瘧原蟲形態(tài)及鏡檢技術(shù)

關(guān)于瘧原蟲形態(tài)及鏡檢技術(shù)一、瘧原蟲形態(tài)及分期1、瘧原蟲構(gòu)造三要素：核、胞漿、瘧色素核：正常情況下核呈鮮紅色，呈圓形或不規(guī)則的顆粒狀胞漿：被染成淺藍色或深藍色，隨著蟲體發(fā)育，胞漿逐漸增多瘧色素：由未被利用的血紅蛋白分解成正鐵血紅素顆粒蓄積在原漿內(nèi)，顏色和顆粒的形狀，因瘧原蟲種類而異。核瘧色素胞漿第2頁,共35頁，2024年2月25日，星期天2、分期：環(huán)狀體、大滋養(yǎng)體、裂殖體、配子體?紅外期裂殖子侵入紅細胞內(nèi)，初期似戒指狀，紅色的核點，蘭色環(huán)狀的胞漿。稱為環(huán)狀體即小滋養(yǎng)體。?環(huán)狀體發(fā)育長大，胞漿可伸出不規(guī)則的偽足，以吞噬血紅蛋白，此為大滋養(yǎng)體。第3頁,共35頁，2024年2月25日，星期天?大滋養(yǎng)體繼續(xù)發(fā)育，其核與胞漿進行分裂，形成裂殖體。原蟲的不同裂殖體中裂殖子的數(shù)目也不一樣，成熟后裂殖子數(shù)一般間日瘧為12—24個，惡性瘧為18—36個。?成熟的裂殖體破裂，裂殖子逸出，一部分被吞噬細胞吞噬，一部分再侵入正常紅細胞開始新一輪的紅內(nèi)期發(fā)育，經(jīng)過數(shù)次裂體增殖后，部分侵入紅細胞的裂殖子不再進行核分裂，而逐漸發(fā)育成雌雄配子體。第4頁,共35頁，2024年2月25日，星期天二、厚薄血膜中瘧原蟲的主要形態(tài)特征薄血膜：瘧原蟲寄生于紅細胞中，結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)典型，一般用于鑒別蟲種。厚血膜：紅細胞被溶解，蟲體皺縮，形態(tài)發(fā)生較大變化，但只要掌握瘧原蟲的核，胞漿，瘧色素三大基本構(gòu)造也是不難鑒別的，一般用于定性。第5頁,共35頁，2024年2月25日，星期天三、薄血膜中間日瘧和惡性瘧各期瘧原蟲形態(tài)鑒別第6頁,共35頁，2024年2月25日，星期天間日瘧環(huán)狀體惡性瘧環(huán)狀體蟲體約占紅細胞1/3，環(huán)較粗；核1個，較少見2個核及一個紅細胞內(nèi)寄生2個環(huán)狀體。蟲體約為紅細胞的1/6，環(huán)纖細；核1-2個，一個紅細胞內(nèi)寄生兩個環(huán)狀體較為常見，蟲體常趨邊。第7頁,共35頁，2024年2月25日，星期天間日瘧大滋養(yǎng)體惡性瘧大滋養(yǎng)體蟲體不規(guī)則，較大，阿米巴樣，常含空泡，瘧色素細小，黃褐色，散在分布。寄生的紅細胞脹大，變淺。蟲體較小，圓形，空泡不顯著，瘧色素細小結(jié)成團塊，呈黑褐色。寄生的紅細胞正?；蚵钥s小。第8頁,共35頁，2024年2月25日，星期天惡性瘧未成熟裂殖體間日瘧未成熟裂殖體較大，核2個以上，圓形或不規(guī)則，空泡消失，瘧色素黃褐色，分布不均較小，核2個以上，瘧色素黑褐色團塊狀第9頁,共35頁，2024年2月25日，星期天間日瘧成熟裂殖體惡性瘧成熟裂殖體大于正常紅細胞，裂殖子12~24個，排列不規(guī)則，瘧色素黃褐色，常集于一側(cè)。小于正常紅細胞，裂殖子8~32個，排列不規(guī)則，瘧色素黑褐色呈團塊狀。第10頁,共35頁，2024年2月25日，星期天間日瘧雌（大）配子體間日瘧雄（小）配子體?如何區(qū)分間日瘧雌雄配子體：雌：核較小，致密，常偏一側(cè)，胞漿深藍雄：核較大，疏松，常位中央，胞漿淺藍第11頁,共35頁，2024年2月25日，星期天惡性瘧雌（大）配子體惡性瘧雄（?。┡渥芋w?如何區(qū)分間日瘧雌雄配子體：雌：兩端尖，核小，致密，深紅，胞漿深藍雄：兩端圓，核大，疏松，淺紅，胞漿淺藍第12頁,共35頁，2024年2月25日，星期天間日瘧晚期大滋養(yǎng)體與雌配子體的區(qū)別大小：不超過被寄生紅細胞的3/4核：較小，不規(guī)則胞質(zhì)：邊緣不規(guī)則，多有空泡瘧色素：顆粒少且細，分布不均勻大滋養(yǎng)體雌配子體大?。簬缀醭錆M被寄生的紅細胞核：較大且致密，周圍有不染色帶胞質(zhì)：邊緣清楚，不含空泡瘧色素：顆粒多且粗，均與分布第13頁,共35頁，2024年2月25日，星期天四、厚血膜中間日瘧和惡性瘧各期瘧原蟲形態(tài)鑒別

厚血膜由于用血量多，涂布面積小，紅細胞重疊且干燥慢，致使蟲體皺縮，空泡消失，胞漿變形，各期瘧原蟲的體積都有所縮小，其中環(huán)狀體和大滋養(yǎng)體的形態(tài)會產(chǎn)生較大變化，難于辨認，而裂殖體和配子體形態(tài)與薄血膜中相比無明顯變化。第14頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（一）厚血膜中環(huán)狀體形態(tài)間日瘧原蟲環(huán)較大，胞漿較厚，常呈“！”或“；”狀惡性瘧原蟲環(huán)纖細，常呈“：”、飛鳥狀、“v”狀和斷環(huán)狀等第15頁,共35頁，2024年2月25日，星期天

厚血膜中間日瘧大滋養(yǎng)體胞漿可皺縮斷裂成幾個塊狀，大小不一，核位于胞漿之中或外邊，瘧色素分布不均，有些僅見胞漿和瘧色素而核看不清。（二）厚血膜中滋養(yǎng)體、裂殖體及配子體形態(tài)

厚血膜中間日瘧裂殖體、配子體以及惡性瘧配子體除蟲體略縮小而著色較深外，形態(tài)與薄血膜中相似。

由于惡性瘧的滋養(yǎng)體和裂殖體是在內(nèi)臟毛細血管中發(fā)育，故在外周血涂片中較難見到。第16頁,共35頁，2024年2月25日，星期天厚血膜中間日瘧原蟲第17頁,共35頁，2024年2月25日，星期天厚血膜中惡性瘧原蟲環(huán)狀體、配子體第18頁,共35頁，2024年2月25日，星期天五、瘧原蟲與其它物體的鑒別（一）白細胞殘骸

白細胞破裂后散出的顆粒，易被誤認為是環(huán)狀體的核，但看不到胞漿；白細胞殘骸常為藍色，與瘧原蟲胞漿相似，有時與其它紅點和血小板巧合在一起，常被誤認為是瘧原蟲。鑒別時如果形同大滋養(yǎng)體，可根據(jù)有無瘧色素來鑒別；如果形同環(huán)狀體，可根據(jù)蟲體大小，折光是否均勻、核與胞漿是否在同一平面上，其它視野內(nèi)有無瘧原蟲等仔細分析判斷。第19頁,共35頁，2024年2月25日，星期天(二）灰塵和染色液的色素沉著

灰塵和染色液的色素沉著在血膜的表面上時，往往會被誤認為是瘧色素，可根據(jù)其顆粒的形狀、大小、色澤以及有無核和胞漿等結(jié)構(gòu)來鑒別，也可轉(zhuǎn)動顯微鏡，看其是否在同一水平面上。第20頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（三）細菌

細菌尤其是球菌在厚血膜中常被染成紅色小點，與瘧原蟲的核相似，最易混淆。球菌形體較大，邊緣光滑，且與紅細胞不在同一平面上。（四）水中原蟲

水中原蟲有時也可看到核、胞漿和空泡，與間日瘧大滋養(yǎng)體相似，但無瘧色素，且空泡多如網(wǎng)眼。第21頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（一）鏡檢的重要性

瘧原蟲鏡檢是診斷瘧疾、確定蟲種及發(fā)現(xiàn)傳染源的重要手段和方法，雖然現(xiàn)在分子生物學(xué)、血清學(xué)技術(shù)迅猛發(fā)展，但是確診瘧疾的“金標準”仍然是病原學(xué)診斷顯微鏡檢查瘧原蟲。六、鏡檢技術(shù)第22頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（二）血片的制作1、厚、薄血膜的形狀與位置一張玻片上同時制作厚薄血膜。將玻片劃分為六等分，第一、二格供記錄姓名、編號或貼標簽之用。厚血膜位于第三格中央（直徑約0.8~1cm），薄血膜則從第四格前緣至第六格中部（長度約2.5cm）。如下圖所示。第23頁,共35頁，2024年2月25日，星期天2、采血

采血部位為無名指末端或耳垂，嬰兒可從拇趾或足跟采血。消毒取血部位皮膚后，用左手拇指和食指緊捏耳垂上方或無名指指尖，以一次性采血針迅速刺入采血部位，不宜過深或過淺，用右手中指輕輕擠出1~2滴血，滴于玻片上以備涂制厚薄血膜。第24頁,共35頁，2024年2月25日，星期天3、涂制血膜（1）厚血膜血量約4~5ul，用推片的左下角由里向外一個方向旋轉(zhuǎn)幾圈，涂成邊緣光滑之圓形，直徑約0.8~1cm左右。厚血膜的厚度以一個油鏡視野可以看到5~10個白細胞為佳。（2）薄血膜血量約1~1.5ul，用推片的下緣置載玻片的中央處，當血液在推片和載玻片之間向兩側(cè)擴展至2cm寬時，使兩玻片保持25°~35°角，從右向左迅速推成舌狀，長約2.5cm。薄血膜的厚度要以紅細胞之間相互接觸而不相互重疊為佳（直觀上指透過玻片能清晰看到報紙上的字）第25頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（三）固定

薄血膜固定：待薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醛平鋪于薄血膜上，起固定薄血膜的作用。?注意不可固定厚血膜。第26頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（四）染色

染色方法有吉氏染色法和瑞氏染色法兩種，因吉氏染色法染色效果穩(wěn)定，保存時間長，一般采用吉氏染色法。

（1）快染：配置10%-20%左右濃度，染色時間短，一般為15分鐘左右。但染色效果不穩(wěn)定。

（2）慢染：配置5%濃度，染色30分鐘~40分鐘，染色效果穩(wěn)定，可保存較長時間。(加水8ML加染液2ML混合)第27頁,共35頁，2024年2月25日，星期天影響染色效果的因素血片染色好壞除了與玻片的清潔度、血片制作質(zhì)量和染色技術(shù)等有關(guān)外，還受以下因素影響：（1）染劑、溶劑的質(zhì)量：染料、甲醇和甘油必須用分析純，且在配置時使用的器具要干凈且無水分。（2）染液的新舊：染液存放時間越久，染色力越強。新配置的染液因色素尚未充分溶解，染色力較弱，因此，通常在染液配置1~2周后才開始使用，盛裝染液的瓶子要加塞蓋密，以防吸潮而影響染液質(zhì)量。第28頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（3）染液稀釋后使用時間：吉氏染液的主要成分是美藍、伊紅和由美藍氧化產(chǎn)生的天青，這三者能在酒精溶液中溶解，但再水溶液中伊紅遇到美藍和天青會產(chǎn)生沉淀。因此，稀釋液要現(xiàn)染現(xiàn)配，且在半小時內(nèi)染色力最強。（4）染色時間：染色時間應(yīng)根據(jù)染液的質(zhì)量、新舊、稀釋濃度和氣溫而適當增減。第29頁,共35頁，2024年2月25日，星期天?染液濃度過低著色慢而淺，常偏酸，紅細胞和瘧原蟲的核染成鮮紅色，淋巴細胞及瘧原蟲的胞漿著色較差。?染液濃度高著色快而深，常偏堿，紅細胞被染成藍紫色，不易于觀察。?染液濃度適中，紅細胞呈淡紅色，嗜酸性細胞的顆粒呈鮮紅色，淋巴細胞和瘧原蟲的胞漿呈藍色或淡藍色，白細胞的核呈紫藍色，瘧原蟲的核呈紅色。

（4）染液的稀釋濃度：第30頁,共35頁，2024年2月25日，星期天吉氏染色血片外觀偏酸標準偏堿第31頁,共35頁，2024年2月25日，星期天

染色后不要將玻片上殘余染液直接迅速倒掉，應(yīng)將玻片連同玻片上的染液一起平放入水中后，將玻片向下傾斜后輕輕左右擺動漂洗。這樣可以有效的避免染色素顆粒沾污血膜。（五）沖洗第32頁,共35頁，2024年2月25日，星期天（六）鏡檢1、血膜上滴加鏡油，查找瘧原蟲目鏡用5x或10x，物鏡須用油鏡（100x）。2、觀察血膜的方法：鏡檢時從血膜的一端開始，自上而下，自左而右，逐個視野順序查看。鏡檢瘧原蟲一般是查厚血膜，薄血膜作為瘧原蟲的分類定種。3、結(jié)果報告：分陽性和陰性。陽性者至少要查見一個典型瘧原蟲（需鑒別蟲種）方可確定；以查完整個厚血膜或至少檢查200個視野未見瘧原蟲者判為陰性。第3