生化分析儀的校準(zhǔn)

生化分析儀的校準(zhǔn)

重慶醫(yī)科大學(xué)附一院陳宏礎(chǔ)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果的可靠性是由其精密度、準(zhǔn)確性及可比性所決定的，一般必需從下幾方面著手。

1.選好測(cè)定方法；2.購(gòu)買質(zhì)量過(guò)硬的試劑盒；3.要有質(zhì)優(yōu)的測(cè)試儀器；必需進(jìn)行正確的校準(zhǔn)；還要規(guī)范化操作；搞好過(guò)硬的室內(nèi)質(zhì)量控制；積極參加室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)；還要有一支素質(zhì)高的隊(duì)伍；

現(xiàn)就生化分析儀的校準(zhǔn)問(wèn)題提出個(gè)人看法。一、校準(zhǔn)的重要性和必要性首先必須明確生化分析儀不論如何先進(jìn)，它還是一個(gè)比較器，它測(cè)試出來(lái)的標(biāo)本結(jié)果是隨著標(biāo)準(zhǔn)限的設(shè)置不同而變化的。二、確立測(cè)定系統(tǒng)的概念

對(duì)于一個(gè)臨床檢測(cè)項(xiàng)目，測(cè)定系統(tǒng)包括測(cè)定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品四要素。在全自動(dòng)生化分析儀上使用配套的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品，即日立7170使用寶靈曼的試劑和校準(zhǔn)品（c.f.a.s），在貝克曼CX-7生化分析儀上使用貝克曼的試劑和校準(zhǔn)品等。各儀器廠家均有自己的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定系統(tǒng)。對(duì)于校準(zhǔn)品不能亂用，如絕對(duì)不能用貝克曼的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)日立生化儀，同樣也不能用寶靈曼的校準(zhǔn)品去校準(zhǔn)貝克曼生化儀。三、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品

校準(zhǔn)品（Calibrationmaterials）含有已知量的欲測(cè)物，用以校準(zhǔn)該測(cè)定方法的數(shù)值，它與該方法及試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。因此最好為人血清基質(zhì)，以減少基質(zhì)效應(yīng)造成的誤差。質(zhì)控品（Controlmaterials）只用于和待測(cè)標(biāo)本同時(shí)測(cè)定的，為了控制標(biāo)本的測(cè)定誤差，因此要求保存時(shí)間十分穩(wěn)定。前者是校準(zhǔn)其值而后者是控制誤差用的。四、校準(zhǔn)前準(zhǔn)備

1.了解燈泡已使用多久？檢查飄移是否合乎要求；2.檢查比色杯的清潔及磨損情況？必要時(shí)進(jìn)行更換；3.用清潔劑泡洗管道4.測(cè)定儀器的精密度及線性是否達(dá)到儀器性能要求？

五、定值質(zhì)控血清是否可以校準(zhǔn)儀器？

我們?cè)谙嗤瑮l件下，同時(shí)用五個(gè)進(jìn)口產(chǎn)品，每家兩種不同濃度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等。表不同廠家定值質(zhì)控對(duì)TP、ALB、、AST、ALP結(jié)果與靶值比較

TPALBUREAT偏差%T偏差%T偏差%汽巴康寧1574.392905.04.5汽巴康寧2464.89242.0819.3-5.76寶靈曼1502.034.8-5.178.960.45寶靈曼248.62.8833.7-5.0424-6.77RANDOX159.76.3640.83.887.674.3RANDOX2398.3326.95.9821.6-5.67Human1724.1846.7-4.183.785.16Human229.8-2.6829.8-2.7625.1-5.08Bio-Red1630391.287.10Bio-Red2421.7927018.0-4.44ASTALPT偏差%T偏差%汽巴康寧143-10.5964.2汽巴康寧2184-11.72650.2寶靈曼158.3-11.22422.7寶靈曼214.-12.33842.7RANDOX162-17.7214-16.1RANDOX2144-12.7394-17.7Human133.5-7.5168-2.2Human2151-11.7287-9.1Bio-Red124-14.62522Bio-Red2201-14.32980.84通過(guò)上述結(jié)果比較，說(shuō)明不同廠家生產(chǎn)的定值質(zhì)控血清靶值之間有的相差較大，提示我們決不能用定值質(zhì)控血清代替校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)用。

六、校準(zhǔn)方法例如日立(Hitachi)系列您必須購(gòu)買寶靈曼(Boehringer)的試劑及其校準(zhǔn)品c.f.a.s.(Calibratorforautomatedsystems)，同時(shí)準(zhǔn)備10至20份新鮮血清。按寶靈曼試劑盒內(nèi)的說(shuō)明書設(shè)置參數(shù)，用c.f.a.s.校準(zhǔn)血清進(jìn)行校準(zhǔn)，即可獲得各項(xiàng)目的校準(zhǔn)K值，同時(shí)觀察一下各項(xiàng)目測(cè)定時(shí)反應(yīng)進(jìn)程圖，檢查各項(xiàng)目參數(shù)設(shè)置是否在最佳位置，如不在最佳位置應(yīng)予以重新設(shè)置并測(cè)定。此時(shí)得到的K值即為準(zhǔn)確的校準(zhǔn)K值，然后測(cè)定待測(cè)的10至20份新鮮血清三次取其平均值，應(yīng)該說(shuō)此結(jié)果是用Hitachi-Boehringer檢測(cè)系統(tǒng)所獲的測(cè)定值。然后用此血清值校準(zhǔn)其它測(cè)定系統(tǒng)。TPALBALTASTCreaUreaUAMen3017

694302327741475626731543SD86

6.69

6347.9

144850.216.1CV%

2.8

1.0

2.11.7

9.8

1.9

1.1表日立7170、BM試劑每天進(jìn)行校準(zhǔn)(n=81)K值的變化TGCholGluCaCKGGTMean11721449174459238642603SD16.917.4

18.156.8

61.167.9CV%

1.4

1.2

1.0

9.6

1.6

2.6表日立7170、BM試劑每天進(jìn)行校準(zhǔn)(n=81)K值的變化七、關(guān)于酶活性測(cè)定校準(zhǔn)問(wèn)題

酶活力（u/l）=△A/min×V×106/(ε×v×1)令k=V×106/（ε×v）則酶活力（u/l）=△A/min×ka)

理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)（ε）來(lái)計(jì)算，如NADH為6.22×103b)

實(shí)測(cè)K值：由于儀器波長(zhǎng)的精密及半寬度不同，而應(yīng)根據(jù)實(shí)測(cè)ε值來(lái)設(shè)定K值c)

廠家給的K值：廠家生產(chǎn)試劑盒說(shuō)明書上提供的K值（有的廠家提供6.3×103）d)

校準(zhǔn)K值：通過(guò)校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)得到的K值

常用K值有以下幾種：

在日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上

可以得到幾種不同的酶K值，見(jiàn)下表

在日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上

可以得到幾種不同的酶K值，見(jiàn)下表表日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上用不同方法

得到幾種酶的K值

指示物波長(zhǎng)理論K值實(shí)測(cè)K值校準(zhǔn)K值A(chǔ)LTNADH340nm244426422（8.1%）3026（23.8%）ASTNADH340mm24442642（8.1%）2775（13.5%）CKNADPH340mm38783878（8.1%）3886（8.3%）GGT4NA405mm14181539（8.5%）1612（13.7%）GGT4NB405mm14751739（17.9%）——ALP4NA（PH10）405mm757825（8.9%）——注：1校準(zhǔn)物為寶靈曼c(diǎn).f.a.s，試劑也用寶靈曼的配套試劑。2括號(hào)內(nèi)數(shù)字是該K值與理論K值相比的變化率825（8.9%）以上摘自張克堅(jiān)文章中*從上述K值中不難發(fā)現(xiàn)實(shí)測(cè)K值大于理論K值，這說(shuō)明生化分析儀的測(cè)光系統(tǒng)還存在著一定誤差，如波長(zhǎng)、半寬度及光徑等偏差，使儀器達(dá)不到理論上的最佳狀態(tài)；*校準(zhǔn)K值與實(shí)測(cè)K值之間也存在一定的差距，即使指示物和儀器相同，其差異可能由試劑及校準(zhǔn)品造成的；*作者認(rèn)為最好使用校準(zhǔn)K值，但必須由兩個(gè)先決條件：1必須使用配套的試劑；2必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，但校準(zhǔn)K值應(yīng)有其溯源性。關(guān)于酶活標(biāo)準(zhǔn)品，歐洲標(biāo)準(zhǔn)局（BCR）和美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院（NIST）均發(fā)表了人血清基質(zhì)的酶活性標(biāo)準(zhǔn)物，相信不久將會(huì)有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)（校準(zhǔn)）品問(wèn)世。八、必須擬訂校準(zhǔn)計(jì)劃（文件）

校準(zhǔn)工作不是僅進(jìn)行一次就可萬(wàn)事無(wú)憂一勞永逸，而必須經(jīng)?；０凑铡芭R床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制（QC）的要求（草案）”必須要求擬定校準(zhǔn)計(jì)劃，其內(nèi)容包括：1．建立校準(zhǔn)方法⑴選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品，包括校準(zhǔn)品數(shù)目、類型和濃度；⑵如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)；⑶確定校準(zhǔn)的頻度。至少每六個(gè)月進(jìn)行一次校準(zhǔn)；*改變?cè)噭┑姆N類，或者批號(hào)更換了。如果實(shí)驗(yàn)室能說(shuō)明改變?cè)噭┡?hào)并不影響結(jié)果的范圍，則可以不進(jìn)行校準(zhǔn)；*儀器或者檢