實驗二十一-細(xì)菌的芽孢和莢膜染色法fg答案

實驗二十一--細(xì)菌的芽孢和莢膜染色法fg答案實驗二十一--細(xì)菌的芽孢和莢膜染色法fg答案12021/1/42一、實驗?zāi)康模?/p>

1、繼續(xù)學(xué)習(xí)微生物涂片的制作方法；

2、掌握芽孢、莢膜染色的基本原理和方法。2021/1/42一、實驗?zāi)康模?2021/1/43二、實驗原理：

芽孢、莢膜染色法都是利用細(xì)菌各部位（分）的構(gòu)造不同，它們對染料的親和力也不同。因此，可以采用各種特殊染色方法，使細(xì)菌細(xì)胞的不同構(gòu)造能在顯微鏡下顯示出來，便于觀察和區(qū)別。2021/1/43二、實驗原理：芽孢、莢32021/1/44三、實驗材料：1、菌種：枯草桿菌、鉀細(xì)菌；

2、染色液：孔雀綠、蕃紅溶液、碳素墨水、甲醇、生理鹽水等；

3、器材：試管夾、酒精燈、接種針、載玻片、顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙等。2021/1/44三、實驗材料：1、菌種：枯草桿菌42021/1/45四、方法和步驟：1、芽孢染色法：某些細(xì)菌（革蘭氏染色陽性桿菌）生長到一定時間（對數(shù)期后期），在細(xì)胞內(nèi)形成一個圓形、橢圓形或圓柱形的結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)稱為芽孢，由于在細(xì)胞內(nèi)也叫內(nèi)生孢子。2021/1/45四、方法和步驟：1、芽52021/1/46芽孢的特點是不能繁殖，休眠體，含水少、含脂高、不透明，對外界環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗能力，有的芽孢在一定條件下可保持活力數(shù)年甚至數(shù)十年之久，芽孢尤其能耐高溫，像枯草桿菌的芽孢，在沸水中可存活1小時，破傷風(fēng)芽孢桿菌可存活3小時，而肉毒梭狀芽孢桿菌的芽孢可忍受6小時，即使在180℃干燥箱中仍可存活10分鐘，這主要是2.6-吡啶二羧酸與鈣的復(fù)合物占芽孢干重5-15%的原理。芽孢有的長在中央或近中央，圓形或橢圓形，芽孢的大小，位置，在分類鑒定上有一定的意義，它僅僅是芽孢細(xì)菌生活史的一個環(huán)節(jié)，它還是檢驗培養(yǎng)基滅菌徹底不徹底的依據(jù)。2021/1/46芽孢的特點是不能繁殖，休眠體，含水少、含脂62021/1/47芽孢染色的原理是利用細(xì)菌的芽孢和菌體對染料的親和力不同的原理，用不同的染料進(jìn)行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。細(xì)菌的芽孢壁比營養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞壁厚，致密、透性低，著色和脫色都比營養(yǎng)細(xì)胞困難。因此，一般采用一種堿性染料（孔雀綠）并在微火上加熱或延長染色時間。我們采用加熱的方法，使菌體和芽孢同時都染上色后，再用水沖洗脫去菌體的染料，此時仍保留芽孢的顏色，并用對照染料來染菌體，這樣就將芽孢和菌體分別染成兩種不同的顏色。其步驟如下：2021/1/47芽孢染色的原理是利用細(xì)菌的芽孢和菌體對染料72021/1/48⑴取枯草桿菌制成涂片、干燥、固定；⑵用試管夾夾住玻片的一端，在涂片上滴加孔雀綠3-4滴；⑶加熱5分鐘使冒蒸汽，切勿煮干；⑷冷卻、水洗（細(xì)水）；⑸蕃紅溶液復(fù)染2-3分鐘，水洗；⑹干燥、鏡檢；⑺結(jié)果：芽孢呈綠色，菌體呈紅色。2021/1/48⑴取枯草桿菌制成涂片、干燥、固定；82021/1/492021/1/4992021/1/4102021/1/410102021/1/4112021/1/411112021/1/4122021/1/412122021/1/4132021/1/413132021/1/4142021/1/414142021/1/4152021/1/415152021/1/4162021/1/416162021/1/4172021/1/417172021/1/4182021/1/418182021/1/4192021/1/419192021/1/4202021/1/420202021/1/4212021/1/421212021/1/4222021/1/422222021/1/4232021/1/423232021/1/4242021/1/424242021/1/4252021/1/425252021/1/4262021/1/426262021/1/4272021/1/427272021/1/4282021/1/428282021/1/4292021/1/429292021/1/4302021/1/430302021/1/4312021/1/431312021/1/4322021/1/432322021/1/4332021/1/433332021/1/4342021/1/434342021/1/4352021/1/435352021/1/4362021/1/436362021/1/4372021/1/437372021/1/4382021/1/438382021/1/4392021/1/439392021/1/4402021/1/440402021/1/4412021/1/441412021/1/4422021/1/442422021/1/4432021/1/443432021/1/4442021/1/444442021/1/4452021/1/445452021/1/4462021/1/446462021/1/4472021/1/447472021/1/4482021/1/448482021/1/4492021/1/449492021/1/4502021/1/450502021/1/4512021/1/451512021/1/4522021/1/452522021/1/4532021/1/453532021/1/4542021/1/454542021/1/4552021/1/455552021/1/4562021/1/456562021/1/4572021/1/457572021/1/4582021/1/458582021/1/4592021/1/459592021/1/4602021/1/460602021/1/4612021/1/461612021/1/4622021/1/462622021/1/4632021/1/463632021/1/4642021/1/464642021/1/4652021/1/465652021/1/4662021/1/466662021/1/4672021/1/467672021/1/4682021/1/468682021/1/4692021/1/469692021/1/4702021/1/470702021/1/4712021/1/471712021/1/4722021/1/472722021/1/4732021/1/473732021/1/4742021/1/474742021/1/4752021/1/475752021/1/4762021/1/476762021/1/4772021/1/477772021/1/4782021/1/478782021/1/4792021/1/479792021/1/4802021/1/480802021/1/4812021/1/481812021/1/4822021/1/482822021/1/4832021/1/483832021/1/4842021/1/484842021/1/4852021/1/485852021/1/4862021/1/486862021/1/4872021/1/487872021/1/4882021/1/488882021/1/4892021/1/489892021/1/4902021/1/490902021/1/4912021/1/491912021/1/4922021/1/492922021/1/4932021/1/493932021/1/4942021/1/494942021/1/4952021/1/495952021/1/4962021/1/496962021/1/4972021/1/497972021/1/4982021/1/498982021/1/4992021/1/499992021/1/41002021/1/41001002021/1/41012021/1/41011012021/1/41022021/1/41021022021/1/41032021/1/41031032021/1/41042021/1/41041042021/1/41052021/1/41051052021/1/41062021/1/41061062021/1/41072021/1/41071072021/1/41082021/1/41081082021/1/41092021/1/41091092021/1/41102021/1/41101102021/1/41112021/1/41111112021/1/41122021/1/41121122021/1/41132021/1/41131132021/1/41142021/1/41141142021/1/41152021/1/41151152021/1/41162021/1/41161162021/1/41172021/1/41171172021/1/41182021/1/41181182021/1/41192021/1/41191192021/1/41202021/1/41201202021/1/41212021/1/41211212021/1/41222021/1/41221222021/1/41232021/1/41231232021/1/41242021/1/41241242021/1/41252021/1/41251252021/1/41262021/1/41261262021/1/41272021/1/41271272021/1/41282021/1/41281282021/1/41292021/1/41291292021/1/41302021/1/41301302021/1/41312021/1/41311312021/1/41322021/1/41321322021/1/41332021/1/41331332021/1/41342021/1/41341342021/1/41352021/1/41351352021/1/41362021/1/41361362021/1/41372021/1/41371372021/1/41382021/1/41381382021/1/41392021/1/41391392021/1/41402021/1/41401402021/1/41412021/1/41411412021/1/41422021/1/41421422021/1/41432021/1/41431432021/1/41442021/1/41441442021/1/41452021/1/41451452021/1/41462021/1/41461462021/1/41472021/1/41471472021/1/41482021/1/41481482021/1/4149芽孢的孔雀綠染色2021/1/4149芽孢的孔雀綠染色1492021/1/41502、莢膜染色法：有些細(xì)菌生活在一定營養(yǎng)條件下，可向細(xì)胞壁表面分泌一層松散透明、疏松、柔軟、粘度極大，粘液狀或膠質(zhì)狀的物質(zhì)即為莢膜。莢膜的化學(xué)成分，主要是多糖、多肽、蛋白質(zhì)、脂以和由它們組成的復(fù)合物-脂多糖、脂蛋白等。莢膜雖不是細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)，但它是細(xì)胞外碳源和能源性貯藏物質(zhì)，并能保護(hù)細(xì)胞免受干燥的影響，同時能增加默某些病原菌的致病能力，使之抵御宿主吞噬細(xì)胞的吞噬。2021/1/41502、莢膜染色法：1502021/1/4151產(chǎn)莢膜細(xì)菌，常常給生產(chǎn)帶來麻煩，食品工業(yè)中的粘性面包，粘性牛奶，都是由于染了此類細(xì)菌引起的，對制糖工業(yè)威脅更大，由于產(chǎn)莢膜細(xì)菌的大量繁殖，增加了糖液粘度，影響了過濾速度，使生產(chǎn)蒙受損失。但在一定條件下，有害的東西可變?yōu)橛幸娴奈镔|(zhì)，如腸膜明串珠菌，在人為控制下，讓其利用蔗糖合成大量產(chǎn)莢膜物質(zhì)—葡聚糖。葡聚糖是生產(chǎn)右旋糖酐的原料，而右旋糖酐是帶代血漿的主要成分，具有維持血液滲透壓和增加血溶量的作用，臨床上還用于抗休克、消腫和解毒，所以在醫(yī)學(xué)上十分重要。莢膜比菌體要大。2021/1/4151產(chǎn)莢膜細(xì)菌，常常給生產(chǎn)帶來麻煩，食品1512021/1/41522021/1/41521522021/1/41532021/1/41531532021/1/41542021/1/41541542021/1/4155其染色原理是莢膜包圍在細(xì)菌細(xì)胞外面的一層粘液性物質(zhì)，它是由多糖類衍生物、糖原或多肽所聚積而成，此層對染料結(jié)合力很弱，因此不易染色，故一般采用負(fù)染色的方法，使細(xì)菌和背景著色，背景與菌體之間形成一透明區(qū)即莢膜，便于觀察，由于莢膜很薄，容易變形，在制片是一般不用加熱固定。其步驟如下：2021/1/4155其染色原理是莢膜包圍在細(xì)菌細(xì)胞外面的一1552021/1/4156方法一.⑴取鉀細(xì)菌一環(huán)，做成涂片，自然干燥（不能加熱干燥）；→⑵碳素墨水（用平整載玻片順菌液刮過）；→⑶風(fēng)干；⑷甲醇固定；⑸水洗；→⑹蕃紅溶液1-2分鐘；→⑺自然干燥、鏡檢；→⑻結(jié)果：背景黑色、莢膜無色、菌體紅色。2021/1/4156方法一.1562021/1/4157方法二.取少許菌苔與一滴無菌水，在玻片上混合，攤平，待自然風(fēng)干后，用石炭酸復(fù)紅染液染2～3，水洗（注意水不要直接沖洗涂菌處），用濾紙吸干。鏡檢，菌體紅色，莢膜為淡紅色。2021/1/4157方法二.取少許菌苔與一滴無菌水，在玻片1572021/1/41582021/1/41581582021/1/41592021/1/41591592021/1/41602021/1/41601602021/1/4161

五、繪圖：繪芽孢染色、莢膜染色的結(jié)果；六、預(yù)習(xí)：

放線菌、霉菌、酵母菌的形態(tài)觀察2021/1/4161

五、繪圖：1612021/1/41622021/1/41621622021/1/4163實驗二十二放線菌、霉菌、酵母菌的形態(tài)觀察2021/1/4163實驗二十二放線菌、霉菌、酵母菌1632021/1/4164一、實驗的目的學(xué)習(xí)和掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的基本方法，并觀察它們的個體形態(tài)特征。2021/1/4164一、實驗的目的學(xué)習(xí)和掌握觀察放線菌、1642021/1/4165二、實驗原理1、放線菌：放線菌是介于細(xì)菌與絲狀真菌之間而又接近于細(xì)菌的一類絲狀原核生物，因菌落呈放射狀而得名。放線菌的菌落在培養(yǎng)基上著生牢固，不易被接種針挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末狀。它和細(xì)菌單染色一樣，可用石炭酸復(fù)紅和呂氏美藍(lán)等染料著色后，在顯微鏡下觀察它們的形態(tài)。放線菌是由不同長短的纖細(xì)的菌絲所組成的單細(xì)胞菌絲體，菌絲內(nèi)無隔膜，菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（基內(nèi)菌絲）和有營養(yǎng)菌絲向上生長的氣生菌絲，有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋狀、波浪形或分枝狀等，著生形式有叢生、互生和輪生三種。孢子的表面光滑或粗糙，圓或橢圓和干形。孢子有各種顏色。這些形態(tài)特點都是鑒別放線菌的重要依據(jù)。2021/1/4165二、實驗原理1、放線1652021/1/4166⑴營養(yǎng)菌絲：又叫初級菌絲體或一級菌絲體，匍匐生長于培養(yǎng)基內(nèi)，主要生理功能是吸收營養(yǎng)物，故亦稱基內(nèi)菌絲。營養(yǎng)菌絲一般無隔膜，直徑0.2—0.8μ，但長度相差很大，短的小于100μ，長的可達(dá)600μ以上，有的無色素，有的產(chǎn)生黃、橙、紅、紫、蘭、綠、褐、黑等不同色素，若是水溶性的色素，還可透入培養(yǎng)基內(nèi)，將培養(yǎng)基染上相應(yīng)的顏色，如果是非水溶性（脂溶性）色素，則使菌落呈現(xiàn)相應(yīng)的顏色，因此，色素是鑒定菌種的重要依據(jù)。2021/1/4166⑴營養(yǎng)菌絲：又叫初級菌絲體或一級菌絲體1662021/1/4167⑵氣生菌絲：又稱二級菌絲體。營養(yǎng)菌絲體發(fā)育到一定時期，長出培養(yǎng)基外并伸向空間的菌絲為氣生菌絲。⑶孢子絲：當(dāng)氣生菌絲體發(fā)育到一定程度，其上分化出可形成孢子的菌絲即孢子絲，又名產(chǎn)孢絲或繁殖絲。放線菌最突出的特性之一是產(chǎn)生大量的、種類繁多的抗生素，根據(jù)估計，全世界共發(fā)現(xiàn)4000多種抗生素，其中絕大部分是由放線菌產(chǎn)生的。2021/1/4167⑵氣生菌絲：又稱二級菌絲體。營養(yǎng)菌絲體1672021/1/41682021/1/41681682021/1/41692、霉菌：霉菌是一些“絲狀真菌”的統(tǒng)稱，不是分類學(xué)上的名詞。凡是在基質(zhì)上長成毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀的絲狀真菌統(tǒng)稱霉菌。霉菌形態(tài)比細(xì)菌、放線菌復(fù)雜，個體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。因此，在觀察是要注意菌絲的直徑大小，菌絲體有無隔膜，營養(yǎng)菌絲有無假根，無性繁殖或有性繁殖時形成的孢子是哪一種，孢子是怎樣著生的。由于霉菌的菌絲較粗大，而且孢子容易飛散，如將菌體置于水中容易變形，故觀察時狀不用水浸法制片，而將菌體置于乳酸石炭酸棉蘭染液中，使細(xì)胞不易干燥，并有殺菌作用。2021/1/41692、霉菌：1692021/1/4170三、材料1、菌種：5406放線菌、青霉菌、黑曲霉、根霉、酵母菌；

2、染料：石炭酸復(fù)紅、0.1%呂氏美藍(lán)、乳酸石炭酸棉蘭；

3、器材：載玻片、蓋玻片、酒精燈、鑷子、接種針、接種鏟等。2021/1/4170三、材料1、菌種：5406放1702021/1/4171四、方法和步驟1、放線菌：用接種鏟切取5406放線菌一塊（帶有培養(yǎng)基）→在載玻片上輕壓一下，棄去培養(yǎng)基，制成印片→固定（火焰）→石炭酸復(fù)紅（染色）→水洗→吸干→鏡檢。2021/1/4171四、方法和步驟1、放線菌：用1712021/1/4172

圖扦片法2021/1/4172