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第第頁土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)試劑盒說明書土壤α葡萄糖苷酶(SolidαGlucosidase,SαGC)試劑盒說明書微量法100管/48樣注意:正式測定前務必取23個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:SαGC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。測定原理:SαGC能夠催化對硝基苯αD吡喃葡萄糖苷生成對硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。自備用品:可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。試劑組成和配制:試劑一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自備)試劑二:粉劑×1瓶,20℃保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍20℃保存;試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存;試劑四:液體15mL×1瓶,4℃保存;樣品處理:新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干,過30~50目篩。測定步驟:1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。2、加樣表試劑名稱測定管對照管風干土樣(g)0.020.02試劑一(μL)1010室溫振蕩混勻15min90℃振蕩混勻15min試劑二(μL)130蒸餾水130試劑三(μL)160160混勻,37℃振蕩反應1h后,90℃水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻。10000g25℃離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)上清液(μL)7070試劑四(μL)130130充分混勻,室溫靜置2min后,400nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管A對照管。每個測定管設一個對照管。SαGC活力計算:a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準條件下測定的回歸方程為y=0.0032x0.0027;x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。SαGC活力(μmol/d/g土樣)=(ΔA+0.0027)÷0.0032×V反總÷W÷T=112.5×(ΔA+0.0027)T:反應時間,1h=1/24d;V反總:反應體系總體積:3×104L;W:樣本質量,0.02g。b.用96孔板測定的計算公式如下標準條件下測定的回歸方程為y=0.0016x0.0027;x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。SαGC活力(μmol/d/g土樣)=(ΔA+0.0027)÷0.0016×V反總÷W÷T=225×
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