微生物檢驗筆記

在我們的日常微生物檢驗中，經(jīng)常會遇到一些較長時間深部感染且用藥效果特別不好的的深

部膿液標(biāo)本，我們常規(guī)的處理辦法是用肉湯管、血平板增菌，經(jīng)過24小時培養(yǎng)后，結(jié)果經(jīng)

常會發(fā)現(xiàn)并無細(xì)菌生長，所以根本就無法做藥敏實驗，所以醫(yī)生就會問：肯定是細(xì)菌感染才

會有膿的，怎么會沒有細(xì)菌呢？患者也在想：我花了那么多的檢驗費，結(jié)果等于白費，醫(yī)生

不是說做了這個實驗就可以指導(dǎo)用藥了嗎？

經(jīng)常發(fā)生這種事情，我們無語

對于這個現(xiàn)象，我也曾翻閱一些書籍、請教一些資深老師，眾說紛紜。

我有以下幾點思考(僅僅是個人猜想)，請大家指正：

1、深部膿液內(nèi)本來是厭氧菌生長，用常規(guī)有氧條件培養(yǎng)，細(xì)菌不會生長。

2、患者體內(nèi)殘余抗生素抑制了細(xì)菌的生長。

3,白細(xì)胞及死亡后的尸體釋放出某些抑菌物質(zhì)抑制了細(xì)菌的生長。

4、長時間感染后?的膿液中本來就沒有細(xì)菌，是因為早期的細(xì)菌已經(jīng)被臼細(xì)胞吞噬掉，卓細(xì)

胞及死亡后的尸體釋放出某些抑菌物質(zhì)抑制了細(xì)菌的進(jìn)一步繁殖。所以早期細(xì)菌死亡

后，后期再也沒有細(xì)菌生長了。人們的錯覺是膿液中肯定有許多許多的細(xì)菌。

5、早期的膿細(xì)胞是由丁?白細(xì)胞吞噬掉細(xì)菌后中毒而死亡的尸體。

6、后期的膿細(xì)胞是由于白細(xì)胞把先前的膿細(xì)胞視為異物攻擊而自己又不斷死亡變成膿細(xì)

胞，并不是吞噬細(xì)菌的結(jié)果。那么這時的抗生素不論其種類有好多、檔次有多高，對

于感染都無濟(jì)于事??！這是醫(yī)生和病人最頭疼的事情。所以這時最好的處理辦法是以將

局部的膿液清理干凈為主，并且要反復(fù)清理，適當(dāng)選用抗生素防止進(jìn)一步感染。

7、如果當(dāng)時結(jié)合做個涂片進(jìn)行革藍(lán)及瑞氏染色檢查，臨床上的確是經(jīng)常遇到這種培養(yǎng)不出

細(xì)菌的情況，我想應(yīng)該同時用厭氧和需氧培養(yǎng)比較好

痰及其他下呼吸道標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查

痰培養(yǎng)主要針對下呼吸道感染病原菌的調(diào)查，如細(xì)菌性肺炎肺結(jié)核、慢性支氣管炎、

支氣管擴(kuò)張癥、肺膿腫、深部霉菌性肺部感染或肺炎支原體引起的感染等。

如分離到結(jié)核分枝桿菌、肺炎支原體或深部霉菌，則可確定為該菌與?感染有關(guān)，如分離

到金黃色葡萄球菌，肺炎鏈球菌等則要小心判斷，因為它們亦可能是上呼吸道常在菌。細(xì)

菌性肺炎可能分離到的菌種有；金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球

菌、肺炎克雷伯菌、腸桿菌科細(xì)菌；肺結(jié)核可能分離到的菌種有；結(jié)核分枝桿菌(68%)、鳥

-胞內(nèi)分枝桿菌(18%)、偶發(fā)分枝桿菌(5%)堪薩斯分枝桿菌(3%)、摞瘍分枝桿菌(3%)、龜分

枝桿菌(1.5%)。

1標(biāo)本采集

1.1采集標(biāo)本均應(yīng)在用藥前，一般以晨痰為好(痰量多、含菌量多)，刷牙，嗽口，以除去

口腔內(nèi)大部分雜菌，用力自肺部咳出痰液，吐入廣口有蓋的清潔無菌容器內(nèi)，一小時內(nèi)送

檢，咳痰時應(yīng)盡量防止唾液及鼻咽部分泌物混入，以減少污染。

1.2檢查結(jié)核分枝桿菌者，如能在清晨采集得當(dāng)，往往一次即可。若患者咳痰較少，則應(yīng)

采集24小時痰液，以提高陽性率。結(jié)核菌培養(yǎng)者應(yīng)連續(xù)3天采集3次晨痰作3次培養(yǎng)。

1.3痰培養(yǎng)亦可用氣管穿剌抽取標(biāo)本，用14號針頭經(jīng)環(huán)狀與甲狀軟骨膜小心穿剌，再以

聚乙烯導(dǎo)管經(jīng)針管伸至氣管，然后以針筒套住導(dǎo)管往后拉抽吸出分泌物，此法適用于厭氧

培養(yǎng)。

1.4支氣管分泌物，應(yīng)由?？漆t(yī)師用支氣管鏡雙層套刷直接采集肺部的分泌物。雖然雙層

導(dǎo)管可保護(hù)采檢刷不受口腔正常菌污染，但還應(yīng)以菌落計數(shù)法來評價標(biāo)本內(nèi)細(xì)菌量，一般

以lOtFU/ml為臨界值。菌落計數(shù)方法：雙層套刷采得標(biāo)本后（約0.1ml）直接插入無菌的

1.0ml林格乳酸鹽溶液，細(xì)菌室收到標(biāo)本后立即以旋轉(zhuǎn)混合器混合均勻，取0.01ml的環(huán)

接種到培養(yǎng)基，CO2環(huán)境培養(yǎng)過夜后作菌落計數(shù)。當(dāng)平板上生長菌落大于10個時，表示培

養(yǎng)陽性有意義。

1.5支氣管肺泡沖洗液采集方法亦用支氣管鏡雙層套刷，不同的是須灌入生理鹽水，使

之達(dá)支氣管、肺泡、再回收，重復(fù)數(shù)次。目的是將肺泡內(nèi)分泌物洗出來，標(biāo)本應(yīng)用同時作

涂片檢查，鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)目《現(xiàn)時，表示未受到口腔分泌物污染。菌落計數(shù)NlO'CFU/ml

才具有診斷意義。Kahn等人發(fā)現(xiàn)此法診斷細(xì)菌性肺炎的敏感度達(dá)100%特異性亦為100%。

且適合于培養(yǎng)厭氧菌，診斷是否由厭氧菌引起的肺膿瘍。

2肉眼觀察

觀察痰液的顏色、粘度、有無血絲、膿，如痰呈水樣，很明顯是唾液，應(yīng)拒收并說明原

因。如見有顆粒存在，則應(yīng)注意可能與放線菌屬及奴卡菌屬有關(guān)。

3革蘭染色涂片檢查

選擇呈血色或銹色膿樣標(biāo)本作涂片革蘭染色鏡檢。

3.1如診斷為肺炎或標(biāo)本來自重癥監(jiān)護(hù)病房，應(yīng)在2小時內(nèi)作出涂片的初步報告。

3.2一般病人的標(biāo)本可在當(dāng)日作出初步報告。

3.3涂片觀察應(yīng)注意細(xì)菌的染色性、形態(tài)、排列，以及真菌或酵母菌的抱子或菌絲。

3.3.1如發(fā)現(xiàn)許多具有莢膜、矛頭狀排列的革蘭陽性雙球菌（有時呈單個、短鏈狀），可能

是肺炎鏈球菌，有條件時再作莢膜染色或莢膜腫脹反應(yīng)。

3.3.2如發(fā)現(xiàn)許多革蘭陽性球菌成簇狀排列，可能是金黃色葡萄球菌。

3.3.3如發(fā)現(xiàn)許多短而粗的、具有莢膜的革蘭陰性桿菌，可能是肺炎克雷伯菌。

3.3.4如發(fā)現(xiàn)革蘭陽性分枝菌絲，應(yīng)懷疑為放線菌或奴卡菌，如肉眼見到硫黃顆粒，則可

能性更大，應(yīng)作抗酸染色，并接種專用培養(yǎng)基。

（檢查放線菌或奴卡菌的抗酸染色，應(yīng)將酸酒精調(diào)換2%硫酸水溶液）。

3.3.5如發(fā)現(xiàn)革蘭陽性酵母菌或其他霉菌，應(yīng)接種專用培養(yǎng)基進(jìn)行分離。

3.4革蘭染色涂片結(jié)果僅為假設(shè)性診斷，快速作出初步報告，并以培養(yǎng)方法證實。

3.5痰標(biāo)本在接種前還應(yīng)作白細(xì)胞和上皮細(xì)胞檢查，用革蘭染色涂片以低倍鏡觀察并計數(shù)

中性粒細(xì)胞及磷狀上皮細(xì)胞，當(dāng)鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)＞25/LPF時應(yīng)重送標(biāo)本。

4痰標(biāo)本接種前處理

4.1漂洗法將膿樣痰倒入盛有無菌生理鹽水及玻璃珠的試管中，充分振搖，然后用接種環(huán)

挑出少許標(biāo)本接種。

4.2溶痰劑處理法有人建議下列藥品可作為溶痰劑：10g/L二硫蘇糖醇（dithiothreitol

DTT）水溶液；2.5g/L乙酰半胱氨酸（N-acety-L-Cystine）水溶液（商品名痰易凈）。將標(biāo)本

裝在離心管中，加入等量上述溶痰劑，以旋轉(zhuǎn)攪拌器震動片刻（20?30杪），靜置10?15

分鐘后再旋轉(zhuǎn)攪拌。然后以3000r/min離心10min,棄上清液，立即將沉淀物接種培養(yǎng)

基。

4.3消化-去污染處理法用于結(jié)核菌培養(yǎng)。

4.3.1二硫蘇糖醇法二硫蘇糖醉液內(nèi)含20g/LNaOH,與痰等量置離心管內(nèi)，以旋轉(zhuǎn)攪

拌器（或其他）劇烈震動，再靜置15分鐘，加無菌0.067mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.8）至離

心管口1.2cm處，關(guān)緊蓋，顛倒至少3次。3000r/min離心15分鐘，去上清,保留沉淀

物，用火焰通過管口。加1?2ml的2.0g/L牛血清白蛋白溶液至沉淀物，以手輕搖混合，

用此沉淀物制涂片并接種培養(yǎng)基。

4.3.2乙酰半胱氨酸法痰標(biāo)本置離心管，并加等量溶痰劑，以旋轉(zhuǎn)攪拌器攪拌5?20

秒，避免太劇烈，置室溫15分鐘，其余步驟與前法相同。以上二種方法試劑配制：（乙酰

半胱氨酸，按需要量當(dāng)天配制，18?24小時后失去溶痰作用）40g/LNaOH25m1高壓滅菌，

29g/L枸椽酸鈉25ml高壓滅菌，N-acetyl-cysteine0.25克，混和，總?cè)萘繛?0ml。

0.067mol/L磷酸鹽緩沖液貯存液：0.067mol/LNa2HP0i9.47g/L,0.067mol/LKH/O,

9.07g/Lo應(yīng)用液：上述二液等量混合，調(diào)pH至6.8（用上述二液調(diào)），121℃15分鐘，置

4℃冰箱保存。

4.3.340g/LNaOH法痰標(biāo)本與40g/LNaOH等量混和，強(qiáng)力振蕩5?20秒，置室溫15

分鐘，加磷酸鹽緩沖液至離管口1.2cm處，倒轉(zhuǎn)3次，離心15分鐘，棄上清液。加一滴

酚紅指示劑，以2mol/LHC1滴加至紅色變成黃色、搖勻管中沉淀物，接種。

由于NaOH對分枝桿菌及污染菌具高毒性、每一步驟之時間必須遵守，否則分枝桿菌極

易死亡。

4.3.450g/Loxalicacid（草酸法）（臺灣林口長庚醫(yī)院用此法）本法對銅綠假單胞菌污

染的標(biāo)本處理，效果較好。

4.3.5氯化十六烷基毗咤法10g/L氯化十六烷基毗嚏含20g/LNaCl,痰標(biāo)本須轉(zhuǎn)送或

郵寄，可用此法，分枝桿菌可生存8天以上。

5接種

5.1按1995年出版《臨床微生物學(xué)手冊》要求接種相應(yīng)的培養(yǎng)基。

5.2臺灣蔡文城推薦接種培養(yǎng)基（常規(guī)痰培養(yǎng)）。

5.2.1一個雙盤平板平板中間有分隔，可傾注二種培養(yǎng)基，一半是苯乙醇瓊脂或哥倫比

亞CNA瓊脂（內(nèi)含粘菌素和蔡咤酸），另一半是EMB或MAC瓊脂。

5.2.2一個血平板并貼0.04單位的桿菌肽紙片，如懷疑肺炎鏈球菌時，可再貼5ng/

片奧本托欣紙片。

5.2.3一個巧克力平板。

5.2.4每個平板均按分段劃線法，將標(biāo)本中細(xì)菌分離出來。

5.2.5孵育在35℃5%C0?環(huán)境中。

6鑒定及報告

6.1第2天觀察各種平板，并記錄細(xì)菌生長的數(shù)量及菌落形態(tài)。

6.2每一種生長菌以多量、中量、少量和極少量表示之（第一區(qū)＞10個，第二區(qū)＜5個為

少量；第一區(qū)＞10個，第二區(qū)＞5個為中量；第一區(qū)＞10個，第二區(qū)＞5個，第三區(qū)＞5

個為多量）。

6.3作涂片革蘭染色鏡檢。

6.4具有金黃色葡萄球菌、腸桿菌科細(xì)菌或銅綠假單胞菌等快速生長菌，可立即作快速藥

敏試驗。

6.5按需要作生化試驗，以鑒定細(xì)菌。

6.6有可能的話、第二天就可發(fā)出最后報告。如疑金黃色葡萄球菌——作血漿凝固酶試驗,

疑銅綠假單胞菌——氧化酶試驗，大腸埃希菌——靛基質(zhì)斑點試驗，肺炎鏈球菌一一膽汁溶

菌、奧本托欣試驗。

6.7第三天可報告常規(guī)痰培養(yǎng)結(jié)果寫出菌名并標(biāo)出生長菌量、依數(shù)量多寡排列。例如：主

要生長菌為金黃色葡萄球菌，多量；流感嗜M桿菌，多量；奈瑟菌屬細(xì)菌，少量。報告多

量生長菌的藥敏結(jié)果。

6.8只有當(dāng)培養(yǎng)生長菌數(shù)量為多量到中量時，才有可能為致病菌。

6.9痰培養(yǎng)可能有1?3種細(xì)菌報告，臨床醫(yī)師必須依臨床癥狀及涂片結(jié)果判斷作出何種

為真正的致病菌。例如肺炎鏈球菌生長速度較慢，可能被生長速度快的細(xì)菌所掩蓋，僅參

考培養(yǎng)結(jié)果，很可能會被忽略掉，如先觀看直接涂片，可以反映標(biāo)本中各種細(xì)菌的真實數(shù)

縣里O

7注意事項痰培養(yǎng)常會有錯誤發(fā)生、甚少能得到很準(zhǔn)確的結(jié)果，其原因有：

7.1收集標(biāo)本人員不明了必須采集新鮮、深咳之痰液。

7.2沒有迅速將標(biāo)本送到檢驗室，檢驗人員沒有立即處理接種標(biāo)本。

7.3痰液受到口咽處正常細(xì)菌群的污染。

7.4難以決定所分離的菌種何者確實與肺部感染有關(guān)，因痰培養(yǎng)很少得到純培養(yǎng)。有人報

告肺炎鏈球菌菌血癥患者的痰標(biāo)本中有45%培養(yǎng)不出肺炎鏈球菌。

7.5痰標(biāo)本不能作厭氧培養(yǎng)。

7.6痰液標(biāo)本作結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)作結(jié)核分枝桿菌檢查的實驗室應(yīng)具備生物安全箱，操

作室的消毒設(shè)施必須完全，沾有分枝桿菌的接種環(huán)不能直接在火焰上消毒，任何廢棄物必

須滅菌后棄之，任何時候應(yīng)防止感染自己或傳染他人。

（楊林編發(fā)）

張聯(lián)璧（蘇州醫(yī)學(xué)院附屬一院,江蘇蘇州215006）

大量的臨床資料顯示，檢出率高的大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞桿菌、

腸球菌等病原菌，對抗生素的敏感率逐年下降，如:大腸埃希氏菌對環(huán)丙沙星的敏感性，200

1年為65.6%,2002年為47.3%,2003年為36.2%。因此，臨床醫(yī)生結(jié)合細(xì)菌藥敏報告選用

抗生素，顯得尤為重要。（4）測定細(xì)菌是否產(chǎn)生ES-BLS對于臨床治療非常重要，當(dāng)分離

出ESBLS菌株時，不管體外藥敏試驗敏感與否，應(yīng)當(dāng)及時向臨床報告，避免使用青霉素類、

一代頭狗、二代頭抱、三代頭抱菌素和氨曲南，以免造成菌群失調(diào)和多重耐藥，可選用碳青

霉烯類、頭霉素類、含酶抑制劑、B-內(nèi)酰胺類及氟唆諾酮類藥物。

近年來，由于細(xì)菌獲得性耐藥機(jī)制的迅速發(fā)展，細(xì)菌耐藥問題變得十分復(fù)雜，某些菌在

同一細(xì)菌體內(nèi)同時存在多種耐藥機(jī)制，如腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生由質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLS、質(zhì)粒介

導(dǎo)的AMPC酶、染色體介導(dǎo)的AMPC酶等，導(dǎo)致細(xì)菌多重耐藥，治療失敗，給感染性疾病

的控制帶來了巨大障礙，使臨床醫(yī)學(xué)在感染控制的問題匕面臨抗生素發(fā)明以來最嚴(yán)重的挑

戰(zhàn)。因此，臨床結(jié)合細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏試驗結(jié)果，對治療由細(xì)菌引起的泌尿系感染有重大的指

導(dǎo)意義。

各種標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

血液及骨髓標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】以無菌方法取靜脈血。成人5?6ml,嬰幼兒1?2ml,骨髓1?2ml。注入

血培養(yǎng)瓶立即混勻送檢（標(biāo)本量：培養(yǎng)液量以1：10為宜），必須在應(yīng)用抗生素前取血。對

已用抗生素者應(yīng)在下次用藥前取血，并在申清單上注明（因需特殊培養(yǎng)基）。亞急性細(xì)菌性

心內(nèi)膜炎及布魯氏菌感染病人，除在發(fā)熱期采血外，要多次采血（24h采血3-4次）和增加

采血量（10ml）。

【細(xì)菌學(xué)檢查】血或骨髓培養(yǎng)應(yīng)孵育7天，此期間如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長，經(jīng)徐片革蘭染色鏡檢

后立即口頭報告“疑有革蘭x性菌生長"，此后約6?8h應(yīng)報告藥敏試驗初步結(jié)果，次日發(fā)

出正式細(xì)菌鑒定及藥敏報告。培養(yǎng)3天無菌生長通知醫(yī)生，7天無菌生長正式發(fā)出陰性報

告。

尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】一般采用中段尿采集法：用肥皂水及1：1000高鎰酸鉀或新潔爾滅液清洗會

陰部后，收集中段尿10?20ml盛于無菌容器，加蓋立即送檢，不超過lh。還可根據(jù)需要

采用導(dǎo)尿法、腎盂尿采集法、膀骯穿刺法及24h尿收集法。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：查革蘭陽性菌、陰性菌或假絲酵母菌?？顾崛旧翰榻Y(jié)核分枝

桿菌。淋球菌涂片：用革蘭染色和呂氏美藍(lán)染色，如發(fā)現(xiàn)革蘭陰性成雙排列的圓形或橢

圓形球菌，應(yīng)進(jìn)一步培養(yǎng)證實。

2.中段尿細(xì)菌計數(shù)：用來助診尿路感染。

3.細(xì)菌培養(yǎng)：48h無細(xì)菌生長，報告陰性。此間有細(xì)菌生長，需進(jìn)行鑒定相做藥敏試驗。

【臨床意義】

1.正常人膀胱尿液通常無菌，尿液細(xì)菌學(xué)檢查有助于泌尿生殖道感染的診斷；同時藥敏

試驗可選擇有效的抗菌藥物，并可作為療效觀察。

2.中段尿細(xì)菌計數(shù)，如為球菌感染，如為桿菌感染，＞107/ml,常為

診斷泌尿系感染的依據(jù)。也可進(jìn)行離心尿計數(shù)，＞10個菌/HPF為泌尿系感染。但對于

免疫功能低下、用抗生素后病人的尿，尿濃度變化大及尿pH值在5.0以下、8.5以上等不

利于細(xì)菌生長的尿，尿頻，病原菌發(fā)育要求條件高，采尿時外陰部消毒劑混入等情況時，

細(xì)菌計數(shù)需結(jié)合臨床具體分析。

3.10%的尿路感染者可能在同份尿標(biāo)本中分離到兩種細(xì)菌，并都是病原菌。若同份標(biāo)本

中檢出三種以上不同微生物，應(yīng)認(rèn)為標(biāo)本被污染。通常尿標(biāo)本中革蘭陰性桿菌苗落計數(shù)》

10'CFU/ml,革蘭陽性球菌苗落計數(shù)〉10MCFU/ml有診斷意義。

糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】自然排便，挑取有膿血.、粘液部分，放入無菌容器中，或置于保存液、增菌

液中立即送檢。排便困難者可采用直腸拭于法。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：濕片檢查、制動試驗利革蘭染色鏡檢：可確診霍亂弧菌?？顾崛旧嚎刹?/p>

結(jié)核分枝桿菌。革蘭染色：可查葡萄球菌、艱難梭菌、彎曲菌和酵母樣菌等。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：根據(jù)需要檢查的細(xì)菌選擇糞便培養(yǎng)條件，一般需培養(yǎng)2?3天，如有陽性菌

生長，需進(jìn)一步進(jìn)行生化鑒定和藥敏試驗后報告。

【臨床意義】人腸道中存在大量細(xì)菌，正常情況下處于?生態(tài)平衡，不會致病。當(dāng)機(jī)體抵抗

力低下，某引起細(xì)菌入侵或濫用抗生素致腸道菌群失調(diào)時，產(chǎn)生腹瀉。

腦脊髓液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】以無菌方法取腦脊髓液3?5ml立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：查找?般細(xì)菌，尤其腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和鏈球菌多見?？?/p>

酸染色：查找結(jié)核分枝桿菌。墨汁染色：查找新型隱球菌。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：腦有髓液培養(yǎng)多數(shù)需3?4天，在此期間如有細(xì)菌生長，需經(jīng)鑒定報告“xx

菌”，同時報告藥敏試驗結(jié)果。

胸、腹水標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】以無菌方法穿刺抽取胸水或腹水5一10ml,注入含106mmol/L枸檬酸鈉

抗凝劑的無菌容器中，抗凝劑與標(biāo)本之比為1：10,立即送檢。注意應(yīng)在用藥前或停藥后

1~2日采集。

【細(xì)菌學(xué)檢杳】

1.涂片檢查：革蘭染色：查找一般細(xì)菌。抗酸染色：查找結(jié)核分枝桿菌。2.細(xì)菌培養(yǎng)：

一般培養(yǎng)2?3天，培養(yǎng)2天無細(xì)菌生長可報告之，此間如有細(xì)菌生長，需進(jìn)一步鑒定和

藥敏試驗后報告。

【臨床意義1正常胸腹腔僅有極少量無菌液體。漏出液無細(xì)菌，滲出液多可找到病原菌（腫

瘤性除外）。如有細(xì)菌，則源于原發(fā)性或繼發(fā)性（鄰近器官的炎癥性病變）胸、腹膜炎。心

包穿刺液細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】在B超引導(dǎo)下行穿刺術(shù)。抽取心包液2?5ml,力口抗凝劑（106mm01兒枸椽

酸鈉：標(biāo)本為1：10）立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】內(nèi)容同胸腹水檢查。

【臨床意義】正常心包液極少量，無菌。漏出液無細(xì)菌，滲出液如為感染所致?？梢娂?xì)

菌。常見的細(xì)菌感染有：乙型溶血性鏈球菌、葡萄球菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌，流

感桿菌、銅綠假單胞菌、偶見大腸埃希菌和傷寒沙門菌。急性心包炎常繼發(fā)于風(fēng)濕熱或猩

紅熱、敗血癥、牙齒感染灶、肺炎、膿胸、外傷、縱隔淋巴炎或膈下膿腫。慢性心包炎可

見結(jié)核分枝桿菌，常繼發(fā)于結(jié)核性胸膜炎。

關(guān)節(jié)液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】行關(guān)節(jié)穿刺術(shù)抽取關(guān)節(jié)液2?5ml,加抗凝劑（106mm01/L枸椽酸鈉：標(biāo)本

為1：10）立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】內(nèi)容同胞腹水檢查。

【臨床意義】關(guān)節(jié)滲出性炎癥時可見細(xì)菌。常見的病原菌有：淋病奈瑟菌、葡萄球菌及

鏈球菌，有時也可見結(jié)核分枝桿菌。

膽汁標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】行十二指腸引流術(shù)，分A（膽總管）、B（膽囊）、C（肝膽管）三管收集膽汁于無

菌容器送檢。也可在膽囊及膽管手術(shù)時直接采取或膽囊造影時穿刺采取。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：一般不做，必要時可革蘭染色鏡檢。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：一般需2?3天，48h無菌生長可報告陰性，此間有細(xì)菌生長需進(jìn)一步鑒定

和做藥敏試驗后報告結(jié)果。

【臨床意義】正常人膽道無細(xì)菌。當(dāng)膽道梗阻細(xì)菌侵入，則發(fā)生感染。入侵膽道的細(xì)菌主

要由腸道上行而來，也可由門靜脈或腸淋巴系統(tǒng)進(jìn)入膽道，故膽道感染細(xì)菌多為腸道菌且

與腸道常在菌從相吻合。

眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】

I.采集眼分泌物：先用無菌生理鹽水沖洗眼部，然后用棉拭于拭干，再用無菌棉拭于采

集分泌物。

2.采集咽分泌物：先用清水撤口，用壓舌板將舌向下向外壓，將咽拭子在咽后壁或懸雍

垂后側(cè)涂抹數(shù)次，切勿接觸口腔和舌粘膜。

3.采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭于涂抹病灶部位，切勿接觸周圍粘膜或皮膚。以

上標(biāo)本均需立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：可查出一般細(xì)菌，尤其應(yīng)注意白喉桿菌、假絲酵母菌、奮森螺

旋體和梭形桿菌。抗酸染色：可查出結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：一般細(xì)菌培養(yǎng)2?3天，百日咳桿菌培養(yǎng)需7天，此間如無菌生長可報告之,

如有細(xì)菌生長則需進(jìn)行種類鑒定和藥敏試驗。對正常時無菌的器官，如眼、中耳可報告檢

出細(xì)菌及藥敏試驗結(jié)果；而鼻、咽等帶菌器官檢出病原菌時，可直接報告菌名和藥敏試驗

結(jié)果；如未檢出病原菌，只檢到正常菌群亦應(yīng)報告所見菌名。

【臨床意義】正常人眼、中耳、鼻竇內(nèi)無菌，鼻、咽部有口腔常在菌叢，耳、鼻、咽部感

染的病原菌多源于口腔，正常菌群常干擾對病原菌的判斷。急性細(xì)菌性鼻炎、鼻腔疝腫、

鼻中隔膿腫多由金黃色葡萄球菌引起；猩紅熱、風(fēng)濕熱、急性腎炎思者咽拭于?？蓹z出化

膿性鏈球菌；百日咳患者初期可檢出百日咳桿菌，咽喉部特別是扁桃體的細(xì)菌學(xué)檢查對白

喉具有診斷價值；急性咽喉炎以鏈球菌感染多見，潰瘍性咽峽炎可由奮森螺旋體和校桿菌

引起。

下呼吸演分泌物細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】

1.自然咳痰法：清晨用清水撤口3次之后，用力咳出深部痰液；痰少或無痰者，可采用

霧化或輕壓胸骨柄上方排痰。

2.氣管鏡下采集。

3.氣管穿刺采集，常用于厭氧菌檢查

4.胃內(nèi)采痰法多用于小兒或衰弱病人。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：首先需觀察涂片中有無纖毛校狀上皮，有較多纖毛柱狀上皮者

可確證是痰；否則標(biāo)本無檢查意義。革蘭染色可檢查一般細(xì)菌，但一定要除外混入的上呼

吸道細(xì)菌和霉菌干擾?？顾崛旧嚎刹檎医Y(jié)核分枝桿菌。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：適合培養(yǎng)的痰標(biāo)本在低倍鏡下細(xì)胞應(yīng)＞25/LPF,上皮細(xì)胞應(yīng)＜25/LPF；

否則說明標(biāo)本留取不合格。下呼吸道病原菌種類繁多，需做基本分離培養(yǎng)和選擇性培養(yǎng)基

培養(yǎng)，一般需2?3天出結(jié)果。

3.報告方式：痰中的病原菌大多屬于機(jī)會致病菌，與正常菌群同在，在報告時應(yīng)作說明。

對于機(jī)會致病菌一般僅當(dāng)其數(shù)量超過正常菌群時，才可報告鑒定及藥敏試驗結(jié)果。檢出致

病菌時，除報告該苗的鑒定名稱外，還需同時報告正常菌群情況。通常以甲型鏈球菌和奈

瑟。菌作為正常菌群存在的指標(biāo)。所報告的細(xì)菌應(yīng)注明與正常菌群比較所占的比例，如在

數(shù)量上多于正常菌群，則診斷為病原菌。未檢出病原菌，則報告“正常菌群

【臨床意義】正常人體下呼吸道無菌，上呼吸道有正常菌群。因下呼吸道分泌物需經(jīng)上呼

吸道排出，常受該處的常在菌群污染。因此，判斷下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，

需對上呼吸道菌群有所了解。常見的上呼吸道棲居菌群中有甲型和丙型鏈球菌、微球菌、

奈瑟菌、嗜血桿菌、表皮葡萄球菌、白喉以外的棒狀桿菌、擬桿菌、校桿菌、厭氧球菌。

病灶分泌物（膿液）標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】

1.棉拭子采集：對已破潰的化膿灶及其他開放性創(chuàng)傷的化膿性標(biāo)本采用此法。

2.抽?。憾嘤糜陂]鎖性膿腫標(biāo)本的采集，以注射器直接送檢（針頭插一橡皮塞隔絕空氣）。

3.對大面積創(chuàng)傷感染，可取感染組織塊或沾有膿汁的內(nèi)層敷料送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：可檢查一般細(xì)菌，特別注意真菌及放線菌的存在?？顾崛旧?/p>

找結(jié)核分枝桿菌（部分奴卡菌也可陽性）。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：一般需2?3日，根據(jù)病情可選擇常規(guī)培養(yǎng)、厭氧培養(yǎng)、結(jié)核菌培養(yǎng)、奴

卡菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)等。人體無菌部位感染。從分泌物中分離到細(xì)菌即有臨床意義，按

分離鑒定結(jié)果報告細(xì)菌名稱及其敏感試驗結(jié)果。當(dāng)感染伴細(xì)菌污染時。通常依靠優(yōu)勢菌

群來確定病原菌。常用的方法是菌落計數(shù)，以檢出數(shù)量上占優(yōu)勢的菌群，再加以分離鑒

定。

【臨床意義】當(dāng)每克組織中細(xì)菌數(shù)量＞（105?106）時，可造成傷口感染。葡萄球菌，鏈球

菌是引起毛囊炎、疳癰、扁桃體炎、化膿性骨髓炎的常見細(xì)菌。炭疽桿菌侵入傷口引起皮

膚炭疽。破傷風(fēng)桿菌感染常累及創(chuàng)傷、燒傷、臍帶殘端等無生活能力的組織。燒傷創(chuàng)面膿

汁以銅綠假單胞菌最多見；其次為金黃色葡萄球菌、變形桿菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希

菌、產(chǎn)堿桿菌、霉菌等；還常見多種細(xì)菌混合感染。常居菌中某種細(xì)菌的數(shù)量占有優(yōu)勢,

且機(jī)體抵抗力低下時也可造成感染。

生殖器官分泌物細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】陰道、子宮頸及前列腺等分泌物及精液由醫(yī)師采集，置無菌試管送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

I.涂片檢查：革蘭染色：可查出一般細(xì)菌，尤其淋病奈瑟菌（需進(jìn)一步培養(yǎng)證實）、杜克

雷嗜血桿菌、假絲酵母菌等?？顾崛旧嚎刹槌鼋Y(jié)核分枝桿菌。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：根據(jù)病情要求選擇培養(yǎng)條件，一般需2?3天，報告鑒定結(jié)果及藥敏試驗結(jié)

果。

【臨床意義】生殖器官的炎癥、結(jié)核，?？刹榈较鄳?yīng)的細(xì)菌，可通過藥敏試驗指導(dǎo)臨床用

藥治療。

2006-5-15

藥敏試驗方法：

K-B法：

I從孵育了16-24小時的瓊脂平板上（血平板），挑出單個菌落，直接用生理鹽水制成0.5

麥?zhǔn)蠁挝弧?/p>

2在15分鐘內(nèi)，用無菌棉拭子蘸取調(diào)好的菌液，在液面上方管壁處旋轉(zhuǎn)并用力擠壓幾次,

以從中擠出過多的菌液。

3用棉拭子在無菌的M-H培養(yǎng)基表面化線接種，再重復(fù)操作兩次，每次將平板轉(zhuǎn)動60度，

每次接種都應(yīng)保證接種物均勻分布，最后用棉拭子涂抹平板的邊緣。

4將確定好的藥敏紙片分貼到平板表面。每個紙片都應(yīng)壓一下，以保證與平板表面完全接

觸。每個紙片中心間距24mm。紙片一旦與平板接觸，不應(yīng)再移動。

5貼完紙片后，應(yīng)在15分鐘內(nèi)放入35度孵箱。嗜血桿菌屬，鏈球菌屬放入3%-5%的CO2

燭缸。

6孵育24小時以后，測量各藥敏紙片抑菌圈直徑，與NCCLS手冊比較，作出結(jié)果判斷。

說明：細(xì)菌藥敏結(jié)果的判斷以NCCLS為標(biāo)準(zhǔn)，所以藥敏試驗的每一步都應(yīng)嚴(yán)格按照

NCCLS操作，否則將失去意義。鏈球菌、奈瑟菌屬、流感嗜血桿菌、除銅綠假單抱菌和

不動桿菌外的假單胞菌屬不用K-B法.

肺炎鏈球菌膠乳凝集測定法

1在一干凈玻片上分別滴兩滴生理鹽水。

2從冰箱取出鑒定試劑（Slidexpneumo-kit）于室溫。

3在其中一滴生理鹽水上滴加R1試劑，在另外一滴上滴加R2試劑，用攪拌棒混勻。

4輕輕晃動玻片2分鐘，觀察結(jié)果。

52分鐘內(nèi)，如R11U現(xiàn)凝集為陽性；如R1和R2均未出現(xiàn)凝集為陰性。

注：R3為陽性對照。

藥敏紙片的選擇

1、革蘭陰性桿菌（腸桿菌科）

頭抱唾后（CTX）頭抱哇林（CZ）頭抱他定（CAZ）

氨芾西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）

頭銜嚷吩（CF）環(huán)丙沙星（CIP）頭抱吠辛（CXM）

慶大霉素（GM）頭的曝后/棒酸（CTX/CA）

頭抱他定/克拉維酸（CAZ/CA）竣莘青霉素（CB）

奧格門?。ˋMX/CA）哌拉西林/三啤巴坦（PIP/TZ）

亞安培南頭抱匹后（FEP）頭抱克羅（CEC）

2、銅綠假單抱菌/不動桿菌

妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）

頭抱哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）頭抱匹胎

頭抱曝腸（CTX）環(huán)丙沙星（CIP）頭抱他定（CAZ）

左旋氧氟沙星（OFL）亞安培南哌拉西林/三晚巴坦

3、金黃色葡萄球菌

苯哇西林（OX）青霉素G（P）頭抱哇林（CZ）阿米卡星（AN）

紅霉素（E）頭抱曝月虧（CTX）環(huán)丙沙星（CIP）

萬古霉素奧格門?。ˋMX/CA）哌拉西林/三哩巴坦

頭抱曝吩（CF）

4、腸球菌

氨葦西林（AM）萬古霉素環(huán)丙沙星（CIP）

慶大霉素（GM）紅霉素（E）氧氟沙星（OFL）

5、除肺炎鏈球菌外鏈球菌

氨芾西林（AM）頭抱曝后（CTX）萬古霉素

紅霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素（CM）

肺炎克雷伯菌產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸桿菌ESBLs的檢測

MH培養(yǎng)基上貼頭抱他定，頭抱他定/克拉維酸，頭抱曝月虧/棒酸，安曲南。

如頭抱他定的抑菌圈＜22mm,安曲南＜27mm,頭抱曝腸＜27mm,意味可能有ESBLS產(chǎn)生。

如頭抱他定/克拉維酸與頭抱他定，頭抱嘎后/棒酸與頭抱嚷后的差值N5mm,財角證ESBLS

產(chǎn)生。

耐藥機(jī)制。

-?代頭抱對普通變形桿菌、枸椽酸桿菌、腸球菌、假單抱菌屬、沙雷氏菌屬、擬桿菌屬

無效。第二代頭也對假單抱菌屬、不動桿菌屬、沙雷氏菌屬、腸球菌無效；腸球菌對頭抱

類天然耐藥。氨基糖鼠類抗生素阿米卡星與慶大霉素不完全交叉耐藥。紅霉素類、四環(huán)素

類等抗生素內(nèi)部有相互交叉耐藥。

金黃色葡萄球菌耐萬古霉素、無乳鏈球菌耐青霉素和氨芾青霉素、無乳鏈球菌和D群

鏈球菌耐萬古霉素和替拉考寧為不可能的表型。

洋蔥伯克霍德菌對氨基糖4類、亞安培南天然耐藥。

除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌外，替拉考寧耐藥的凝固酶陰性的葡萄球菌不常見。

金黃色葡萄球菌對復(fù)方新諾明耐藥為罕見表型。

氨苦青霉素對非發(fā)酵類不宜應(yīng)用o

對于葡萄球菌，苯哇西林耐藥，青霉素敏感是不可能的。

NCCLS關(guān)于細(xì)菌藥敏實驗的說明

總評論：

1、頭抱曝吩可以代表頭抱嘎吩、頭泡匹林、頭布拉定、頭抱氨芳、頭抱克洛、和頭抱羥

氨苫。但是，頭抱啤林、頭抱吠辛、頭抱泊狗、頭抱丙烯應(yīng)單獨測試，因為某些對這些藥

物敏感的菌株對頭抱睡吩是耐藥的。

2、利福平不能單獨用于化療。

腸桿菌科

1、對于沙門菌屬和志賀菌屬只有氨芳西林、喳諾酮、和甲氧茉咤/磺胺甲惡唾可用于常規(guī)

試驗與報告。初此之外，對于沙門菌屬和志賀菌屬的腸道外分離株，應(yīng)測試并報告氯霉素

和一種三代頭抱菌素。

2、克雷伯菌屬和大腸艾希菌的產(chǎn)ESBLS株對青霉素、頭抱菌素類或安曲南臨床治療可顯

耐藥性，盡管在體外藥敏試驗對其中某些抗生素敏感。對于所有產(chǎn)ESBLs株，應(yīng)報告為

耐所有青霉素類、頭狗菌素及安曲南。

3、隨著3代頭抱菌素的治療，腸桿菌屬、枸椽酸菌屬和沙雷菌屬可發(fā)展其耐藥性。最易

敏感的菌株在開始治療3-4天就可變?yōu)槟退帲虼艘磸?fù)測試這些菌株。

葡萄球菌

1、青霉素敏感的葡萄球菌對FDA批準(zhǔn)的用于葡萄球菌感染的其他青霉素類、頭抱菌素和

碳青烯類也是敏感的。青霉素耐藥而苯哇西林敏感的菌株對月內(nèi)酰胺酶不穩(wěn)定的青霉素是

耐藥的，但對其他快內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定的青霉素、供內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合藥、相關(guān)的頭抱類和

卡巴陪南是敏感的。苯映西林耐藥的葡萄球菌對現(xiàn)在可用的所有［3-內(nèi)酰胺類抗生素是耐藥

的。因此僅測試青霉素和苯唾西林就可以推知一大批內(nèi)酰胺類抗生素的敏感性與耐藥

性，不必常規(guī)測試其他青霉素類、供內(nèi)酰胺類抑制劑復(fù)合藥、頭抱類和卡巴陪南類。

2、絕大多數(shù)的MRS對多種抗生素耐藥。包括|3-內(nèi)酰胺類、氨基糖或類、大環(huán)內(nèi)酯類、克

林霉素和四環(huán)素。觀察到多重耐藥應(yīng)該是對甲氧西林可能耐藥的線索。

3、長期應(yīng)用哇諾酮類治療的過程中葡萄球菌可發(fā)展其耐藥性，因此應(yīng)重復(fù)測試耐藥性。

腸球菌

1、對于腸球菌屬，頭抱菌素、氨基糖戒類（除了篩選高水平耐藥性）、克林霉素和甲氧芳

咤/磺胺甲惡哇在體外可能有活性，但臨床無效，因此不能報告細(xì)菌對這些藥物敏感。

2、青霉素敏感性可以用于不產(chǎn)B-內(nèi)酰胺酶的腸球菌對氨莘西林、阿莫西林、?；备镂?/p>

林、氨苫西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉維酸、哌拉西林以及哌拉西林/三唾巴坦的敏感性

3、氨革西林是氨節(jié)西林和阿莫西林類的代表藥。氨革西林的結(jié)果可用來判斷不產(chǎn)P-內(nèi)酰

胺酶的腸球菌對阿莫西林/克拉維酸和氨革西林/舒巴坦的敏感性。

4、青霉素的結(jié)果可預(yù)測不產(chǎn)供內(nèi)酰胺酶的腸球菌對氨芾西林、阿莫西林、氨葦西林/舒巴

坦、阿莫西林/克拉維酸、哌拉西林/三唾巴坦的敏感性。

5、對于血和腦有液分離株需用頭抱硝曝吩供內(nèi)酰胺酶試驗，陽性提示對青霉素耐藥，同

時對酰胺基、竣基和胭基青霉素耐藥。

細(xì)菌鑒別要點：

1、革蘭陽性球菌

所有革蘭陽性球菌第一步為觸酶試驗。

通常觸酶陽性為葡萄球菌和微球菌，陰性為鏈球菌科。但不排除例外，氣球菌為弱陽性。

糞腸球菌偶有陽性。操作觸酶試驗應(yīng)盡量避免用鉗金取菌環(huán)（針）在H2O2上涂菌，而應(yīng)

先涂菌，在滴H2O2,步驟不能顛倒。因為伯金可以和H2O2產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。H2O2必

須新鮮，若放置過久或暴露于光線下容易分解，必須保存于4℃冰箱。實驗所用菌須大量,

不可挑到瓊脂，會產(chǎn)生假陽性。

對觸酶陽性的革蘭陽性球菌，應(yīng)繼續(xù)做玻片法血漿凝固酶試驗，此為檢出葡萄球菌，如陽

性般為金黃色葡萄球菌：如陰性應(yīng)做試管法凝固酶實驗確證，玻片法僅為篩選實驗。血

漿凝固酶實驗用血漿須用兔或豬血漿，新鮮血漿不穩(wěn)定，可能發(fā)生自我凝集或形成顆粒產(chǎn)

生渾濁或產(chǎn)生沉淀而導(dǎo)致判度借誤；不可使用人血漿，其含有抑制物質(zhì)回干擾實驗結(jié)果。

觸酶陰性為鏈球菌科，根據(jù)菌落溶血進(jìn)行下一步鑒定：

a溶血：草綠色鏈球菌；肺炎鏈球菌；腸球菌

B溶血：A群鏈球菌；B群鏈球菌，部分D群鏈球菌

腸球菌也有不溶血菌落，不能根據(jù)溶血判斷腸球菌。鏈球菌主要實驗：膽汁七葉甘，七葉

甘，菊糖，CAMP,桿菌肽，高鹽，奧樸托辛，膽鹽溶解。

腸球菌為致病菌，且腸球菌與非腸球菌耐藥機(jī)制不同，應(yīng)進(jìn)行鑒別，腸球菌分為糞腸球菌

和屎腸球菌；非腸球菌分為牛鏈球菌和馬鏈球菌。腸球菌對青霉素耐藥，非腸球菌對青霉

素敏感。腸球菌的藥敏注意高耐氨基糖成的細(xì)菌，如高耐氨基糖成則意味氨基糖或與B內(nèi)

酰胺類藥物合用無協(xié)同作用。

肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌鑒別：肺炎鏈球菌奧樸托辛、菊糖、膽鹽溶解實驗皆為陽性。

但這3個實驗都非特異，需聯(lián)合應(yīng)用方為最佳。肺炎鏈球菌的青霉素藥敏實驗應(yīng)注意，當(dāng)

青霉素（K-B法）的抑菌圈直徑大于或等于19mm時為敏感，當(dāng)小于19mm時不能確定是

否中敏或耐藥，應(yīng)做MIC稀釋確證。

2、革蘭陰性桿菌

包括腸桿菌科、非發(fā)酵菌和弧菌科。

第一步實驗為氧化酶實驗。

氧化酶陰性為腸桿菌科：陽性為非發(fā)酵菌和弧菌科。

腸桿菌科包括大腸桿菌、變形桿菌、普羅菲登斯菌及摩根菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、

多源菌屬、沙雷菌屬、耶爾森菌屬。非發(fā)酵菌包括銅綠假單抱菌、黃單抱菌、不動桿菌等。

氧化酶實驗注意事項：①需用銅綠假單抱菌做陽性對照。

②60秒內(nèi)判讀結(jié)果有效，而以10秒內(nèi)最佳。③不要用含微量鐵的取菌環(huán)或針，可用棉棒

替代。

革蘭陰性桿菌的鑒定以API系列為國標(biāo)，其他生化管僅為常規(guī)鑒定。

標(biāo)準(zhǔn)化的微生物采集方法

（一）基本原則

1、發(fā)現(xiàn)感染應(yīng)及時采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查，二、三級醫(yī)院微生物標(biāo)本送檢率不應(yīng)

低于70%。

2、盡量在抗菌藥物使用之前采集標(biāo)本。

3、標(biāo)本采集時應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，減少或避免機(jī)體正常菌群及其它雜菌污染。

4、標(biāo)本采集后應(yīng)立即送至細(xì)菌室。床旁接種可提高病原菌檢出率。

5、以棉拭子采集的標(biāo)本如咽拭子、肛拭或傷口拭子，宜插入運送培養(yǎng)基送檢。

6、送檢標(biāo)本應(yīng)注明來源和檢驗?zāi)康?，使?xì)菌室能正確選用相應(yīng)的培養(yǎng)基和適宜的培養(yǎng)環(huán)

境。

（二）血液與骨髓的送檢方法

1、通常采血部位為肘靜脈。疑似細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時，以肘動脈或股動脈采血為宜，切忌

在靜滴抗菌為物的靜脈處采取血標(biāo)本。

2、采血部位的局部皮膚應(yīng)嚴(yán)格消毒。將采集的血液注入血培養(yǎng)瓶前，應(yīng)更換針頭或過火

消毒針頭。

3、每次采血量成人5~10ml,嬰幼兒l~2ml,培養(yǎng)基與血液之比以10：1為宜，以稀釋血

液中的抗生素。

4、懷疑菌血癥因盡早采血，體溫上升階段采血可提高陽性率，但要防止因等待而延誤時

機(jī)。對已用抗菌藥物而不能停藥者，可在下次用藥前采血。

5、對疑為細(xì)菌性骨髓炎或傷寒病人,在病灶或骼前（后）上棘處嚴(yán)格消毒后抽取骨髓1ml作

細(xì)菌培養(yǎng)。

（三）尿液的送檢方法

1、中段尿：女性采樣前應(yīng)先用肥皂水或0.1%高鎰酸鉀溶液沖洗外陰部及尿道口；男性須

翻轉(zhuǎn)包皮沖洗，用0.1%新潔爾滅消毒尿道口，滅菌紗布擦干后，收集標(biāo)本。

2、導(dǎo)尿管導(dǎo)尿采樣可減少污染。對留置導(dǎo)尿者，可用碘酒消毒尿道口處的導(dǎo)尿管壁，用

聯(lián)空針筒的細(xì)針斜穿管壁抽吸尿液；或拔去閉式引流的集尿袋，棄取導(dǎo)尿管前段尿液，留

無污染的膀胱內(nèi)尿液數(shù)毫升送檢。不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本。

3、送檢標(biāo)本以晨起第一次尿為宜。

4、室溫下尿標(biāo)本擔(dān)擱稍久可導(dǎo)致尿內(nèi)細(xì)菌濃度明顯增加而影響病原菌與污染菌的區(qū)分。

不能立即送檢者，可暫存4℃冰箱。

（四）痰標(biāo)本的送檢方法

1、咳痰：清水反復(fù)漱口后用力咳痰，從呼吸道深部咳出新鮮痰液于無菌容器送檢。痰量

極少者可用45℃10%氯化鈉溶液霧化吸入導(dǎo)痰。

2、對咳嗽乏力或昏迷病人，可用吸痰管經(jīng)鼻腔或口抵達(dá)氣管腔內(nèi)吸引痰液。用纖維支氣

管鏡可直接在病灶部位采集高濃度的感染病原菌，但不能完全避免咽喉部正常菌群感染。

3、雙側(cè)肺部感染伴人工氣道如氣管切開或氣管插管患者，可用吸痰管經(jīng)人工氣道估插至

葉支氣管水平吸引痰液。

4、痰標(biāo)本不能及時送檢者，可暫存4c冰箱。室溫下?lián)鷶R數(shù)小時定植于口咽部的非致病

菌呈過度生長而肺炎鏈球菌、葡萄球菌和流感嗜血桿菌檢出率明顯降低

（五）手術(shù)創(chuàng)口、燒傷創(chuàng)面于膿液

1、無菌生理鹽水擦洗病灶表面后，用棉拭子采取病灶深部的膿液和分秘物，置運送培養(yǎng)

基內(nèi)送檢。

2、對未潰瘍的膿腫宜用碘酒、酒精消毒皮膚后，以無菌注射器抽取膿液送檢；也可于切

開膿腫時用無菌棉拭子采樣。

3、采樣前病灶局部應(yīng)避免用抗菌藥物或消毒劑。

（六）糞便的送檢方法

1、排便后，挑取有膿血、黏液部分的糞便2~3g（液狀糞便則取絮狀物），盛于蠟紙袋內(nèi)

送檢。

2、對不易獲取糞便者或嬰幼兒，可用肛拭采集。將拭子前端用無菌甘油水濕潤。然后插

入肛門約4~5cm（幼兒約2~3cm）處，輕輕旋轉(zhuǎn)擦取直腸表面黏液后退出，置運送普及內(nèi)

送檢。

（七）咽拭、口腔拭子的送檢

1、病人清水漱口后，由檢查者將其舌外拉時懸幽垂盡可能向外牽引，棉拭子越過舌根到

咽后壁或懸幽垂的后側(cè)，反復(fù)擦拭數(shù)次，插入運送培養(yǎng)基。棉拭子應(yīng)避免觸及舌、口腔黏

膜和唾液。

對化膿性扁桃體炎或口腔念珠菌病，用棉拭

臨床標(biāo)本的處理

1、血標(biāo)本

1.1常見細(xì)菌

革蘭陽性菌：肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性鏈球菌、糞腸球菌、

類白喉棒狀桿菌、產(chǎn)單核李斯特菌等。

革蘭陰性菌：腦膜炎奈瑟菌、卡他布蘭漢菌、傷寒沙門菌、流感嗜血桿菌、大腸艾希菌、

變形桿菌、產(chǎn)汽腸桿菌、銅綠假單抱菌、肺炎克雷伯菌等。

1.2臨床意義

血液培養(yǎng)應(yīng)用于傷寒、副傷寒、化膿性細(xì)菌和其他革蘭陰性桿菌引起的敗血癥的診斷。

目前引起敗血癥的細(xì)菌多為金黃色葡萄球菌和大腸艾希菌。

疥、癰和膿腫繼發(fā)的敗血癥主要是金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌引起。

尿道、膽、胃腸黏膜損傷引起的敗血癥以大腸艾希菌多見，其次為變形桿菌、產(chǎn)汽腸桿菌、

葡萄球菌。

急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎以金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌常見；亞急性心內(nèi)

膜炎以草綠色鏈球菌多見，偶見腸球菌；化膿性心包炎以金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、

肺炎鏈球菌多見。

血液病、肝硬化引起的敗血癥金黃色葡萄球菌和銅綠假單抱菌為主。

彌漫性血管內(nèi)凝血以革蘭陰性桿菌為主。

燒傷后敗血癥以銅綠假單抱菌為主。

3、痰標(biāo)本

常見細(xì)菌：肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌；腦膜炎奈瑟

菌、k他布蘭漢菌、肺炎克雷伯菌、大腸艾希菌、銅綠假單胞菌、沙雷菌、流感嗜血桿菌。

痰標(biāo)本：須接種2個血平板，一個放普通孵箱，另?個放C02孵箱.痰標(biāo)本接種于血平板、麥

康凱平板、巧克力平板。巧克力平板是用來篩選流感嗜血桿菌。肺炎鏈球菌和流感嗜血桿

菌的檢出率是衡量一個細(xì)菌室水平的重要依據(jù)，因此對于包括以上兩種菌在內(nèi)的苛養(yǎng)菌的

鑒定應(yīng)引起重視。痰標(biāo)本接種時，第一區(qū)劃完線后，接種環(huán)必須過火消毒，否則將達(dá)不到

分區(qū)的效果。

痰標(biāo)本建議接種2個血平板、一個巧克力平板、一個麥康凱平板。痰標(biāo)本于咽標(biāo)本的處

理基本相同。

4、尿標(biāo)本

常見細(xì)菌：大腸艾希菌、葡萄球菌、變形桿菌。

注意事項：尿標(biāo)本不能離心，離心將使污染菌也集中于沉淀部分，導(dǎo)致錯誤結(jié)果。一般而

言，菌落大于105/ml代表真正感染，103/ml以下表示污染，104?105為懷疑污染，如病

人的排尿速度太快或接受藥物治療或尿的pH小丁5。比重小于1.003時，細(xì)菌的數(shù)目可

能降低。因此病人若已服用抗生素，104菌落即需進(jìn)行鑒定和抗生素藥敏試驗。

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2006-5-15

細(xì)菌的人工培養(yǎng)程序及常用的人工培養(yǎng)方法。

細(xì)菌的人工培養(yǎng)程序為：標(biāo)本（估計菌量少的標(biāo)本，先增菌培養(yǎng)）-根據(jù)培養(yǎng)目的，接種于

適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基一適宜的培養(yǎng)環(huán)境，35℃~37℃,18~241觀察細(xì)菌的生長情況，選擇可疑

菌落進(jìn)行分離、鑒定。

根據(jù)對氣體的需求，細(xì)菌的人工培養(yǎng)方法可分為：①需氧培養(yǎng)（需氧菌與兼性厭氧菌）：置

于空氣中即可，適于大多數(shù)細(xì)菌；②厭氧培養(yǎng)（專性厭氧菌）：需在無游離氧的環(huán)境中培養(yǎng)；

③二氧化碳培養(yǎng)（少數(shù)細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、布魯菌、空腸彎曲菌等）：需在含5%~10%CO2

環(huán)境中培養(yǎng)；④微需氧環(huán)境（僅在5%左右的低氧壓環(huán)境中才能生長的細(xì)菌的培養(yǎng)）。

鑒定細(xì)菌的基本程序？

細(xì)菌鑒定的基本程序：①細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查；②細(xì)菌生長特性；⑦生物化學(xué)試驗；④抗原構(gòu)

造及血清學(xué)診斷；⑤噬菌體及藥物敏感試驗；⑥毒力測定及動物試驗。

簡述收集細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)注意的事項

收集細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本首先應(yīng)注意無菌的原則，其次還應(yīng)注意：

（1）細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在抗生素治療前收集，并及時送檢。

（2）血培養(yǎng)成人抽血兒童3~5ml,注入規(guī)定培養(yǎng)瓶。

（3）尿標(biāo)本收集前應(yīng)清潔外陰部，留中段尿2~3ml于無菌小瓶中。

（4）胸腹水、膿、分泌物應(yīng)收集于無菌小瓶或無菌試管內(nèi)。

（5）厭氧培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)避免與氧接觸，并及時送檢。

細(xì)菌耐藥性是怎樣產(chǎn)生的？

細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生可以通過細(xì)菌染色體耐藥基因的突變、耐藥質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)座子的插

入，使細(xì)菌產(chǎn)生一些新的酶類或多肽類物質(zhì)，破壞抗菌藥物或阻擋藥物向靶細(xì)胞穿透，或

發(fā)生新的代謝途徑，從而產(chǎn)生對抗生素的耐藥性，造成臨床藥物治療的失敗。

“MIC”、“S”、“MS”、"「及“R”的意義是什么?

M1C：最小抑菌濃度，表示某藥物對某菌的最小抑菌濃度，常以Ng/ml或p/ml來表示。藥

物低于該濃度時，細(xì)菌即不被抑制。

S：敏感。表示該藥物的常用劑量預(yù)期有效。

MS：中度敏感。表示該藥物在常用劑量時，體內(nèi)藥物濃度較高的部位或超常用量時血藥

濃度預(yù)期有效。

I：中介度。為了防止因技術(shù)因素引起的誤差而設(shè)的緩沖地帶，獲此結(jié)果不應(yīng)向臨床醫(yī)師

報告。

R：耐藥。常用量預(yù)期無效。

以上是NCCLS（美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會）所做的規(guī)定和解釋，已被各國普遍接受并實

行。S、MS、I、R的分界點是根據(jù)該藥在血中的治療濃度和該藥對病原菌的MIC而確定

的，同一藥物對不同病菌的s、MS、I、R的分界點不相同，而且病原菌對某藥敏感或耐

藥是在一定條件下相對的概念。

NCCLS每年關(guān)于細(xì)菌藥敏試驗都會公布一些新的補(bǔ)充、修改的文件，各地均應(yīng)盡可能采

用近期的規(guī)定。

什么是B-Lac、ESBLs、MRSA、MRCNS?

0-Lac：0-內(nèi)酰胺酶的縮寫（p-Lactamase）,也即青霉素酶。是由某些細(xì)菌所產(chǎn)生，能產(chǎn)生p-Lac

的細(xì)菌，可以使青霉素迅速水解而失效，所以，若遇這類菌株感染，使用青霉素和其他不

耐酶的隹內(nèi)酰胺類藥物治療均無效，如乙?；⒖⒒?、酰版基青霉素等。反之，不產(chǎn)生p-Lac

的菌株，對其它青霉素敏感，頭抱菌素類及卡巴配能類藥物也均敏感。

MRS：耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillinresistantstaphylococcus）的縮寫，MRSA指耐甲氧

西林金葡菌，MRCNS指耐甲氧西林凝固酶陰性葡菌。這類細(xì)菌引起的感染，特別是院內(nèi)

感染逐年增長，已被引起廣泛的注意。MRS對所有的B-內(nèi)酰胺類和頭抱類藥物均耐藥，

不論其敏感試驗的結(jié)果如何，臨床治療均無效。同時.，其對喳諾酮類、氨基糖成類和大環(huán)

內(nèi)脂類藥物的耐藥性也上升。

ESBLs：超廣譜[J-內(nèi)酰胺酶（extended-spectrum[3-Lactamase）的縮寫。是某些革蘭氏陰性桿

菌（特別是大腸埃希菌和克雷白菌屬）的某些菌株產(chǎn)生的一種酶，這些菌株對B-內(nèi)酰胺類藥

物（青霉素類、頭抱類）均耐藥，不論敏感試驗結(jié)果如何，臨床治療均無效。產(chǎn)ESBLs菌株

對其他藥物如氨基糖式類、復(fù)方新諾明等也可能耐藥，但可對碳青霉烯類、頭霉烯類藥物

敏感。

各種標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

血液及骨髓標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】以無菌方法取靜脈血。成人5~6ml,嬰幼兒1?2m1,骨髓1?2ml。注入血

培養(yǎng)瓶立即混勻送檢（標(biāo)本量：培養(yǎng)液量以1：10為宜），必須在應(yīng)用抗生素前取血。對已用

抗生素者應(yīng)在下次用藥前取血，并在申清單上注明（因需特殊培養(yǎng)基）。亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜

炎及布魯氏菌感染病人，除在發(fā)熱期采血外，要多次采血（24h采血.3-4次）和增加采血量

（10ml）o

【細(xì)菌學(xué)檢查】血或骨髓培養(yǎng)應(yīng)孵育7天，此期間如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長，經(jīng)徐片革蘭染色鏡檢后

立即口頭報告“疑有革蘭x性菌生長”，此后約6?8h應(yīng)報告藥敏試驗初步結(jié)果，次日發(fā)出正

式細(xì)菌鑒定及藥敏報告。培養(yǎng)3天無菌生長通知醫(yī)生，7天無菌生長正式發(fā)出陰性報告。

尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】一般采用中段尿采集法：用肥皂水及1：1000高缽酸鉀或新潔爾滅液清洗會陰

部后，收集中段尿10?20ml盛于無菌容器，加蓋立即送檢，不超過lh。還可根據(jù)需要采用

導(dǎo)尿法、腎盂尿采集法、膀骯穿刺法及24h尿收集法。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：查革蘭陽性菌、陰性菌或假絲酵母菌?？顾崛旧翰榻Y(jié)核分枝桿

菌。淋球菌涂片：用革蘭染色和呂氏美藍(lán)染色，如發(fā)現(xiàn)革蘭陰性成雙排列的圓形或橢圓形

球菌，應(yīng)進(jìn)一步培養(yǎng)證實。

2.中段尿細(xì)菌計數(shù)：用來助診尿路感染。

3.細(xì)菌培養(yǎng)：48h無細(xì)菌生長，報告陰性。此間有細(xì)菌生長，需進(jìn)行鑒定相做藥敏試驗。

【臨床意義】

1.正常人膀胱尿液通常無菌，尿液細(xì)菌學(xué)檢查有助于泌尿生殖道感染的診斷；同時藥敏試

驗可選擇有效的抗菌藥物，并可作為療效觀察。

2.中段尿細(xì)菌計數(shù)，如為球菌感染，＞10八3/ml；如為桿菌感染，＞10人5/ml,常為診

斷泌尿系感染的依據(jù)。也可進(jìn)行離心尿計數(shù)，＞10個菌/HPF為泌尿系感染。但對于免疫

功能低下、用抗生素后病人的尿，尿濃度變化大及尿pH值在5.0以下、8.5以上等不利于細(xì)

菌生長的尿，尿頻，病原菌發(fā)育要求條件高，采尿時外陰部消毒劑混入等情況時，細(xì)菌計數(shù)

需結(jié)合臨床具體分析。

3.10%的尿路感染者可能在同份尿標(biāo)本中分離到兩種細(xì)菌，并都是病原菌。若同份標(biāo)本中

檢出三種以上不同微生物，應(yīng)認(rèn)為標(biāo)本被污染。通常尿標(biāo)本中革蘭陰性桿菌苗落計數(shù)〉

10'CFU/ml,革蘭陽性球菌苗落計數(shù)〉10A4CFU/ml有診斷意義。

糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】自然排便，挑取有膿血、粘液部分，放入無菌容器中，或置于保存液、增菌液

中立即送檢。排便困難者可采用直腸拭于法。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

I.涂片檢查：濕片檢查、制動試驗和革蘭染色鏡檢：可確診霍亂弧菌。抗酸染色：可查結(jié)

核分枝桿菌。革蘭染色：可查葡萄球菌、艱難梭菌、彎曲菌和酵母樣菌等。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：根據(jù)需要檢查的細(xì)菌選擇糞便培養(yǎng)條件，一般需培養(yǎng)2?3天，如有陽性菌生

長，需進(jìn)一步進(jìn)行生化鑒定和藥敏試驗后報告。

【臨床意義】人腸道中存在大量細(xì)菌，正常情況下處于生態(tài)平衡，不會致病。當(dāng)機(jī)體抵抗力

低下，某引起細(xì)菌入侵或濫用抗生素致腸道菌群失調(diào)時.，產(chǎn)生腹瀉。

腦脊髓液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】以無菌方法取腦脊髓液3?5ml立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：查找一般細(xì)菌，尤其腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和鏈球菌多見?？?/p>

酸染色：查找結(jié)核分枝桿菌。墨汁染色：查找新型隱球菌。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：腦有髓液培養(yǎng)多數(shù)需3?4天，在此期間如有細(xì)菌生長，需經(jīng)鑒定報告“xx菌”,

同時報告藥敏試驗結(jié)果。

胸、腹水標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】以無菌方法穿刺抽取胸水或腹水570ml,注入含106mmol/L枸檬酸鈉抗

凝劑的無菌容器中，抗凝劑與標(biāo)本之比為1：10,立即送檢。注意應(yīng)在用藥前或停藥后1?2

日采集。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：革蘭染色：查找?般細(xì)菌?？顾崛旧翰檎医Y(jié)核分枝桿菌。2.細(xì)菌培養(yǎng)：

一般培養(yǎng)2?3天，培養(yǎng)2天無細(xì)菌生長可報告之，此間如有細(xì)菌生長，需進(jìn)?步鑒定和藥

敏試驗后報告。

【臨床意義1正常胸腹腔僅有極少量無菌液體。漏出液無細(xì)菌，滲出液多可找到病原菌（腫

瘤性除外）。如有細(xì)菌，則源于原發(fā)性或繼發(fā)性（鄰近器官的炎癥性病變）胸、腹膜炎。心包

穿刺液細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】在B超引導(dǎo)下行穿刺術(shù)。抽取心包液2?5ml,加抗凝劑（106mm01兒枸椽酸

鈉：標(biāo)本為1：10）立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】內(nèi)容同胸腹水檢查。

【臨床意義】正常心包液極少量，無菌。漏鋁液無細(xì)菌，滲出液如為感染所致?？梢娂?xì)菌。

常見的細(xì)菌感染有：乙型溶血性鏈球菌、葡萄球菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌，流感桿菌、

銅綠假單胞菌、偶見大腸埃希菌和傷寒沙門菌。急性心包炎常繼發(fā)于風(fēng)濕熱或猩紅熱、敗血

癥、牙齒感染灶、肺炎、膿胸、外傷、縱隔淋巴炎或膈下膿腫。慢性心包炎可見結(jié)核分枝桿

菌，常繼發(fā)于結(jié)核性胸膜炎。

關(guān)節(jié)液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】行關(guān)節(jié)穿刺術(shù)抽取關(guān)節(jié)液2?5ml,加抗凝劑（106mm01/L枸椽酸鈉：標(biāo)本為

1：10）立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】內(nèi)容同胞腹水檢查。

【臨床意義】關(guān)節(jié)滲出性炎癥時可見細(xì)菌。常見的病原菌有：淋病奈瑟菌、葡萄球菌及鏈

球菌，有時也可見結(jié)核分枝桿菌。

膽汁標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】行十二指腸引流術(shù)，分A（膽總管）、B（膽囊）、C（肝膽管）三管收集膽汁于無菌

容器送檢。也可在膽囊及膽管手術(shù)時直接采取或膽囊造影時穿刺采取。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

1.涂片檢查：一般不做，必要時可革蘭染色鏡檢。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：一般需2?3天，48h無菌生長可報告陰性，此間有細(xì)菌生長需進(jìn)一步鑒定和

做藥敏試驗后報告結(jié)果。

【臨床意義】正常人膽道無細(xì)菌。當(dāng)膽道梗阻細(xì)菌侵入，則發(fā)生感染。入侵膽道的細(xì)菌主要

由腸道上行而來，也可由門靜脈或腸淋巴系統(tǒng)進(jìn)入膽道，故膽道感染細(xì)菌多為腸道菌且與腸

道常在菌從相吻合。

眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查

【標(biāo)本采集】

1.采集眼分泌物：先用無菌生理鹽水沖洗眼部，然后用棉拭于拭干，再用無菌棉拭于采集

分泌物。

2.采集咽分泌物：先用清水撤口，用壓舌板將舌向下向外壓，將咽拭子在咽后壁或懸雍垂

后側(cè)涂抹數(shù)次，切勿接觸口腔和舌粘膜。

3.采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭于涂抹病灶部位，切勿接觸周圍粘膜或皮膚。以上

標(biāo)本均需立即送檢。

【細(xì)菌學(xué)檢查】

I.涂片檢查：革蘭染色：可查出一般細(xì)菌，尤其應(yīng)注意白喉桿菌、假絲酵母菌、奮森螺旋

體和梭形桿菌。抗酸染色：可查出結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：一般細(xì)菌培養(yǎng)2?3天，百日咳桿菌培養(yǎng)需7天，此間如無菌生長可報告之，

如有細(xì)菌生長則需進(jìn)行種類鑒定和藥敏試驗。對正常時無菌的器官，如眼、中耳可報告檢出

細(xì)菌及藥敏試驗結(jié)果；而鼻、咽等帶菌器官檢出病原菌時，可直接報告菌名和藥敏試驗結(jié)果;

如未檢出病原菌，只檢到正常菌群亦應(yīng)報告