《六堡茶鮮葉中噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測(cè) 膠體金免疫層析法》征求意見(jiàn)稿

Q/LB.□XXXXX-XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由梧州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全綜合檢測(cè)中心提出。本文件由廣西農(nóng)業(yè)農(nóng)村產(chǎn)業(yè)振興促進(jìn)會(huì)歸口。本文件起草單位：梧州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全綜合檢測(cè)中心、山東美正生物科技有限公司、廣西益譜檢測(cè)技術(shù)公司、廣西-東盟食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心、蒼梧縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心、蒼梧縣六堡鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心、藤縣濛江鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村中心、蒼梧縣六堡茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司、蒼梧縣六堡鎮(zhèn)官營(yíng)坪六堡茶專業(yè)合作社、蒼梧縣不倚恭州茶業(yè)有限公司、蒼梧縣心怡六堡茶業(yè)有限公司。本文件主要起草人：楊桂強(qiáng)、吳玉鈞、高君、黃海軍、王瀅、趙長(zhǎng)軍、李吉生、田華麗、甘祥鴻、陳小聰、劉楓、劉薏、黃演勛、陳英海、嚴(yán)洲芬、潘金新、石紹明、秦永強(qiáng)、黃利華、黃東喬、譚愛(ài)云。六堡茶鮮葉中噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測(cè)膠體金免疫層析法范圍本文件界定了六堡茶鮮葉中噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測(cè)膠體金免疫層析法的術(shù)語(yǔ)和定義，規(guī)定了原理、試劑耗材、儀器和設(shè)備、試驗(yàn)方法、測(cè)定、結(jié)果分析和性能指標(biāo)的技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于六堡茶鮮葉中噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷5種農(nóng)藥殘留檢測(cè)膠體金免疫層析法。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法NY/T2102茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中殘留的噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和檢測(cè)線(T線)上包被原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線(T線)顏色變淺或消失，通過(guò)檢測(cè)線(T線)與控制線(C線)顏色深淺比較，對(duì)樣品中殘留的噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷進(jìn)行定性判定。試劑耗材除另有說(shuō)明外，本文件使用分析純（含）以上試劑，用水符合GB/T6682要求的二級(jí)水。試劑噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷：純度≥99％，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。甲醇(CH3OH)：ρ=0.79?g/cm3。氯化鈉(NaC1)：ρ=2.165?g/cm3，含量≥99.5％。氯化鉀(KC1)：ρ=1.98?g/cm3，含量≥99.0％。磷酸氫二鈉(Na2HPO4)：ρ=1.064?g/cm3，含量≥98.0％。磷酸氫二鉀(KH2PO4)：ρ=2.44?g/cm3，含量≥98.0％。水胺硫磷（C11H16NO4PS）：ρ=1.275?g/cm3，含量≥90.0％。啶蟲(chóng)脒（CHClN4）：ρ=1.330?/cm3，含量≥98.0％。呋蟲(chóng)胺（C7H14N4O3）：ρ=1.425?g/cm3，含量≥90.0％。噻蟲(chóng)嗪（C8HClN5O3S）：ρ=1.7?g/cm3，含量≥97.0％。吡蟲(chóng)啉（C9HClN5O2）：ρ=1.543?g/cm3，含量≥97.0％。溶液配制10％甲醇溶液吸取10?mL甲醇（5.1.2），用水定容至100?mL，混勻。稀釋液分別稱取8?g氯化鈉（5.1.3）、0.2?g氯化鉀（5.1.4）、1.44?g磷酸氫二鈉（5.1.5）、0.24?g磷酸二氫鉀（5.1.6）于1000?mL燒杯中，加水充分?jǐn)嚢枞芙夂蠖ㄈ葜?000?mL。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、中間液、工作液的制備水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、中間液、工作液100?g/L?的水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)水胺硫磷（5.1.7），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個(gè)月。1?g/L的水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)中間液準(zhǔn)確移取100?g/L的水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.2.3.1.1）100?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。0.01?g/L的水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取1?g/L的水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.2.3.1.2）100μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個(gè)月。啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、中間液、工作液100?g/L?的啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)啶蟲(chóng)脒（5.1.8），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個(gè)月。10?g/L的啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)中間液準(zhǔn)確移取100?g/L?的啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.2.3.2.1）1000?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。1?g/L的啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取10g/L?的啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.2.3.2.1）1000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個(gè)月。呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、中間液、工作液100?g/L的呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)呋蟲(chóng)胺（5.1.9），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個(gè)月。10?g/L的呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)中間液準(zhǔn)確移取100g/L的呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.2.3.3.1）1000?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。2?g/L的呋蟲(chóng)胺標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取呋蟲(chóng)胺10?g/L的水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.2.3.3.2）2000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個(gè)月。噻蟲(chóng)嗪標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、中間液、工作液100?g/L?的噻蟲(chóng)嗪標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)噻蟲(chóng)嗪（5.1.10），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個(gè)月。10?g/L的噻蟲(chóng)嗪標(biāo)準(zhǔn)中間液準(zhǔn)確移取100?g/L?的噻蟲(chóng)嗪標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.2.3.4.1）1000?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。1?g/L?的噻蟲(chóng)嗪標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取噻蟲(chóng)嗪10?g/L的噻蟲(chóng)嗪標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.2.3.4.2）1000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個(gè)月。吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、中間液、工作液100?g/L的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取1.0?g(精確至0.0001?g)吡蟲(chóng)啉（5.1.11），用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。-20?℃冷凍避光保存，有效期12個(gè)月。1?g/L的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)中間液準(zhǔn)確移取100?g/L的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.2.3.5.1）100?μL至10?mL，用甲醇（5.1.2）溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。0.1?g/L?的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取吡蟲(chóng)啉1g/L?的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.2.3.5.2）1000?μL至10?mL容量瓶中，用10％甲醇(5.2.1)溶解，定容至10?mL。4?℃冷凍避光保存，有效期1個(gè)月。儀器和設(shè)備電子天平：分別精確至0.01?g、0.0001?g和0.01?mg。移液器：20?μL～200?μL，100?μL～1000?μL，1?μL～10?mL。旋渦混合器。離心管：1.5?mL、2?mL、5?mL、50?mL。膠體金免疫層析檢測(cè)卡試驗(yàn)方法樣品采集茶葉鮮葉采集按照NY/T2102的規(guī)定執(zhí)行。鮮茶樣品前處理樣品混合液制備選取一定量的有代表性樣本，剪成1?cm左右見(jiàn)方碎片；準(zhǔn)確稱取1?g±0.1?g樣品于15?mL或50?mL離心管中；加入3?mL稀釋液（5.2.2），劇烈振蕩2?min～3?min即為樣品混合液。樣品待測(cè)液的制備水胺硫磷項(xiàng)目測(cè)定的樣品待測(cè)液按照7.2.1的要求執(zhí)行。啶蟲(chóng)脒項(xiàng)目測(cè)定的樣品待測(cè)液吸取5?μL樣品混合液（7.2）于5?mL離心管中，加入3495?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測(cè)液。呋蟲(chóng)胺項(xiàng)目測(cè)定的樣品待測(cè)液吸取10?μL樣品混合液（7.2）于2?mL離心管中，加入1000?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測(cè)液。噻蟲(chóng)嗪項(xiàng)目測(cè)定的樣品待測(cè)液吸取50?μL樣品混合液（7.2）于2?mL離心管中，加入950?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測(cè)液。吡蟲(chóng)啉項(xiàng)目測(cè)定的樣品待測(cè)液吸取50?μL樣品混合液（7.2）于2?mL離心管中，加入700?μL稀釋液（5.2.2），混勻后即為待測(cè)液。空白樣品前處理稱取空白試樣，按照7.2的要求執(zhí)行?？瞻自嚇樱翰缓?種農(nóng)藥的鮮茶葉。加標(biāo)質(zhì)控樣品前處理分別準(zhǔn)確稱取6個(gè)空白試樣1.0?g(精確至0.01?g)置于15?mL或50?mL離心管中，加入適量水胺硫磷（5.2.3.1.3）、啶蟲(chóng)脒（5.2.3.2.3）、呋蟲(chóng)胺（5.2.3.3.3）、噻蟲(chóng)嗪（5.2.3.4.3）、吡蟲(chóng)啉（5.2.3.5.3）標(biāo)準(zhǔn)工作液，使待測(cè)液中的終濃度分別為0.05?mg/kg水胺硫磷、10?mg/kg啶蟲(chóng)脒、20?mg/kg呋蟲(chóng)胺、10?mg/kg噻蟲(chóng)嗪、0.5?mg/kg吡蟲(chóng)啉。再加入3?mL稀釋液（5.2.2），劇烈振蕩2?min～3?min即為樣品混合液,按照7.2.2的要求執(zhí)行。測(cè)定所有操作需在室溫下(20?℃±5?℃)進(jìn)行。鮮茶樣品待測(cè)液測(cè)定水胺硫磷、吡蟲(chóng)啉項(xiàng)目測(cè)定分別吸取7.2.2.1和7.2.2.5的樣品待測(cè)液體100?μL（滴管約3～4滴）于微孔中，緩慢抽吸多次至待測(cè)液與微孔試劑充分混勻；孵育3?min后將微孔內(nèi)所有液體轉(zhuǎn)移至檢測(cè)卡的加樣孔中，加樣同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)；反應(yīng)5min后判讀結(jié)果。啶蟲(chóng)脒、呋蟲(chóng)胺、噻蟲(chóng)嗪項(xiàng)目測(cè)定分別吸取7.2.2.2、7.2.2.3和7.2.2.4的樣品待測(cè)液100?μL（滴管約3～4滴）于加樣孔中，加樣同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，反應(yīng)5min后判讀結(jié)果。空白樣品測(cè)定按照8的要求執(zhí)行。加標(biāo)質(zhì)控樣品測(cè)定按照8的要求執(zhí)行。結(jié)果分析結(jié)果判定陽(yáng)性檢測(cè)線(T線)不顯色或檢測(cè)線(T線)顏色比控制線(C線)顏色淺，表明樣品中噻蟲(chóng)嗪、啶蟲(chóng)脒、吡蟲(chóng)啉、呋蟲(chóng)胺、水胺硫磷殘留的含量高于方法檢測(cè)限，判定為陽(yáng)性。判定示意圖見(jiàn)圖1。目視判定示意圖陰性檢測(cè)線（T線）顏色比控制線（C線）顏色深或者檢測(cè)線（T線）顏色與控制線（C線）顏色相當(dāng)，表明樣品中腐霉利殘留低于方法檢測(cè)限，判定為陰性。判定示意圖見(jiàn)圖1。無(wú)效控制線(C線)不顯色，表明操作不正確或試劑條無(wú)效。判定示意圖見(jiàn)圖1。質(zhì)控試驗(yàn)要求空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。否則表示不滿足質(zhì)控試驗(yàn)要求，此批樣品結(jié)果無(wú)效。性能指標(biāo)靈敏度靈敏度應(yīng)≥95％。特異性特異性應(yīng)≥95％。假陰性率假陰性率應(yīng)≤5％。假陽(yáng)性率假陽(yáng)性率應(yīng)≤5％。性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)附錄A。

（資料性）

定性方法性能指標(biāo)計(jì)算方法性能指標(biāo)計(jì)算表見(jiàn)表A.1。性能指標(biāo)計(jì)算表樣品情況a監(jiān)測(cè)結(jié)果b總數(shù)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性NNN1.=N11陰性NNN2.=N21總數(shù)N.1=N11N.2=N12N=N1.+N2