實(shí)驗(yàn)一生長譜法

關(guān)于實(shí)驗(yàn)一生長譜法實(shí)驗(yàn)一

用生長譜法測定微生物的營養(yǎng)要求第2頁,共12頁，2024年2月25日，星期天一、目的要求學(xué)習(xí)并掌握生長譜法測定微生物營養(yǎng)需求的基本原理和方法。第3頁,共12頁，2024年2月25日，星期天二、基本原理微生物的生長繁殖需要適宜的營養(yǎng)環(huán)境；在缺乏某種營養(yǎng)物質(zhì)的、含有指示劑的培養(yǎng)基上接入某種微生物，再在接菌平板上置入這種營養(yǎng)物質(zhì)，經(jīng)一定條件培養(yǎng)后,即可通過指示劑變化情況來判斷對不同營養(yǎng)物質(zhì)的利用情況。該法可以定性、定量地測定微生物對各種營養(yǎng)物質(zhì)的要求，在微生物育種、營養(yǎng)缺陷型鑒定以及飲食制品質(zhì)量檢測等諸多方面具有重要用途。第4頁,共12頁，2024年2月25日，星期天三、實(shí)驗(yàn)器材菌種大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)培養(yǎng)基（合成培養(yǎng)基）

(NH4)3PO41g,KCl0.2g,MgSO4·7H2O0.2g,豆芽汁10mL,瓊脂20g,蒸餾水定容至1LpH7.05,加入12mL0.04%的溴甲酚紫作指示劑(pH5.2～6.8),將顏色由黃色調(diào)為紫色。1×105Pa滅菌25min。溶液和試劑

A—葡萄糖、B—乳糖、C—麥芽糖、D—蔗糖、E—木糖、F—半乳糖。器具無菌培養(yǎng)皿、吸管、鑷子、牙簽、酒精燈、接種環(huán)等,另備試管無菌水6支。第5頁,共12頁，2024年2月25日，星期天四、操作步驟配制培養(yǎng)基制作糖浸片將圓形打孔器(d=0.8cm)打下的濾紙片,置入不同糖的飽和溶液中浸泡10min后,取出置28℃培養(yǎng)箱中烘干備用(最好置紫外燈下滅菌20～30min)。制備菌懸液在已培養(yǎng)24h的大腸桿菌(E.coli)等3種斜面內(nèi)分別倒入5ml無菌水，用接種環(huán)輕輕刮下菌苔，振蕩，制成菌懸液。制平板混菌法——在無菌平板內(nèi)加入上述菌懸液(1ml菌懸液/10ml培養(yǎng)基），倒入溶化冷卻至50OC左右的合成培養(yǎng)基，輕輕搖勻。涂布法——將溶化冷卻至50OC左右的合成培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿，待其凝固后，加入0.5ml菌懸液，用玻棒涂布均勻。第6頁,共12頁，2024年2月25日，星期天對照：培養(yǎng)基+菌0+糖0（1）處理：培養(yǎng)基+菌+糖（3混菌，3涂布）培養(yǎng)基+菌+糖0（3，混菌或涂布）培養(yǎng)基+菌0+糖（1）第7頁,共12頁，2024年2月25日，星期天分小區(qū)植糖在冷凝后的平皿背面,用記號筆畫出6個(gè)均勻的植糖區(qū)域(圖1),用無菌鑷子分別取代號為A、B、C、D、E、F的6種糖浸片各1張對號放入用兩種方法接菌的平板的對應(yīng)區(qū)域中,并輕輕按壓,以免在進(jìn)行倒置培養(yǎng)時(shí)糖片脫離培養(yǎng)基平板。培養(yǎng)及觀察將已放置糖浸片后的平皿置于37℃條件下,培養(yǎng)18～24h后,觀察濾紙片周圍有無菌落生長以及指示劑變色程度。四、操作步驟圖1平板分區(qū)示意圖第8頁,共12頁，2024年2月25日，星期天五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果繪圖，表示大腸桿菌等三種菌在平板上的生長狀況。分析繪制表格，說明大腸桿菌等三種菌利用六種糖的情況。如何保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性？第9頁,共12頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)安排及分組情況第一次課（第四周）：講述實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，完成實(shí)驗(yàn)步驟1：配培養(yǎng)基，滅菌第二次課（第六周）：完成實(shí)驗(yàn)步驟2、3、4、5、6等撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告分組4個(gè)人一組，分成6組，每組作兩種制平板方式。第10頁,共12頁，2024年2月25日，星期天注意事項(xiàng)1.做實(shí)驗(yàn)之前要想好要準(zhǔn)備哪些東西，準(zhǔn)備多少；滅菌時(shí)要想好要滅哪些東西，要滅多少。2.要嚴(yán)格無菌操作。3.加入菌懸液后要趁培養(yǎng)基尚未凝固及時(shí)倒平板，否則將會出現(xiàn)平板尚未倒好培養(yǎng)基已經(jīng)凝固于三角瓶中。4.放濾紙片時(shí)要對號入座并輕輕按壓,以免在進(jìn)行倒