人源間充質(zhì)干細胞外泌體

ICS00.000CCSX?團體標準T/XXXX-XXXX人源間充質(zhì)干細胞外泌體HumanmesenchymaIexosomes（征求意見稿）XXXX-XX-XX發(fā)布 XXXX-XX-XX實施中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進會 發(fā)布目次TOC\o"1-5"\h\z前言 III1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 1干細胞 1人源間充質(zhì)干細胞 13外泌體 14外泌體可溯源性資料信息分類標識要求縮略語 15人源間充質(zhì)干細胞要求 26技術(shù)要求 21外泌體制備 26.2關(guān)鍵質(zhì)量屬性 27檢驗方法 21形態(tài) 2數(shù)量、粒徑、濃度 2標志蛋白 3蛋白含量 35微生物 38檢驗規(guī)則 31總原則 42放行檢驗 48.3留樣 48.4復(fù)合檢驗 48.fi判定規(guī)則 49包裝、儲存和運輸 49.1包裝 49.2標簽 49.3存儲 49.4運輸 410廢棄物處理 4附錄A（資料性）外泌體質(zhì)量檢驗報告單 5參考文獻 6本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由提出。本文件由歸口。本文件起草單位：本文件主要起草人：本文件為首次發(fā)布。人源間充質(zhì)干細胞外泌體1范圍本標準規(guī)定了人源間充質(zhì)干細胞外泌體的鑒定方法、檢驗要求、檢驗規(guī)則、標簽、包裝、儲存、運輸和廢棄物處理要求。本標準適用于人源間充質(zhì)干細胞外泌體的制備與檢驗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法WS213丙型肝炎診斷WS273梅毒診斷WS293艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準WS299乙型病毒性肝炎診斷標準中華人民共和國藥典（2020年版）全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》T/CSCB0001-2020干細胞通用要求T/CSCB0003-2020人間充質(zhì)干細胞3術(shù)語和定義3.1干細胞stemceII干細胞是一類具有不同分化潛能，并在非分化狀態(tài)下自我更新的細胞。3.2人源間充質(zhì)干細胞humanmesenchymaIstemcelI一類存在于多種人體組織（如骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等），具有多向分化潛力，非造血干細胞的成體干細胞。這類干細胞具有向多種間充質(zhì)系列細胞（如成骨、成軟骨及成脂肪細胞等）或非間充質(zhì)系列細胞分化的潛能，并具有獨特的細胞因子分泌功能。3.3外泌體exosome由活細胞經(jīng)過“內(nèi)吞、融合、釋放”的一類具有磷脂雙分子層，直徑在30-15Orlnl之間的細胞外囊泡。注：外泌體攜帶多種蛋白質(zhì)、mRNA、IniRNA和脂質(zhì)類物質(zhì)等，廣泛參與細胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞，調(diào)控生理和病理過程。4外泌體可溯源性資料信息分類標識要求縮略語下列縮略語適用于本文件。IIBV——乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）HCMV 人巨細胞病毒（HumanCytomegaIovirus）HCV 丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus)HEBV 人類皰疹病毒(HumanEpstein-BarrVirus)HIV 人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus)HTLV 人類嗜T細胞病毒(HumanT-IymphotropicVirus)TP 梅毒螺旋體(TrePOnemaPallidum)GMP 良好生產(chǎn)規(guī)范(GOOdManufacturingPracticeofMedicalProducts)5人源間充質(zhì)干細胞要求細胞組織來源應(yīng)通過醫(yī)療機構(gòu)或區(qū)域倫理委員會審批，且供者簽署知情同意(應(yīng)用及研究)。應(yīng)建立細胞采集的供者評估和篩選標準、采集方法、運輸標準和交接標準，保證供者和細胞的安全。需提供干細胞的獲取方式和途徑以及相關(guān)的臨床資料，包括供者的一般信息、既往病史、家族史等。既往史和家族史要對遺傳病(單基因和多基因疾病,包括心血管疾病和腫瘤等)相關(guān)信息進行詳細采集。供體應(yīng)篩查確認無HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMv和TP感染。應(yīng)建立細胞培養(yǎng)的工藝標準、質(zhì)量標準、儲存標準和檢驗標準，保證制備外泌體原材料的質(zhì)量可控及安全性。使用的間充質(zhì)干細胞和培養(yǎng)過程中的輔料應(yīng)符合《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則(試行)》中的要求。6技術(shù)要求外泌體制備外泌體的制備應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》中的要求。關(guān)鍵質(zhì)量屬性形態(tài)透射電鏡下多呈杯狀圓形或類圓形的膜性小囊泡，可見囊泡的雙膜性結(jié)構(gòu)，中央為低電子密度成分分布較集中且邊界清晰。2.2粒徑應(yīng)分布在30T50nm范圍內(nèi)，且在該范圍內(nèi)存在粒徑峰值。2.3標志蛋白需同時滿足以下條件。CD9、CD63以及CD81任意兩個表達陽性；Alix.TSgloI任意一個表達陽性;CaIneXin、histone3以及GMl30任意兩個表達陰性。2.4微生物真菌、細菌、支原體、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP、外源病毒因子、內(nèi)毒素為陰性。2.5純度外泌體顆粒數(shù)與蛋白量比值不低于IXl(TIlparticles/mgo7檢驗方法1形態(tài)按照透射電鏡觀察法。數(shù)量、粒徑、濃度按照納米流式檢測法、納米顆粒跟蹤分析儀或納米庫爾特粒度儀分析。標志蛋白按照《中華人民共和國藥典》通則“免疫印跡法”檢測。蛋白含量按照蛋白質(zhì)定量試劑盒(BCA)檢測。生物7.5.1總原則檢驗方法優(yōu)先選擇現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》的方法，若考慮成本、生產(chǎn)量、快速檢測等需求，可以采用非藥典規(guī)定的檢驗方法(即替代方法)，但應(yīng)進行替代方法的驗證，確認其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法。7.5.2真菌按照《中華人民共和國藥典》通則“1101無菌檢查法''檢測。7.5.3細菌按照《中華人民共和國藥典》通則“1101無菌檢查法”檢測。7.5.4支原體按照《中華人民共和國藥典》通則“3301無菌檢查法”檢測。7.5.5HIV按照《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》(WS293-2019)核酸法檢驗。7.5.6HBV按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》核酸法檢驗。7.5.7HCV按照《丙型病毒性肝炎診斷標準》(WS213-2008)核酸法檢驗。7.5.8HTLV按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》核酸法檢驗。7.5.9EBV按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》核酸法檢驗。7.5.10HCMV按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》核酸法檢驗。7.5.11TP按照《梅毒診斷標準》(WS273-2007)核酸法檢驗。7.5.12外源病毒因子按照《中華人民共和國藥典》通則“3302外源病毒因子檢查法”檢測。7.5.13內(nèi)毒素按照《中華人民共和國藥典》通則“1143細菌內(nèi)毒素檢查法”檢測。8檢驗規(guī)則8.1總原則在一個制備周期中，同一來源、同i批次、同一方法、同一生產(chǎn)線制備出來的產(chǎn)品為一批。8.2放行檢驗8.2.1每一批產(chǎn)品中隨機抽取一定數(shù)量最小包裝單元進行檢驗。取樣量一般應(yīng)為檢驗需求量的2倍。抽樣原則根據(jù)實際情況可參考《藥品抽樣原則及程序》（國藥監(jiān)藥管（2019）34號）制定。8.2.2放行檢驗項目應(yīng)包括6.3關(guān)鍵質(zhì)量屬性規(guī)定的所有項目。8.2.3每一批制劑均應(yīng)進行放行檢驗，并附檢驗報告。B.3留樣8.3.1每一批外泌體必須留樣，在無菌條件下留取適量外泌體進行留樣。留樣量一般至少應(yīng)當能夠確保按照相應(yīng)質(zhì)量標準滿足2次全檢，并至少保留一件最小包裝的成品。8.3.2樣本至少保存到產(chǎn)品有效期后一年。3.3留樣的包裝形式應(yīng)當與放行包裝形式一致。8.4復(fù)合檢驗根據(jù)需要，應(yīng)有專業(yè)檢驗機構(gòu)/實驗室進行復(fù)核檢驗。85判定規(guī)則放行檢驗項目全部符合6.3關(guān)鍵質(zhì)量屬性規(guī)定，即判為合格產(chǎn)品；有1項及以上不符合的，則被判為不合格產(chǎn)品。9包裝、儲存和運輸1包裝直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料，應(yīng)選擇低吸附、對外泌體關(guān)鍵質(zhì)量屬性無影響的材料和容器。接與產(chǎn)品接觸的包裝材料應(yīng)滿足無菌、無熱原要求。包裝內(nèi)應(yīng)附外泌體使用說明，最小包裝上應(yīng)附標簽。9.2標簽標簽應(yīng)包括以下內(nèi)容：a.制劑名稱；b.外泌體數(shù)量；c.制劑體積；d.生產(chǎn)日期（年、月、日、時、分）；e.生產(chǎn)批號；f.儲存條件；9.3存儲應(yīng)在低于-80C環(huán)境下儲存，應(yīng)避免反復(fù)凍融或溫度劇烈波動。94運輸凍存的外泌體應(yīng)在干冰環(huán)境下運輸，非凍存的外泌體應(yīng)在2~8℃條件下運輸。10廢棄物處理對于制備、檢驗及研究過程中不合格的外泌體、剩余廢棄間充質(zhì)干細胞或捐贈組織（如供者脂肪、臍帶等），應(yīng)符合國家和地方性法規(guī)的要求，并應(yīng)交由當?shù)丨h(huán)保部門資質(zhì)認定的單位進行最終處置。應(yīng)建立廢棄間充質(zhì)干細胞及外泌體管理文檔，嚴格執(zhí)行管理規(guī)范并詳細記錄。

附錄A（資料性）外泌體質(zhì)量檢驗報告單表格編號:申請單號制備時間申請人制劑批號體積外泌體數(shù)量樣本類型樣本編號樣本代次序號檢驗項目標準規(guī)定/參考值檢驗結(jié)果結(jié)果判定123456檢驗結(jié)論主檢人審核人批準人檢驗日期審核日期批準日期注：本報告經(jīng)涂改、增刪或未加蓋本中心檢驗報告專用章的復(fù)印件均無效參考文獻[1]原國家衛(wèi)生計生委，原食品藥品監(jiān)督總局，干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則(試行)，2015.[2]Minimalinformat