子）后，才能表現(xiàn)出酶的活性。酶蛋白質與輔助因子結合形成的復合物稱為全酶。例如酪氨酸酶是以銅離子為輔助因子的全酶。通常反被酶作用的物質稱為該酶的底物，一種酶催化特定的一個或一類底物的反應，具有很高的選擇性和靈敏度，因而引起廣大分析工作者的重視和興趣。酶已作為一種分析試劑得到應用。特別是有生化、醫(yī)學方面有很高的應用價值。例如生命物質和流體中的特殊有機成分，用其他方法測定有困難，用酶法分析卻有其獨到之處。本實驗從土豆中提取酪氨酸酶，并測定其催化活性。當土豆、蘋果、香焦等的受損面接觸空氣后會產生深棕色的現(xiàn)象是人們都見過的，這是這類物質含有酪氨酸和酪氨酸酶，酶存在于物質內部，當暴露在空氣中后，在氧氣的參與下，會發(fā)生一系列反應。以下是主要的反應過程。由于多巴轉變成多巴紅的反應速率較快，再轉到下一步產物速率則慢得多，故可選擇多巴轉變?yōu)槎喟图t的反應速率的測定來判斷催化反應的活性。因多巴紅具有特殊的顏色，故可用分光光度法測定，在不同的時刻測定某特定波長下的吸光度，用吸光度對時間作圖，從所得的直線斜率求酶的活性。其反應過程如下圖所示酶的活性計算方法：一般定義在優(yōu)化的條件下（包括pH值、離子強度、溫度等），25℃時在1min內轉化1mol底物所需要催化劑的量為活性單位。通過下式可計算酶的活性：，式中，為所用溶液的酶的活性，為最大吸收波長吸光度的變化，t為時間（min），k為多巴紅的摩爾吸收系數(shù)，V為加入酶的體積，進而計算出原料（土豆）中酶的活性：。式中A為原料中酶的活性（注意此處A不是吸光度A），V0為原料所得的酶溶液的總體積，m為原料總質量。三．實驗儀器與試劑1、儀器：分光光度計、離心機、研缽、水浴、秒表2、試劑：二羥基苯丙胺酸（多巴）、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、鹽酸、土豆1、影響酶活性的因素有哪些？答：酶是一種活性蛋白質。因此，一切對蛋白質活性有影響的因素都影響酶的活性。酶與底物作用的活性，受溫度、pH值、酶液濃度、底物濃度、酶的激活劑或抑制劑等許多因素的影響。2、提取物在放置過程中為何會變黑？答：它們的組織中都含有酪氨酸和酪氨酸酶，酶存在于物質內部，當內部物質暴露于空氣中，在氧的參與下將發(fā)生反應，生成黑色素。3、熱處理后酶的活性為何會