茄子品種抗黃萎病苗期人工接種鑒定技術(shù)規(guī)范

茄子品種抗黃萎病苗期人工接種鑒定技術(shù)規(guī)范1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了茄子品種抗黃萎病苗期人工接種鑒定方法的術(shù)語和定義、鑒定方法、及其抗病性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)?？剐栽u價(jià)分級及鑒定結(jié)果有效性判斷。本標(biāo)準(zhǔn)適用于茄子品種苗期對黃萎病人工接種抗性鑒定和評價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改條款（不包括勘誤的內(nèi)容）或修改版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本均適用于本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)中種子質(zhì)量符合下列標(biāo)準(zhǔn)原則。GB16715.2-2010瓜菜類作物種子，茄子類。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1人工接種(artificialinoculation)采用人工方法將病原物直接或間接接種到寄主植物的種子或根部，使其發(fā)病，并依據(jù)相關(guān)的抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，來區(qū)分品種的抗病性。3.2對照品種(controlvariety)為了保證抗性鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，減少年度間和環(huán)境條件差異，選擇抗性水平較穩(wěn)定的品種作為抗性鑒定試驗(yàn)的對照品種。4鑒定方法4.1育苗基質(zhì)以進(jìn)口丹麥的品氏托普泥炭（粒徑0-6mm）或其他生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的質(zhì)優(yōu)泥炭為育苗基質(zhì)。將基質(zhì)取出搗碎，加入20g蔬菜復(fù)合肥與適量的清水混配均勻，調(diào)節(jié)基質(zhì)含水量至60%。4.2基質(zhì)裝盤播種灌根法和傷根灌根法使用底部有孔的塑料育秧盤（規(guī)格：54cm×28cm×5cm，孔徑：6cm×6cm-3cm×3cm，32孔）播種、培育茄苗。將制備好的基質(zhì)置入塑料秧盤中，基質(zhì)量以裝平秧盤為準(zhǔn)。秧盤中每孔穴播茄子種子2-3粒，每個(gè)品種播種1盤，即32孔穴。4.3對照品種以“H051”栽培茄或其他易感黃萎病的茄子品種為人工接種抗病性鑒定的感病對照品種，以每批次的對照品種的抗性鑒定結(jié)果來評判各參試品種的相對抗性。4.4茄苗接種前管理種子發(fā)芽出苗后，保持秧盤基質(zhì)濕潤。出苗7-10d定苗，每穴保留健壯茄苗1株，苗齡20-25d，每盤追施尿素2g（兌水配成溶液）。露地育苗，雨天需做避雨處理，方法可用竹條與塑料薄膜制成拱棚覆蓋茄苗。茄苗可使用殺蟲劑防蟲，但不使用殺菌劑防病。4.5接種時(shí)間以春、秋季節(jié)為宜。露地接種，氣溫宜在18-25℃進(jìn)行；職能溫室（棚）接種，氣溫可調(diào)節(jié)至20℃左右。4.6接種菌株采用當(dāng)?shù)赜写硇缘膹?qiáng)致病力菌株接種。4.7接種方法4.7.1灌根法于多數(shù)茄苗長全2-3片真葉時(shí)接種。用移液器定量吸取10ml制備好的接種菌懸液注入到茄苗生長的基質(zhì)中。接種菌懸液孢子濃度均為1×107個(gè)/mL(附錄B)，接種菌懸液量均為每穴10ml。4.7.2傷根灌根法于多數(shù)茄苗長全3片真葉時(shí)接種，用規(guī)格為15cm×1cm鋼制藥勺的條形手柄在距離茄苗主根2-3cm的位置按等邊三角形的三邊方向分邊垂直插入，切斷茄苗部分須根，然后用移液器定量吸取10ml制備好的接種菌懸液均勻滴加到傷根形成的孔洞里。接種菌懸液孢子濃度均為1×107個(gè)/mL(附錄B)，接種菌懸液量均為每穴10ml。4.8接種后期管理茄苗接菌后保濕24h，之后噴清水保持盤中基質(zhì)濕潤。露地管理雨天需做避雨處理，晴天氣溫偏高需做遮陽處理。保濕與避雨處理均可用竹條與塑料薄膜制成拱棚覆蓋茄苗。5病情調(diào)查5.1調(diào)查時(shí)間灌根法以人工接種后45d進(jìn)行病情調(diào)查，傷根灌根法以人工接種30d進(jìn)行病情調(diào)查。5.1.1調(diào)查方法與數(shù)據(jù)處理調(diào)查各參鑒品種的所有茄苗，檢查每株茄苗病情（癥狀識別見附錄A），按“0-5級”分級標(biāo)準(zhǔn)（見附錄B）記載病情,統(tǒng)計(jì)株發(fā)病率和病情指數(shù)（見附錄B）。6抗病性評價(jià)6.1評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)茄子品種的抗病性以人工接種鑒定的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。以對照品種的發(fā)病株率不低于50%，且3級以上的病株占總病株數(shù)的50%以上，為人工接種鑒定結(jié)果有效性標(biāo)準(zhǔn)。6.2抗性表型劃分根據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)的各品種的病情指數(shù)，按照表1評定各參鑒品種對黃萎病的抗性結(jié)果。表1茄子品種苗期抗黃萎病評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)抗性表型病情指數(shù)高抗（HR）X=0抗（R）0＜DI≤15中抗（MR）15＜DI≤30耐?。═）30＜DI≤50中感（MS）50＜DI≤70感（S）70＜DI≤100附錄A(資料性附錄)A.1茄黃萎病癥狀在茄子整個(gè)生長期間均可發(fā)生黃萎病，苗期即可遭受侵染，5-6葉時(shí)初見癥狀；門茄座果以后，癥狀逐漸明顯，田間癥狀有黃斑型、萎蔫型、枯死型3種類型，以黃斑型癥狀比較普遍。A.1.1黃斑型病株一般不矮化或稍矮化，葉片受害先是在葉脈間、葉尖、或葉緣出現(xiàn)褪綠、黃化病斑，并逐漸擴(kuò)展到整個(gè)葉片，使葉片變黃或呈現(xiàn)大片黃化斑駁，且多自下而上或從一邊向全株發(fā)展。葉片初在葉緣及葉脈間變黃，后發(fā)展至半邊葉片或整片葉變黃。早期病葉晴天高溫時(shí)呈萎蔫狀，早晚尚可恢復(fù)，后期病葉病葉由黃變褐，萎蔫下垂以至脫落，嚴(yán)重時(shí)全株葉片變褐萎垂以至脫光僅剩莖桿。本病為全株性病害，剖檢病株根、莖、分枝及葉柄等部，可見維管束變褐，擠捏橫切面，無渾濁液滲出，可以與青枯病區(qū)別。A.1.2萎蔫型，與黃斑型相比，萎蔫型癥狀的特點(diǎn)是發(fā)病植株的葉怎不沒有明顯的黃斑癥狀，而是病株的葉片比較迅速地自下而上呈現(xiàn)出失水萎蔫狀，往往病株的下部葉片枯死、上部葉片萎蔫。A.1.3枯死型，枯死型植株往往嚴(yán)重矮化，葉片皺縮、凋萎、枯死、脫落，病情擴(kuò)展更為迅速，在比較短的時(shí)間內(nèi)常常導(dǎo)致整株死亡；發(fā)病植株結(jié)果少，果實(shí)小、質(zhì)地較硬、風(fēng)味很差，甚至失去食用價(jià)值。A.2病害循環(huán)與發(fā)生規(guī)律茄黃萎病是以大麗輪枝菌（VerticilliumdahliaeKleb.)為主要病原引起的土傳真菌性病害。病菌以休眠菌絲、厚垣孢子和微菌核隨病殘?bào)w在土壤中越冬，成為翌年的初侵染源。土壤中病菌可存活6?8年，借風(fēng)雨、流水或人畜活動(dòng)傳到無病田。翌年溫度適宜時(shí)，病菌的分生孢子或微菌核萌發(fā)，從根部傷口或直接從幼根表皮及根毛侵人，后在維管束內(nèi)繁殖，并擴(kuò)展到枝葉，引起茄子系統(tǒng)發(fā)病和出現(xiàn)系統(tǒng)癥狀。該病在寄主的一個(gè)生長季節(jié)內(nèi)無再侵染。病菌發(fā)育適溫19-24℃，最高30℃，最低5℃。一般氣溫低，定植時(shí)根部傷口愈合慢，利于病菌從傷口侵人；從茄子定植到開花期如遇氣候冷涼，日均溫度低于15℃，且持續(xù)時(shí)間長，發(fā)病早而重；如此期間氣候溫暖，雨水調(diào)和，病害明顯減輕；地勢低洼、施用未腐熟的有機(jī)肥、灌水不當(dāng)及連作地發(fā)病重。附錄B(規(guī)范性附錄)黃萎病接種體制備、茄子黃萎病嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)、病情指數(shù)計(jì)算方法B.1黃萎病接種體制備在無菌條件下將參試的黃萎病菌從斜面中轉(zhuǎn)接到含有150mL馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(PS)的三角搖瓶中，150r/min、26℃條件下震蕩培養(yǎng)4d。將菌液用雙層紗布過濾，棄菌絲體留過濾液，將過濾液2000r/min離心10min，棄上清液，沉淀即為黃萎病菌孢子。用無菌水將孢子重新懸浮并稀釋，在光學(xué)顯微鏡下使用血球計(jì)數(shù)板對菌懸液中孢子進(jìn)行計(jì)數(shù)，配制成濃度為1×107個(gè)/mL的孢子懸浮液供接種備用