組培室設(shè)計與管理（植物組織培養(yǎng)課件）

組培室設(shè)計與管理組培室設(shè)計組培室管理組培室管理【知識點】掌握常用消毒劑的配制方法。

技能點】能熟記組培常用器材的清洗要求及其步驟素質(zhì)要求：具有服務(wù)“三農(nóng)”意識、創(chuàng)新意識、環(huán)保意識、安全意識、

團隊意識；具有任務(wù)執(zhí)行力，規(guī)范操作、一絲不茍的工作態(tài)度。一、環(huán)境日常管理1.注重員工培訓(xùn)組培員工的素質(zhì)高低直接決定了組培工作的效率與質(zhì)量。

培訓(xùn)內(nèi)容包括職業(yè)道德、無菌觀念、團隊精神、組培知識、操作規(guī)范、管理制度等。2、加強日常管理（1）實行崗位責任制，明確崗位職責。（2）建立組培室管理制度，加強員工的安全衛(wèi)生教育，嚴格控制人員出入。（3）藥品、器械等分類存放，嚴格藥品使用登記制度。（4）設(shè)施設(shè)備維護與保養(yǎng)專人負責，安全使用，定期檢修，發(fā)現(xiàn)安全隱患及時排除。（5）上下工序交接記錄填寫認真、規(guī)范。（6）定期進行空間消毒滅菌，培養(yǎng)室分區(qū)、分類擺放瓶苗，標識清晰，污染的瓶苗及時清除。（7）要求員工注意個人衛(wèi)生，規(guī)范操作，監(jiān)督互查，相互配合，協(xié)同一致，誠實守信。3.空間消毒（1）藥液噴霧。植物組織培養(yǎng)中常用70%酒精對接種室、培養(yǎng)室空間及墻壁進行噴霧消毒。用一些藥劑涂擦、噴霧滅菌物體表面，如臺面、桌面、墻面、雙手、植物材料表面等。70%的酒精，0.25-1%的新潔爾滅（苯扎溴銨/溴化苯烷銨）噴灑培養(yǎng)室、接種室或其他實驗室，可有效殺死空氣中的雜菌，同時可降塵。（2）藥劑熏蒸?？刹捎帽姿峒訜釋嶒炇铱臻g進行熏蒸消毒。冰醋酸也可進行加熱熏蒸，但效果不如甲醛。熏蒸時，房間可預(yù)先噴濕以加強效果。（3）射線消毒。常用的射線為紫外線,紫外線可損傷皮膚和角膜，應(yīng)注意防護。（4）空氣污染檢驗①平板檢驗法。②斜面檢驗法。二、組培常用器械消毒1.高壓滅菌鍋的使用①檢查儀器儀表（壓力表為0）。②檢查滅菌鍋安全水位。若水位不足往外鍋加水至安全水位。濕熱滅菌方法③關(guān)閉上排氣閥，在內(nèi)鍋內(nèi)放入待滅菌物品，蓋上鍋蓋，打開放氣閥，對角擰緊鍋蓋螺帽后關(guān)閉放氣閥。④接通電源打開開關(guān)，設(shè)置滅菌溫度和滅菌時間分別為121℃,20min。待壓力上升至0.05MPa時緩慢打開上排氣閥，將冷空氣排盡為0時，關(guān)閉排氣閥。⑤繼續(xù)加熱待溫度上升至121℃、0.1MPa時間維持20min后關(guān)閉電源，打開上排氣閥，待壓力表為0MPa后，打開放氣閥，依次打開鍋蓋，取出物品水平放。滅菌注意：滅菌方法與藥劑要根據(jù)不同材料不同目的適當選用，濕熱滅菌培養(yǎng)基要在制備后24h內(nèi)完成滅菌工序。2.真空泵用以輔助過濾除菌。常用于植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和抗生素。一般利用孔徑為0.22μm微孔濾膜來進行除菌。過濾滅菌方法液體過濾液體量大時，使用抽濾裝置或者真空泵；液量小時，用注射器等小型器具。微孔過濾由醋酸纖維素和硝酸纖維素混合制成。濾膜有吸附作用，在過濾滅菌液體較多時，應(yīng)勤換濾膜。空氣過濾組培車間要求嚴格規(guī)模較大，可采用空氣過濾系統(tǒng)對整個空氣過濾滅菌，但投入較高。無菌操作環(huán)境（超凈工作臺）采用空氣過濾滅菌，創(chuàng)造局部的無菌環(huán)境。3.烘箱在烘箱內(nèi)加熱烘烤至160～170℃，維持2h可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物，適用于耐高溫的玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器、接種器械、工作服等）。干熱滅菌方法——干熱滅菌的物品要預(yù)先洗凈并妥善包扎，放入箱內(nèi)，以免滅菌后取用時重新污染?！蔁釡缇?，待充分冷涼，才能打開烘箱，以免因驟冷而使器皿破裂，防止強烈的冷熱對流使冷空氣被吸入包扎層內(nèi)引起污染。注意：1、玻璃器皿等在滅菌前必須正確包裹和封口，以保證玻璃器皿滅菌后不被外界雜菌所污染。2、物品放入干燥烘箱內(nèi)，不能擺放過密，以免妨礙空氣流通，不得使器皿與烘箱內(nèi)層底板直接接觸。使用對象金屬器械如鑷子、剪子、解剖刀（針）等。灼燒滅菌方法4.殺菌器金屬器械與材料直接接觸的部分，需在酒精燈外焰部分灼燒充分，直至尖端部分燒紅為止。高溫滅菌器，溫度達200-300℃，滅菌時間30秒以上。；冷卻后使用。灼燒滅菌方法注意問題在無菌操作時，把鑷子、剪刀等浸入70%的酒精廣口瓶中，使用前取出在酒精燈火焰中灼燒。三、組培常用器具洗滌與滅菌1.清洗目的：防止油污、重金屬離子、酸堿等有害物質(zhì)殘留在器皿內(nèi)，影響培養(yǎng)物生長。2.清洗方法：1）新玻璃器皿：用1%左右的稀鹽酸將可溶性無機物除去，也可用洗滌劑洗滌。2）用后玻璃器皿：需立即浸入水中（如有污染，應(yīng)先用70%的酒精浸泡滅菌），再選擇堿洗法/酸洗法洗滌。3）有微生物污染的器皿：必須先煮沸或高溫高壓殺菌，否則會產(chǎn)生孢子飛揚，污染環(huán)境。溫熱的洗衣粉溶液清洗，再用60-70℃的熱水清洗，自來水沖洗干凈后，再用蒸餾水漂洗兩遍。當玻璃器皿上粘有蛋白質(zhì)或其他有機物時，用稀鹽酸將玻璃器皿浸泡4h或較長時間（最好過夜），將可溶性的有機物除去，再用水清洗。酸洗法堿洗法洗液的配置肥皂液洗衣粉水重鉻酸鉀溶液稱40g工業(yè)用重鉻酸鉀加入少量水中，加熱溶化，待冷卻后再慢慢往上述水溶液中加入工業(yè)用濃硫酸，邊加邊攪拌，最后定容到1000ml，加蓋備用。重鉻酸鉀洗液可以重復(fù)使用，直至溶液變?yōu)榫G色（因腐蝕性危險，現(xiàn)很少用）。3.玻璃器皿的洗滌對新購或使用過但未污染的玻璃器皿采用酸洗法或堿洗法進行清洗。新購玻璃器皿或使用過未污染的洗滌方法1%稀鹽酸或洗液浸泡4h以上自來水清洗10%-20%溫熱洗衣粉液刷洗蒸餾水沖洗或改用洗滌劑洗滌酸洗法60%-70%熱水或自來水清洗倒扣在晾干架或工作臺上晾干或烘干無塵柜中保存堿洗法污染物洗滌前的處理：曾裝有污染組織或培養(yǎng)基的器皿，不打開瓶蓋，先把它們放入高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，減少污染微生物?；蛴?0%的酒精（稀酸稀堿）滴入覆蓋污染物表面幾分鐘。丟棄污染的一次性消耗品，應(yīng)先高壓蒸汽滅菌，以降低污染源。使用過的玻璃器皿有污染的洗滌方法自然水浸泡去除殘余培養(yǎng)基或殘渣蒸餾水沖洗1次后晾干或烘干洗滌劑或洗衣粉水溶液浸泡并刷洗自來水沖洗或清水漂洗干凈無塵柜中保存自來水沖洗1次玻璃器皿的存放將洗干凈的器皿置于烘箱內(nèi)在75℃下干燥或常溫下晾干，然后放于防塵柜中。在加熱干燥或常溫晾干時，各種玻璃容器都應(yīng)口朝下放，以便使里面的水能很快流盡。透明锃亮內(nèi)外壁水膜均一不掛水珠無油污和有機物殘留洗滌標準案例移液管、量筒和容量瓶的洗滌方法操作步驟：洗滌液中浸泡2h以上→取出在流水中沖洗半小時→蒸餾水沖淋1次。4.吸管等難洗的用具：可以在洗液中浸泡后再洗。5.金屬用品：用酒精擦干并保持干燥。6.膠皮塞、膠皮管：用合成洗滌液洗滌，因其吸附力較強，需多次清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗。7.常用藥劑的配制1)酒精稀釋。酒精稀釋的原理是稀釋前后純酒精量相等。即原酒精濃度×取用體積=稀釋后濃度×稀釋后體積。比如：原酒精濃度為95%，欲配成70%酒精配制方法為：取95%酒精70ml，加蒸餾水至95ml，搖勻，即為70%的酒精。這里原酒精濃度為95%，取用體積為Xml，稀釋后濃度為70%，稀釋后體積為95ml，代入上述公式，95%×X=70%×95，計算可得X=70。2.1mol/L氫氧化鈉的配制。（NaOH摩爾質(zhì)量=分子克數(shù)=40）解答：稱40gNaOH加蒸餾水1000ml，即為1mol/LNaOH。3.1mol/L鹽酸（HCl）的配制。具體配制鹽酸的濃度時，應(yīng)考慮原濃酸的比重濃度。如配制1mol/LHCl100ml，比重為1.19，質(zhì)量百分比38%。1.日常洗滌方法2.玻璃器皿洗滌標準3.配制70%酒精3.配制1mol/L氫氧化鈉小結(jié)

組培室設(shè)計與管理組培室設(shè)計組培室管理組培室設(shè)計【知識點】組培室的構(gòu)成及其功能【技能點】能熟記常用儀器的使用方法、注意事項和保養(yǎng)方法

素質(zhì)要求：具有服務(wù)“三農(nóng)”意識、創(chuàng)新意識、環(huán)保意識、安全意識、

團隊意識；具有任務(wù)執(zhí)行力，規(guī)范操作、一絲不茍的工作態(tài)度。一、組培室的基本組成

1、設(shè)計原則1）根據(jù)培養(yǎng)目的、培養(yǎng)規(guī)模、資金能力以及現(xiàn)有條件等來確定工廠（實驗室）的大小，體現(xiàn)適用性原則。2）根據(jù)生產(chǎn)工藝流程和操作步驟來確定實驗室布局，體現(xiàn)合理性原則。3）防止污染，體現(xiàn)環(huán)保型原則。4）降低成本，體現(xiàn)經(jīng)濟實用性原則。2、環(huán)境要求選址空氣清新、光線充足、通風良好、環(huán)境清潔、水電齊備、交通便利的地方。分室名稱功能貯藏室主要用于存放各種化學藥品、儀器設(shè)備、玻璃器皿等洗滌室培養(yǎng)容器和實驗用具等洗滌、干燥和貯存；培養(yǎng)材料的預(yù)處理；組培苗出瓶、清洗與整理等配制室母液和培養(yǎng)基的配制；培養(yǎng)材料的預(yù)處理滅菌室培養(yǎng)基、接種工具與用品的消毒滅菌接種室離體植物材料的表面滅菌、接種；培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)接等無菌操作。培養(yǎng)室培養(yǎng)離體材料緩沖室以防止帶菌空氣直接進入接種室和工作人員進出接種室時帶進雜菌表1組培室各分室的功能實驗室設(shè)計案例(討論)二、組培常用基本器械

天平、顯微鏡、酸度計、電磁爐、超凈工作臺、干燥箱、培養(yǎng)架、蒸餾水發(fā)生器、冰箱、空調(diào)、加熱器、高壓滅菌、恒溫箱等。1.天平：分析天平，電子天平稱量微量元素、維生素、激素等稱量大量元素、糖、瓊脂等2.顯微鏡：解剖鏡、生物顯微鏡等生物顯微鏡3.酸度計、pH試紙用于校正培養(yǎng)基的pH。4.電磁爐5.無菌超凈工作臺6.培養(yǎng)基灌裝機及洗瓶機8.除濕機7.空調(diào)機9.冰箱10.純水機與蒸餾水發(fā)生器11.滅菌設(shè)備干熱消毒的普通柜（烘箱）用于干燥洗凈后的玻璃器皿，用80℃的溫度烘干組織培養(yǎng)植物材料以測定干物質(zhì)。高壓滅菌鍋

用于培養(yǎng)基、蒸餾水和接種器械的滅菌消毒。工作原理：在密閉的蒸鍋內(nèi)，0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達121℃。12.培養(yǎng)設(shè)備光照培養(yǎng)架照度計13.恒溫箱又稱培養(yǎng)箱14.搖床與轉(zhuǎn)床表2組培室主要儀器設(shè)備類別儀器設(shè)備名稱貯藏設(shè)備藥品柜、櫥柜、醫(yī)用小平推車等洗滌設(shè)備干燥箱、超聲波清洗器、洗瓶機、蒸餾水發(fā)生器、工作臺、醫(yī)用小平推車等培養(yǎng)基配制設(shè)備普通冰箱、低溫冰箱、電子天平、托盤天平、工作臺、藥品柜、醫(yī)用小平推車等滅菌設(shè)備高壓滅菌鍋、液體過濾滅菌裝置、干熱消毒柜、烘箱、微波爐、噴霧消毒器、工作臺等接種設(shè)備超凈工作臺、普通解剖鏡、接種器具殺菌器、配電盤、醫(yī)用小平推車等培養(yǎng)設(shè)備空調(diào)機、加濕器、除濕機、人工氣候箱或光照培養(yǎng)箱、搖床、轉(zhuǎn)床、振蕩器、光照時控器、照度儀、換氣扇、配電盤等觀察與生化鑒定設(shè)備普通顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、普通解剖鏡、低溫冰箱、培養(yǎng)箱、切片機、水浴鍋、低溫高速離心機、電子分析天平、細胞計數(shù)器、PCR儀、酶聯(lián)免疫檢測儀、分子成像儀、液相色譜儀、電激儀、毛管電泳儀、圖像拍攝處理設(shè)備、電腦、工作臺等表3組培室常用玻璃器皿與器械用品類別玻璃器皿與器械用品名稱貯藏用品化學試劑瓶、化學藥劑、各種玻璃器皿等洗滌用品晾干架、洗液缸、水槽、試管刷、周轉(zhuǎn)箱培養(yǎng)基配制用品電爐、試管、培養(yǎng)瓶、試劑瓶、燒杯、培養(yǎng)皿、移液管、移液槍、移液管架、注射器、吸管、滴瓶、量筒、容量瓶、分液漏斗、不銹鋼鍋、磁力攪拌器、周轉(zhuǎn)箱、玻璃棒、打火機或火柴、記號筆、計算器、標簽紙、蒸餾水桶、尼龍繩、聚丙烯塑料封口膜、棉塞、牛皮紙、紗布等接種與滅菌用品酒精燈、噴壺、紫外光燈（40W）、鉆孔器、接種工具架、不銹鋼篩網(wǎng)、接種針和接種鉤、手術(shù)剪（12cm、15cm、18cm）、解剖刀（4號刀柄、21-23號刀片）、手術(shù)鑷（扁頭鑷子20-25cm、鈍頭鑷子20-25cm、尖頭鑷子16-25cm、槍形鑷子等20-25cm）、培養(yǎng)皿（∮6cm、∮9cm、∮12cm）、打火機或火柴、記號筆、標簽紙、周轉(zhuǎn)箱、無菌服、口罩、實驗帽等培養(yǎng)用品培養(yǎng)瓶、光照培養(yǎng)架、熒光燈、LED燈等觀察與生化鑒定用具載玻片、蓋玻片、染色片、滴瓶、燒杯、試管、玻璃試劑瓶等三、組培常用器皿與用具1.器皿1)培養(yǎng)器皿2)