細胞生物學實驗講義

實驗一顯微攝影術(Micrography)

在利用顯微鏡觀察組織、細胞或細胞顯微結構時，一旦觀察到理想的圖像就需要記錄下來，原始的繪

圖技術已遠遠不能滿足學者們對大量圖像信息特別是彩色信息的需求。要滿足這種需求，就需要利用顯微

攝影技術。顯微攝影就是通過攝影裝置拍攝顯微鏡視場中被檢樣品光學影像的一種技術。

實驗目的

1.掌握顯微攝影裝置及其操作技術

2.通過實驗，能獨立完成顯微攝影的全過程

實驗用品

復式光學顯微鏡及其攝影裝置，各色濾光鏡、黑白或彩色負性膠片、顯影罐、溫度計、水浴鍋或冰塊、

喑房袋、暗盒、剪刀、膠帶(橡皮膏，瓷或塑料盤、盆、量筒、燒杯、天平、顯影液、定影液、倍影液及生

物樣品等。

實驗原理和方法

顯微攝影是通過攝影裝置，拍攝顯微鏡視場中被檢樣品的光學影像的一種技術。

一、用于顯微攝影的顯微鏡

用于顯微攝影的顯微鏡應具備下列條件：

1.配有高分辨力的平場復消色差物鏡(PL?APO)及專用的攝影目鏡。

2.聚光器數(shù)值孔徑0.9以上，其值可調，像差校正良好，上透鏡可任意搖出。

3.具有可變的視場光闌和孔徑光闌。

4.具內裝式電光源照明系統(tǒng)，照度可隨意調節(jié)，光源以鹵鴇燈為好，訂位可做垂直、水平和前后調節(jié)。

5.鏡座要具有一定的重量，重心低，堅實牢固不易為外力所動。

6.載物臺能隨意水平轉動，附有驅動調節(jié)裝置。

7.具專用的顯微攝影裝置或供安裝攝影裝置的攝影鏡筒(三筒)。

二、感光膠片的選用

感光膠片是被攝體影像的一種感光材料。種類較多，性能差異大。

（一）黑白膠片

1.膠片的種類：

從用途上可分為：（1）黑白負片（影像與被攝樣品的明暗相反，用作底片與相紙一起印放黑白照片用。

顯微攝影絕大部分使用此類膠片）；（2）黑白正片（其影像與被攝樣品相同，為正像。用于翻攝，作幻燈片

和拷貝電影放映片用）。

從感色敏感度上可分為：（1）色盲片（僅由基本感光乳劑制成，感色光譜范圍為330~500nm,是低速

感光片，銀粗細、反差大、解像力高；此膠片可在紅燈下操作，適于翻攝拷貝透明正片用，不宜直接作為

攝影底片）；（2）分色片（正色片）（在感光乳劑中添加了對黃綠敏感的光學增感劑，感色光譜范圍為

330~600nm,除紅橙色的被攝樣品外，可用于顯微攝影）；（3）全色片（乳劑中加添了完善的光學增感色素,

對可見光譜的各波段色光能全部感受；感色范圍為330~700nm,其中對綠色感應稍弱。膠片的銀粒粗、感

光速度快、反差小、黑白等級多）。

2.膠片的照相性能

照相性能是決定和影響膠片影像質量諸多因素的總稱。評價膠片的照相性能，主要包括下述幾項：

（1）感光度

指膠片對光線的敏感程度，是表示膠片感光快慢的標志，也是確定曝光時間的主要依據(jù)。感光度愈高,

曝光量愈?。桓泄舛扔?，曝光量愈大。

當前國際上對感光度的標度方法主要有DIN制（又稱“定”制）、ASA制和ISO制三種。目前各國大

多采用ASA制，在照相機或顯微攝影裝置上，涉及膠片感光度的標定值，絕大多數(shù)采用ASA制。

ASA制、DIN制和ISO制的互算關系

ASA1225501002004008001600

DIN12°15°18°21°24°29°30°33°

ISO12/12°25/15°50/18°100/21°200/24°400/29°800/30°1600/33°

膠片標定的感光度是曝光的依據(jù)，但不是固定不變的，隨保存時間和沖洗條件以及照相機和曝光表等

因素的不同而有變化。在拍攝前，一定要把攝影裝置上的膠片感光度標定值，調在所用膠片的實際感光度

值上。

顯微攝影對膠片的感光速度沒有特定的要求，選用膠片時:考慮的不是速度本身，而是與感光速度相

關的質量因素。凡屬感光度高的膠片，乳劑的銀粒粗，反差小，灰霧大，保存性差;感光速度低的膠片，銀

粗細，反差大，灰霧小，保存性好。所以，顯微攝影力求使用低感光度膠片，以便獲得反差高，銀粒細膩，

清晰度高的攝影效果。目前，市場供應的ASA100全色膠片，不是理想的顯微攝影用膠片，感光度在ASA50

以下更適于顯微攝影。

（2）反差系數(shù)

被攝體的明暗差別叫做反差，膠片的反差用反差系數(shù)”值表示。丫值是指拍攝后膠片上的影像反差與拍

攝前被攝體或樣品的景物反差之比。

Y值=影像反差/景物反差。

對于同一反差的景物或樣品，使用不同的丫值膠片，可拍出不同反差的影像。視場中影像反差的提高，

選用高Y值膠片進行拍攝，是重要的措施之一。不同類別膠片，其了值不同。一般，黑白負片尸0.65,黑白正

片了=3。

同一視場的相同影像，用不同反差系數(shù)的膠片拍攝，能拍出不同反差效果的底片。反差系數(shù)愈大，底

片的影像反差愈強，黑白對比愈分明。反差系統(tǒng)愈小，底片反差愈弱，色調灰暗，影像黑白對比不分明。

顯微攝影宜使用高反差的膠片，以校正物像反差過小的弊病。因此，膠片的反差強度，對控制影像的質量

是十分重要的，應作為選用膠片的重要質量指標，需要特殊強調。

(3)寬容度

膠片表現(xiàn)景物明暗對比或亮暗差范圍的能力稱作寬容度。能便亮度反差很大的景物正確下的膠片稱之

為寬容度大，反之則為小。在選用膠片和確定最佳的曝光點時，必須把樣品的明喑差和膠片的寬容度一并

考慮。膠片的寬容度范圍應能涵容樣品的亮暗范圍。即膠片的寬容度要大于樣品的寬容度。膠片寬容度愈

大，正確曝光的范圍愈大。膠片寬容度與膠片感光度成正相關。感光度高，寬容度大，記錄明暗反差范圍

的能力就強。

顯微攝影不同于一般的攝影，被攝影位于顯微鏡視場中，影像反差小，明暗對比不大，膠片的寬容度

勿須特殊強調。

(4)解像力

膠片對景物細部結構分辨的能力。以每毫米寬度內能分辨出若干條黑白相間平行線數(shù)目來表示。解像

力高，分辨的線條多，影像的清晰度好，對影像細部影紋表現(xiàn)細膩，質感強。即使經高倍放大，其影像的

細部影紋仍不失其清晰微細。

膠片解像力，取決于感光乳劑中鹵化銀顆粒的大小及其乳劑涂層的厚度。顆粒細涂層薄，解像力高；

反之則低。感光度高，顆粒粗的膠片解像力低，感光度低，顆粒細的膠片解像力高。顯微攝影應選用感光

度低、鹵化銀顆粒細的膠片為宜。

(5)密度和最大密度

密度是指感光膠片在曝光顯影之后黑化的程度。膠片曝光顯影之后，乳劑層中的感光鹵化銀還原為不

透光的金屬銀粒，具吸光或阻光作用。黑魚影像就是由無數(shù)微小的銀顆粒聚積而成。曝光量人的高光部分,

被還原的金屬銀粒多，曝光最小的低光部分，銀粒聚積較少。前者稱為密度大，后者稱為密度小。在一定

范圍內，密度隨曝光量的增加而加大，隨曝光量的減少而變小。

每種膠片都有其最大密度值，即感光乳劑層，通過曝光顯影之后，能變黑的最大限度。膠片在增加到

最大曝光量情況下，其密度值上升到一定限度不再上升。這個密度最大值。稱為最大密度或稱最高密度。

最高密度決定于感光乳劑中的含銀量和乳劑配方的結構，以及鹵化銀在顯影時被還原的程度。最高密度大,

才能正確反映出被攝體最亮部分的層次，增強立體感。密度用D表示，最大密度用D,mx表示。

(二)彩色膠片

多彩的生物界，生物樣品幾經制片加工，脫下自然的色彩。一經染色立現(xiàn)斑瀾，赤、橙、黃、綠、青、

藍、紫，不一而足。鮮艷的色彩，給人視覺以強烈的刺激，產生賞心悅目的效果。

提高了影像的清晰度和反差。使用彩色膠片，拍攝視場中絢麗多彩的影像，真實地再現(xiàn)客觀景物自然

形體和明暗層次，更在色彩上表現(xiàn)出形像質感的生動和真實，這些是黑臼攝影所不能及的?，F(xiàn)今，彩色顯

微攝影日趨廣泛，只因制版印刷等程序繁瑣，費用昂貴，限制了彩色顯微攝影的普及。但彩色攝影終歸要

得到進一步的發(fā)展。

1.色溫(colortemperature)

彩色攝影除根據(jù)光強度決定適宜的曝光量外，還要考慮光源的色溫，以求色彩正確還原。色溫是評定

光源色質的一種標度，是表明光源光譜成分的一種度量。每種光源所發(fā)出的光，均由很多不同波長的幅射

組成。不同光源發(fā)出的色光波長比例不一，光譜成分不同。

所謂色溫，實際上是指光源的光譜成分，而光譜成分又主要是看光源中波長短的藍紫光與波長長的紅

橙光的比例。細果光譜成分中波長短的光線所占比例增加，波長長的光線所占的比例減少，色溫就升高;

反之，色溫就會降低。同一電光源的色溫，因電壓的高低變化而改變。電壓高時色溫增高，電壓低時色溫

降低。

因此，攝影上所謂的色溫的高低，只是意味著光源中紅、藍色光的不同比率而與實際溫度無關，如果

在一?盞色溫為3200K的鴇絲燈上，包被一層黃色透明紙，其色溫即刻下降；包上一層淡藍色的透明紙，其

色溫驟然上升。同理在嚴寒或酷暑的氣候下，色溫不隨氣溫的升降而變化。

顯微攝影的照明光源，絕大部分為澳鴇燈或鴇絲燈。所發(fā)之光為連續(xù)光譜，其中多紅黃色光，色溫偏

低，約在3200~3400K。

2.彩色膠片的種類

按用途分：

(1)彩色負片(colornegativefilm)彩色負片經曝光和顯影加工后，所得影像在明喑和色彩上恰好與景

物或樣品相反。彩色負片使用廣泛，其商品名稱的英文標示法：商品牌名+color。如Fujicolor(富士彩色負

片)、Kodakcolor(柯達彩色負片)等。用“color”標示彩色負片。拍攝，顯影加工后的負片稱為底片，與彩

色照相紙一起擴印，放大成彩色照片。

(2)彩色正片(colorpositivefilm)彩色正片是復制性的彩色感光材料，用于與彩色負片(底片)復制彩色

透明正像電影片。彩色正片經曝光、顯影加工后，所得影像其明暗和色彩與被攝景物或樣品完全一致。

(3)彩色反轉片(color代versalfilm)彩色反轉片經曝光和反轉加工后，所得影像與被攝景物，在明暗

和色彩上完全相同。使用彩色反轉片拍攝，經反轉沖洗加工后，直接得到彩色透明正像，不需任何再復制

過程。加工后的反轉片，用以制版、印刷、幻燈片放映。彩色反轉片商品名稱的英文標示，與彩色負片不

同，為商品牌名+chrome,如Fujichrome(富士彩色反轉片)、Kodakchrome(柯達彩色反轉片)等。彩色反轉

片的曝光寬容度低，能記錄景物的亮度差較小?？扇菰S的曝光誤差幅度，必須控制在±1/2級曝光量的范圍

內。曝光錯誤導致的后果是彩色平衡失調；曝光正確的彩色片，色彩鮮艷、飽和度好、明度適中。

按平衡色溫分：

不同的照明光源其光譜組合不同，色溫亦不同。彩色片只有很窄的最佳色彩還原的色溫片。為了能在

兒種主要基本光源下拍出色彩還原準確的彩色影像，生產出兩類彩色膠片：一類是對藍光敏感的、適于燈

光下拍攝的燈光型彩色膠片；另一類是對紅、綠和藍三種原色感受基本均等的、適于太陽光下拍攝的日光

型彩色膠片。

(1)0光型彩色片(daylighttypecolorfilm)

日光型彩色片，適宜在日光下和電子閃光燈下使用，其平衡色溫是5400~5600Ko在日光型彩色膠片

的包裝上，標有“日光型”(“daylighttype")字樣。使用前務請辨別清楚，以免錯用。顯微鏡的照明光源色

溫在不加任何調節(jié)的情況下一般在3200~3400K?在如此低下的色溫下，用日光型片拍攝，沖洗后的負片

的影像，將因色溫低而普遍偏青。

⑵燈光型彩色片(tungstentypecolorfilm)

燈光型彩色片，適于在燈光照明下使用，其燈光型彩色片的平衡色溫是3200~3400K。在燈光下用燈

光型彩色片拍攝，被攝體或樣品的色彩，方能得到正確的還原。燈光型片對波長短的藍紫光敏感，在日光

和電子閃光燈下拍攝，因藍光過多，沖洗后的影像偏黃。彩色膠片因種種原因造成的偏色，在一定限度內

都可在彩色照片的擴放中，通過校色而糾正。

三、濾色鏡的選用

濾色鏡(filter)是顯微攝影必備的光學濾光元件。利用濾色鏡對色光選擇吸收的原理，通過控制色光；

突出或抑制影像在膠片上的感應，以期獲得理想的照相底片。

黑白膠片是把視場中的彩色影色，以黑白及不同程度的各種灰色中間層次記錄在負片上。利用濾色鏡

控制照明光的不同色光，調整影像的色調和反差，可拍出各種不同效果的底片。

?束白光，色散后形成紅、橙、黃、綠、青、藍、紫七種單色光。濾色鏡是一種色光過濾器，能選擇

吸收部分色光，只允許與其本身顏色相同的色光通過，從而改變了入射照明光束的光質，引起各種不同顏

色的樣品對光線的通過、吸收發(fā)生改變，從而改變樣品的明暗差。濾色鏡對各種色光有選擇吸收的特性，

那些與濾色鏡色相同的色光則能通透過去，而與濾色鏡顏色互補的色光則被吸收。例如，綠色濾色鏡在白

光下把光譜中的藍色光和紅色光全部吸收，只限綠色光透過，濾色鏡顯示綠色。黃濾色鏡吸收藍色光。紅

濾色鏡把光譜中由綠至藍的光波全部吸收，只讓紅色光透射。藍濾色鏡吸收了由紅到綠的色光，僅使藍色

光通過。

在顯微鏡的光路上加用濾色鏡，從白光中減去與濾色鏡顏色互補的色光，使改變的色光透射物體，造

成影像色調和反差提高，以獲得理想的底片。被攝物體反射出來的色光，如果被濾色鏡透過，在黑白底片

上產生相應的密度，印放出照片，這部分影調比較明亮；假若該色光被濾色鏡吸收，底片上的密度就薄，

制出的照片影調就暗，并具一定的密度。通過加用不同顏色的濾色鏡，控制樣品的不同色光的透過和吸收，

借以改變樣品的明暗反差，以獲得理想的影像。

顯微攝影由于成像光束的多次折射和放大，影像的明暗反差大為減弱。所以，顯微攝影首先考慮的主

要在提高影像反差，其次才是分辨率。為提高影像反差，選用濾色鏡的原則是：選用與被攝物體吸收的色

光同一顏色的濾色鏡，即選用被攝物體顏色的補色濾色鏡，則可達到理想的最佳影像對比。因此，視場中

的物體影像的色調和反差可被補色的濾色加強，而被同色的濾色鏡削弱。例如，用Giemsa染色的染色體

呈品紅色。這種品紅染色體在視場中吸收綠色光，透過紅光和藍色光。顯微攝影時，在光路中加用品紅色

的補色-綠色濾色鏡，可把照明光線中的紅色和藍色光吸收，只通過綠色光。它恰好是品紅色染色體吸收的

色光，致使綠色光全被吸收，不再作用在膠片上，染色體在沖洗后的底片上的影像呈白色，其它部分為黑

色。印放出的照片，將是深黑色的染色體散在光亮的自色背景上。彩色消晰，黑白分明。對雙重或多重染

色的樣品，拍攝時要選用能突出重要影像部分的濾色鏡，不可兼顧。例如，蘇木精-番紅染色的標本，欲突

出蘇木精染色部分，要加用黃色濾色鏡，因為蘇木精顯藍色，黃色是藍色的補色，有加強或突出藍色部分

的作用?？傊@微攝影選用濾色鏡，取決于被攝樣品的染色。如果濾色鏡只透過染色體標本所能吸收的

光譜或濾色鏡透射曲線與標本的吸收曲線相同，即選用補色的濾色鏡定會達到理想的最佳影像對比。濾色

鏡只限手用全色膠片拍攝時使用，不能到處濫用，對于只有黑白淺灰色的物體影像，由于能均勻地吸收或

透射各種色光，濾色鏡在此不起作用。

四、顯微攝影裝置的組裝與調試

顯微攝影是通過安裝在顯微鏡上的攝影裝置進行的，當今的顯微鏡和顯微攝影裝置都是配套生產的，

設計精密，結構復雜，操作簡捷，質量高超?，F(xiàn)今，顯微攝影裝置，由于引進了電子元件，趨向于自動化

和半自動化，使用方便快捷、曝光準確、影像質量高。由于各諸多廠家生產的顯微鏡及其攝影裝置的型號、

類別很多，難以全部講述。盡管型號、種類多樣，但原理、結構以及使用、操作方法大同小異。只要掌握

基本要領，詳細閱讀各廠家所提供的說明書和資料，定能順利安裝。

現(xiàn)以OLYMPUS顯微鏡的PM-10AD攝影裝置為例，概述其組裝程序。首先，要仔細閱讀說明書，熟

悉各部組件及結構，按要求順序組裝，其次，帶上手套組裝，勿觸及光學玻璃及其它精密部分。組裝步驟

如下：

1.將35mm機身接合器，裝接在自動曝光裝置機體上。后者的定位銷與前者的定位槽接合并用滾花固

定環(huán)固緊。

2.安裝35mm照相機機身。先使機身和接合器上的紅色標志點互相對準，再接紅箭頭的方向轉動照相

機身，至聽見咔嗒聲響，使兩者嚙合。卸下機身按下述方法：壓下照相機接合器背面的釋放桿，壓下的同

時，向紅色箭頭的相反方向轉動機身，當兩個標志點對準時，機身即可卸下。

3.把轉筒式焦點調節(jié)用目鏡（目鏡取景器）裝在自動曝光裝置機體上。安裝時注意對準兩者的定位銷與

定位槽，并用滾花環(huán)固定。

4.把自動曝光裝置機體安裝在顯微鏡的攝影鏡筒上，使紅色標志點朝向您的方向，將其固定。安裝前,

先將“NFK”攝影目鏡裝入目鏡接合器中，上面安裝自動曝光裝置機體，便兩者的標志點對齊。

5.連接電源軟線。低壓連接軟線的兩個接頭，一端插入自動曝光裝置機體的背面插孔中，用金屬掀鈕

接頭固定。另一端與自動控制裝置背面的插孔連接。接線前，精細檢查，確認電壓與需要的相符，注意檢

查顯微鏡上的線路電壓選擇器開關，使調位在所用的電壓位置上。

五、拍攝的一般操作過程

攝影是顯微攝影操作中的關鍵環(huán)節(jié)。在鏡檢中發(fā)現(xiàn)理想的影像，要立即拍攝。

（一）拍攝前的準備工作

1.顯微鏡的光路合軸

通過調中聚光器達到光路合軸，另把光源燈的燈絲位置調中，并成像在孔徑光闌處。使照明光闌與顯

微鏡的光學系統(tǒng)的光軸合一。按科勒照明法使視場均?照明。

2,選用優(yōu)質物鏡

現(xiàn)今，物鏡以PL-APO為佳。拍攝前，擦拭物鏡的前透鏡，使之清晰成像，物鏡的倍數(shù)視需要選定，

但應盡量選用高數(shù)值孔徑者，以提高分辨率，并兼顧焦點深度和視場直徑。

3.配用適宜的攝影目鏡

選取專用的、與物鏡配套的攝影目鏡。各攝影裝置皆有配套產品，選用的倍率視總放大率和所用物鏡

的倍率而定，以選低倍為佳。

關于攝影目鏡，應選用能充分發(fā)揮物鏡的性能、并對物鏡起補償作用的目鏡。因此，使用制造廠家指

定的目鏡是十分重要的。

OLYMPUS顯微攝影用目鏡有下列兩大類：

①配合長筒物鏡用的NFK型顯微攝影目鏡

SPlanAPO-----------

SPlan------------------NFK型

DPlan-------------------

這種新型的NFK系列攝影目鏡是專為顯微攝影而設計的，與LB（長筒）物鏡配合使用。NFK系列目鏡

包括2.5x、3.3x、5x和6.7x四種。

②用于短筒物鏡用的FK/P型顯微攝影目鏡：

PlanAPO

FK.P型

Plan------

上述兩類攝影目鏡為專用攝影目鏡，不能作為觀察使用，切記！

4.合理調節(jié)光闌的開度

視所用物鏡的數(shù)值孔徑，使孔徑光闌的開度調到物鏡孔徑光闌的70%的開孔上，以提高視場內的影像

反差。視場光闌的邊緣要外切孔徑光闌，使兩者密接。

5.加用濾色鏡

黑白膠片的顯微攝影，必須加用濾色鏡。通過選擇性的濾光，提高影像的反差或分辨率。若提高反差，

在光路上加用與被攝體的顏色互補的濾色鏡；欲提高分辨率時，則加用虧樣品同色的濾色鏡。濾色鏡選用

是否得當，可通過鏡檢觀察認定。如果加用濾色鏡后被攝體在視場中呈現(xiàn)黑色，則為最佳，否則需要更換。

（二）裝入膠片

一切準備就緒后，將選用的膠片裝入機身（cameraback）。使用135mm膠卷，向喑盒里裝膠卷的操作與

普通照相機相同，在此不再贅述。但要確保膠片未被反裝和片頭牢掛，否則膠片不進、無法拍射，就只會

空攝；另外，裝片時，應避開強光或直射陽光，以防膠片漏光，切忌。

（三）取景和聚焦

取景是確定拍攝的主體及其范圍。顯微攝影的取景是通過攝影裝置的側視目鏡取景器。顯微鏡的目鏡

部分作為拍攝前在視場中的廣泛搜尋之用。待發(fā)現(xiàn)被攝體后，再轉向目鏡取景器件最后的取舍。把被攝主

體限定在取景屏的中央部位，以待拍攝。

聚焦是通過顯微鏡的粗、細謂焦螺旋，把被攝體的影像清晰地聚焦在照相機身的膠片平面處。

取景、聚焦的具體過程或步驟如下：

1.屈光度調節(jié)

顯微攝影者的視力強弱不一，顯微攝影前通過攝影裝置的目鏡取景器，對視力須進行統(tǒng)一矯正，以達

清晰聚焦的目的。

取景聚焦前：進行屈光度調節(jié)，使目鏡取景器適于各種不同的視力者，皆達準確的聚焦。在顯微攝影

裝置的接頭部位，有一筒狀側視目鏡取景器，它由數(shù)片透鏡組成。近眼端有一屈光度調節(jié)環(huán)，能隨意轉動，

變換透鏡間距，改變焦點距離。調節(jié)環(huán)旋轉調節(jié)的最大范圍為±5屈光度（一屈度相當于眼鏡的100度）。經

過調節(jié)使近（遠）視眼在500度之內的人，可脫下眼鏡取景對焦。屈光度調節(jié)環(huán)的轉動范圍或幅度，因人而

異，視力正常者，屈光度值為“0”左右；視力不佳者，其轉動范圍，+、-不同，多少不等。

在側視目鏡取景器內有一玻璃屏，上刻雙十字線。調節(jié)時.，左右轉動屈光度調節(jié)環(huán)，使側目鏡取景器

鏡筒的前端伸縮，改變焦距，至清晰地分辨出雙十字線為止.通過改變取景器的筒長，以辨清雙十字為依

準。使不同視力者在顯微攝影時，都可做到精確的準焦，拍出清晰的底片，避免因視力不同而獲得不同的

拍攝效果。

屈光度調節(jié)的關鍵，確實把取景調焦屏上的十字線調成雙線。邊觀察邊調節(jié)，直至十字線清晰地現(xiàn)出

雙線為止。雙十字線較準后，要保持不變，不能隨意變動，以防焦距改變。取景聚焦只需使用顯微鏡調焦

螺旋。屈光度調節(jié)僅改變目鏡取景器長度，不涉及被攝物體至機射膠片平面的距離。當十字被看成雙線時,

聚焦的像點能清晰地投射在膠片面上；如果十字線成單線，即使影像清楚地準焦，真像點并不落在膠片面

上，而位其前或后，底片影像模糊不清。當改變拍攝者或左右眼調換使用時，屈光度須重調。

2.取景

取景決定拍攝的對象、范圍和大小。專用攝影設備，用側視日鏡取景器取景，在列有雙十字線的玻璃

屏上，同時刻有數(shù)種規(guī)格的長方形取景框。底片所能攝下的范圍，并非視場所見的全部，僅是圓形視場中

的長方形部分。在可供系列機身同時使用的取景器中，有數(shù)種規(guī)格的取景框。取景時要準確選用，務使所

用膠片的規(guī)格與取景框的大小相符。樣品中被的攝主體一經確定之后，就要考慮放大倍率即被攝體應拍攝

的大小或范圍，以及在長方形取景框中的方位：橫或豎。拍攝的范圍以不超出取景框線為限，應充分利用

限界，擴大影像，使之充滿在24x36mm的膠片畫幅內，讓被攝體緊接線界。若是被攝體為長條狀，應使

其條軸與取景框的長邊平行，而不是垂直，以期充分利用拍攝空間。取景時，被攝的物體影像中心位于長

方形取景框的對角線中心，并使兩者的長、短軸相應，需要90。調整時，轉動載物臺或攝影裝置，讓影像

長軸和取景框橫軸平行。影像的大小用調換物鏡和目鏡控制。

3.聚焦

聚焦是通過顯微鏡的粗、細調焦螺旋進行。轉動顯微鏡的粗、細調節(jié)螺旋改變物鏡前透鏡和被檢物體

的距離，使視場中物體影像的焦點聚于機身的膠片平面上?？v橫移動鏡臺上制片標本，尋找拍攝圖像，上

下轉動調焦螺旋、辨清被攝體的細微結構。取景聚焦，幾經反復，底片影像的清晰度決定于拍攝前的最終

準焦。

取景聚焦完畢，立即按下快門按鈕，任何有關操作，都要在聚焦前完成。準焦后的微小顫動都會引起

焦點的改變、致使底片影像模糊不清。

當今的顯微攝影裝置，多自動曝光或半自動曝光。曝光時只需按動控制器上的曝光按鈕，曝光完畢，

自動卷片。加放濾色鏡務在聚焦前置于鏡架上，如在聚焦后加用，會使焦點改變，影像不清。當使用4x

或更低倍數(shù)的物鏡時，由于焦深大，難以做到精確聚焦。拍出的底片易模糊不清。為防止或杜絕上述的缺

陷或誤差，在用4x或更低倍數(shù)物鏡攝影時，在目鏡取景器前，加用調焦望遠鏡(focustelescope)。使物像放

大，焦深變小，達到準確地聚焦。聚焦時將望遠鏡的焦距調至無限遠處，重新進行屈光度調節(jié)。待看清兩

條平行十字線再轉入調焦操作。

(四)曝光

曝光(exposure)是通過快門線牽動快門釋放按鈕，使快門開啟，膠片感光，并形成潛影的過程。曝光是

顯微攝影的成敗關鍵。正確曝光才能獲得一幅密度適宜、明喑分明的底片。顯微攝影沒有專用的鏡頭，只

用物鏡和目鏡代替.不需調節(jié)光圈系數(shù)值，僅有快門速度的控制。顯微鏡視場亮度變化大，影像的明暗和

放大倍率，亦頻頻變換。根據(jù)視場亮度和樣品的明暗，能正確地估計出曝光時間，非輕易之舉，比普通攝

影困難得多.從影像的亮度，估計出曝光時間，會因人眼瞳孔隨亮度的變化而縮放，導致錯誤的結果。所

以，憑視覺的亮明是不科學的，人眼對光不會有科學的定量的能力。曝光過度，底層密度過大，晦暗不清,

高光部分喪失影紋細節(jié)，最小密度部分灰霧大，底片反差小。曝光不足，整個底片密度過小，雖然最大密

度部分影紋分明，但最小密度和灰霧密度一樣，沒有影紋存在，缺乏正常的反差。這類底片，根本不能印

放出合格的照片。

現(xiàn)今的顯微攝影裝置，皆為半自動或自動曝光。曝光時間用電子元件調控，達到正確曝光。關鍵在于

能否正確地操作。影響曝光的因素很多，其中包括：被攝物體的顏色和光學性質，物鏡的數(shù)值孔徑和倍數(shù)、

目鏡倍數(shù)、膠片的性能、濾色鏡的顏色、光源強度和色溫等因素。下面概述幾個主要因素，除膠片感光速

度是表示對亮度的敏感程度外，考慮其余因素的共同著眼點，就是分析它們對被攝影像的亮度是加強還是

削弱，僅供手控曝光的參考。

1.光源的強度

光源燈是顯微攝影的照明光源，低壓鴿絲白熾燈，燈泡小、強度較大、電壓6~12V,功率5~60W。顯

微攝影的曝光時間，依所用光源強度而定?電壓高，功率大的燈泡，照明強度高，藍紫光多，便膠片感光

快，曝光時間要短。鹵鴇燈為一新型光源燈，發(fā)光效率高，照明強度大。發(fā)光穩(wěn)定，比功率相同的鋁絲白

熾燈亮得多。膠片感光快，曝光時間要短，鹵鴇燈的光譜曲線也是連續(xù)光譜。常用12V、50W和12V、100W

燈泡。

2.膠片感光度

膠片感光度是表明膠片對光線的敏感程度。為達到一定的密度，感光度高的膠片所需曝光時間短，反

之則長。同一感光度，不同牌號的膠卷，其實際感光度不盡相同。既使用同一牌號的膠卷，不同時間的產

品(乳劑號不同)，在性能上會有稍許的差異。膠片超過有效期或保存條件不住，膠片的感光度會降低。使

用時要酌情增加曝光時間。

3.物鏡的數(shù)值孔徑和總放大倍數(shù)

視場中影像的亮度與物鏡的數(shù)值孔徑和顯微鏡的總放大率相關?影像亮度與物鏡數(shù)值孔徑的平方成正

比，物鏡的孔徑愈大，迸光量愈多，影像亮度愈大，曝光時間要短。視場中影像亮度與顯微鏡的總放大率

的平方成反比。盡管使用數(shù)值孔徑較大的物鏡，如果所用目鏡倍數(shù)較大，總放大倍數(shù)提高，影像亮度也會

相應減弱，曝光時間需要加長。所以曝光時間與有效的物鏡數(shù)值孔徑平方成反比，與目鏡的放大倍率平方

成正比，與總放大倍數(shù)亦成正比。

此外，目鏡至機身膠片平面的距離，也就是接筒和機身的長度，亦為影響曝光時間的因素。距離越長，

光線越弱，其強度與距離平方成反比。所以，曝光時間以目鏡至膠片的距離的平方成正比。長度越長，曝

光時間愈多。

4.濾色鏡的顏色

濾色鏡具有濾光的作用，經選擇吸收，僅有部分色光透射，減弱了光源的照明強度。其減弱的程度因

濾色鏡不同而別，一般用濾色鏡的因數(shù)表示。所謂因數(shù)就是在曝光時間上增加的倍數(shù)或曝光補償倍數(shù)。因

數(shù)可隨條件不同而改變，使用全色膠片拍攝，四對全部可見光的各種色光都感受，如用黃濾色鏡僅吸收藍

光，紅光和綠光都可透過，所以因數(shù)小，即補償數(shù)小。加用紅濾色鏡，吸收了綠光和藍光，僅透過紅光，

濾色鏡的因數(shù)大，即曝光補償倍數(shù)大，藍色濾色鏡，顏色深，吸收色光多，圍數(shù)大。光源的色溫不同，濾

色鏡的因數(shù)亦不同。光源色溫高，照明光線中藍紫光多。

機用濾色鏡，吸收的色光多，因數(shù)大，光源色溫低時，照明光線中紅橙光多，藍紫光少，黃濾色鏡吸

收的色光相對減少，所以因數(shù)小。一般情況下，使用全色膠片時，黃濾色鏡的因數(shù)小，藍、綠和紅濾色鏡

的因數(shù)大。適宜的曝光補償倍數(shù)，要通過試拍解決。中黃濾色鏡的補償倍數(shù)為1~1.5左右，中綠濾色鏡為

2左右。

5.被攝樣品的染色和光學性質

視場中影像的染色和反射光情況，也是影響曝光的因素。被攝體染色適度，分色好，清晰醒目，背景

透明，反差大，易拍出感光適宜的好底片。染色過深，分色不好，被攝體被染料堆積，細微部分分辨不清,

底色大，背景渾喑，通透性差，曝光時間要長。染色淺淡，被攝體不鮮明，與背景區(qū)別不大，反差小，曝

光時間要短。后兩類材料難以拍好，除非奇缺，應棄之不顧，不值一捆?？偫ㄉ鲜鲋T因素，決定出準確曝

光的快門速度。調準時間后，邊取景聚焦，邊持快門線，待準焦后，立即掀動快門按鈕，不要用力過猛。

低速曝光的輕微顫動也會使底片的影像模糊不清。

目前，從攝影設備的設計制造上，已能保證準確曝光。如在光電元件控制下的自動曝光或用曝光表測

定后的曝光，都可拍出感光準確的底片。但是，由于設備的限制，尚不能普遍采用。手工操作的攝影裝置,

在完全手控條件下，只要多拍，精心鉆研，記錄對比，達到正確的曝光是不難的。因此，嚴格控制光源的

電壓，使照明強度保持相對穩(wěn)定，在目鏡、物鏡恰當?shù)慕M合下，調節(jié)相應的光闌開度，科學地運用濾色鏡,

保持使用同一種膠片，熟練地掌握顯影技術，定能拍出理想的底片。感光膠片攝影曝光后，即轉入暗室工

作，經顯影、停顯定影和水洗后形成底片，晾干后用相紙印放成照片。

六、OLYMPUS顯微攝影裝置組成與使用

OLYMPUS公司的顯微鏡，在國內多見。顯微攝影裝置亦有數(shù)種類型，其中以BH系列顯微鏡的

PM-10AD型顯微攝影裝置較佳，該機具有設計合理、結構精密、操作靈活、效能精確等特點。PM-10AD

裝有一自動曝光調控裝置(automaticexposurecontrol),它是整個系統(tǒng)的心臟，用小型電子計算機進行調控,

能自動地進行必要的信息處理。通過儀表板上的度盤和開關，將有關膠片規(guī)格，感光度的倒易律失效，被

攝標本特性(視場背景的明暗，樣品的密度等)等數(shù)據(jù)輸入進去，電子計算機計算、修正以達最佳曝光。

(一)準備工作

1.檢查攝影裝置

在膠片裝入機身之前，應熟練掌握攝影裝置每個部件的結構與性能，并檢查其組裝情況是否完好無誤，

并按要求進行正確的操作。其步驟如下：

(1)把自動曝光裝置機體(automaticexposurebody)上的光路選擇器拉桿，向外拉出一級，露出拉桿上的

綠色環(huán)帶。在選擇器的位置上標有綠色的"CVE”字母，此擋可做取景聚焦和攝影曝光之用。該擋的光路中

有64%的光線進入膠片面，16%光線進入聚焦取景器，還有20%進入曝光控制器中。

(2)將自動曝光調控裝置上的曝光方式選擇器刻度盤(MODE/EXPOSURET1ME)的旋鈕對準“AUTO”

位，此位為自動曝光檔，該刻度盤上尚有“FLASH”位，為閃光同步用。還有“MANUAL”位，為手控

曝光用。曝光時間范圍ls~40min,各刻在定時器上。

(3)將ASA膠片感光刻度盤(ASAfilmspeeddial)的旋鈕調到所用膠片的實際感光度(ASA)值上。目前市

面出售的膠片感光度多為ASAI00的膠片。

(4)打開位于自動曝光調控裝置右側的ON-OFF電源開關，該裝置正面左下角的安全燈(SAFETY)點亮。

該燈指示曝光時間是否在自動曝光范圍的限度以內，用不同的色光顯示：①綠色：可以進行正確的曝光。

②紅色：并伴有蜂鳴的警告聲響。其中，持續(xù)的聲響，示照明光源照度不足；間歇的響聲，示光源照度過

度。操作者便可根據(jù)警告信號，滑動位于顯微鏡座右側的調接鈕使照明強度升高或減弱。

(5)按壓綠色的標有"EXPOSE”的曝光按鈕，照相機身快門開啟，自動曝光控制裝置上的工作燈(WORK)

點亮，兩者同步。

(6)機身上的快門閉合，WORK燈同時熄滅。隨之出現(xiàn)膠片自動前卷的驅動聲響，同時?，機身前面的

卷片指示燈(WINDING)點亮。待一切指標均正常后，便可裝入膠卷進行攝影。

2.將135膠卷裝入機身

(1)提起照相機身的后蓋開啟/倒片旋鈕(BACKCOVERRELEASE/REWINDERKNOB)隨咔嚓一聲響，

機身后蓋開啟。

(2)把裝入暗盒內的膠卷放大機身的暗盒艙中，將后蓋開啟/倒片鈕推回原位，卡住膠卷軸。

(3)將膠卷外露的一端，拉向相時的一側，插入卷片軸的裂隙中。不要把膠片從裂隙的另一側伸出。

(4)按下自動曝光控制裝置的時間停止/進片(TIMEOFF/WINDING)按鈕，使膠片向前卷動，片孔分輪齒

嚙合。

(5)關閉機身后蓋，緊壓至聽到咔嚓聲止，表明后蓋己嚴密閉合。

(6)下按TimeofVWINDING按鈕，按動一次膠卷前進一張，壓下2~3次后直至機身的曝光計數(shù)器現(xiàn)出

“1”時為止。

(7)作為使用中的膠片的提示物，可將135膠片包裝紙盒端部的小型方紙卡，插入機身后蓋上的便箋夾

框中，以示所用膠片的種類、牌號、規(guī)格和感光度等。

(二)攝影操作

1.35mm黑白膠片的顯微攝影

按下列程序進行：

⑴選定曝光方式：將曝光方式/時間選擇標度盤(MODE/EXPOSURETIME)的旋鈕對準欲選用的位置

上。標度盤上有自動曝光(AUTO)、閃光(FLASH)和手控(MANUAL)三種方式。為使曝光準確、快捷，多采

用自動曝光方式，將旋鈕對準“AUTO”位置。在某些條件下，應用手控曝光更為適宜時，使用手控曝光。

把旋鈕對準“MANUAL”檔位。在手控曝光方式的時間刻度盤上，右側為秒(SEC),左側為分(MIN),曝

光的時間范圍為ls~40min,在此范圍內，M任選某一曝光時間，只要把旋鈕對準欲選用的曝光時間即可按

下快門釋放鈕(EXPOSE),快門仍然是自動開啟、閉合，只是曝光時間為你所定。如果曝光需要進行超過

40min的長時間曝光時，把旋鈕對準“T"(TIME)位，當按下快門釋放按鈕時，快門將保持持續(xù)開啟狀態(tài)，

直到壓下自動曝光調控裝置上的時間終止/卷片按鈕(T1MEOFF/WINDING)時，快門才會閉合。

(2)畫幅選擇：在標有"FORMAT字樣的畫幅選擇按鍵共有三個。自上而下，分別在鍵的左側標有“35”

(供135(35mm)膠卷的照相機身使用)、“L”(供大幅膠片的照相機身使用)和“16”(供16mm縮時電影拍攝

使用)字樣。隨顯微攝影所用膠片畫幅的規(guī)格，壓下相應的按鍵即可。如使用135膠卷時按下“35”按鍵。

(3)調準膠片感光度的ASA值：把“ASA”膠片感光度標度盤的旋鈕，對向所用膠卷的ASA感光度值

上。常用膠片多為ASA100。此盤標度范圍0~6400,共分10大級，每一大級又分不小級，計30小級。如

ASA50~ASA100間，又分64、80小級。ASA值一定要與所用膠卷的實際感光度相符，否則曝光失準。

(4)校準倒易律失效補償值:在倒易律失效補償標度盤(RECIPROCITY)上，根據(jù)所用膠片的種類和特性，

將旋鈕對向該膠片的倒易律失效補償值上。

感光片的感光乳劑所承受的曝光量(H),等于光強度(E)和曝光時間⑴的乘積：

H=Ext

當H一定時，E高時t縮短，E低時t加長，總曝光量H不變，膠片的光化學效果不變，即密度(黑白

程度)保持不變。而在這種H值總量不變之中，E與t值可任意調整、易換。這種互易關系稱為倒易律或且

易律gciprocity),此定律在一定限度內有效。超此范圍，倒易律失效。當照明強度很弱(E值很小)，需長

時間曝光(t值特長)；或照明強度很強(E值很大)，需短時間曝光(t值特短)。雖然曝光量的H值相同，卻不

能獲得相同的影像密度。因曝光時間極短或過長，引起膠片的感光效率下降，致使影像密度不足，此即倒

易律失效所致。因膠片種類和特性的不同，一般在曝光時間短于1/lOOOs或長于1s時，易產生倒易律失效。

失效的結果是影像密度不足。任何種類的膠片都有其獨特的倒易律失效的特性。其特性與倒易律失效的補

償值，均由膠片生產的廠家提供。為獲得最佳的拍攝效果，對此必須補償修正。"RECIPROCITY”標度盤，

調度范圍為0~7。只要把正確的數(shù)據(jù)輸入系統(tǒng)，經電子計算，即可以對所用膠片進行修正。倒易律失效補

償值，可通過查閱補償值數(shù)據(jù)表獲得。該表印制在一滑動的白色塑料板上。置于自動曝光調換裝置的底昆

可隨意抽出查閱。不同膠片及其補償值列在表內，查出后將倒易律失效補償旋鈕對向此值。一般情況下，

將旋鈕對向“4”位即可。

(5)把回轉或目鏡取景器的屏幕選擇桿調到“35”位：此時，“35mm”的長方形畫幅框線由非連續(xù)的四

角形刻線構成)處于連續(xù)的長方形框線之中。在調焦取景屏上，有多種適于不同畫幅的取景框線。在取景時,

要準確辨認，找到所需的相應畫幅框線。

(6)屈光度調節(jié)：轉動回轉或目鏡前端的“屈光度調節(jié)環(huán)”觀察屏幕上的十字線，轉至能清晰的分辨出

兩條平行的雙十字線上。調準雙十字線后，在拍攝過程中目鏡取景器不準轉動。在取景聚焦時，要時刻注

意觀察十字線是否仍為雙線，使之永保雙十字線狀態(tài)。

(7)取景聚焦：通過目鏡取景器尋找理想的拍攝物像，并對被攝樣品聚焦。正確的選用物鏡和目鏡，使

放大的被攝樣品的物像觸及框線，以充分利用35mm框線所允許的放大范圍。35mm畫幅的長寬比為3:2。

裝膠卷的照相機身可行360。旋轉，在取景時可旋轉照相機身使影像與畫幅的長短軸向相應。

(8)曝光校正標度盤(EXPOUSUREADJ.)的調整：按視場背景的明暗、被攝樣品的密度及分布狀態(tài)，將

曝光校正旋鈕，轉向適宜的位置，進行曝光補償。在自動曝光調控裝置的光路上放有測光元件硅藍光電

池(siliconbluecell)用以在顯微攝影中，測量視場內畫幅區(qū)域內的光亮強度，并傳送給計算機部分。根據(jù)諸

多信息和數(shù)據(jù)的綜合處理，實現(xiàn)自動曝光。被攝樣品的曝光正確與否，需視視場亮度、樣品密度及分布狀

態(tài)而定。因為測光元件是朝向視場內畫幅區(qū)域平均測光，綜合視場與樣品的總亮度進行曝光。視場背景的

明暗，樣品的密度與分布，直接影響自動曝光的結果。被攝主體是樣品，而非背景或視場。例如，染色體

組型的拍攝，在較大的明亮視場內，散在的十余條或數(shù)十余條小的、深暗的染色體。測光元件綜合全畫幅

區(qū)域的亮度進行曝光。被攝主體的染色體，勢必曝光不足。為此，以被攝樣品為主體，隨視場的明暗及樣

品的分布密度，進行不同的曝光校正補償。曝光的校正或補償，以視場背景明暗和樣品的密度及其分布為

依據(jù)，給予一定的曝光補償，達到準確曝光的目的。其具體校正或補償如下表所示。

OLYMPUSPM-10AD攝影裝置的曝光補償

曝光補償標感光度(ASA相當值

物體狀態(tài)曝光變化

度*)

暗視野中稀疏分布著暗物體().2525超過2級

暗視野中分散著物體0.550超過1級

整個視野中均勻地分布著物體1100標準

暗視野中分散著暗物體2200低于I級

暗視野中稀疏分散著物體4**400低于2級

*指使用ASA100的膠片時，ASA變化情況

**如果曝光補償?shù)臉硕炔蛔阌脮r、用ASA感光度標度盤進行補調

曝光校正標度盤從中部1位左右等分，左側為明視場(BRIGHTFIELD)的校正范圍，從1起弧線左下，

數(shù)值區(qū)段為1-0.5-0.25；右側為暗視場(DARKF正LD)的校正范圍，從1起弧線右下，數(shù)值區(qū)段為1-24。

在每一區(qū)段內，再劃分三個刻度，每一刻度相當于1/3級。標度盤的數(shù)值與曝光量的關系，以1為標準，

膠片感光度相當于ASA100;旋鈕調至0.5處，膠片感光度相當于減去0.5倍，由ASA100降至ASA50,實

際曝光量增加二倍；當旋鈕調至2時，相當于膠片感光度增加一倍。由ASA100增至200,實際曝光量減

少二倍。

(9)察看指示燈：自動曝光調控裝置接通電源后，安全燈“SAFETY”點亮，燈色起指示作用。攝影系

統(tǒng)正常時，燈顯綠色，可行拍攝。當照度過強或不足，超出該裝置允許的曝光范圍時，燈顯紅色并伴有警

報聲，此時不可進行拍攝。待經調節(jié)恢復正常后，方可拍攝。

(10)選用濾色鏡：在顯微鏡應的濾色鏡梁上，根據(jù)需要加用各種不同的濾色鏡。欲提高影像反差時，

加用與樣品染色互為補色的濾色鏡；欲提高影像分辨率時，加用與被攝樣品同色的濾色鏡。

(11)曝光：按下快門釋放按鍵“EXPOSE”，快門開啟膠片感光，曝光同時，工作燈亮；快門閉合曝光

結束，燈熄滅，膠卷自動進片?張。

(12)膠卷用盡：整個膠卷拍攝完了時，紅色的膠片結束燈“FILMEND”亮。

(13)膠片拍攝完之后，按下面的操作程序取出膠卷：

①一旦全卷膠片拍完，卷片馬達停止工作，控制裝置上的膠片結束燈亮，并伴有警告聲。待卸下膠卷

或拿掉暗箱機身以及壓下“TIMEOFF”按鈕時?，燈滅聲息。

②反時針方向，把機身上的倒片釋放離合器轉動90。，使卷片的齒輪可以倒轉。

③搬開倒片手柄，按順時針方向連續(xù)繞動，當膠片處于倒轉時，感有拉力，當拉力驟然消失時，示膠

片頭已脫離卷片軸桿，攝完的膠卷已全部進入暗盒，外剩的只是裝膠卷時外露的片頭。(切記：片頭絕不

要全部倒入暗盒，以免光線由暗盒進出片的縫隙進入。待膠片完全倒轉后，倒片釋放離合器自動復位)

2.35mm彩色膠片的顯微攝影

彩色片的顯微攝影，除幾項獨具的程序外，其拍攝過程基本同于黑白膠片的顯微攝影。請按前述程序

進行。下面僅就彩色片的特點，談幾個需要注意的問題。

(1)彩色膠片的選用

彩色膠片種類多，性能各異，用途不一，沖洗程序亦不同。在拍攝前，一定要根據(jù)自己的目的及要求，

選用適宜的彩色膠卷。在選用彩色膠卷時，應考慮下列幾種因素：

①彩色負片和彩色反轉片兩者差異較大，性能、用途不同。如果作為擴放彩色照片用，應選取彩

色負片。若作為制版或用以幻燈之用，要選用彩色反轉片。

②日光型彩色片和燈光型彩色片從所需平衡色溫上看，彩色負片和彩色反轉片均有日光型和燈光

型兩類。日光型膠片的平衡色混為5400~5600K,燈光型的平均色混為3200~3400K,要記清所用彩色片的

色溫類型，以便進行光源色溫的校正。

③生產廠家和牌號各膠片生產廠家，生產水平不一，質量好壞也相差懸殊。廠家和牌號是膠片質

量的標志，要慎重選購。

④有效期和乳劑號彩色膠片的質量會隨存放時間的延長而降低，超出有效期后，各種照相性能均

有所下降。盡量不要使用過期的彩色膠片。

(2)色溫的調節(jié)

光源的色溫必須和膠片的平衡色溫一致，否則，彩色影像就無法真實地再現(xiàn)出物體的顏色。光源色溫

高于膠片的平衡色溫時，彩色照片影像的色調偏青藍色調；光源色溫低于膠片平衡色溫時，彩色照片的影

像偏橙紅色調。彩色膠片雖有日光型和燈光型兩類，但在攝影實踐中，作為照明的光源是多種多樣的，它

們的色溫變化很大，與彩色膠片要求的平衡色溫相差也較大。有時要用日光型片在燈光下攝影；有時又需

要用燈光型片在日光下攝影。為使光源色溫適于所用的彩色片的平衡色溫，必須對光源色溫加以調整。

OLYMPUS的PM-10AD型攝影裝置，配有用以調節(jié)光源色溫的專用色溫轉換濾色鏡，一般有45LBD?

(藍色，用于日光型彩色膠片的顯微攝影)和45LBT(琥珀色，用于燈光型彩色膠片的顯微攝影)兩種。

用PM-10AD攝影裝置調節(jié)光源色溫的程序和方法敘述如下：

①安裝PM-CTR色溫微型組件(colortemperaturemodule)：卸下自動曝光裝置機件左手側的蓋子后，將

測量光源色溫的色溫微型組件裝在自動曝光裝置機體的左側，用組件固定螺絲連接，并用硬幣擰緊。

②校準色溫

(a)將被攝樣品放在物鏡下聚焦，然后移開樣品，把載片的空的部分移入光路，以測定光源的色溫。

(b)把自動曝光裝置機體上的光路選擇調節(jié)器桿全部拉出，露出桿上的黃色環(huán)帶(在孔的上緣標有黃色

的“VCT”字樣，示觀察和測定色溫之意)。此時，照明光源的80%進入目鏡取景器，20%進入色溫測量

裝置。

(c)依所用彩色膠片的平衡色溫，將色溫微型組件左側輪上的“D"(日光型)或“T"(燈光型)標志對準

正面長方型字盤中間的三角形標志上。

(d)在顯微鏡應的濾色鏡架上，加色溫轉換濾色鏡(日光型彩色膠片用45LBD濾色鏡，氟燈光型用

45LBT濾色鏡)。

(e)接通電源，調節(jié)色溫。通過前后滑動顯微鏡座右側的滑動電壓控制(slidingvoltagecontrollever),使

照明光源的電壓升降，改變照明光源的色光成分，與色溫轉換濾色鏡一起使色溫提高或降低。通過觀察垂

直成行的色溫測定器示盤上的指示燈的變化，確定所需要的色溫，在色溫測定器示度盤的左側有一縱列透

窗。中間有一個三角形窗，上方為4個綠色正方形窗，下方有4個紅色正方形窗。接通電源后，其中某一

標志窗亮。如果綠色正方形亮，表明色溫偏高，光源中藍光偏多，偏高的視所亮的綠色正方形位置而定，

愈位于上方色溫愈高。如果紅色正方形亮示色溫低，光源中紅光偏多，其偏多的程度視所亮的紅色正方形

位置而定，正方形位置愈低，色溫愈低，色光中紅色愈多。只有中央的紅色三角形窗亮時，色溫恰到好處，

此時的光源色溫與彩色膠片所要的色溫平衡。

色溫測定器上的標志燈的變化，要通過照明光源的電壓升降來控制。一旦色溫校準，光源的電壓,.濾

色鏡系統(tǒng)不準絲毫改變。否則色溫將會失去平衡。

⑴將光路選擇調節(jié)器桿推進一級，使綠色環(huán)帶(CVE)位于孔口處，以進行拍攝和觀察。

(g)將載片上的樣品移入光路如果光源照明過亮，需要降低照明時，千萬不要降低電壓，以防色溫

降低。用加放中灰濾色鏡(neutraldensityfilter)的方法，降低照明強度。因為ND濾色鏡是一種不改變色溫,

僅減少照明強度的濾色鏡。隨后，按正常程序進行拍攝，其操作方法與黑白膠片的顯微攝影相同。

彩色膠片的沖洗要求嚴格，因條件限制不能自行沖洗時，可送沖洗單位加工。

(三)自動曝光控制裝置的特殊應用

1.自動曝光鎖(AELOCK)的使用

當被攝樣品很大或使用高倍率攝影時，一個完整的標本需分區(qū)段依次進行連續(xù)的幾次拍攝，在印、放

照片后再連接在一起。為此須使用一樣品，不同構圖的各張底片，要有嚴格相等的曝光量。AELOCK鍵

就是為了滿足這種需求而設置的。

在樣品的典型區(qū)域選定之后，按壓下AELOCK鍵(該鍵上方的指示燈閃亮)，從而使曝光時間(包括

以后的曝光時間)固定，使每張底片的曝光量相同，直到再次壓下AELOCK鍵時為止。

2.135膠片的多重曝光

自動曝光調控裝置裝有135臼動卷片裝置，每次曝光后，自動地卷繞底片一張，但依下述操作方式可

達到時同一張底片進行多次曝光的目的。

(1)把膠片畫幅選擇按健(FORMAT)中，標有“L”的中部按鈕壓下，使自動卷片功能喪失。

(2)將ASA膠片感光度示度盤旋鈕，調到所用膠片實際感光度的8倍(即把ASA100的膠片感光度值，

調至ASA800)的檔位上。把感光度調高，可防止曝光過度。

多重曝光完了后，要壓下“35”膠片畫幅按鍵，并壓下膠片前進按鈕(WINDING)以解除多重曝光，使

多重曝光這張底片卷過。

七、顯微攝影的影像放大率的計算

顯微攝影后，一般需要對負片影像放大率以及照片的影像放大率進行計算。其計算方法如下：

1.膠片畫幅上影像放大率的計算

顯微攝影的135膠片的影像放大率，因所用顯微鏡及其攝影裝置的不同而有差別。現(xiàn)以OLYMPUS顯

微鏡的PM-10AD攝影裝置為例介紹一下135膠片影像放大率的計算方法。

OLYMPUS顯微鏡的PM-1OAD攝影裝置35mm膠片上影像放大率，有兩種計算方法：

①使用FK和NFK攝影鏡時：

影像放大率=物鏡放大率x攝影目鏡放大率(注意：不附加攝影透鏡的放大倍率)

②使用P目鏡時：

膠片影像放大率=物鏡放大率xP目鏡放大率x攝影透鏡放大率(0.5x)

具體放大率的計算如下表所示：

OLYMPUSPM-10AD攝影裝置135膠片的影像放大率

目鏡FK(NFK)P

物鏡3.3x6.7x7x10x

4x13.226.81420

10x33673550

20x6613470100

40x132270140200

lOOx330670350500

2.35mm負片的放大照片倍率計算法

負片的影像通過放大機擴大成照片，其增率計算一般無公式可循，因為放大機的結構、聚光鏡的倍數(shù)、

鏡頭焦距以及物距的不同，用某一公式計算是相當困難而復雜的?，F(xiàn)介紹一簡便而準確的方法，計算放大

照片的倍率。

物鏡測微計(objectivemicrometer)又稱載物臺測微計(stagemicrometer),供透射光使用。為-長方形，

形同載玻片，中心刻一分度尺，長1或2mm，姍'為100或200,胳，每1小格的實際長度為0.01mm(l()|im)o

其計算方法如下：

在樣品顯微攝影的同時，把物鏡測微計放在載物臺聚焦，拍成清晰的影像(負片)。即在獲得被攝樣品

的負片同時，也獲得了同一放大率的物鏡物鏡測微計的負片。因測微計每1格的實際長度為lOgm,故無

論是縮小還是放大，它的絕對長度總是每1格lOpn。

在放大被攝樣品的照片同時，以同一放大倍率放一張物鏡測微計的照片。然后實際測量放大照片中每

一測微計1格長度，被除后所得之商，即為放大率。

例如：物鏡測微計放大照片中，每格長度為2.5cm,此新照片的放大率應計算為：2.5x10000+10=2500,

所得之值2500即為照片的放大倍率，即影像被放大了2500倍。

八、黑白膠片的沖洗

膠卷拍攝完畢，應在短時間內沖洗，不可久留。如暫不沖洗，應存放在冷涼、干燥和避光之處。最好

還是拍攝后立即沖洗，保存時間長、潛影衰退。

黑白膠片的沖洗，包括顯影、停顯、定影、水洗和晾干等過程。現(xiàn)將沖洗的具體操作簡述如下：

(—)顯影(develop)

用顯影液，把膠片的潛影還原為可見的與實際景物相反的負像的過程稱作顯影。

1.顯影液

黑白膠片所用的各種顯影液，一般由顯影劑、保護劑、促進劑和抑制劑等各類藥品組成。

(1)顯影劑：是一類還原劑，能使已感光的銀鹽還原為金屬銀。常用的顯影劑有水吐爾(對甲氨基苯酚

硫酸鹽)、對苯二酚和菲尼酮(1-苯基-4,5-二氫毗哇-3-酮)等。

(2)保護劑：延緩顯影劑氧化，防止顯影劑失效。常用的保護劑是無水亞硫酸鈉(Na2so①與氧的化

合能力強，能防止顯影液氧化，并具有溶解鹵化銀的能力。

(3)促進劑：為一類堿性物質，能增強顯影劑的顯影作用。常用的藥品有無水碳酸鈉，硼砂(四硼酸鈉)

和氫氧化鈉等。

(4)抑制劑：抑制感光少或未感光部分的鹵化銀還原，防止產生灰霧。常用藥品是漠化鉀，它能控制顯

影速度，減少產生灰霧，增強影像反差，用量過多能降低感光度。

上述四類藥品，按不同的配方組成不同的顯影液。藥品要保證