高效液相色譜儀常用檢測(cè)器的種類 液相色譜操作規(guī)程

第第頁高效液相色譜儀常用檢測(cè)器的種類液相色譜操作規(guī)程檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。1.紫外可見吸收檢測(cè)器（ultraviolet－visiblede檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。1.紫外可見吸收檢測(cè)器（ultraviolet－visibledetector，UVD）紫外可見吸收檢測(cè)器（UVD）是HPLC中應(yīng)用廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見光度計(jì)。

（1）紫外吸收檢測(cè)器紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng)，并安裝一個(gè)光柵型單色器，其波長(zhǎng)選擇范圍寬（190nm～800nm）。它有兩個(gè)流通池，一個(gè)作參比，一個(gè)作測(cè)量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號(hào)輸出，輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān)。局限：流動(dòng)相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動(dòng)相，每種溶劑都有截止波長(zhǎng)，當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)。

（2）光電二極管陣列檢測(cè)器（photodiodearraydetector，PDAD）也稱快速掃描紫外可見分光檢測(cè)器，是一種新型的光吸收式檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時(shí)檢測(cè)由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長(zhǎng)的光信號(hào)，然后對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速?zèng)Q定具有較佳選擇性和靈敏度的波長(zhǎng)。單光束二極管陣列檢測(cè)器，光源發(fā)出的光先通過檢測(cè)池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來，每幅圖象僅需要10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。

2．熒光檢測(cè)器（fluorescencedetector，F(xiàn)D）熒光檢測(cè)器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器，可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測(cè)。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。

近年來，采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。

3.示差折光檢測(cè)器（differentialrefractiveIndexdetector，RID）示差折光檢測(cè)器是一種濃度型通用檢測(cè)器，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測(cè)定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè)，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。4.電化學(xué)檢測(cè)器（elec）chemicaldetector，ED）電化學(xué)檢測(cè)器主要有安培、極譜、庫(kù)侖、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器，屬選擇性檢測(cè)器，可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無機(jī)和有機(jī)陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中，電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用較多。

電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是：①靈敏度高，最小檢測(cè)量～般為ng級(jí)，有目可達(dá)pg級(jí)；

②選擇性好，可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)；③線性范圍寬，一般為4～5個(gè)數(shù)量級(jí)；

④設(shè)備簡(jiǎn)單，成本較低；⑤易于自動(dòng)操作。

5.化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器（c。iluminescencedetector，CD）化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。這種檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g。儀器網(wǎng)-專業(yè)分析儀器服務(wù)平臺(tái),實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備交易網(wǎng),儀器行業(yè)專業(yè)網(wǎng)絡(luò)宣傳媒體。相關(guān)熱詞：等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。日常維護(hù)和保養(yǎng)貯液器：清潔是保持流動(dòng)相貯液器正常使用的關(guān)鍵，要盡可能使用HPLC級(jí)的溶劑和試劑含有緩沖鹽和非HPLC級(jí)的流動(dòng)相一定要通過0.5μm的過濾器以除去其中的微粒物質(zhì)。改變流動(dòng)相時(shí)應(yīng)防止交叉污染，陳舊的流動(dòng)相和用久了的試劑瓶應(yīng)定期廢棄，防止生長(zhǎng)微生物和組分改變。貯器內(nèi)壁定期清洗，里面的附件要經(jīng)常更換。泵：泵的密封圈是最易磨損的部件，密封墊圈的損壞可引起系統(tǒng)的許多故障。有人建議3個(gè)月?lián)Q一次墊圈。但也不能一概而論，要看墊圈的材料質(zhì)量，使用壓力大小、保養(yǎng)以及緩沖液的情況而定。采取下列措施可以延長(zhǎng)墊圈的壽命：1每天要把泵中的緩沖液體洗干凈，防止鹽沉積，泵要浸在無緩沖液的溶液或有機(jī)溶劑中；2用HPLC級(jí)試劑；3用燒結(jié)不銹鋼沉子。要注意防止因泵阻塞造成壓力過高而損壞柱塞桿或燒壞電機(jī)。進(jìn)樣器：停機(jī)后要用溶劑沖洗干凈進(jìn)樣器內(nèi)殘留的樣品和緩沖鹽，防止無機(jī)鹽沉積和樣品微粒造成閥轉(zhuǎn)子面磨損或阻塞，嚴(yán)禁用氣相色譜那樣的尖針頭進(jìn)樣。色譜柱：防止柱性能下降有以下幾方面的措施：1溶劑的化學(xué)腐蝕不能太強(qiáng)；2避免微粒在柱頭沉降；3泵上要裝壓力限制器，防止壓力過高沖擊大；4流動(dòng)相PH>7時(shí)用大粒度同種填料作預(yù)柱；5柱頭加燒結(jié)片不銹鋼濾片，需要時(shí)加保護(hù)柱；檢測(cè)器：要保持檢測(cè)器清潔，每天用后連同色譜柱柱一起沖洗。提倡不定期用強(qiáng)溶劑反向沖洗檢測(cè)池（拆開柱）。用脫過氣的流動(dòng)相，防止空氣泡卡在池內(nèi)。檢測(cè)器燈有一定的壽命，不用時(shí)不要打開燈。操作極限：每臺(tái)泵都有壓力上限，系統(tǒng)達(dá)到預(yù)定值時(shí)會(huì)自動(dòng)停泵，這樣能保護(hù)柱和其他硬件。上限壓力設(shè)在20MPa以下，泵墊圈和進(jìn)樣閥耐用，但壓力上限設(shè)定過低會(huì)延長(zhǎng)分析時(shí)間。根據(jù)檢驗(yàn)設(shè)定壓力上限在15～20MPa為宜。新柱的壓力比較低，隨著使用時(shí)間加長(zhǎng)而壓力上升，所以設(shè)定的壓力上限也應(yīng)變化。在梯度洗脫中應(yīng)考慮因流動(dòng)相的變化而引起的壓力變化，避免上限壓力過低造成中途停泵。帶有微機(jī)的系統(tǒng)還需設(shè)定壓力下限，一般在0.5～1MPa，在貯器中流動(dòng)相被抽干或嚴(yán)重滲漏時(shí)會(huì)自動(dòng)停泵。有時(shí)下限壓力設(shè)在0也會(huì)自動(dòng)停泵。液相色譜速率理論方程式

在范第姆特方程模型基礎(chǔ)上，根據(jù)液相色譜的特點(diǎn)作了某些修正，得到如下幾種液相色譜速率理論方程式。

1、高效液相色譜速率理論方程式：其中渦流擴(kuò)散項(xiàng)：分子擴(kuò)散項(xiàng)：傳質(zhì)阻力項(xiàng)：其中包括：稱為流動(dòng)的流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力系數(shù)，稱為滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力系數(shù)，稱為固定相中的傳質(zhì)阻力系數(shù)。

高效液相色譜速率理論方程詳細(xì)表達(dá)式：式中，

dp——色譜柱填料平均粒徑；

df——固定相有效液膜厚度；

U——流動(dòng)相平均流速；

Dm——組分分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)；

Ds——組分分子在固定相中的擴(kuò)散系數(shù)；

wm——由色譜柱和填充的性質(zhì)所決定的系數(shù)；

ws——與容量因子k有關(guān)的系數(shù)；

wsm—