病原性球菌及檢驗(yàn)

關(guān)于病原性球菌及檢驗(yàn)1.簡(jiǎn)述病原性球菌的概念及種類。2.熟悉常見(jiàn)病原性球菌的主要生物學(xué)特性、臨床意義。3.說(shuō)出葡萄球菌、鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法。

學(xué)習(xí)目的與要求第2頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

對(duì)人有致病性的球菌主要引起化膿性炎癥,又稱化膿性球菌。主要包括有1、G+球菌：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌。2、G-球菌：腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌等。第3頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)葡萄球菌屬

(Staphylococcus)

第4頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）形態(tài)與染色

G+，球形，無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢，呈葡萄串狀排列。一、生物學(xué)特性第5頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）培養(yǎng)特性

營(yíng)養(yǎng)：要求不高，耐鹽。

液體：均勻渾濁生長(zhǎng)

普通瓊脂平板：

血液瓊脂平板：高鹽甘露醇平板：金黃色葡萄球菌為淡橙黃色菌落；其他葡萄球菌為白色菌落。第6頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）生化反應(yīng)

活潑

分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸。(如：葡萄糖，麥芽糖，蔗糖，甘露醇）

觸酶（＋）（區(qū)別于鏈球菌屬）第7頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）抗原構(gòu)造１、蛋白抗原（ＳＰＡ）２、多糖抗原

金黃色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（檢測(cè)磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染診斷）凝固酶（－）：甘油磷壁酸第8頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（五）分類:３２個(gè)種及亞種１、按色素分類：金、白、檸２、按凝固酶分類：凝固酶陰性、凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌３、按噬菌體分類：金葡菌分為5群26型

4.據(jù)色素、生化反應(yīng)分：

金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌第9頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

三種葡萄球菌的主要性狀第10頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（六）抵抗力無(wú)芽胞菌中最強(qiáng)，耐干燥，對(duì)石炭酸、升汞、龍膽紫敏感。易產(chǎn)生耐藥性變異，如：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）。MRSA常呈多重耐藥，對(duì)青霉素、氧氟沙星及紅霉素的敏感率分別為1.3%、3%及14%。第11頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

長(zhǎng)期住院、反復(fù)使用各種廣譜抗菌藥物、燒傷或有傷口的病人及與MRSA定植或感染的病人接觸都是造成院內(nèi)MRSA流行的危險(xiǎn)因素。MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來(lái)源。

MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來(lái)源。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）第12頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、致病性和免疫性(一)致病物質(zhì)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生多種侵襲性酶與外毒素。

1．血漿凝固酶（coagulase)：分：結(jié)合型凝固酶、游離型凝固酶。

鑒別金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)。

2．葡萄球菌溶血素（staphylolysin）第13頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天3．殺白細(xì)胞素（leukocidin）4．腸毒素（enterotoxin）：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9個(gè)血清型）5．表皮剝脫毒素（exfoliativetoxin）6.毒性休克綜合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）第14頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）所致疾病

1．侵襲性疾病：（1）皮膚軟組織感染

特點(diǎn)：病灶局限且膿汁粘稠

（2）內(nèi)臟器官感染

（3）全身感染

（4）尿路感染第15頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天2．毒素性疾病

（1）食物中毒

（2）燙傷樣皮膚綜合征由表皮剝脫毒素引起。

（3）毒性休克綜合征由TSST1引起

（4）假膜性腸炎

第16頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

人類凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最為常見(jiàn)。

CNS主要引起以下幾種感染：泌尿系感染，細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，敗血癥等，其中大多為醫(yī)院內(nèi)感染。此外，心臟起搏器安裝、置換人工心臟瓣膜、長(zhǎng)期腹膜透析、靜脈滴注等亦可造成凝固酶陰性葡萄球菌的感染。3、凝固酶陰性葡萄球菌的致病性第17頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集（二）檢驗(yàn)程序（三）檢驗(yàn)方法第18頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集根據(jù)病情采集標(biāo)本

種類：膿液、傷口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便等。

注意：無(wú)菌操作，避免污染。第19頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）葡萄球菌檢驗(yàn)程序膿液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液腦脊液血液糞便、嘔吐物直接涂片染色增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)（血平板）分離培養(yǎng)（高鹽甘露醇平板）取可疑菌落鑒定試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)涂片染色血漿凝固酶耐熱核酸酶其他鑒定試驗(yàn)報(bào)告初報(bào)第20頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）檢驗(yàn)方法1、直接涂片適用于：正常情況下無(wú)菌的標(biāo)本（如腦脊液）伴有炎癥細(xì)胞的其他體液標(biāo)本、膿液等初步報(bào)告：“查見(jiàn)革蘭陽(yáng)性葡萄狀排列球菌，疑為葡萄球菌”或：“查見(jiàn)類似葡萄球菌的革蘭陽(yáng)性球菌”第21頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、分離培養(yǎng)

50ml葡萄糖肉湯（增菌）

渾濁無(wú)菌（7天）報(bào)告：無(wú)菌生長(zhǎng)腦脊液、膿液、穿刺液、咽拭、尿液血平板血液標(biāo)本5ml糞便、嘔吐物高鹽甘露醇平板第22頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）檢驗(yàn)方法3、鑒定試驗(yàn)（1）血漿凝固酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）（2）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）（3）耐熱核酸酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）（４）腸毒素測(cè)定：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生（5）SPA檢測(cè)：金黃色葡萄球菌（6）凝固酶陽(yáng)性和凝固酶陰性的葡萄球菌鑒定（7）API葡萄球菌鑒定試劑盒第23頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）結(jié)果評(píng)價(jià)和報(bào)告1、金黃色葡萄球菌：無(wú)論任何標(biāo)本中分離到均應(yīng)鑒定并報(bào)告臨床。2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：從輸液導(dǎo)管、人工植入組織中分離到，應(yīng)視為致病菌。3、尿培養(yǎng)計(jì)數(shù)：>103-104為陽(yáng)性菌尿標(biāo)準(zhǔn)。4、其他凝固酶陰性葡萄球菌：引起感染流行或治療失敗時(shí)，應(yīng)鑒定到種。5、金黃色葡萄球菌（MRSA)：頭孢菌素類抗生素體外藥敏試驗(yàn)為敏感時(shí)，不應(yīng)報(bào)告，因體內(nèi)試驗(yàn)已證實(shí)MRSA對(duì)該類抗生素耐藥。第24頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)鏈球菌屬

(Streptococcus)第25頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、鏈球菌第26頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)與染色

G+，球形或橢圓形，呈鏈狀排列，無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，有莢膜。第27頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、生物學(xué)特性（二）培養(yǎng)特性

條件：營(yíng)養(yǎng)要求較高，多數(shù)為兼性厭氧菌，少數(shù)專性厭氧。

液體：沉淀生長(zhǎng)（絮狀或顆粒狀）。

普通瓊脂平板：不生長(zhǎng)。

血液瓊脂平板：第28頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）生化反應(yīng)

活潑

分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸。菊糖（-）膽汁溶菌試驗(yàn)（-）

optochin敏感試驗(yàn)（-）

觸酶（-）（區(qū)別于葡萄球菌屬）（區(qū)別甲鏈與肺鏈）第29頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）抗原構(gòu)造

１、多糖抗原（C抗原）：群特異性。２、蛋白抗原（M、T、R、S）型特異性，與致病有關(guān)的是M蛋白抗原。

3、核蛋白抗原：無(wú)特異性。

第30頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天多糖抗原蛋白質(zhì)抗原核蛋白抗原鏈球菌抗原構(gòu)造模式圖莢膜第31頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（五）分類40個(gè)種及亞種

１、按溶血情況分類：（1）甲型溶血性鏈球菌：菌落周?chē)?～2mm寬的草綠溶血環(huán)，稱甲型溶血或α溶血。為條件致病菌。

（2）乙型溶血性鏈球菌：菌落周?chē)纬梢粋€(gè)2～4mm寬的透明溶血環(huán)，稱乙型溶血或β溶血。又稱溶血性鏈球菌。致病力強(qiáng)，引起多種疾病。（3）丙型鏈球菌：無(wú)溶血環(huán)，不致病第32頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天２、按抗原結(jié)構(gòu)分類：

按C抗原分群：ABCD…20群，對(duì)人致病的以A群為主。按M蛋白分型：如A群：100個(gè)型，B群：4型，C群：13個(gè)型。（五）分類第33頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（六）抵抗力不強(qiáng)，60℃30min殺死，對(duì)多種消毒劑敏感。乙鏈：對(duì)青霉素、四環(huán)素、紅霉素等敏感。第34頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、致病性和免疫性（一）致病物質(zhì)

1、鏈球菌溶血素（1）鏈球菌溶血素O(SLO)SLO抗體

抗鏈球菌溶血素O試驗(yàn)：協(xié)助診斷風(fēng)濕熱（>1:400)

（2）鏈球菌溶血素S(SLS)：無(wú)抗原性。2、致熱外毒素（猩紅熱毒素/紅疹毒素）3、M蛋白第35頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

4、透明質(zhì)酸酶

5、鏈激酶

6、鏈道酶第36頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）所致疾病主要由A群鏈球菌引起。

1、化膿性感染：由皮膚傷口侵入，經(jīng)呼吸道侵入，其他途徑（如產(chǎn)褥熱、蜂窩組織炎）特點(diǎn)：病灶界限不清,膿汁稀薄2．中毒性疾?。盒杉t熱由產(chǎn)生致熱外毒素的A族鏈球菌所致的急性呼吸道傳染病。第37頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天3．變態(tài)反應(yīng)性疾?。猴L(fēng)濕熱急性腎小球腎炎二、致病性和免疫性4．其他疾?。杭仔停ú菥G色）鏈球菌：引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。第38頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集（二）檢驗(yàn)程序（三）檢驗(yàn)方法第39頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）標(biāo)本采集根據(jù)病情采集標(biāo)本

種類：膿液、鼻咽拭子、血液等風(fēng)濕熱查血清抗體第40頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）鏈球菌的檢驗(yàn)程序痰、膿、穿刺液咽拭子等腦脊液血液直接涂片染色測(cè)抗原分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)(5%CO2葡萄糖肉湯)血平板（5%CO2）可疑菌落鑒定試驗(yàn)初步報(bào)告血清學(xué)鑒定（分群）桿菌肽試驗(yàn)

optochin膽汁溶菌試驗(yàn)其他鑒定敏感試驗(yàn)試驗(yàn)第41頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）鏈球菌的檢驗(yàn)方法（1）直接鏡檢：（痰、膿、穿刺液、咽拭子等）初報(bào)：發(fā)現(xiàn)G+球菌，呈鏈狀排列第42頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（2）分離培養(yǎng)：①血液、腦脊液肉湯增菌

②膿液、咽拭子等血平板分離第43頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）鑒定鏈球菌的主要試驗(yàn)：根據(jù)形態(tài)、菌落、溶血情況進(jìn)行：①桿菌肽敏感試驗(yàn)：A群敏感(d>10mm)②Optochin敏感試驗(yàn)：肺炎鏈球菌d>18mm，

d<15mm為陰性。③膽汁溶菌試驗(yàn)：肺炎鏈球菌+

④CAMP試驗(yàn)：Ｂ群無(wú)乳鏈球菌為＋

第44頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑤血清學(xué)鑒定：試劑盒STREPTEX。用亞硝酸抽提待測(cè)菌的群特異性抗原，分別與包被有抗體的膠乳顆粒反應(yīng)。⑥抗O試驗(yàn)：風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎，效價(jià)>400為+第45頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、肺炎鏈球菌

(S.pneumoniae)

屬鏈球菌科，鏈球菌屬。廣泛分布于自然界，主要寄生于人類上呼吸道，多數(shù)不致病。第46頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)與染色

G+，矛頭狀，成雙（或短鏈）排列，無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，有莢膜。第47頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）培養(yǎng)特性

條件：營(yíng)養(yǎng)要求較高，兼性厭氧菌，5-10%C02生長(zhǎng)最好。產(chǎn)生自溶酶。

液體：培養(yǎng)24h呈均勻混濁，后期因產(chǎn)生自溶而變得澄清。

普通瓊脂平板：不生長(zhǎng)。

血液瓊脂平板：灰白色，圓形，扁平，較小，周?chē)胁菥G色溶血環(huán)（α溶血）

第48頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）生化反應(yīng)

活潑

分解多種糖類。菊糖（多數(shù)+）膽汁溶菌試驗(yàn)（+）

Optochin試驗(yàn)(+)區(qū)別甲鏈與肺鏈第49頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）抗原構(gòu)造

１、莢膜多糖抗原：據(jù)此將肺炎鏈球菌分85型，對(duì)人致病的有20多型。Ⅰ-Ⅲ型引起大葉性肺炎。

２、菌體多糖抗原：可與CRP反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀。

3、M蛋白抗原：型特異性。

第50頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（五）抵抗力較弱，加熱56℃，20min即死亡。對(duì)一般消毒劑敏感，對(duì)干燥抵抗力較強(qiáng)。莢膜變異：有莢膜的光滑（S）型菌有毒力，失去莢膜的粗糙（R）型毒力減低或消失。（六）變異性第51頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、致病性和免疫性（一）致病物質(zhì)

1、莢膜：肺炎球菌的致病力，主要是莢膜的抗吞噬作用。

2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎鏈球菌溶素O等

溶血毒素“O”：自溶后釋放，能溶解人和動(dòng)物的紅細(xì)胞，高濃度對(duì)動(dòng)物有壞死及致死作用。第52頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）所致疾病

存在于正常人上呼吸道，為條件致病菌，僅在人體抵抗力下降時(shí)才引起疾病?？梢穑捍笕~性肺炎，胸膜炎，膿胸，慢性支氣管炎，中耳炎，腦膜炎，敗血癥等。第53頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集痰液，膿液，血液，腦脊液等。（二）檢驗(yàn)程序（三）檢驗(yàn)方法第54頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢驗(yàn)程序痰、膿腦脊液血液直接涂片分離培養(yǎng)革蘭染色、美蘭染色莢膜腫脹試驗(yàn)增菌培養(yǎng)（葡萄糖肉湯、硫酸鎂肉湯）（血平板）挑選可疑菌落純培養(yǎng)初報(bào)兔血清肉湯小白鼠毒力試驗(yàn)涂片莢膜腫脹試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)菊糖發(fā)酵Optochin試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)報(bào)告第55頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢驗(yàn)方法1、直接鏡檢適用于：痰、膿、腦脊液標(biāo)本。

報(bào)告：“找到肺炎鏈球菌”2、分離培養(yǎng)

硫酸鎂肉湯：均勻混濁生長(zhǎng)，有綠色熒光。

血平板：灰白色，圓形，扁平，較小，周?chē)胁菥G色溶血環(huán)（α溶血）

第56頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、鑒定試驗(yàn)（1）莢膜腫脹試驗(yàn)（2）膽汁溶菌試驗(yàn)：+（3）Optochin試驗(yàn)：+（4）菊糖發(fā)酵試驗(yàn)：+（5）小鼠毒力試驗(yàn)：有毒力的菌株，接種后12-36h，死亡。

第57頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天膽汁溶菌試驗(yàn)陽(yáng)性：

加入膽汁或10%去氧膽酸鈉，37℃，5-10min，激活本菌的自溶酶，出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。第58頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天Optochin敏感試驗(yàn)陽(yáng)性：取肉湯培養(yǎng)液均勻涂于血平板上用optochin紙片貼于接種區(qū)中央（或分區(qū)劃線法，紙片貼于1-2區(qū)），35℃需氧培養(yǎng)過(guò)夜，抑菌圈>18mm。第59頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天Optochintest

第60頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天肺炎鏈球菌的主要鑒定依據(jù)1、鏡下形態(tài)：革蘭陽(yáng)性球菌，矛頭狀成雙排列，平端相對(duì)，尖端向外；

2、血平板菌落特點(diǎn)：直徑0.5-1.5mm，灰白色，半透明，光滑（有些菌株為粘液狀），扁平，周?chē)胁菥G色溶血環(huán)。培養(yǎng)或放置24h以上，菌落中央可塌陷，呈臍窩狀。

3、生化鑒定：

Optochin試驗(yàn)+，膽汁溶菌試驗(yàn)+。第61頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌的鑒別

形態(tài)菌落血清膽汁菊糖Opto-小鼠肉湯溶菌chin毒力試驗(yàn)肺鏈甲鏈矛頭狀，稍大，濕潤(rùn)渾濁++++成雙，扁平，有莢膜臍窩狀圓形，較小，稍干，沉淀————無(wú)莢膜圓，凸起第62頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）結(jié)果評(píng)價(jià)和報(bào)告

乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌為毒力強(qiáng)的致病菌，無(wú)論從任何臨床標(biāo)本中分離出均應(yīng)報(bào)告臨床。及時(shí)鑒定和報(bào)告咽部標(biāo)本中分離出的化膿性鏈球菌，有利于早期治療，以減少并發(fā)癥（如風(fēng)濕熱，腎小球腎炎）的產(chǎn)生。

草綠色鏈球菌在重癥感染時(shí)，應(yīng)鑒定到種。第63頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天第三節(jié)腸球菌屬

是腸道中的正常菌群導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)感染：如尿路感染、腹部和盆腔感染、敗血癥、腦膜炎。第64頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)染色

G+球菌，單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。無(wú)莢膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。第65頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

營(yíng)養(yǎng)要求較高。能在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（PH9.6）、高膽汁（40%）、10~45℃生長(zhǎng)。

菌落：圓形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有γ或α溶血。（二）培養(yǎng)特性第66頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天能分解多種糖類觸酶（-）PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺）試驗(yàn)（+）（三）生化反應(yīng)第67頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

目前分18種。引起醫(yī)院內(nèi)感染常見(jiàn)的是糞腸球菌和屎腸球菌。常用的分型方法：rRNA基因探針?lè)中头ā＃ㄋ模┓中停ㄎ澹┑挚沽?/p>

對(duì)理化因素抵抗力弱。但對(duì)大多數(shù)抗生素天然耐藥。第68頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、微生物學(xué)檢驗(yàn)

（一）標(biāo)本采集

尿液、血液、腦脊液、膿汁分泌物等。第69頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）檢驗(yàn)程序尿液、膿汁、穿刺液血液涂片染色分離培養(yǎng)（血平板、5%CO2）初報(bào)挑選可疑菌落增菌培養(yǎng)（葡萄糖肉湯、5%CO2）PYR試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷試驗(yàn)6.5%NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)其他鑒定試驗(yàn)報(bào)告第70頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）檢驗(yàn)方法1、直接鏡檢適用于：痰、膿、腦脊液、穿刺液標(biāo)本。2、分離培養(yǎng)

血平板：灰白色，圓形，中等大小，不透明，S型菌落，周?chē)笑寥苎颚萌苎＿x擇培養(yǎng)基：疊氮膽汁七葉苷瓊脂平板。第71頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、鑒定試驗(yàn)（1）菌屬鑒定試驗(yàn)：①PYR試驗(yàn)：腸球菌、A群鏈球菌、某些凝固酶陰性葡萄球菌為（+）②膽汁七葉苷試驗(yàn)：+③鹽耐受試驗(yàn)：+（4）種間鑒定試驗(yàn)：P175表17-3第72頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天第四節(jié)奈瑟菌屬

(Neisseria)

特點(diǎn)：為一群G-雙球菌，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及觸酶+。

種類：共九種，主要致病菌是

腦膜炎奈瑟菌(merningococcus)

淋病奈瑟菌(gonorrhoeae)第73頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、腦膜炎奈瑟菌

(N.meningitidis)即腦膜炎球菌，是流行性腦脊髓膜炎的病原體第74頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）生物學(xué)性狀1．形態(tài)結(jié)構(gòu)2．培養(yǎng)特性3．生化反應(yīng)4.抗原結(jié)構(gòu)5.抵抗力特點(diǎn)

第75頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)G-，腎形成雙排列在患者腦脊液標(biāo)本中位于中性粒細(xì)胞內(nèi)無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛，具有莢膜、菌毛。

第76頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天2．培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含有血清或多種氨基酸、無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。血平板：半透明，灰褐色，圓形，濕潤(rùn)光滑露滴樣菌落。易自溶。第77頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天巧克力平板：圓形，扁平，藍(lán)灰色，半透明，光滑濕潤(rùn)的菌落。卵黃雙抗（EPV）平板：較大，無(wú)色，光滑濕潤(rùn)，扁平，邊緣整齊的菌落。血清肉湯：呈微混濁。第78頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.生化反應(yīng)分解葡萄糖、麥芽糖：+硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，不分解尿素氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性第79頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.抗原結(jié)構(gòu)可分9個(gè)血清群，對(duì)人致病的主要是A群5．抵抗力特點(diǎn)

對(duì)寒冷、光、熱力，干燥等十分敏感。室溫3h，60℃5min死亡。采集標(biāo)本：注意保溫迅速送檢。對(duì)磺胺類、青霉素、鏈霉素均敏感。

第80頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）致病性與免疫性1．致病物質(zhì)：菌毛、莢膜、內(nèi)毒素

2．所致疾?。簜魅驹?、傳播途徑寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，與患者補(bǔ)體介導(dǎo)的殺菌活性缺陷有關(guān)。約2%-3%的人表現(xiàn)為流腦癥狀。

3.免疫性病原可產(chǎn)生群特異性抗體，但不持久。第81頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天(三)微生物學(xué)檢驗(yàn)1．標(biāo)本采集

菌血癥期病人采集血液有出血點(diǎn)或瘀斑者，可取瘀斑滲出液有腦膜刺激癥狀，抽取腦脊液帶菌者：咽拭子第82頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天注意事項(xiàng)：立即送檢注意保溫（勿放冰箱）防干燥防紫外線第83頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天２、腦膜炎球菌的檢驗(yàn)程序

血液增菌培養(yǎng)（葡糖肉湯）分離培養(yǎng)（巧克力、血平板）鑒定試驗(yàn)涂染檢氧化酶葡、麥糖多價(jià)血清藥敏試驗(yàn)

結(jié)果報(bào)告

鼻咽拭子

卵黃雙抗平板5~10%co237℃18~24h37℃18~24h37℃18~24h腦脊液瘀血點(diǎn)離心上沉清淀液物5~10%ＣＯ2涂片染色初步報(bào)告直接凝集第84頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天腦膜炎球菌的鑒定依據(jù)菌落特征符合形態(tài)染色符合分解葡、麥糖產(chǎn)酸氧化酶、觸酶陽(yáng)性血清凝集試驗(yàn)陽(yáng)性第85頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）

即淋球菌為淋病的病原體，人是唯一天然宿主和傳染源第86頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）生物學(xué)性狀1．形態(tài)結(jié)構(gòu)2．培養(yǎng)特性3.生化反應(yīng)4．抵抗力特點(diǎn)

第87頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天1．形態(tài)結(jié)構(gòu)G-，球形或腎形，成對(duì)排列有莢膜，無(wú)芽胞和鞭毛第88頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天2．培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高，30-37℃生長(zhǎng)，須在含有血液或血清的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，常用血液、巧克力等培養(yǎng)基初次分離，須5-10%CO2才能生長(zhǎng)發(fā)育菌落：凸起，光滑、圓形，灰褐色，半透明第89頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.生化反應(yīng)

氧化酶試驗(yàn)：（+）觸酶：（+）葡萄糖（+），麥芽糖（-）易自溶第90頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天4．抵抗力特點(diǎn)

抵抗力弱，在干燥環(huán)境中僅能存活1-2h，濕熱55℃5min,100℃立即死亡。室溫下存活1-2d。對(duì)消毒劑極敏感

第91頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天１、致病物質(zhì)：菌毛、外膜蛋白、等２、所致疾?。呵址溉祟惷谀蛏诚到y(tǒng)引起淋病(首位性病)

新生兒眼炎（二）致病性與免疫性

第92頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天1．標(biāo)本采集標(biāo)本：男性：尿道分泌物女性：陰道分泌物全身性淋?。貉?、泌尿、生殖道的各種分泌物、尿液立即送檢

２．檢驗(yàn)程序(三)微生物學(xué)檢驗(yàn)第93頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天膿汁、分泌物直接涂片染色

分離培養(yǎng)血、巧克力、TM平板5－10%co235℃18－24h鑒定試驗(yàn)涂染檢氧化酶糖發(fā)酵藥敏試驗(yàn)報(bào)告

初步報(bào)告35℃18－24h第94頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（１）直接涂片鏡檢急性淋?。菏戎行粤＜?xì)胞內(nèi)大量G-，腎形雙球菌——具有診斷意義慢性淋?。虹R檢較困難３．檢驗(yàn)方法第95頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天（２）分離培養(yǎng)

即采集即培養(yǎng)，常用含有兩種以上抗生素（萬(wàn)古霉素、粘菌素、磺胺類等）的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)（如ML、TM）5-10%CO2培養(yǎng)基先預(yù)溫。第96頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天氧化酶試驗(yàn)：（+）觸酶：（+）（多數(shù)奈瑟菌為陰性）

葡萄糖（+），麥芽糖（-）

PCR：靈敏，特異，標(biāo)本不受限制(不需活菌)

（３）鑒定第97頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天

1.名詞解釋：血漿凝固酶、SPA、抗鏈“o”試驗(yàn)、Optochin試驗(yàn)。

2.根據(jù)色素和生化反應(yīng)將葡萄球菌分成哪幾種？

3.金黃色葡萄球菌的鑒定依據(jù)有哪些？

4.根據(jù)鏈球菌在血平板上的溶血現(xiàn)象，將其分成哪些類型？甲鏈和乙鏈有何區(qū)別？

5.簡(jiǎn)述鏈球菌的檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法。

6.腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些異同點(diǎn)？

7.采集腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)應(yīng)該注意哪些問(wèn)題？為什么？

復(fù)習(xí)思考題第98頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天中等大，突起，有色素，S型菌落。葡萄球菌菌落形態(tài)（普通瓊脂平板）第99頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌第100頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天金黃色葡萄球菌有透明溶血環(huán)。表皮葡萄球菌無(wú)溶血環(huán)。第101頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天葡萄球菌A蛋白（SPA）的意義：（1）降低抗體的調(diào)理作用，抗吞噬（2）協(xié)同凝集試驗(yàn):輔助診斷疾病。第102頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天血漿凝固酶試驗(yàn)［原理］致病性葡萄球菌能產(chǎn)生２種血漿凝固酶：

一種為結(jié)合型凝固酶（凝聚因子）：細(xì)菌表面的纖維蛋白原受體與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌凝集。另一種為游離型凝固酶，可被人或兔血漿中的協(xié)同因子激活，成為凝血酶樣物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。

［檢測(cè)方法］結(jié)合型凝固酶：玻片法游離型凝固酶：試管法第103頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天耐熱核酸酶試驗(yàn)液體培養(yǎng)物煮沸15min

37℃3h甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂第104頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天腸毒素測(cè)定病人嘔吐物、糞便、剩余食物高鹽肉湯37℃24h分離培養(yǎng)肉湯煮沸30min，離心，取上清夜幼貓觀察癥狀（4h出現(xiàn)）第105頁(yè),共120頁(yè)，2024年2月25日，星期天SPA的檢測(cè)致病性葡萄球菌（SPA)兔抗羊紅