【丹參中丹參總酮的提取工藝探究7100字（論文）】

Ⅱ緒論概況丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根莖。藥性苦、微寒[4]。歸心肝經(jīng)本中藥功效具有活血化瘀、止痛、解煩、涼血、祛瘀的作用，可用于血瘀、痛經(jīng)、閉經(jīng)、產(chǎn)后腹痛、胸痛、上腹痛、脅痛、瘀傷、疼痛、疼痛、失眠等月經(jīng)不調(diào)。能抗心率失常，保護(hù)以及心肌、保護(hù)人類肝細(xì)胞造成損傷并促進(jìn)患者肝細(xì)胞再生利用其中脂溶性丹參酮類化學(xué)物質(zhì)文化還具有抗腫瘤藥物作用。丹參酮對部分真菌有較好的抗菌效果如金黃色葡萄球菌，在長期使用、抗炎、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的過程中不易產(chǎn)生耐藥性，對銀屑病、頑固性蕁麻疹、痤瘡等有較好的治療效果。其化學(xué)組成成分分析主要含醌類成分、有機(jī)酸類物質(zhì)成分和脂肪酸類藥物成分，總丹參酮可以包含發(fā)現(xiàn)丹參酮I、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB、隱丹參酮、異隱丹參酮等10余個(gè)丹參酮通過單體，主要包括含有二萜醌類脂溶性及酚酸類以及水溶性有效成分。目前對丹參脂溶性的研究多以丹參酮ⅡA、丹參酮等脂溶性成分為基礎(chǔ)，以丹參酮總提取量為指標(biāo)?？疾煲毫媳?、提取工作時(shí)間、提取不同溫度對含量的影響。藥理作用及作用機(jī)制丹參酮對心腦血管的作用眾多研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參酮ⅡA在多種重要途徑發(fā)揮著環(huán)境保護(hù)以及心肌的作用，左心室肥大肥大往往是慢性病高血壓的伴隨的并發(fā)癥，低濃度丹參能抑制動(dòng)物心臟的心肌收縮，減少系統(tǒng)能量資源消耗而不損傷導(dǎo)致心肌[5]。丹參酮IA磺酸能抑制心肌收縮力，但能輕微增強(qiáng)心臟的心肌收縮力[6]。阻斷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物冠狀動(dòng)脈血流后，靜脈注射生理鹽水使對照組左心室舒張壓升高，靜脈注射丹參酮ⅡA使實(shí)驗(yàn)組左心室舒張壓顯著降低說明丹參酮ⅡA可能通過降低左心室壁張力和心臟體積而降低心肌耗氧量[7]。在給大鼠口服甲狀腺素粉誘導(dǎo)甲亢過程心肌微粒體ATP酶活性降低,丹參酮Ⅱ-A磺酸鈉ATP酶活性具有保護(hù)作用,可提高心肌ATP酶活性,對心肌起到保護(hù)作用[8]。采用大鼠離體工作心臟模型，在停搏液中加入丹參酮。所以丹參酮可以通過提高抗氧化能力作用研究從而達(dá)到保護(hù)以及心肌，丹參酮IA磺酸鈉離體心肌動(dòng)作電位時(shí)程縮短,主要為其降低慢反應(yīng)電位除極速率,而對0相上升發(fā)展速率產(chǎn)生影響程度較小，其結(jié)合于G蛋白偶聯(lián)受體,通過絲裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路信息進(jìn)行分析信號(hào)系統(tǒng)傳導(dǎo)使心肌組織細(xì)胞[Ca2+]顯有與維拉帕米相似的Ca2+阻滯治療作用[9]。丹參素能顯著擴(kuò)張實(shí)驗(yàn)性急性心肌梗死犬、貓、離體貓和豬的冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流，并能對抗嗎啡、心得安的冠狀動(dòng)脈收縮作用。因此，丹參素被認(rèn)為是擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈的有效成分之一?？咕饔玫⑼駼、羥基丹參酮、隱丹參酮、甲酸酯、二氫丹參酮Ｉ及總丹參酮的其他成分均具有抑菌作用，其中隱丹參酮的抑菌作用最強(qiáng)，主要是對革蘭氏陽性菌，與金屬離子配位后抑菌作用更強(qiáng)。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)研究所發(fā)現(xiàn)，丹參酮對金黃色葡萄球菌有明顯的抑制作用[10]，對溶血性鏈球菌也有一定的抑制作用，其中h37rv的最小抑菌濃度(mic)為1.5mg/l結(jié)核桿菌[11]。消炎作用研究進(jìn)展抗炎作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)教學(xué)研究結(jié)果表明,丹參酮有明顯的抗炎癥作用。能明顯抑制組胺引起的毛細(xì)血管通透性增加；能抑制滲出性甲醛腹膜炎。明膠對小鼠的白血球有顯著的抑制作用。對亞急性甲醛性關(guān)節(jié)腫有明顯的抑制影響作用。棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)無抑制控制作用。研究結(jié)果表明,當(dāng)健康人白細(xì)胞與丹參酮共同進(jìn)行孵育1h,可使白細(xì)胞趨化性以及發(fā)生發(fā)展明顯具有抑制;而對白細(xì)胞的隨機(jī)選擇運(yùn)動(dòng)無影響。若孵育時(shí)間持續(xù)19h,則5μg/L丹參酮足以使白細(xì)胞趨化性及隨機(jī)運(yùn)動(dòng)均有明顯的抑制?？拱┳饔秒[丹參酮中的丹參酮ⅡA具有抑癌作用;腫瘤的惡性表型是通過誘導(dǎo)控制，直到其逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞，并恢復(fù)其大部分正常功能。隱丹參酮對癌細(xì)胞的生長周期阻礙加以調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式抑制癌細(xì)胞的增殖加速凋零。抑制細(xì)胞增殖的作用主要是通過阻滯G0/G1期或G2/M期[12]。丹參的化學(xué)成分丹參的化學(xué)成分主要含醌類成分:丹參酮I（C18H12O3）、II、ⅡA(C13H18O3)、ⅡB、Ⅲ、V、VI，異丹參酮I、IIA、IIB,隱丹參酮，異隱丹參酮，甲基丹參酮，羥基丹參酮，丹參新酮，左旋二氫丹參酮I等;有機(jī)酸類成分:丹酚酸A、B，丹參素，原兒茶醛，原兒茶酸，迷迭香酸，琥珀酸，紫草酸單甲酯，紫草酸二甲酯，紫草酸A、B等;脂肪酸類成分:亞油酸，亞麻酸，油酸，棕櫚酸[13];按照性質(zhì)的不同分為脂溶性和水溶性，丹參含有脂溶性成分和水溶性成分兩大部分.脂溶性成分大多為共軛醌,酮類化合物,如丹參酮I,丹參酮IIA,丹參酮IIB,隱丹參酮等.水溶性成分有丹參素,丹參酸甲,乙,丙,原兒茶酸,原兒茶醛等[1]。脂溶性化合物脂溶性成分大多為共軛醌,酮類化合物,如丹參酮I,丹參酮IIA,丹參酮IIB,隱丹參酮等[14]。其中包括丹參酮I為丹參抑菌有效進(jìn)行成分問題之一，經(jīng)體外研究試驗(yàn)，對人體型結(jié)核桿菌H37Rv菌株有較強(qiáng)的抑制影響作用。藥理作用為性激素樣作用:子宮重量法和陰道涂片法證明該晶體具有溫和的雌激素樣活性。精囊和前列腺重量法證明具有抗雄激素作用。治療痤瘡，膿皰性痤瘡，心絞痛。丹參酮ⅡA經(jīng)磺化而得的一種水溶性物質(zhì)丹參酮ⅡA磺酸鈉（SodiumTanshinonⅡASilateA），能增加冠脈血流量，改善缺氧后引起的心肌代謝紊亂，從而提高心肌耐缺氧的能力。還有一個(gè)顯著提高保護(hù)紅細(xì)胞膜的作用。對動(dòng)物進(jìn)行心肌梗塞有縮小梗塞區(qū)域面積的效應(yīng)。在一定劑量下，還能增強(qiáng)心肌收縮力。丹參酮ⅡA對抗AS的形成。對低密度指蛋白引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。血液中膽固醇濃度明顯增高，特別是對于低密度指蛋白（LDL）含量降低膽固醇濃度不斷增高可引起動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷，導(dǎo)致中國動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。是評(píng)價(jià)丹參酮ⅡA對LDL引起的EC損傷的影響。丹參酮ⅡA具有抗氧化作用，可防止LDL的氧化[15]，從而保護(hù)EC，維持其分泌PGL2的正常功能，抗AS形成。丹參酮I（C18H12O3）丹參酮ⅡA(C13H18O3)水溶性化合物水溶性成分有丹酚酸A、B,丹參素，原兒茶醛，原兒茶酸，迷迭香酸，琥珀酸，紫草酸單甲酯，紫草酸二甲酯，紫草酸A、B等;脂肪酸類成分:亞油酸，亞麻酸，油酸，棕櫚酸。丹參總酮的提取采用正交試驗(yàn)的方法設(shè)計(jì)，采用乙醇提取回流法提取丹參酮，以總丹參酮作為丹參酮總量。以總丹參酮的提取量為指標(biāo)?？疾炝艘毫媳?、提取時(shí)間、提取溫度等因素對提取物含量的影響。醇提法提取總丹參醇由于丹參酮IIA易溶于甲醇，乙醇，丙酮，乙醚，苯等有機(jī)溶劑，微溶于水。，多用乙醇進(jìn)行提取，包括生產(chǎn)乙醇通過滲濾法和回流法。①滲濾法:采用正交實(shí)驗(yàn)考察四個(gè)因素甲醇的濃度、藥材浸泡時(shí)間、提取時(shí)間和提取溫度對丹參酮提取率的影響,藥材提取溫度、藥材浸泡時(shí)間、提取時(shí)間、甲醇濃度(70%-90%)和甲醇用量對提取率均有影響。稱取10g中藥丹參粉末使用高濃度(90%)的醇溶劑、加溫(60-65)、浸泡時(shí)間延長(6h)可以相對的縮短提取所需的時(shí)間,獲得產(chǎn)物丹參總酮。但是因?yàn)榈⒅苄猿煞謱囟燃捌洳环€(wěn)定，貯放、回收乙醇、濃縮、干燥醇提后的這五個(gè)工序是丹參酮熱降解是否能降低的至關(guān)重要的因素，所以加熱時(shí)間要嚴(yán)格控制在2-4h的范圍內(nèi)。②回流法:采用乙醇加熱回流法，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)獲得提取丹參酮的最佳提取條件為:丹參粉碎后過篩，乙醇濃度為75%,提取溫度為65,提取時(shí)間為2h,料液比為1：8。通過正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳提取溶劑倍量、回流時(shí)間和回流次數(shù)?？疾鞂?shí)驗(yàn)中，由于溶劑用量在7倍以上，丹參酮IIA的提取量沒有顯著差異，綜合考慮人規(guī)?；a(chǎn)成本和資源利用率等因素，丹參酮IIA的提取以7倍溶劑為宜。本實(shí)驗(yàn)使用反流法研究四個(gè)因素：液體比，提取時(shí)間、萃取溫度對丹參總酮提取的影響，藥材不被水浸泡，直接用干藥材提取，降低藥材的水分含量，避免更大的實(shí)驗(yàn)誤差，采用甲醇加熱回流法，并通過單因子實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)獲得最佳提取條件，用于提取丹參酮。取10g丹參切碎，放入濾紙內(nèi)包裹防止藥材漏出，放置于索氏提取器內(nèi)加入不同濃度的甲醇溶液60%-90%濃度間區(qū)內(nèi)，實(shí)際使用70%濃度的醇溶液，液料比為124毫升醇溶液浸泡2h，65度水浴加熱回流提取2小時(shí)，提取次數(shù)為2次。超聲提取法提取總丹參醇超聲能產(chǎn)生空化效應(yīng)、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)具有破碎、攪拌、釋放等特殊作用[16]。它能使丹參根植物組織的空化泡在溶劑中潰滅，使組織中的細(xì)胞瞬間完成破碎。有利于溶劑滲入植物細(xì)胞，使細(xì)胞中的有效成分進(jìn)入溶劑，加速相互滲透和溶解，能夠顯著的提高溶解度。超聲提取丹參酮，稱取6份10g的中藥丹參粉，并加入75%工業(yè)乙醇溶液120ml在天平上進(jìn)行稱重記錄,水溫維持在不超過60。C[17]然后分別用40KHz超聲波提取10、20、30、40、50、60min。本法進(jìn)行具有在實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)備可以簡單,操作的更加方便，提取無需加熱、時(shí)間短，提取率高、污染少等特點(diǎn)，優(yōu)于其他傳統(tǒng)的醇提法，可增加藥材的利用率。索氏提取法提取總丹參醇索氏提取器法利用氣壓差使溶劑回流虹吸，使被萃取的物質(zhì)被純?nèi)軇┹腿?，因此萃取效率被提高，用天平稱取丹參粉10g用濾紙包裹后不漏粉，使用粉末增加液體浸溶的面積再次提高萃取效率，橫著放入索氏提取器中，然后將固定量的有機(jī)溶劑苯放入圓底燒嘴中，在水浴中加熱(80-85)使苯蒸出，通過索氏提取器冷卻凝結(jié)，將熱苯溶液放入索氏提取器中，用藥物濾紙包裝浸泡，反復(fù)操作，直到索氏提取器中的熱的苯溶液無色。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)溶液中的苯，剩下的殘留物為我們需要的總丹參酮。微波提取法提取總丹參酮微波提取是一項(xiàng)新興的技術(shù)，加熱升溫快、能耗低、選擇性好,應(yīng)用于中藥提取具有穿透力強(qiáng)、選擇性高等顯著特點(diǎn)。稱取被已粉碎的丹參藥材10g,加入6倍的95%的乙醇微波提取30min以上,微波功率320W進(jìn)行微波，然后進(jìn)行回流提取然后離心。超臨界CO2萃取提取總丹參酮超臨界CO2流體萃取技術(shù)是近20年來經(jīng)濟(jì)發(fā)展結(jié)合起來的在分離域出現(xiàn)的一種社會(huì)新技術(shù)，它與常規(guī)溶劑萃取的區(qū)別是選用CO2氣體與待分離物質(zhì)接觸也就是具有一種可以稱為超臨界流體(SF)的物質(zhì)文化代替?zhèn)鹘y(tǒng)有機(jī)溶劑系統(tǒng)作為一個(gè)萃取劑[18]。使其有選擇性將物質(zhì)極性、分子量、沸點(diǎn)等不同依次萃取出來，即在臨界點(diǎn)附近系統(tǒng)的溫度和壓力的微小變化可以導(dǎo)致材料溶解度的幾個(gè)數(shù)量級(jí)的突然變化。該方法具有無毒、快速、低成本、低溫操作的優(yōu)點(diǎn)。采用超臨界CO2萃取法提取了總丹參酮,其中壓力、溫度、時(shí)間、乙醇流量等對總丹參酮提取收率的影響至關(guān)重要。10g中藥丹參粉萃取壓力25MPa,萃取溫度40'C，萃取時(shí)間2h,乙醇流量1.0m/min,進(jìn)行超臨界萃取。紫外分光光度法測定總丹參酮的含量本實(shí)驗(yàn)研究采用不同回流法提取法進(jìn)行提取總丹參酮，然后用丹參酮ⅡA作為一個(gè)對照，使用通過紫外可見分光光度計(jì)來測定總丹參酮的含量，此方法可以低成本、操作系統(tǒng)簡單、省時(shí)、適用且可靠性強(qiáng)，可作為中國中藥中總丹參酮含量以及測量的一種社會(huì)適應(yīng)性較強(qiáng)的方法。儀器與對照品日本島津UVMmini-1240分光度計(jì)，BSA電子天平（德國賽多利斯）萬分之一，丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品（冠晨生物貨號(hào)：GC-01-341），75%乙醇溶液（武漢康寧美生物科技有限公司）、甲醇(衢州巨氏試劑有限公司)、FD-2密封式恒溫可調(diào)式電爐加熱器(常州市金壇科興儀器廠有限公司)、博科臺(tái)式TGL-16M型高速離心機(jī)（濟(jì)南千司生物有限公司）方法供試品的制備取最終提取后得到的提取液60ml或者1/2，置于250ml容量瓶中，用甲醇稀釋，到距離刻度1-2cm時(shí)用膠頭滴管定容，定容后上下來回?fù)u勻;用移液管準(zhǔn)確稱量上一步溶液的4ml，置于50ml的容量瓶中，同上，在距離刻度線1-2cm時(shí)用甲醇稀釋定容至刻度線，上下均勻搖動(dòng)，得到供試品溶液。對照品的制備用天平精密稱取丹參酮ⅡA20毫克，置于100毫升的容量瓶中，使用甲醇將其溶解并稀釋到刻度線1-2cm時(shí)用膠頭滴管定容后，然后上下翻轉(zhuǎn)進(jìn)行搖勻后得0.2毫克每毫升的對照品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定精密量取丹參酮ⅡA對照品的溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,分別置于10mL的容量瓶中,加入甲醇溶解后并稀釋至容量瓶刻度，于269nm的波長處分別測出其吸光度[19]。以對照品濃度X為橫坐標(biāo)吸光度Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，最后得到回歸方程為y=4.955x+0.2087[20],r=0.9993(n=5)。結(jié)果表明，丹參酮IIA的濃度在0.020042-0.10021mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)把上述實(shí)驗(yàn)的同批供試品，分別于0、1、2、3、4、5、6小時(shí)進(jìn)行吸光度檢測，分別為0.215、0.214、0.217、0.218、0.215、0.215、0.214，其RSD為0.7%（此組數(shù)據(jù)為純提法中的回流法數(shù)據(jù)，其余4組RSD均在2.0%內(nèi)，在6小時(shí)內(nèi)均為合格），則說明這批供試品在6小時(shí)內(nèi)是穩(wěn)定的[21]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論提取方法的選擇以上實(shí)驗(yàn)的提取方式都進(jìn)行4次重復(fù)，并于269nm處分批次分別測出其吸光度，并進(jìn)行計(jì)算其提取量，并將4次結(jié)果做一平均值[23]，可得到結(jié)果如表1所示。由下表可以得知使用醇回流法提取總丹參酮ⅡA的提取效率分別高于醇滲濾法、超聲提取法、微波提取法、超臨界CO2萃取法這4種方法,并且醇回流法操作簡單、便利，成本也相對較低，在生產(chǎn)中也可以進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)，所以選擇醇回流法進(jìn)行丹參酮的提取[24]。表1不同提取方法下丹參酮ⅡA含有量(mg/g，n=4)提取方法1234平均值滲濾法0.9560.9940.9191.0010.968醇回流法2.652.712.662.742.69超聲法1.191.521.461.721.47微波法0.9210.8940.9110.8560.900超臨界CO2萃取法82.052.10正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表2正交實(shí)驗(yàn)因素實(shí)驗(yàn)表水平因素料液比溫度/。C浸泡時(shí)間/h回流時(shí)間/h11:8601.01.021:10652.01.531:12701.52.0表3正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果實(shí)驗(yàn)序號(hào)（A）液料比（B）溫度/。C（C）浸泡時(shí)間/h（D）回流時(shí)間/h總丹參酮含量/（mg/g）111111.831212221.962313332.101續(xù)表421231.803522311.922623121.965731321.784832132.165933211.967K11.9261.6651.8071.860K21.8591.8421.741.896K31.8421.7961.7861.935R0.0840.1840.0670.75結(jié)論由正交實(shí)驗(yàn)得出當(dāng)提取條件有料液比、溫度（加熱）、浸泡時(shí)間、回流時(shí)間四個(gè)條件時(shí)，料液比為1：8時(shí)，浸泡時(shí)間為1小時(shí)回流時(shí)間2小時(shí)時(shí)，總丹參醇的含量最高，提取的總丹參醇含量達(dá)2.165mg/g；醇回流方法操作簡單、便利，成本也相對較低，能夠更好更快速的去適應(yīng)于生產(chǎn)，而不必要在漫長的生產(chǎn)中進(jìn)行漫長的適應(yīng)，在生產(chǎn)中也可以進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)，能夠在提高產(chǎn)量獲得相對應(yīng)的經(jīng)濟(jì)報(bào)酬的同時(shí)也相對環(huán)保節(jié)能。

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