我國首次非洲豬瘟疫情的發(fā)現(xiàn)和流行分析

一起因（一）基本情況：2018年6月中旬：遼寧省沈陽市沈北新區(qū)沈北街道五五社區(qū)張某豬場大豬開始發(fā)病，先后用過藥物控制（藥品不詳），大約2~6天出現(xiàn)死亡，不用藥大致10天左右死亡，病死率100%；找到當(dāng)?shù)啬臣夹g(shù)服務(wù)部，也未能確診和控制。圖1、全國首例非洲豬瘟疫點據(jù)送樣人敘述：發(fā)病豬主要癥狀是高熱、皮紅、嘔吐、便秘。他們現(xiàn)場剖解，可見淋巴結(jié)、心臟、肝臟、腎臟、小腸粘膜和腸系膜出血；其中，脾臟腫大到3~6倍，個別病死豬脾臟腫大到10倍，顏色變暗、質(zhì)地變脆。那期間：當(dāng)?shù)鼐陀辛阈秦i場出現(xiàn)類似病例，個別豬場因發(fā)病采用藥物（藥品不詳），但無法治愈，因而將病豬全部清空。（二）送檢病料：2018年7月20日：該技術(shù)服務(wù)部將張某豬場病豬腎臟、脾臟和淋巴結(jié)等病料送檢設(shè)在吉林省長春市的軍事科學(xué)院、軍事醫(yī)學(xué)研究院、軍事獸醫(yī)研究所、流行病學(xué)課題組（隸屬中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部）。（三）確診過程：首先，該實驗室采用RT-PCR和PCR擴增方法，對藍(lán)耳病毒、豬瘟病毒、圓環(huán)病毒II型等的核酸進(jìn)行擴增，結(jié)果均呈陰性。然后，將樣品進(jìn)行電鏡觀察，看見類似于副黏病毒的非典型病毒樣顆粒，直徑180~200nm?！靖别げ《尽繉儆趩喂蒖NA，有包膜的病毒顆粒，具多形性，有圓形、橢圓形和長桿狀或絲狀等。直徑150~300nm。副黏病毒科的主要成員及所致疾病有：豬腮腺炎病毒、豬宜麥病毒、牛副流感病毒、牛瘟病毒、羊小反芻獸疫病毒、雞新城疫病毒、犬瘟熱病毒等。至今，未見第二篇關(guān)于國內(nèi)非洲豬瘟病毒電鏡形態(tài)的文章和圖片。根據(jù)病毒粒子大小，初步懷疑非瘟病毒。接著、7月31日，進(jìn)行病毒擴增的PCR檢測。8月1日凌晨，結(jié)果出現(xiàn)為非洲豬瘟陽性；并進(jìn)一步檢測其核苷酸序列測定，結(jié)果均為非洲豬瘟病毒陽性。從而，確診本次病例為非洲豬瘟病毒感染，也是我國第一例感染非瘟病毒的豬場。圖2、非瘟核苷酸基因序列測定二調(diào)查軍事獸醫(yī)研究所立即向農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸醫(yī)局緊急報告了核酸擴增結(jié)果、書面疫情報告及測序結(jié)果。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部據(jù)此安排了國家外來動物疫病研究中心緊急奔赴現(xiàn)場，調(diào)查疫情、采集病料。（一）流行情況：1、生豬動態(tài)：發(fā)病場戶張某與當(dāng)?shù)刎i場從6月中旬，出現(xiàn)生豬發(fā)病，就像往常一樣再購進(jìn)仔豬。就這樣在7月5日從遼寧省沈陽市渾南區(qū)高坎鎮(zhèn)小仁境村王某家買入45頭健康生豬。至此，張某豬場當(dāng)時存欄生豬383頭。2、傳染溯源：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部專家組在王某養(yǎng)豬場的糞便樣品中檢出非洲豬瘟病毒核酸陽性。說明，該場最后染疫非瘟來源于王某豬場。至于王某豬場非瘟病毒從何而來，至今未見報道。3、病情程度：該豬場陸續(xù)發(fā)病一個半月，發(fā)病豬全是100kg/頭的大肥豬。進(jìn)入7月似乎更加嚴(yán)重。由于用藥，一是通常以抗細(xì)菌為主的抗生素沒控制住，二是過量的藥物毒性加重病情，三是病毒性病原本身，綜合作用結(jié)果，傳染后期出現(xiàn)死亡。平常死亡3頭左右，最高一天死亡10頭左右。這樣到8月1日累計發(fā)病47頭，發(fā)病率12.27%；病豬死亡47頭，致死率100%；全場死亡率12.27%。國家外來動物疫病研究中心專家在總結(jié)這次案例，是這樣評定的，該首例非瘟的發(fā)病緩慢，發(fā)病率低、死亡率低，病死率高。（二）緩慢染疫：1、剩余觀察：剩余存欄生豬336頭，臨床未見異常，這些與發(fā)病豬屬于同場、同群、同養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)，全部表現(xiàn)健康。2、發(fā)病示意：發(fā)病豬都屬于相互間緊鄰欄位，飼養(yǎng)人員長時間在舍內(nèi)走動，傳播依然極其緩慢，說明本病原不通過空氣傳播。3、泔水檢測：該場全部飼喂泔水，經(jīng)對該張某豬場泔水檢測，沒發(fā)現(xiàn)非瘟病毒核酸陽性。但是，未經(jīng)高溫處理的泔水存在傳播病毒的風(fēng)險。三核實這樣，國家外來動物疫病研究中心立即展開對該張某豬場疑似非洲豬瘟的認(rèn)定檢測。（一）臨床觀察：對剛病死的兩頭豬進(jìn)行剖檢。發(fā)現(xiàn)：脾臟極度腫大，一頭腫大5~7倍，另一頭腫大10倍，質(zhì)脆梗死；肺臟出血與間質(zhì)性肺炎；下頜與腸系膜淋巴結(jié)出血，切面呈大理石樣；扁桃體有陳舊性出血。腎臟腫大，但未見出血點。（二）病原樣品：（1）兩頭病死豬的剖檢病料，包括扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟和全血；（2）30頭臨床健康豬的全血。（三）血清樣品：（1）兩頭病死豬的血清；（2）30頭臨床健康豬的血清。四確診（一）抗原檢測：通過熒光定量PCR和普通PCR，測序片段擴增。兩頭病死豬的8份組織樣品和全血均表現(xiàn)為陽性反應(yīng)。進(jìn)一步對抗原蛋白P72基因測序，為非瘟病毒基因II型。這也是后來我國廣泛流行的非瘟病毒II型毒株。擴增曲線的橫坐標(biāo)為擴增循環(huán)數(shù)，縱坐標(biāo)為熒光強度；綠色橫線位置為熒光強度的閾值，對應(yīng)的循環(huán)數(shù)為臨界循環(huán)數(shù)（CT）；CT值低于40判定為陽性；圖中擴增曲線從左至右依次為P、全血1、脾1、全血2、淋巴結(jié)2、腎2、淋巴結(jié)1、腎1、脾2圖3、實時定量PCR擴增結(jié)果30頭臨床健康豬的全血PCR檢測非瘟病毒核酸抗原全部陰性。（二）抗體檢測：同時，32份（含兩頭病死豬和30頭健康豬）血清樣品的非瘟特異性抗體均為陰性。（三）首例公布：為此，正式確診該沈北新區(qū)張某豬場為非洲豬瘟首例疫點。2018年8月3日，由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部正式向全國公布，沈北新區(qū)發(fā)現(xiàn)我國首例非洲豬瘟。2018年9月20日，由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部以2019年第九期《獸醫(yī)公報》正式向世界公布。五反思（一）關(guān)于蟲媒傳染病要件：蟲體傳媒始終未出現(xiàn)：從最初2018年8月1日“首例非瘟”，遼寧省沈陽市沈北新區(qū)張某豬場；到如今2019年7月27日第148~149例“非瘟”，遼寧省鐵嶺市西豐縣安民鎮(zhèn)高速公路出口處截獲的2車，以及遼寧省沈陽市康平縣海洲高速公路出口處截獲的一車，兩例外省運入生豬中排查出非洲豬瘟疫情為止，暫告一段落。歷時361天，均未見到任何單位、組織和個人，報道鈍緣軟蜱染疫發(fā)病豬場。圖4、非瘟病毒蟲媒鈍緣軟蜱（二）關(guān)于流行臨床與病理學(xué)特征：1、未見各種日齡豬只易感的流行病學(xué)特征：肥豬階段的大豬高度易感；其余豬場主要報道易感排序為，種豬、肥豬、育成豬、保育仔豬，最后乳豬（饑餓死亡）。圖5、全身敗血呼吸困難2、未做類癥鑒別和細(xì)菌學(xué)排除性檢查：敗血性鏈球菌病多發(fā)生于中大豬與成年種豬，5~11月份高發(fā)，突然發(fā)病，發(fā)病率30~100%，急性1~3天死亡，一般3~5天死亡，病死率30~90%。臨死前，常見口鼻流出暗紅色血液；有的病豬因胃粘膜彌漫性出血和腸道卡他性出血性炎癥，可見便中帶血。這點，敗血性鏈球菌病與非洲豬瘟極其相似。

圖6、電子顯微鏡下的豬鏈球菌圖7、臨死前口鼻流出暗紅色血液3、腎臟出血時隱時現(xiàn)：最初的“首例非瘟”未見到病死豬腎臟表面出血點，這是區(qū)別于其它豬病的核心與關(guān)鍵。之所以叫豬瘟，就是有腎臟表面呈現(xiàn)“麻雀腎”樣的針尖狀出血點；而非洲豬瘟的病變特征也正是基于腎臟同樣具有出血小點，只是程度輕一些，才叫非洲的豬瘟。另外，高致病性藍(lán)耳病也有腎臟表面出血小點；敗血性鏈球菌病也可見腎臟表面和切面皮質(zhì)與髓質(zhì)稀少的斑點狀出血。圖8、腎臟表面針尖狀出血斑點4、消化道淋巴結(jié)未見血瘤樣腫大：本次兩頭病死豬腸系膜淋巴結(jié)腫大，切面僅見到大理石樣病變。即使淋巴結(jié)有出血性血瘤樣病變，也不排除敗血性鏈球菌病也有相應(yīng)病變。圖9、消化道淋巴結(jié)血瘤樣腫大5、脾臟腫大不見鑒別性診斷：在熱性疫病的臨床死豬剖檢中，常常發(fā)現(xiàn)脾臟腫大。它們中有：豬丹毒大脾病、敗血性鏈球菌病、豬肺疫、高致病性藍(lán)耳病，以及這次的非瘟。6、沒有嘗試原發(fā)或繼發(fā)病菌的藥敏試驗：僅憑豬場養(yǎng)殖戶、基層獸醫(yī)或門市服務(wù)人員說用了藥，就認(rèn)定所有抗菌素和中藥對本病無效，較為簡單。這對復(fù)雜的養(yǎng)殖生產(chǎn)疫病防控實踐，難以產(chǎn)生真正的指導(dǎo)作用。(三)關(guān)于形態(tài)生物學(xué)特征：1、淋巴結(jié)觸片可見單核細(xì)胞核破裂：組織學(xué)驗查：采淋巴結(jié)組織作觸片、染色，如鏡檢到淋巴細(xì)胞核破裂，即為非洲豬瘟，這是非洲豬瘟特征性組織學(xué)病變；而經(jīng)典豬瘟則無此病變。此次組織學(xué)檢查，未做這項重要的特征性核實。圖10、淋巴細(xì)胞核破裂2、未見HAD紅細(xì)胞吸附試驗：紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象是非瘟病毒特有的生物學(xué)特性。當(dāng)具有高致病性非瘟病毒感染豬體后，就將自身的血凝素（HA）傳遞給單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，通過這兩類血液細(xì)胞將豬的紅細(xì)胞吸附在自己表面，形成“玫瑰花環(huán)”或“桑葚”狀現(xiàn)象，即有HAD反應(yīng)的病毒株屬于活性毒株。至今，HAD試驗仍是OIE推薦應(yīng)用最普遍診斷非洲豬瘟的經(jīng)典方法。只是觀察時間較長，一般為3~10天。圖11、致敏白細(xì)胞吸附的紅細(xì)胞顯微圖凡無吸附紅細(xì)胞的非瘟病毒，即使有非瘟病毒核酸陽性反應(yīng)，都是無活性毒株，稱為NHV毒株。目前，這類毒株多達(dá)216株，都不具備致病性，但都有核酸陽性反應(yīng)和有完整的病毒體。只是不產(chǎn)生吸附因子或沒有血凝素（HA）。圖12、非瘟病毒HAD紅細(xì)胞吸附試驗3、病原學(xué)電鏡觀察是確診的最根本依據(jù)：從這篇山東青島《我國首例非洲豬瘟的確診》全篇看，均未提到電子顯微鏡觀測項目。除了PCR核酸陽性外，病原體本身卻遺漏，似乎也可以像血粉中雖有非瘟核酸陽性、而無病原體即無活性那樣的基本判斷。圖13、目前的新型電子顯微鏡4、電鏡觀察病原形態(tài)類似副黏病毒：從另一篇吉林長春《我國首次非洲豬瘟疫情的發(fā)現(xiàn)和流行分析》看，最初發(fā)病是在2018年6月中旬零星散發(fā)，接到病料時間為2018年7月20日。采自疫情脾臟組織病料，電鏡觀察到的病原體呈類似于副黏病毒RNA的非典型病毒樣顆粒，病毒大小為180~200nm。見下圖，疑似非洲豬瘟病毒電鏡負(fù)染照片。圖14、類副黏病毒的非典型病毒樣顆粒同樣是電鏡下的觀察：2003年全國發(fā)生人類非典，香港大學(xué)微生物學(xué)系管軼副教授、博士于當(dāng)年3月22日，在電子顯微鏡下首次發(fā)現(xiàn)非典病原為冠狀病毒，直徑80~120nm。與冠狀病毒相比，非瘟病毒更大，更容易看出。可至今為止，非瘟發(fā)生一年來，并沒有看見各大學(xué)微生物學(xué)實驗室、各省部級動物微生物檢測機構(gòu)公布電鏡下清晰明白的病原照片。圖15、當(dāng)年電子顯微鏡與配套設(shè)施可能是病毒分離的政策限制，也可能是尋找困難。這，才是本病真正確診的根本依據(jù)，卻成為至今為止留下的一個很大的遺憾！至今，各機構(gòu)發(fā)出的所謂非瘟病毒圖片，仍然是國外早已公布的舊照片。我們已經(jīng)進(jìn)入到4G、5G電子時代，查看這樣一個較大病毒體，應(yīng)該不存在設(shè)備和技術(shù)障礙。后記：從1962年，國外《家畜傳染病學(xué)》翻譯本進(jìn)入國內(nèi)，非洲豬瘟概念隨之首次亮相新中國；七十年代中期“非洲豬瘟”進(jìn)入我國《家畜傳染病學(xué)》試用教科書；到1979年7月7日我國農(nóng)業(yè)部畜牧總局就發(fā)布了《關(guān)于嚴(yán)防非洲豬瘟傳入我國的緊急聯(lián)合通知的補充函》以來，已經(jīng)過去40周年。不曾想，“非洲