《傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處置技術(shù)規(guī)范 第11部分：細菌類應急檢測技術(shù)（征求意見稿）》

32范：）I 2 2 3 3 5學合理、快速準確開展實驗室應急檢測提供標準操作流程，以規(guī)范全省傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事——第1部分：范圍。規(guī)定了本規(guī)范流程適用的場景和檢測——第2部分：規(guī)范性引用文件。規(guī)定了本規(guī)范引用的既有的法律法規(guī)、技術(shù)方案、標準。1傳染病突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急處置技術(shù)規(guī)范第11部分：細菌類應急檢測技術(shù)GB/T40226-2021環(huán)境微生物宏基因組檢測高通量測WS233-2017病原微生物實驗室生物安全通用準則WST503-2017臨床微生物實驗室血培養(yǎng)操作規(guī)范WST498-2017細菌性腹瀉臨床實驗室診斷操作指南WS271-2007感染性腹瀉診斷標準WST499-2017下呼吸道感染細菌培養(yǎng)操作指南WS288-2017肺結(jié)核診斷YY/T1740.2-2021醫(yī)用質(zhì)譜儀第2部分：基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀又稱“下一代”測序技術(shù)（"Next-generation"sequencingtechnology或大規(guī)模平行測序（Massivelyparallelsequencing，MPS）4實驗室生物安全要求24.2實驗人員、場所、感染性標本處置及消毒等4.3《醫(yī)療廢物管理條例》對醫(yī)療廢物和整個處置流程5.1準備工作5.2質(zhì)量控制間應始終保持痰膜被染色液覆蓋，必要時可續(xù)加染色液。加熱時勿使染色液c)水洗：流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去染色液，瀝e)水洗：流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去脫色液，3h)效果：一張染色合格的玻片，痰膜肉眼觀為亮藍色，無紅色斑分離純化，并進行后續(xù)進一步鑒定，對血培養(yǎng)陰性的標本根據(jù)標本類型選擇相應商品化離心柱法或磁珠法基因組DNA提取試劑盒，具體操作方法按試劑盒說根據(jù)標本類型選擇相應商品化的裂解試劑，按照試純培養(yǎng)的細菌菌落可使用煮沸法進行簡易模板制備。刮取擴大培養(yǎng)的菌苔1接種環(huán)（約2μL～5μL）放入裝有800μL純水或TE的1.5mL離心管內(nèi)，混勻；100℃加熱10min；12,000rpm離心10min；吸取上清即為PCR模板。選擇非人源性內(nèi)參時，應在待核酸提取的標本中加入相應的內(nèi)參模板，以監(jiān)測核酸提取板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下（60-65℃),經(jīng)一個步驟即可完成。當陰性對照、陽性對照結(jié)果、成立時，再進行判斷結(jié)果。常使用以下方法對結(jié)未渾濁判為陰性；2熒光檢測：加入熒光指示劑橙綠變色燃料（OGDye）可與擴增產(chǎn)物結(jié)合，陽性反應4反應體系（PCR反應液、酶、引物、探針及模板）及反應程序（反應溫度、循環(huán)數(shù)及熒光通道）參當陰性對照、陽性對照結(jié)果、內(nèi)參（如有）成立時，再進行結(jié)果判斷。陰性顯示增曲線，陽性顯示Ct值小于或等于病毒核酸檢測試劑盒說明書規(guī)定值，且有S形擴根據(jù)PCR儀器和試劑的要求制備反應體系，使用熒光染料或探針監(jiān)測目標核酸的擴增，最后用專門的軟件進行計8.5多病原檢測平臺（微流體芯片法）測序完成后，對Q20和Q30進行統(tǒng)計，樣本測序的堿基質(zhì)量應同時符合：Q20≥95%、Q30≥每個樣本的高質(zhì)量數(shù)據(jù)（Q20）的數(shù)據(jù)總量5將這些疊連群片段聚集起來，與參考數(shù)據(jù)庫進行比對，得到新的參考基因集。方法外，宜將可用高質(zhì)量測序數(shù)據(jù)比對到組裝好的參考基因集或合適的數(shù)據(jù)庫上，按相似度95%以上，覆蓋度90%以上進行統(tǒng)計，得到基因水平上的相對豐度分布情況，再將注釋到同一物種分類水平的基因傷口）。確認致病微生物時，應考慮檢出微生物是否為感染部位的潛在9免疫學應急檢測技術(shù)9.1膠體金檢測技術(shù)9.1.1實驗過程9.1.2結(jié)果判定9.2.1實驗過程9.2.2結(jié)果判定6通常以空白對照調(diào)零，讀取酶標儀器上各孔450nm或4