微生物標(biāo)本的采集方法課件

感染辦張瑞芳正確的微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送，是準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷的前提

根本原那么1、及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2、在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3、采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作4、采樣后立即送檢5、棉拭子標(biāo)本宜用運(yùn)送培養(yǎng)基6、標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑7、送檢標(biāo)本時(shí)應(yīng)注明來源和檢驗(yàn)?zāi)康?、混有正常菌群的標(biāo)本，不可置肉湯培養(yǎng)如何提高細(xì)菌陽性檢出率

▲、標(biāo)本采集時(shí)機(jī)▲、標(biāo)本采集方法▲、標(biāo)本的質(zhì)與量▲、標(biāo)本的運(yùn)送與保存▲、鏡檢篩選合格標(biāo)本▲、高質(zhì)量、多種別離培養(yǎng)基▲培養(yǎng)環(huán)境一、痰標(biāo)本采集?關(guān)于咳痰標(biāo)本※在抗菌素應(yīng)用前采集標(biāo)本※標(biāo)本采集后1—2h內(nèi)必須立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理※痰標(biāo)本應(yīng)用最早且廣泛，但也是最受爭議的標(biāo)本※采集標(biāo)本過程中要有專業(yè)的醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo)使下呼吸道感染病原診斷成為難題◎細(xì)菌〔包括防線菌與奴卡菌，厭氧菌與分枝桿菌〕◎真菌〔包括肺孢子菌〕◎病毒◎支原體、衣原體與立克次體◎原蟲◎寄生蟲?痰標(biāo)本采集——自然咳痰標(biāo)本患者清晨起床后，用清水或冷開水反復(fù)漱口去除過量的口腔細(xì)菌，有假牙者應(yīng)取下假牙先輕咳，咳出口腔中的痰液棄去，再用力深咳，從氣管咳出呼吸道深部的痰，直接吐入清潔、無菌的容器中無痰可用3%---5%NaCI5ml霧吸約5min導(dǎo)痰也可用物理療法。體位引流等法取痰幾種下呼吸道直接采集的標(biāo)本◎經(jīng)氣管穿刺吸引◎經(jīng)胸壁針刺吸引◎經(jīng)支氣管鏡采樣支氣管肺泡灌洗經(jīng)支氣管鏡直接吸引◎開胸肺活檢◎經(jīng)人工氣道吸引分泌物

?痰標(biāo)本采集——吸痰吸痰：無法咳痰或不合作者、人工氣道者，戴好無菌手套，無菌集痰器分別連接吸引器和無菌吸痰管。按吸痰法將痰吸入無菌集痰器內(nèi)，加蓋送檢經(jīng)支氣管鏡直接吸引：注意嚴(yán)格無菌操作二、尿標(biāo)本的正確采集——清潔中段尿標(biāo)本?應(yīng)保證尿液在膀胱內(nèi)至少停留4h以上。最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本?方法：患者睡前少飲水，清晨起床后先用肥皂水清洗會(huì)陰部，女性應(yīng)用手分開大陰唇，男性上翻包皮，仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排出，棄去，不要停頓，直接將中段尿10---20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢。容器內(nèi)是無菌的，所以翻開容器蓋后，應(yīng)拿在手中，不要隨意亂放。記錄留取標(biāo)本的時(shí)間，保證在留取標(biāo)本后1小時(shí)內(nèi)送至檢驗(yàn)科?尿標(biāo)本正確采集--------留置導(dǎo)尿※消毒導(dǎo)尿管外部〔接頭上端近會(huì)陰部〕，按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液10ml，操作時(shí)注意防止混入消毒劑〔推薦用三步消毒法：75%酒精---2%碘酒----75%酒精脫碘待干〕※注意不能從收集袋中采集尿液三、血培養(yǎng)標(biāo)本采集

1、手清潔：無明顯污染使用速干手消毒液進(jìn)行手衛(wèi)生2、血培養(yǎng)瓶口消毒：75%酒精消毒一遍，待干60s3、靜脈穿刺消毒：推薦用三步法用75%酒精消毒采集部位用2%碘酒從穿刺點(diǎn)向外畫圓消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)5cm以上，涂擦穿刺皮膚2遍，待干75%酒精脫碘：用75%酒精由內(nèi)向外涂抹去碘酒液，待酒精揮發(fā)枯燥后采血?操作本卷須知：從靜脈采血，不建議從動(dòng)脈采血用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭〔如果行第二次穿刺，應(yīng)換針頭〕直接注入消毒后的血培養(yǎng)瓶血抽到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固，立即送檢，切勿冷藏?、軐掖尾裳獞?yīng)在不同部位的血管穿刺以排除皮膚菌叢污染的可能。除非無法作靜脈穿刺取血，否那么不應(yīng)從留置導(dǎo)管內(nèi)取血。⑤抽血前應(yīng)將標(biāo)簽貼于血培養(yǎng)瓶頸上，標(biāo)簽內(nèi)容包括病人根本信息、采血時(shí)間、采血部位。注意不要把標(biāo)簽貼在培養(yǎng)瓶條形碼上，否那么儀器無法識(shí)別。?血培養(yǎng)次數(shù)和采血時(shí)間※采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥物之前進(jìn)行，在患者發(fā)熱期間越早越好，以發(fā)熱頂峰前1h內(nèi)或病人寒戰(zhàn)和發(fā)熱開始時(shí)采集為宜。在10分鐘內(nèi)與不同部位采集外周血2~3份培養(yǎng)〔有助于判斷是污染還是感染，提高檢出陽性率〕※注意報(bào)陽時(shí)間，陽性瓶數(shù)?！诓扇⊙囵B(yǎng)后的2---5天內(nèi)，不需要再重復(fù)采取血培養(yǎng)，因?yàn)檫M(jìn)行治療后的2---5天血液中的感染細(xì)菌不會(huì)馬上消失。

四、對(duì)可疑中心靜脈導(dǎo)管相關(guān)血流感染1、保存導(dǎo)管2、外周靜脈血一份，中心靜脈導(dǎo)管血1分，不用棄去導(dǎo)管起始局部的血液。3、拔除導(dǎo)管：4、2個(gè)外周靜脈血、導(dǎo)管尖端5cm(在進(jìn)行中心靜脈導(dǎo)管血和周圍靜脈血培養(yǎng)時(shí)應(yīng)記錄報(bào)陽時(shí)間〕?血管內(nèi)導(dǎo)管尖段標(biāo)本的采集、送檢程序用75%酒精清潔導(dǎo)管周圍皮膚無菌操作移動(dòng)導(dǎo)管，剪取尖端末端5cm,直接置入無菌試管內(nèi)或直接置入血平板內(nèi)。立即送檢〔不超過15min),防止枯燥如因疑心CRBSI移除皮下埋置式靜脈輸液港，港內(nèi)容物及導(dǎo)管尖端作定量培養(yǎng)。?血培養(yǎng)常見錯(cuò)誤※培養(yǎng)瓶放冰箱※瓶橡膠塞上小蓋未翻開直接穿刺※抽血后未及時(shí)混勻血液凝固五、如何正確運(yùn)送標(biāo)本1、運(yùn)送培養(yǎng)基溫度應(yīng)適當(dāng)2、原那么：保持細(xì)菌活力3、血培養(yǎng)、腦脊液標(biāo)本：應(yīng)及時(shí)送檢；不能及時(shí)送檢的標(biāo)本應(yīng)置溫箱或室溫中，切不能放入冰箱中保存〔除病毒、霉菌、分支桿菌培養(yǎng)樣本置4℃)4、痰、尿等標(biāo)本：如不能及時(shí)送檢可置冰箱，以抑制細(xì)菌生長，但時(shí)間不能超過6h.六、各種標(biāo)本儲(chǔ)存的環(huán)境?標(biāo)本采取后應(yīng)該立即送檢，如不能立即送檢，儲(chǔ)存的環(huán)境要求：※儲(chǔ)存環(huán)境標(biāo)本來源4℃冰箱----痰、尿液、糞便、活檢組織、氣槍沖洗物、導(dǎo)尿管、心包積液、膿和傷口分泌物等※室溫〔25℃〕---血液培養(yǎng)、腦脊液、泌尿生殖道、眼、耳、鼻、喉、血管導(dǎo)管尖、體液、厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本。美國的理念1970年以前，美國的醫(yī)院定期對(duì)空氣和環(huán)境外表〔如地面、墻壁、臺(tái)面〕進(jìn)行培養(yǎng)。到了1970年，CDC和美國醫(yī)院協(xié)會(huì)〔AHA〕主張停止對(duì)環(huán)境的常規(guī)培養(yǎng)，因?yàn)獒t(yī)院感染發(fā)生率與空氣或環(huán)境外表中總的微生物污染水平不相關(guān)。且環(huán)境外表或空氣中微生物含量的允許水平也沒有有意義的標(biāo)準(zhǔn)。1970---1975年，美國有25%的醫(yī)院減少了這種常規(guī)的環(huán)境培養(yǎng)工作--------一個(gè)已經(jīng)持續(xù)的趨勢。什么情況下要求進(jìn)行環(huán)境采樣?四種狀況下要求進(jìn)行環(huán)境采樣：一、是當(dāng)環(huán)境中的宿主或媒介物被認(rèn)為在疾病傳播中有流行病學(xué)意義時(shí)，提供疾病或感染爆發(fā)的依據(jù)二、是在研究過程中進(jìn)行適當(dāng)?shù)沫h(huán)境采樣三、是為了監(jiān)測潛在的危險(xiǎn)環(huán)境條件，確認(rèn)有害的化學(xué)或生物因素的存在，并驗(yàn)證危險(xiǎn)因素的成功消除四、是為了質(zhì)量保證〔QA〕而采樣，以評(píng)估改變感染控制措施取得的效果或是確保設(shè)施或系統(tǒng)按照標(biāo)準(zhǔn)或預(yù)期結(jié)果執(zhí)行。一、物體外表采樣?物體外表細(xì)菌總數(shù)的檢測評(píng)價(jià)▲被污染程度▲主要依據(jù)▲消毒效果物體外表采樣--涂抹法?涂抹法：將5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢測物品外表，用浸有無菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格板內(nèi)來回均勻涂抹整個(gè)方格，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸局部，將棉拭子放入盛有10ml生理鹽水的試管中，充分振搖1min,作適量稀釋后，接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后根據(jù)平板上菌落數(shù)得出物品外表每平方厘米的細(xì)菌數(shù)物體外表采樣--斑貼法?斑貼法：按無菌操作方法將5cm×5cm的無菌濾紙用滅菌生理鹽水浸濕，均勻貼附與物體外表，1min取下放入盛有25ml滅菌生理鹽水試管中，充分振搖1min，作適量稀釋后，接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上作菌落計(jì)數(shù)，同樣得出物品外表每平方厘米的細(xì)菌數(shù)二、消毒物品外表的監(jiān)測：1、采樣時(shí)間：消毒處理后4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行采樣2、采樣面積：被采面積＜100平方厘米，取全部外表；≥100平方厘米，取100平方厘米。3、采樣方法：用5cm*5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板放在被檢消毒物品外表，用含相應(yīng)中和劑無菌洗脫液〔5ml)的棉拭子在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子投入王景洗脫液中，立即送檢。小型物體外表的結(jié)果計(jì)算用cfu/件表示。物表監(jiān)測結(jié)果范圍1、Ⅰ類、Ⅱ類環(huán)境：≤5cfu/cm22、Ⅲ類、Ⅳ類環(huán)境：≤10cfu/cm2?GB15982-2021?醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)?三、手消毒效果監(jiān)測1、采樣時(shí)間：在接觸病人和從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣或消毒后立即采樣2、采樣面積及方法〔棉拭方法〕被檢人五指并攏，用含相應(yīng)中和劑無菌洗脫液〔5ml)的棉拭子在雙手指手監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)范圍1、外科手消毒：≤5cfu/cm22、衛(wèi)生手消毒：≤10cfu/cm2?GB15982-2021?醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)?4.2四、空氣消毒效果監(jiān)測1、采樣時(shí)間段：在消毒處理后，操作前進(jìn)行采樣2、采樣方法：按面積定數(shù)、翻開、蓋搭皿體邊緣3、采樣高度：距地面1.5米〔80-150㎝〕4、布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積≤30㎡，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線三點(diǎn);室內(nèi)面積＞30㎡設(shè)4角及中央5點(diǎn)均距墻壁1米5、收取方法：由外往里逐一收取，防止穿過培養(yǎng)皿從里往外收取五、消毒液監(jiān)測1、采樣方法：用無菌注射器按無菌操作方法:10ml培養(yǎng)基吸取1ml被檢消毒液；5ml培養(yǎng)基吸取0.5ml被檢消毒液，參加培養(yǎng)劑中混勻。2、消毒液標(biāo)準(zhǔn)：使用中滅菌用消毒液：無菌生長使用中皮膚黏膜消毒液染菌量：≤10cfu／ml其他使用中消毒液染菌量：≤100cfu／ml?消毒液監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)范圍1、使用中滅菌劑：無菌生長2、使用中皮膚黏膜消毒液：≤10cfu/ml3、其他使用中消毒液：≤100cfu/ml六、紫外線強(qiáng)調(diào)監(jiān)測方法

1、日常記錄：使用后進(jìn)行消毒時(shí)間累積，使用超過1000小時(shí)的應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測或更換建立紫外線消毒使用登記本，每周用75%酒精擦拭燈管并記錄2、照射強(qiáng)調(diào)：普通30W直管型紫外線燈，新燈管的輻照強(qiáng)度≥90μW／cm2為合格?符合GB19258?要求;使用中紫外線燈照射強(qiáng)度≥70μW／cm2為合格；3、強(qiáng)調(diào)監(jiān)測：每半年一次監(jiān)測前用75%酒精清潔燈管外表，開燈，待其穩(wěn)定5分鐘后，放置強(qiáng)度監(jiān)測卡于燈管下垂直1米處，正面朝上，照射1分鐘，取卡，讀數(shù)。4、本卷須知：做好自身防護(hù)尤其是眼睛；檢測卡要閉光保存。七、高度危險(xiǎn)性醫(yī)療器械八、中度危險(xiǎn)性醫(yī)療器械：

?呼吸機(jī)管路、口表等：≤20cfu/件，

不得檢出致病性微生物

每季度監(jiān)測九、低度危險(xiǎn)性醫(yī)療器械?聽診器、血壓計(jì)袖帶等：≤20cfu/件，

不得檢出致病性微生物

每季度監(jiān)測十、消毒內(nèi)鏡

十一、透析用水

?細(xì)菌：≤100cfu/ml每月監(jiān)測?內(nèi)毒素：≤0.25EU/ml每季度監(jiān)測YY0572-2021?血液透析及相關(guān)治療用水?4.1十二、透析液

?細(xì)菌：≤100cfu/ml每月監(jiān)測?內(nèi)毒素：≤0.5EU/ml每季度監(jiān)測YY0598-2021?血液透析及相關(guān)治療用水?53.54每季度衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測培養(yǎng)基統(tǒng)計(jì)表十三、環(huán)境管理環(huán)境管理?維護(hù)與保養(yǎng)要求空氣處理機(jī)組、新風(fēng)機(jī)組應(yīng)定期檢查，保持清潔。新風(fēng)機(jī)組粗效濾網(wǎng)宜每2天清潔一