中草藥對育肥豬鏈球菌病的預(yù)防及其生長性能、免疫指標(biāo)的影響

摘要：試驗選取140日齡、體重86kg、健康的育肥豬80頭，隨機分為4組。A組、B組、C組為中藥添加組，D組為對照組。預(yù)試期7d，正式試驗期40d。試驗結(jié)果表明，與D組相比，A組、B組、C組育肥豬的平均日增重顯著升高(p＜0.05），B組、C組育肥豬的平均日采食量顯著升高(p＜0.05），A組、B組育肥豬的料重比顯著降低(p＜0.05）；B組和C組發(fā)病率顯著氏于D組(p＜0.05），與A組差異不顯著(p＞0.05）、病死率B組和C組顯著低于A組和D組(p＜0.05）。豬血清中腫瘤壞死因子-α含量A組、B組、C組均顯著降低(p＜0.05），白細胞介素-10含量A組、B組、C組均顯著增加(p＜0.05）?？梢姡兴幵谂R床上可以顯著提高患有鏈球菌病育肥豬的生長性能，降低血清炎性細胞因子含量，提高抗炎因子含量，對育肥豬鏈球菌病有較好的預(yù)防作用。在非洲豬瘟疫情常態(tài)化背景下，在生豬養(yǎng)殖中疫病防控為重中之重。在生豬的疫病中，豬鏈球菌病是疫病防控工作重要的內(nèi)容之一，是生豬養(yǎng)殖領(lǐng)域發(fā)生率相對較高的細菌性傳染病，該病致病性強、致死率高。近年來飼料行業(yè)規(guī)范管理，飼料添加抗生素被全面禁用，該病的發(fā)生率逐漸增加。中草藥具有來源廣泛，價格便宜，毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點，逐漸被用于畜禽疾病的防治。本試驗旨在研究中草藥對育肥豬鏈球菌病的預(yù)防及生長性能、免疫指標(biāo)的影響。1材料與方法1.1試驗材料1.1.1菌株豬鏈球菌血清型2型，在本地養(yǎng)殖場采集分離。1.1.2中藥材料金線重樓，野菊花，白頭翁，紫花地丁，忍冬藤，黃連，甘草，金銀花，梔子，郁金，白芍，黃芩，黃柏，蒲公英，柯子，白毛夏枯草，七葉一枝花。以上中藥均購自怡康藥店。1.1.3試驗動物育肥豬由本地豬場提供，本試驗于2021年9—11月在商洛興旺豬場完成。選取140日齡、體重86kg、健康的育肥豬80頭。每組20頭，共分4組。其中A組使用方劑一(金線重樓16g、野菊花65g、白頭翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g），B組使用方劑二(黃連50g，甘草20g、金銀花15g、梔子20g、郁金30g、白芍30g、黃芩30g、黃柏30g、蒲公英15g、柯子40g），C組使用方劑三(忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黃芩30g、野菊花65g、七葉一枝花20g、金銀花15g、紫花地丁35g），D組為空白對照組。1.1.4基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)日糧配方見表1，復(fù)合預(yù)混料購自新鄉(xiāng)市酵守康飼料有限公司。表1基礎(chǔ)日糧配方注：預(yù)混料為每千克飼糧提供：銅10mg、I0.5mg、鋅80mg、鐵72mg、硒0.32mg、錳72mg、維生素A8000IU、維生素D3

1600IU、維生素E28mg、維生素K3

0.5mg、泛酸2.5mg、維生素B1

1.52mg、維生素B2

5.2mg、生物素0.1mg、葉酸0.25mg、維生素B12

0.04mg、維生素B6

3.0mg、煙酸20mg。1.2試驗方法1.2.1方劑與藥液煎煮制備方劑一：金線重樓16g、野菊花65g、白頭翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g。方劑二：黃連50g，甘草20g、金銀花15g、梔子20g、郁金30g、白芍30g、黃芩30g、黃柏30g、蒲公英15g、柯子40g。方劑三：忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黃芩30g、野菊花65g、七葉一枝花20g、金銀花15g、紫花地丁35g。加入藥物重量10倍量的潔凈水，浸泡后煎煮，煮沸后文火煎30min，用四層紗布過濾藥液，藥渣加入8倍量藥重的水，煮沸后文火煎30min，過濾藥液，每副合并2次藥液置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2飼養(yǎng)及給藥對育肥豬進行正常的飼養(yǎng)管理，飼料和飼喂方式均不改變。在各中藥試驗組的飼料中按每頭一服藥量拌入飼料中飼喂，每天早晚各1次。在試驗第7天通過口服豬鏈球菌血清型2型2.13×107

CFU/g攻毒。試驗40d。1.2.3測定指標(biāo)和方法第8天開始臨床觀察試驗動物，主要觀察精神、食欲和排便情況；記錄發(fā)病率、死亡率。1.2.3.1生長性能飼喂試驗開始與結(jié)束前，分別記錄試驗豬的初重和末重，試驗育肥豬空腹12h，稱重，試驗結(jié)束后統(tǒng)計各組試驗育肥豬的總采食量，計算豬平均日采食量、平均日增重及料重比。平均日增重=總增重/(試驗天數(shù)×試驗豬頭數(shù))平均日采食量=采總食量/(試驗天數(shù)×試驗豬頭數(shù))料重比=平均日采食量/平均日增重1.2.3.2血清細胞因子在前腔靜脈進行采血，置于干凈的離心管中等待血清的析出，在低溫離心機中以3000r/min，離心15min，取上清液分裝，及時測定血清指標(biāo)。使用ELISA方法檢測血清腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、白細胞介素-1(interleukin-1，IL-1）、白細胞介素-10(interleukin-10，IL-10）、干擾素-α(interferon-α，IFN-α）含量。所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所，具體操作參考說明書。1.2.4生物試驗取病死豬淋巴、肝臟、脾臟、關(guān)節(jié)液，加生理鹽水研磨過濾。過濾液接種(20±2)g健康小白鼠，12～72h后觀察其病理反應(yīng)。觀察感染后分離出的細菌，及LD50。1.2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計應(yīng)用SPSS19.0軟件對各組的發(fā)病率和病死率進行顯著性分析。2結(jié)果與分析2.1中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預(yù)防效果和血清細胞因子的影響由表2可以看出中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預(yù)防效果和血清細胞因子的影響。與D組相比，A組、B組、C組育肥豬的平均日增重顯著升高(p＜0.05），B組、C組育肥豬的平均日采食量顯著升高(p＜0.05），A組、B組育肥豬的料重比顯著降低(p＜0.05）。與D組相比，A組、B組、C組的發(fā)病數(shù)、病死數(shù)均少于D組；B組、C組發(fā)病率顯著低于D組(p＜0.05）A組和B組間發(fā)病率差異不顯著(p＞0.05）；B組、C組和A組病死率顯著低于D組(p＜0.05）。由表4可知，與D組相比，豬血清中TNF-α含量A組、B組、C組均顯著降低(p＜0.05）。IL-10含量A組、B組、C組均顯著高于D組(p＜0.05）；IL-1和IFN-α含量各組間差異不顯著(p＞0.05）。表2中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預(yù)防效果和血清細胞因子的影響注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p＞0.05)，肩標(biāo)字母不同表示差異顯著(p＜0.05)。A組使用方劑一(金線重樓16g、野菊花65g、白頭翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g），B組使用方劑二(黃連50g，甘草20g、金銀花15g、梔子20g、郁金30g、白芍30g、黃芩30g、黃柏30g、蒲公英15g、柯子40g），C組使用方劑三(忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黃芩30g、野菊花65g、七葉一枝花20g、金銀花15g、紫花地丁35g），D組為空白對照組。2.2病理剖檢結(jié)果病死豬可見四肢內(nèi)側(cè)皮膚發(fā)紅和充血，對病死豬進行剖檢，可見淋巴結(jié)腫大和充血。腹腔漿膜可見大量黃色漿液。部分關(guān)節(jié)囊膜有出血癥狀。2.3生物試驗結(jié)果12～72h后接種小白鼠均死亡，從死亡白鼠體內(nèi)分離細菌，在顯微鏡下呈卵圓形、無鞭毛、鏈狀排列。3討論根據(jù)中獸醫(yī)辨證論治原則，豬鏈球菌病屬于“熱毒熾盛”，所以本次試驗選取的都是清熱解毒類中藥，金線重樓消腫止痛、金銀花疏散風(fēng)熱、白頭翁清熱解毒、黃柏解毒療瘡、忍冬藤疏風(fēng)通絡(luò)、紫花地丁涼血消腫、野菊花消腫解毒、蒲公英消腫散瘀、梔子涼血解毒、白芍解熱鎮(zhèn)靜、郁金疏肝解郁、黃芩瀉火解毒、黃連清熱瀉火等。3.1中草藥對生長性能的影響劉仲昊等在育肥豬日糧中分別添加金銀花粗提物、葛根粗提物和混合粗提物(金銀花粗提物+葛根粗提物），與對照組相比，各試驗組育肥豬的平均日采食量和平均日增重均有提高趨勢，其中混合提取物組顯著提高。申學(xué)林等研究育肥豬肉質(zhì)時發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥能夠改善豬肉的瘦肉質(zhì)。陳曉明等試驗表明，將一定量中草藥渣添加至斷奶仔豬日糧中進行飼喂，日增重指標(biāo)有明顯的提升，料重比呈下降趨勢，其中腹瀉率的下降尤為明顯。和紹禹等挑選三元雜交生長豬做試驗，飼喂試驗結(jié)果表明，添加了中草藥添加劑的試驗組，育肥豬的生長速度加快，采食量及日增重明顯提升，飼料利用率得到明顯改善，料重比和病豬數(shù)明顯降低。戴玲等用大蒜、黃芪、構(gòu)樹葉等六味中草藥配制成中草藥飼料添加劑對育肥豬生產(chǎn)性能和肉品質(zhì)的影響，結(jié)果表明，在平均日增重和飼料利用率均顯著高于空白組，氨基酸和脂肪酸的含量均顯著高于空白組。谷新利等用黃茅、白術(shù)、熟地黃等中草藥添加劑飼喂育肥羔羊，羔羊的日增重、飼料利用率顯著提高。本試驗中與D組相比，A組、B組、C組的平均日增重顯著升高，B組、C組的平均日采食量顯著升高，A組、B組的料重比顯著降低，可能是中草藥增強豬對鏈球菌病的抵抗能力，食欲較好。3.2中草藥對豬鏈球菌病的預(yù)防馮沙沙等人用黃連、大黃、黃柏、黃芩、連翹、石榴皮、丹參、訶子、烏梅等中藥對豬鏈球菌做了體外抑菌試驗，均有不同程度的抑菌作用。劉啟志等使用板藍根、金銀花、黃連、蒲公英、馬齒莧、野菊花、連翹七味中藥對豬鏈球菌病進行預(yù)防試驗，在臨床上對豬鏈球菌病有很好的預(yù)防作用，并且效果優(yōu)于西藥。潘任桃等將茶皂素與4種抗菌藥物聯(lián)用，測定其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果。郭洋認(rèn)為豬鏈球菌病綜合征型為“熱入營血，毒陷心包，擾動肝風(fēng)證”，治療原則為“清熱涼血，平肝熄風(fēng)”，使用方劑鉤藤犀角地黃湯進行治療，結(jié)果療效較好。本試驗中，A組、B組、C組的發(fā)病數(shù)、病死數(shù)均少于D組空白對照；發(fā)病率B組、C組為20%，A組為30%，D組為40%，B組、C組和D組顯著降低；病死率B組、C組為0，A組為33.33%，D組為62.5%，病死率顯著降低，D組與其他三組差異極顯著。A組的發(fā)病率高于B組、C組，可能由于A組使用的中藥種類少于其他兩組。3.3中草藥對血清細胞因子的影響汪德剛等認(rèn)為中草藥富含多種有效活性成分，如多糖、苷類、揮發(fā)油生物堿等物質(zhì)，這些成分能夠提高機體免疫和體液免疫。蔡進研究發(fā)現(xiàn)在日糧中添加黃芪多糖、益母草粉、甘草粉、山藥粉能顯著提高斷奶前仔豬免疫力。謝紅兵等研究表明，中草藥飼料添加劑能明顯提高豬只機體內(nèi)豬瘟血清抗體、胰島素和甲狀腺素T4水平，對仔豬的免疫能力也有明顯的增強。杜改梅等試驗結(jié)果同樣表明，中草藥飼料添加劑能夠增強豬的體液免疫能力。張林麗等研究表明，細胞因子是機體內(nèi)部分子量小而生物學(xué)活性較高的一類物質(zhì)，主要由免疫細胞、血管內(nèi)皮細胞、表皮細胞等多類細胞經(jīng)過刺激而生成，主要參與炎癥、細胞增殖與凋亡及免疫應(yīng)答等。本試驗中與D組相比，豬血清中TNF-α含量A組、B組、C組均顯著降低，IL-10含量A組、B組、C組均顯著增加；IL-1和IFN-α含量4組差異不顯著。本試驗中藥成分可能通過阻斷ERK、MAPKs等蛋白磷酸化途徑，從而抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活，下調(diào)COX-2、iNOS等蛋白的表達量，進而抑制巨噬細胞合成TNF-α等炎性