儀器分析：第四章 高效液相色譜法和超臨界流體色譜法 液相色譜分析條件的選擇

*第四章

高效液相色譜法和超臨界流體色譜法4.5.1

一般條件選擇4.5.2分離類型的選擇4.5.3流動相的選擇第六節(jié)

HPLC的應用4.6.1

高效液相色譜的分析應用4.6.2制備型液相色譜第五節(jié)

液相色譜分析條件的選擇choiceofanalyticalconditionforHPLCHighperformanceliquidchromatographyandSupercriticalfluidchromatography

*4.5.1

一般條件的選擇1.影響分離的因素與提高柱效的途徑

液體的擴散系數(shù)僅為氣體的萬分之一，則在高效液相色譜中,速率方程中的分子擴散項B/u較小，可忽略不計，即

H=A+Cu

液體的黏度比氣體大100倍，密度為氣體的1000倍，故降低傳質阻力是提高柱效主要途徑。載體粒度較大時的LC曲線。*由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色譜中，不可能通過增加柱溫來改善傳質。分離過程需要保持恒溫。

改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。上圖為粒度較大時的LC曲線左圖為粒度較小時的LC曲線*2.流速流速是調整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。

3.固定相及分離柱

氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項技術要求非常高的工作，一般很少自行制備。*4.5.2分離類型選擇*4.5.3

流動相的選擇選擇流動相時應注意以下幾個普遍性的問題：

（1）盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。（2）避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3）試樣在流動相中應有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（4）選擇的流動相應滿足檢測器的要求。如當使用紫外檢測器時，流動相不應有紫外吸收。*在選擇流動相時，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。常用溶劑的極性大小順序為：

水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)

當純?nèi)軇┎荒軡M足分離要求時，多采用混合溶劑或梯度洗脫。

*多元混合溶劑的溶劑極性參數(shù)計算

式中

i為混合溶劑中各溶劑的體積百分數(shù)。二元混合溶劑的則為式中

A，

B分別為二元混合溶劑中溶劑A和溶劑B的體積百分數(shù)。

*多元混合溶劑的溶劑極性參數(shù)計算

色譜分析需要調節(jié)流動相極性使試樣組分的容量因子k的數(shù)值在適宜范圍內(nèi)。對于正相色譜，二元溶劑的極性參數(shù)P'和組分的k值存在如下關系：

式中、分別為初始和調節(jié)后二元溶劑的極性參數(shù)。k1、k2為組分相應的容量因子。*例4-3在一反相色譜柱上，當流動相為30%甲醇和70%水(體積比)時，某組分的保留時間為25.6min，死時間為0.35min，如何調節(jié)溶劑配比使組分容量因子為5？

解：初始值

=0.75

即調整溶劑比例為75%甲醇和25%水可使該組分的k值為5。*溶劑的選擇性溶劑和樣品分子間的作用力用接受質子的能力xe、給予質子的能力xd和靜電力xn(由偶極矩決定)三種參數(shù)來表征，并以xe、xd和xn構成一個三角坐標圖

。

溶劑可分為八組而分別位于圖中不同區(qū)。I組的xe值較大，屬質子受體溶劑；VII組的xd值較大，屬質子給于體溶劑；V組的xn值較大，屬偶極作用力溶劑。同組溶劑在分離中具有相似的選擇性，不同組差別較大。*溶劑的選擇性*4.6HPLC的應用

4.6.1HPLC的應用

1.環(huán)境中有機氯農(nóng)藥殘留量分析可對水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進行分析。固定相：薄殼型硅膠(37～50m)

流動相：正己烷流速：1.5mL/min

色譜柱：50cm2.5mm(內(nèi)徑)檢測器：示差折光檢測器*2.稠環(huán)芳烴的分析

稠環(huán)芳烴多為致癌物質。

固定相：十八烷基硅烷化鍵合相流動相：20%甲醇-水～100%甲醇線性梯度淋洗，2%/min

流速：1mL/min

柱溫：50oC

柱壓：70104Pa

檢測器：紫外檢測器*3.血漿分析*4.6.2制備型液相色譜

獲得高純物質（色譜純）的有效方法。半制備柱（內(nèi)徑8mm，長度15～30cm），一次制備量0.1～１mg。1.色譜柱的柱容量（柱負荷）

對分析柱：不影響柱效時的最大進樣量；對制備柱：不影響收集物純度時的最大進樣量；超載：進樣量超過柱容量。柱效迅速下降，峰變寬。

超載可提高制備效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%為宜。*2.液相制備色譜的方法（1）主峰可獲得良好分離；使用制備柱，超載提高效率。（2）兩主成分之間的小組分；超載，分離切分使待分離組分成為主成分（富集）后，再次分離制備。

*3.制備型液相色譜

制備型液相色譜：結構與分析型一樣，但泵流量大、進樣量大、采用制備柱；柱后餾分收集器。

制備柱：內(nèi)徑20～50mm，柱長50cm。*請選擇內(nèi)容結束4.1

高效液相色譜法的特性

4.2

高效液相色譜儀

4.3

液相色譜固定相與流動相