一例豬偽狂犬病和副豬嗜血桿菌病混合感染的診斷與防治

摘要：某戶外購900頭育肥豬，體重約25kg，引進一周后發(fā)病。病豬主要表現(xiàn)發(fā)燒、氣喘，用替米考星、多西環(huán)素等藥物治療效果不佳，發(fā)病率上升，重者死亡，造成一定損失。針對此類病情，作者進行了流行病學調查、臨床觀察、實體解剖及實驗室診斷，確診該病例是由豬偽狂犬病和副豬嗜血桿菌病混合感染引起，通過采取綜合措施控制了病情。關鍵詞：豬偽狂犬病；副豬嗜血桿菌病；臨床癥狀；剖檢變化；gE抗體；細菌分離培養(yǎng)鑒定1臨床癥狀病豬精神不振，食欲降低或廢絕，發(fā)燒，體溫39.5～41℃，咳嗽，氣喘，關節(jié)腫脹，患處手感發(fā)熱或有波動感，跛行，有些病例表現(xiàn)叫聲嘶啞，眼神呆滯，后驅搖擺，走路不穩(wěn)。重癥病例張口氣喘，食欲廢絕，衰竭而死，病程7～10d。2剖檢變化頜下淋巴結腫大硬化，壞死，切面呈紅白相間（圖1）；咽部組織水腫；扁桃體充血呈暗紅色，有白色豆粒狀或片狀壞死灶（圖2）；氣管內有豐富的血性黏稠液體或泡沫；肺臟腫大，充血，表面有白色壞死病灶，灶周暗紅，病健部分界明顯；肺臟被膜表面覆有黃白色纖維素滲出物；心包積水；胸腔積水；腹腔內有纖維素滲出物附著；肝臟腫大，變硬，上有白色壞死灶（圖3）；腎臟有少量出血點，體積無變化；脾臟上有多量刺狀或點狀白色壞死灶；腸系膜淋巴結腫大壞死，呈紅白相間的大理石樣病變，質地硬化；腹股溝淋巴結水腫，切面呈血色點狀壞死灶；髖關節(jié)、膝關節(jié)內有大量黃白色黏稠液體（圖4）。疑似診斷：結合臨床癥狀、剖檢病變綜合診斷，該豬群疑似感染豬偽狂犬病和副豬嗜血桿菌病。為進一步確診，進行了實驗室診斷。3實驗室診斷3.1細菌分離培養(yǎng)鑒定確保整個實驗過程嚴格執(zhí)行無菌操作。1）病料采集：無菌采集該病死豬的氣管、肺臟和關節(jié)液于滅菌容器內備用。2）實驗材料：胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）、麥康凱瓊脂、普通營養(yǎng)瓊脂、NAD（V因子）、新生牛血清、細菌微量生化反應管、革蘭氏染色試劑。3）實驗步驟：用滅菌接種環(huán)挑取氣管內容物、肺臟深部刮取物、關節(jié)液三種病料分別接種在三個加有5%牛血清+0.005%NAD的TSA在平板上，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察結果。菌落形態(tài)：三個平板上均長有光滑、圓形、邊緣整齊、灰白色、半透明、中等大小的菌落。培養(yǎng)特性：用滅菌接種環(huán)挑取該分離菌單個典型菌落分別接種在5%牛血清+TSA+0.005%NAD平板、5%牛血清+TSA平板、普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板上，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察：該菌只能在TSA+牛血清+NAD（V因子）平板上良好地生長，其余三種平板均無細菌生長，說明此菌為“嗜V因子生長菌”。革蘭氏染色鏡檢：挑取典型菌落，革蘭氏染色后顯微鏡下觀察，該菌呈多形性，絲狀、纖細長桿菌、纖細短桿菌、小球桿菌或小球菌為淡紅色的革蘭氏陰性菌（G-）。生化試驗鑒定：該菌尿素酶試驗陽性、接觸酶試驗陽性，氧化酶試驗陰性。能發(fā)酵蔗糖、葡萄糖，不發(fā)酵山梨醇、甘露醇。根據(jù)以上鑒定結果判定，該菌為副豬嗜血桿菌。3.2豬偽狂犬野毒感染檢測1）組織病原學檢測①樣本制備：無菌采集病死豬的頜下淋巴結、扁桃體、腦、脾臟適量，混合研磨、離心、制備，取上清液備用；②實驗操作步驟（略）。用豬偽狂犬病毒（gE基因）實時熒光PCR檢測試劑盒（世紀元亨）檢測上述組織中豬偽狂犬病毒gE基因。結果判定：被檢樣品閾值（Ct值）≤30并出現(xiàn)特定擴增曲線的為PRV陽性；③檢測結果：該樣本Ct值=20.37＜30并出現(xiàn)特定擴增曲線，PRV核酸陽性，表明該豬感染偽狂犬野毒。2）豬偽狂犬病毒gE抗體檢測

①需要抽取樣本量（n）的確定。根據(jù)公式n={1-（1-α）1/D}×{N-（D-1）/2}，計算n=58（其中，N-群體數(shù)量=900，P-預期流行率=5%，M-檢測方法（ELISA）敏感性=98%，α-置信水平=95%，D=N×P×M）；②樣本制備：用5mL一次性采血器，豬前腔靜脈采血，隨機抽取58份血樣，3,000r/min，離心5min，制備血清；③實驗操作步驟（略）。采用IDEXX豬偽狂犬病病毒gE抗體ELISA檢測試劑盒。使用前，所有試劑和微量包被反應板一律恢復至室溫（18～26℃），并通過輕輕渦旋、旋轉或顛倒混勻。整個實驗過程嚴格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。結果有效性：陰性對照N（OD650）的平均值（0.873）減去陽性對照P（OD650）的平均值（0.162）等于0.711，大于0.300，試驗成立。計算S/N值，即樣品S（OD650）與陰性對照N（OD650）的平均值之比。結果判定：被檢樣本S/N值≤0.60的，該樣本判為陽性，即被偽狂犬野毒感染；被檢樣本S/N值＞0.60，該樣本判為陰性；被檢樣本0.60＜S/N值≤0.70，判為可疑；④檢測結果：58份被檢血清樣本，23份樣本豬偽狂犬病毒gE抗體陰性，35份樣本豬偽狂犬病毒gE抗體陽性，表明該豬群已受到偽狂犬野毒侵襲。4診斷結論由以上檢測結果得出，該豬群病情是由豬偽狂犬病毒和副豬嗜血桿菌混合感染引起。5控制措施

5.1生物安全措施發(fā)現(xiàn)病豬立即進行嚴格隔離，重癥淘汰，病死豬進行徹底的無害化處理。場內、外環(huán)境用戊二醛和聚維酮碘兩種消毒劑交替進行消毒，不留死角。發(fā)病初期1次/d，中期1次/3d，后期1次/7d。嚴格管控人、車、物、料，加強人員、車輛出入登記及消毒管理，在豬群食欲降低情況下，要少喂勤添，保證飼料新鮮適口，藥品質量安全可靠。5.2緊急免疫接種全群實施豬偽狂犬疫苗緊急免疫接種，按照3頭份/頭，做到一豬一針頭。5.3藥物治療全群使用20%氟苯尼考粉0.15g/kg·bw，參芪粉2kg/t料，甘草2kg/t料，2次/d，連用5d?？ò推チ肘}1kg/t料，2次/d，連用3d。5.4提高抗病力飲水中加入電解多維、VC，提高機體抗病力。通過采取以上措施，豬群病情逐漸穩(wěn)定。6結語豬偽狂犬病能夠引起種豬繁殖障礙，仔豬腹瀉、神經(jīng)癥狀及中大豬頑固性的咳嗽、氣喘；副豬嗜血桿菌病主要表現(xiàn)纖維素性漿膜炎和多發(fā)性關節(jié)炎及肺炎。這兩種疾病均已成為當今危害養(yǎng)豬業(yè)重要的傳染病，是生產(chǎn)中最常見的混感組合，一旦發(fā)病，損失嚴重，應高度重視。在非洲豬瘟防控及“降本增效”的倡導下，仍需選擇優(yōu)質疫苗，嚴格執(zhí)行免疫程序，做好豬群基礎免疫，保證豬群良好的免疫力以抵抗各類病原侵襲。生產(chǎn)中，有些豬場為降低養(yǎng)殖成本或接種疫苗帶來的應激，使用廉價劣質疫苗，減少甚至取消疫苗免疫，