心血管基因治療

關(guān)于心血管基因治療第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義臨床意義上的基因治療，是指通過(guò)特定的載體，將外源性DNA編碼的基因或者是對(duì)特定基因有修飾作用的DNA、RNA，可以直接導(dǎo)入特定的人體器官或特定部位（InVivo），也可以先導(dǎo)入到體外培養(yǎng)的細(xì)胞中，再將細(xì)胞導(dǎo)入人體(ExVivo)，從而起到治療特定疾病的效應(yīng)。第2頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例腺苷脫氨酶（ADA）缺乏癥患者基因治療成功。

10年后，

在法國(guó)9例ADA缺乏癥患者接受治療，3年后，3例患淋巴細(xì)胞白血病和惡性骨髓瘤。

迄今為止，1500多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)幾萬(wàn)人接受了治療。第3頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天在中國(guó)，人們以碳水化合物為主，高甘油三酯血癥患者是高膽固醇血癥患者的4倍。近來(lái)發(fā)現(xiàn)高甘油三酯血癥可作為心血管疾病的獨(dú)立發(fā)病因子，得到廣泛重視和研究。圖為脂蛋白脂酶基因缺陷導(dǎo)致的高甘油三酯小鼠，血漿呈牛奶狀。小鼠極度高甘油三酯血癥血漿中國(guó)山東病人極度高甘油三酯血癥血漿脂蛋白脂酶LPL缺陷的基因治療第4頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、基因治療的方法

（1）目的基因的制備

（2）靶細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)

（3）載體的選擇

（4）導(dǎo)入方法第一節(jié)

基因治療概論第5頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。目的基因的制備（基因治療的策略）1.基因替代（genereplacement）

針對(duì)整個(gè)病變基因，不考慮基因上的致病性突變位點(diǎn)，將整個(gè)正?；?qū)爰?xì)

胞內(nèi)，使外源正?；蛟隗w內(nèi)表達(dá)，達(dá)到治病的效果。2.基因修正（genecorrection）

針對(duì)致病基因的突變堿基序列，設(shè)計(jì)特殊的修正序列，導(dǎo)入細(xì)胞后，將致病基

因的突變位點(diǎn)置換下來(lái)，達(dá)到治病的效果。3.基因放大（geneaugmentation)基因放大通常選擇和致?。ㄈ毕荩┗蛴谢パa(bǔ)或相近功能的基因，將此基因

導(dǎo)入后高表達(dá)，其發(fā)揮的功能可以糾正缺陷的病變基因。LDL-R-/-VLDL-R

第6頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。4.基因失活

（geneinactivation）

①反義技術(shù)（antisensetechnology）

反義核酸技術(shù)就是根據(jù)堿基互補(bǔ)原理，利用人工或生物合成特異互補(bǔ)的DNA或RNA片段抑制或封閉基因表達(dá)的技術(shù)，包括反義寡核苷酸技術(shù)、反義RNA技術(shù)和核酶技術(shù)。（轉(zhuǎn)錄和翻譯水平，特異阻斷靶基因的表達(dá)）

②基因敲除技術(shù)（geneknock-out）或條件敲除（conditionalKO）

③RNA干擾（RNAinterference,geneknock-down）RNA(interference，RNAi）是由雙鏈RNA（doublestrandedRNA,dsRNA）

分子在mRNA水平關(guān)閉相應(yīng)序列基因表達(dá)或使其沉默的過(guò)程。第7頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。RNAi示意圖第8頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、基因治療的方法

（1）目的基因的制備

（2）靶細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)（exvivo)

（3）載體的選擇

（4）導(dǎo)入方法第一節(jié)

基因治療概論第9頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。靶細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)

體細(xì)胞和生殖細(xì)胞1.體細(xì)胞：(1)成纖維細(xì)胞：

優(yōu)點(diǎn)：①容易獲取或體外培養(yǎng)，也容易植回體內(nèi)；②易轉(zhuǎn)染，并能穩(wěn)定地表達(dá)外源目的基因，

合成和分泌的蛋白質(zhì)可以通過(guò)血液供各種類(lèi)型細(xì)胞使用；③回輸?shù)某衫w維細(xì)胞很容易被取出。(2)造血干細(xì)胞：

優(yōu)點(diǎn)：①取材比較容易，并易于輸回體內(nèi)；②造血干細(xì)胞具有不斷分裂、分化成各種血細(xì)胞的潛能；③基因產(chǎn)物在骨髓細(xì)胞成熟后可以通過(guò)血液循環(huán)遍布全身。

缺點(diǎn):①骨髓造血干細(xì)胞在骨髓細(xì)胞中所占比例極少(0.1%)，

提高基因轉(zhuǎn)移效率，提高表達(dá)水平及延長(zhǎng)表達(dá)時(shí)間.第10頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。(3)成肌細(xì)胞：

優(yōu)點(diǎn)：①成肌細(xì)胞來(lái)源于骨骼肌，易獲得；②成肌細(xì)胞易于體外培養(yǎng)；③成肌細(xì)胞具有增殖能力；④易于基因轉(zhuǎn)移，并易與原位肌纖維融合，血管豐富。(4)血管內(nèi)皮細(xì)胞：導(dǎo)管球囊攜帶DNA可成功地進(jìn)行血管基因轉(zhuǎn)移。

(5)淋巴細(xì)胞：

優(yōu)點(diǎn)：①易提取，易體外培養(yǎng)并易于回輸入體內(nèi)；②基因轉(zhuǎn)移效率較高。

缺點(diǎn)：回輸體內(nèi)后淋巴細(xì)胞的壽命短，需要經(jīng)常輸入.第11頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。2.生殖細(xì)胞（主要用在動(dòng)物模型上）：

transgenicandknockoutanimalmodel第12頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、基因治療的方法

（1）目的基因的制備

（2）靶細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)

（3）載體的選擇第一節(jié)

基因治療概論第13頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。載體的選擇病毒型載體和非病毒型載體

逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus，RV）載體

優(yōu)點(diǎn)：

①

RNA反轉(zhuǎn)錄為DNA,

②感染效率高，并穩(wěn)定持久地表達(dá)所帶的外源基因

缺點(diǎn)：

①容量小，只能容納8～10kb的外源基因片段；②血清補(bǔ)體能使之失活；③病毒滴度低，低于治療大腫瘤需要的滴度；④病毒整合到DNA后，可能引起插入突變和激活癌基因的可能；⑤宿主范圍有限，只感染增殖細(xì)胞，故在應(yīng)用上有一定局限性。理想載體:低毒，高效，大容量，可調(diào)控的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。

第14頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。2.腺病毒（adenovirus，Ad）載體

線性雙鏈DNA，36Kb

優(yōu)點(diǎn)：①宿主領(lǐng)域廣（感染分裂期，非分裂期細(xì)胞）②可獲得高病毒效價(jià)，適用于臨床③可直接體內(nèi)注射④腺病毒顆粒比較穩(wěn)定⑤插入外源基因容量大

缺點(diǎn)：①免疫原性強(qiáng)，只適用于短期感染（2-3周）②缺乏靶向性③可能有致病性

第15頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。3.腺相關(guān)病毒（adeno-associatedvirus，AAV）載體

單鏈線性DNA，缺陷病毒，動(dòng)物病毒中最小的。

優(yōu)點(diǎn)：①宿主范圍廣泛

②介導(dǎo)長(zhǎng)期的基因表達(dá)，最有希望的病毒載體系統(tǒng)之一③插入突變的危險(xiǎn)性低，生物安全性高

缺點(diǎn)：①載體容量有限（<5kb），不適于較大基因片段的插入②可用于癌基因治療，但轉(zhuǎn)染能力不如腺病毒

第16頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。4.慢病毒（lentivirus，LV）載體

反轉(zhuǎn)錄病毒的一種

優(yōu)點(diǎn)：①既可感染分裂細(xì)胞又可感染非分裂細(xì)胞②轉(zhuǎn)移基因片段容量較大③目的基因表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)④不易誘發(fā)免疫反應(yīng)

缺點(diǎn)：①毒力恢復(fù)、垂直感染等安全問(wèn)題

第17頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。非病毒載體原理：非病毒載體主要通過(guò)與DNA結(jié)合成顆粒復(fù)合物，然后將DNA導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)而轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核。目前所應(yīng)用的非病毒載體方法包括裸質(zhì)粒直接應(yīng)用、脂質(zhì)體、陽(yáng)離子多聚體(多聚賴(lài)氨酸PLL、聚乙烯亞胺PEI）、納米顆粒載體等。優(yōu)點(diǎn)：容量大、操作方便、安全和無(wú)免疫源性缺點(diǎn)：感染效率沒(méi)有病毒高，高濃度是有細(xì)胞毒性，有的在體內(nèi)不能降解。第18頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、基因治療的方法

（1）目的基因的制備

（2）靶細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)

（3）載體的選擇

（4）導(dǎo)入方法第一節(jié)

基因治療概論第19頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。ExVivo，細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療，首先將目的基因在體外導(dǎo)入到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)，再將細(xì)胞移植到機(jī)體的特定器官或部位發(fā)揮作用（主要是以造血干細(xì)胞為主）。InVivo，組裝了目的基因的載體將直接導(dǎo)入到所需部位，有直接注射，如在肌肉中表達(dá)的多點(diǎn)注射；缺血心肌直視下直接注射，靜脈注射（肝臟為靶器官），腫瘤部位的注射。導(dǎo)入方法第20頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療?；蛑委煷嬖诘膯?wèn)題及方向①目的基因在宿主體內(nèi)表達(dá)不穩(wěn)定，時(shí)間短，限制了基因治療的療效；②目的基因移植引起免疫系統(tǒng)對(duì)已識(shí)別過(guò)的外來(lái)物產(chǎn)生免疫增強(qiáng)，

使病人的治療難以重復(fù)；③病毒載體對(duì)病人可能有各種潛在的危險(xiǎn)；④許多疾病是由多基因紊亂引起，無(wú)法用單基因糾正解決問(wèn)題。目標(biāo)：高效性、靶向性、可調(diào)控性、安全性，尤其是在表達(dá)時(shí)間、部位、水平以及對(duì)各種信號(hào)反應(yīng)的可調(diào)控性方面能夠操控對(duì)單基因遺傳病、惡性腫瘤的術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、心血管病等，基因治療提供了一個(gè)全新的治療思路，為人類(lèi)攻克這些不治之癥帶來(lái)了希望。第21頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。第二節(jié)

基因治療在心血管疾病中的應(yīng)用研究動(dòng)脈粥樣硬化

（AS）第22頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。第23頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。HDLSMCECVEGFAS的基因治療靶點(diǎn)FGFAPOA-ILCATABC-A1LDL第24頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。LDL-R1.LDL-R基因突變病人：血漿LDL增高,家族性高膽固醇血癥（發(fā)病率1/500）。

它汀類(lèi)藥降低TC約30%左右。純合子病人：對(duì)藥物沒(méi)有反應(yīng)，迅速發(fā)生AS。

基因治療在LDL-R-/-小鼠及兔，取得滿(mǎn)意效果。3.臨床試驗(yàn)：逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的exvivoLDL受體基因治療純合子病人，

患者血漿LDL膽固醇只降低了將近30％。

由于基因治療過(guò)程的復(fù)雜性，該研究沒(méi)有繼續(xù)擴(kuò)大（肝臟組織

分離肝細(xì)胞

感染

回輸）。APOB100：反義DNA技術(shù)，（II期臨床，i.V.，降LDL40%），但GPT增高。RNAi

（III期臨床）

AS的靶點(diǎn)LDL低密度脂蛋白第25頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。I期臨床試驗(yàn)：主要進(jìn)行兩方面的試驗(yàn)，一方面藥耐，另一方面是藥代。

受試者是健康人（20例）。II期臨床試驗(yàn)：安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。患者參加（大于200例）。III期臨床試驗(yàn)：治療作用與安全性進(jìn)行確認(rèn)（大于400-500人）。IV期臨床試驗(yàn)：國(guó)家規(guī)定一些新藥在批準(zhǔn)上市后，療效，不良反應(yīng)，藥劑型觀察等。臨床藥物試驗(yàn)分期第26頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。心力衰竭（heartfailure，HF）

已成為發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一。

藥物干預(yù)：β-腎上腺素受體拮抗劑、血管緊張素II和醛固酮抑制劑

以及利尿劑等。

藥物干預(yù)能夠增加生存率，但是還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠理想，

因此很有必要發(fā)展一種新的治療策略。第27頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。心衰靶點(diǎn)第28頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。心衰靶點(diǎn)1

肌漿網(wǎng)Ca2+-ATPase

心衰時(shí)肌漿網(wǎng)SERCA2a活性的降低心衰大鼠，TAC（transaorticconstriction）的模型后，進(jìn)行冠脈內(nèi)Adv-SERCA2a轉(zhuǎn)移，發(fā)現(xiàn)心肌的收縮和舒張功能改善，生存率提高。由二尖瓣損傷造成心衰的豬時(shí)發(fā)現(xiàn)，冠狀動(dòng)脈灌注介導(dǎo)的AAV1-SERCA2a兩個(gè)月后，左室收縮性能和心肌重塑都有明顯改善。臨床研究方面，美國(guó)匹茲堡大學(xué)醫(yī)學(xué)中心已經(jīng)獲準(zhǔn)進(jìn)行SERCA2a基因轉(zhuǎn)移治療晚期心力衰竭的I期臨床試驗(yàn)，結(jié)果令人期待。SERCA2a第29頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。心衰靶點(diǎn)2

去磷酸化的PLN時(shí)能夠與SERCA2a結(jié)合，從而抑制其活性；

反之，磷酸化的PLN對(duì)SERCA2a的抑制作用就會(huì)消失。

心衰時(shí)PLN活性增高，促進(jìn)心衰。

腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的突變的PLN-S16E（一種PLN抑制劑）。

能夠防止罹患心肌病的倉(cāng)鼠以及心梗后心衰大鼠的心肌病變。WatanabeA等人運(yùn)用siRNA，導(dǎo)入新生大鼠心肌細(xì)胞，

使心肌細(xì)胞鈣攝取功能得到恢復(fù)。運(yùn)用反義核苷酸技術(shù)降低PLN水平，改善人類(lèi)衰竭的心肌細(xì)胞的

收縮性和鈣處理能力。

PLN第30頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。

微小RNAs（micro-RNAs，miRs)

miRs是體內(nèi)存在的非編碼的RNAs，約22個(gè)核苷酸序列。它們通過(guò)結(jié)合在靶基因的3’非編碼區(qū)抑制蛋白的轉(zhuǎn)錄后翻譯過(guò)程，或者誘導(dǎo)mRNA降解來(lái)達(dá)到抑制基因表達(dá)的作用。

通過(guò)抑制miR－195的表達(dá)，來(lái)達(dá)到減輕心肌肥大從而對(duì)抗心力衰竭的作用。

抑制miR-21能夠抑制血管緊張素II和去氧腎上腺素誘導(dǎo)心肌肥大以及胚胎基因的表達(dá)，也具有抗心肌肥大和抗心衰的作用心衰靶點(diǎn)3第31頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。β-腎上腺素受體（β-adrenalinereceptor）系統(tǒng)心衰靶點(diǎn)41.β1-AR2.β2-ARβ-AR第32頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。缺血性心臟病的血管新生療法1

Vale等對(duì)6例慢性心肌缺血患者心內(nèi)膜下注射編碼phVEGF-2的裸質(zhì)粒，試驗(yàn)組心絞痛發(fā)作，硝酸甘油使用量明顯減少，1年后平均缺血面積顯著減少。Reilly等對(duì)30名加拿大心血管協(xié)會(huì)3～4級(jí)難治性心絞痛患者進(jìn)行直接心肌內(nèi)注射編碼VEGF-2基因的裸質(zhì)粒，1例術(shù)中死亡。一年內(nèi)心絞痛得到明顯改善。一年后有4例死亡、5例心梗、7例再手術(shù)，其他部位心肌缺血引起。

芬蘭的一個(gè)研究組通過(guò)血管成形術(shù)和支架術(shù)導(dǎo)管灌注實(shí)施了Kuopio血管再生Ⅱ期臨床試驗(yàn)，hVEGF-Ad或hVEGF-P/L。6個(gè)月后未見(jiàn)明顯副作用，心肌灌注，有明顯改善。VEGF第33頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。缺血性心血管病的血管新生療法2FGFGrine在60例穩(wěn)定型心絞痛患者中冠脈內(nèi)注射Ad-FGF-4，F(xiàn)GF4可提高患者的運(yùn)動(dòng)耐力、減少心絞痛發(fā)作。

E2F：

細(xì)胞周期中主要轉(zhuǎn)錄因子，利用反義核苷酸技術(shù)，導(dǎo)入細(xì)胞后，

與轉(zhuǎn)錄因子E2F特異性結(jié)合，從而使轉(zhuǎn)錄因子喪失活化細(xì)胞周期的功能。

冠脈搭橋用的大隱靜脈壁，增厚大大減輕(III期臨床)E2F第34頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。高血壓的治療靶點(diǎn)①增強(qiáng)舒血管基因，即將正常舒血管基因DNA序列導(dǎo)入細(xì)胞，

使血管舒張基因過(guò)表達(dá)；②抑制縮血管基因，即將反義DNA序列或RNAi技術(shù)，

抑制血管收縮基因表達(dá)。第35頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。誘導(dǎo)基因表達(dá)：正義療法（senseapproach）：

通過(guò)正義療法在不同的高血壓實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭羞^(guò)表達(dá)血管擴(kuò)張劑,腎上腺髓質(zhì)素，心房利鈉肽，內(nèi)皮型一氧化氮，血管緊張素II受體2型受體（AT2R）

第36頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。降低基因表達(dá)：反義療法（antisenseapproach）：

即根據(jù)靶基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)設(shè)計(jì)反義寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotide，ASODN）分子，通過(guò)靜脈注射或靶組織局部注射，將能與靶基因結(jié)合的ASODN直接導(dǎo)入或以病毒為載體轉(zhuǎn)染到體內(nèi)，抑制收縮血管相關(guān)基因表達(dá)，減少縮血管物質(zhì)的生成。AGT、ACE、AT1R，β1AR，C-fos，羧肽酶Y為靶基因RNAi：MR，TRPC3

（瞬時(shí)Ca通道）第37頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。心律失常靶點(diǎn)

目前，心律失常的分子遺傳學(xué)研究主要集中于單基因遺傳性疾病。至少明確8個(gè)基因的突變可引起心肌細(xì)胞離子通道的功能異常而導(dǎo)致心律失常，包括鉀通道基因KCNQ1、KCNE1、HEGR、KCNE2和KCNJ2；鈉通道基因SCN5A；鈣釋放通道基因RYR2，錨蛋白B基因（AnkyrinB）和起搏電流通道基因HCN4。第38頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。

截止2000年，400多個(gè)臨床方案被實(shí)施，累計(jì)3500多個(gè)人接受了治療。

心臟移植

基因治療來(lái)解決器官移植排斥有著獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：器官移植是把一個(gè)個(gè)體的組織或器官切取下來(lái)移植給另一個(gè)個(gè)體，這就為我們提供了一個(gè)在體外使用轉(zhuǎn)基因載體改造供體器官或組織的時(shí)機(jī)。在局部表達(dá)免疫移植抑制分子，讓受者免于全身使用免疫抑制劑，而且有望達(dá)到抗原特異性耐受的狀態(tài)。第39頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)

基因治療概論一、基因治療（genetherapy）的定義

是糾正疾病相關(guān)的缺陷基因的一種技術(shù)。二、基因治療的歷史回顧1990年，在美國(guó)首例ADA缺乏癥患者基因治療成功。