細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)

關(guān)于細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)

第一節(jié)

臨床常用抗菌藥物

抗菌藥物是指具有殺菌或抑菌活性的抗生素和化學(xué)合成藥物。

前者是真菌、放線菌、細(xì)菌等的代謝產(chǎn)物，后者是經(jīng)化學(xué)改造的半合成抗生素和化學(xué)合成藥物。第2頁,共66頁，2024年2月25日，星期天一、青霉素類抗生素：包括青霉素G、耐青霉素酶青霉素、廣譜青霉素(氨芐青霉素、美洛西林、哌拉西林

)等。二、頭孢菌素類抗生素：第一代(頭孢唑林、頭孢氨芐、頭孢拉定

)、第二代(頭孢孟多、頭孢西汀，頭孢呋新，頭孢克羅等

)、第三代

(頭孢哌酮（先鋒必）、頭孢三嗪（菌必治）、頭孢噻肟鈉、頭孢他啶、頭孢唑肟等)

。第四代如頭孢地嗪、頭孢噻唑肟、頭孢吡肟等。適用于多重耐藥G-桿菌嚴(yán)重感染，對(duì)厭氧菌也有很好的抗菌作用三、其他β－內(nèi)酰胺類抗生素

（一）單環(huán)β－內(nèi)酰胺類抗生素:主要有氨曲南和卡蘆莫南。

抗菌藥物的分類第3頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（二）頭霉素類和氧頭孢烯類抗生素:主要有頭孢西丁、頭孢替坦、頭孢美唑。（三）碳青霉烯類抗生素:

主要有亞胺培南、米洛培南、必安培南、帕尼培南。（四）β－內(nèi)酰胺類抑制劑:

主要有克拉維酸舒巴坦和他唑巴坦。所有β－內(nèi)酰胺類抗生素都能抑制細(xì)胞壁粘肽合成酶，即青霉素結(jié)合蛋白（penicillinbindingproteins，PBPs），從而阻礙細(xì)胞壁粘肽合成，使細(xì)菌胞壁缺損第4頁,共66頁，2024年2月25日，星期天四、氨基糖苷類抗生素可干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)合成,主用于對(duì)革蘭氏陰性菌、綠膿桿菌等感染的治療

按其來源分為：①由鏈霉菌屬發(fā)酵濾液提取獲得，有鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龍霉素、新霉素；②由小單胞菌屬發(fā)酵濾液中提取，有慶大霉素、福提霉素；③半合成氨基糖苷類，有阿米卡星、奈替米星、地貝卡星等。第5頁,共66頁，2024年2月25日，星期天五、喹諾酮類抗生素

是一種DNA旋轉(zhuǎn)酶抑制劑，它作用于細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶，干擾DNA超螺旋結(jié)構(gòu)的解旋，從而阻礙DNA的復(fù)制。

第一代為窄譜抗生素，有新惡酸、奈啶酸和惡喹酸。第二代為廣譜類抗生素，抗菌強(qiáng)度依次為環(huán)丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、諾氟沙星。第三代為超廣譜類抗生素，有司帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等。第6頁,共66頁，2024年2月25日，星期天六、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素:

作用于核糖體50S亞基，抑制肽酰基轉(zhuǎn)移酶，阻止轉(zhuǎn)肽作用和mRNA位移，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成。常用的有：紅霉素、柱晶白霉素、麥迪霉素、乙酰螺旋霉素。

七、四環(huán)素、氯霉素和林可酰胺類抗生素（一）四環(huán)素為廣譜抗生素，能特異性地與細(xì)菌核糖體30S亞基的A位置結(jié)合?？咕钚缘捻樞?yàn)槊字Z環(huán)素＞多西環(huán)素＞美他環(huán)素＞地美環(huán)素。第7頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（二）氯霉素類抗生素，包括氯霉素、甲砜霉素。（三）林可酰胺類抗生素，主要有鹽酸林可霉素、克林霉素。八、糖肽類抗生素常用的有萬古霉素和替卡拉寧第8頁,共66頁，2024年2月25日，星期天九、磺胺類藥物及增效劑分三類：①用于全身感染的藥物，分為短效、中效、長效三類，有磺胺甲惡唑，磺胺嘧啶、磺胺甲氧吡嗪；②腸道起作用的藥物有柳氮磺胺啶銀、磺胺二甲氧嘧啶；③局部應(yīng)用的藥物有磺胺米隆、磺胺醋酰鈉。第9頁,共66頁，2024年2月25日，星期天十、其他合成抗菌藥

1.硝基呋喃類用于腸道、尿路感染和外用消毒，有呋喃坦啶和呋喃唑酮。

2.硝基咪唑類對(duì)厭氧菌有抗菌作用，對(duì)需氧菌無效，有甲硝唑和替硝唑。第10頁,共66頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)

（AST）一、意義①可預(yù)測(cè)抗菌治療的效果，“敏感”治療可能有效；“耐藥”肯定失??；②指導(dǎo)醫(yī)生選擇使用抗生素，AST的結(jié)果為“耐藥”，即應(yīng)更換藥物；③提供所選擇藥物的依據(jù)；④監(jiān)測(cè)耐藥性，分析耐藥菌變遷，掌握耐藥菌感染病流行病學(xué)，控制和預(yù)防耐藥菌感染發(fā)生和流行。第11頁,共66頁，2024年2月25日，星期天二、試驗(yàn)常規(guī)抗菌藥物選擇

在臨床上將試驗(yàn)藥物分成A、B、C、U四組,A組所列的抗生素為常規(guī)首選藥敏試驗(yàn)藥物,B組

為臨床使用主要抗生素,尤其在醫(yī)院感染時(shí)使用的抗生素，可在下列情況下使用：①對(duì)A組同類抗生素耐藥；②標(biāo)本來源不同時(shí)，如三代頭孢菌素使用于腦脊液中的腸桿菌，磺胺甲惡唑使用于尿道分離的細(xì)菌；③多種微生物感染；④多部位感染；⑤感染流行的控制；⑤對(duì)A組抗生素過敏、耐受或無反應(yīng)。第12頁,共66頁，2024年2月25日，星期天C組藥物用于對(duì)A組藥物耐藥的流行菌株或?qū)組藥物過敏的病人和某些不常見的細(xì)菌（如腸外分離的沙門菌屬或耐萬古霉素腸球菌）。U組

僅用于尿道中分離的細(xì)菌，不作為尿道外分離菌的常規(guī)藥敏試驗(yàn)。第13頁,共66頁，2024年2月25日，星期天建議非苛氧菌常規(guī)藥敏試驗(yàn)和報(bào)告應(yīng)考慮的抗菌藥物分組細(xì)菌A組B組C組U組腸桿菌科氨芐西林頭孢唑啉頭孢噻吩慶大霉素阿莫西林/克拉維酸或氨芐西林頭孢孟多或頭孢呋辛頭孢吡污頭孢美唑頭孢哌酮頭孢西丁頭孢噻污環(huán)丙沙星或左氟沙星亞胺培南甲氧芐定氨曲南頭孢他啶(可指示產(chǎn)ESBLs)氯霉素卡那霉素奈替米星四環(huán)素妥布霉素羧芐西林洛美沙星或氧氟沙星加替沙星氯碳頭孢磺胺異惡唑甲氧芐啶呋喃妥因第14頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

建議非苛氧菌常規(guī)藥敏試驗(yàn)和報(bào)告應(yīng)考慮的抗菌藥物分組細(xì)菌A組B組C組U組

葡萄球菌屬細(xì)菌苯唑西林青霉素阿奇霉素或克拉霉素或紅霉素克林霉素萬古霉素泰利霉素利奈唑胺環(huán)丙沙星或左氟沙星或氧氟沙星氯霉素慶大霉素利福平四環(huán)素羅美沙星或諾氟沙星磺胺異惡唑甲氧芐啶呋喃妥因第15頁,共66頁，2024年2月25日，星期天(一）非苛養(yǎng)菌藥敏試驗(yàn)抗生素的選用

A組一級(jí)試驗(yàn)并常規(guī)報(bào)告的抗微生物藥,

如葡萄球菌屬用苯唑西林和青霉素。B組一級(jí)試驗(yàn)有選擇報(bào)告的抗微生物藥,

如腸球菌屬用萬古霉素。C組—補(bǔ)充試驗(yàn)有選擇報(bào)告的抗微生物藥，如葡萄球菌屬用氯霉素。U組—僅用于泌尿道的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)的抗微生物藥，如葡萄球菌屬用洛美沙星和諾氟沙星。第16頁,共66頁，2024年2月25日，星期天(二）苛養(yǎng)菌藥敏試驗(yàn)抗生素的選用A組一級(jí)試驗(yàn)并常規(guī)報(bào)告的抗微生物藥,

如肺炎鏈球菌用紅霉素和青霉素。B組一級(jí)試驗(yàn)有選擇報(bào)告的抗微生物藥,

如肺炎鏈球菌用頭孢噻肟或頭孢曲松。C組補(bǔ)充試驗(yàn)有選擇報(bào)告的抗微生物藥，如肺炎鏈球菌用頭孢呋辛。第17頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

稀釋法和紙片擴(kuò)散法稀釋法是在體外定量檢測(cè)抗菌藥物抑制待測(cè)菌生長活性的方法,抗菌藥物在液體或固體培養(yǎng)基中稀釋.

（一）液體稀釋法原理:以MH（水解蛋白）液體培養(yǎng)基將抗菌藥物做不同濃度的稀釋，然后接種待測(cè)菌，定量測(cè)定抗菌藥物抑制或殺死該菌的最低（或最?。┮志鷿舛龋╩inimalinhibitoryconcentration,MIC）。

三、藥敏試驗(yàn)方法第18頁,共66頁，2024年2月25日，星期天材料：

抗菌藥物(配制見表)

培養(yǎng)基：一般采用MH液體培養(yǎng)基。接種菌液的準(zhǔn)備：挑取純培養(yǎng)（平板）的4-5個(gè)菌落，種于3-5mlMH液體培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)4-6小時(shí)；校正菌液濃度，使其相當(dāng)于0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝坏臐岫龋?.28x108cfu/ml）標(biāo)準(zhǔn)，再用MH液體培養(yǎng)基進(jìn)行1：200的稀釋后，在15min內(nèi)用完。無菌小試管：10-15支無菌吸管：

35℃培養(yǎng)箱第19頁,共66頁，2024年2月25日，星期天操作步驟：取10支小試管，除第一支外，其余每管加于MH培養(yǎng)基1ml.吸取抗菌藥物原液（1000μg/ml）5.12ml,加入液體培養(yǎng)基4.88ml，混合，吸出2ml加入第一和第二管中，每管加1ml，第二管混合后取出1ml加入第三管，依次類推直至9管，吸取1ml去掉，各管抗菌藥物的實(shí)際含量依次分別為512、256、128、64、32、16、8、4、2、1μg/ml；另設(shè)培養(yǎng)液對(duì)照、待測(cè)菌生長對(duì)照、和質(zhì)控菌生長對(duì)照。3.將一定濃度的待測(cè)菌懸液依次加入上述各管中，每管0.05ml，混勻。放入35℃培養(yǎng)箱12-18小時(shí)后觀察結(jié)果。4.結(jié)果判斷：凡無肉眼可見細(xì)菌生長的藥物最低濃度即為該待測(cè)菌的最低抑菌濃度（MIC）;

再以0.01ml容量接種環(huán)無菌管中取出一環(huán)種于血平板作次代培養(yǎng)，經(jīng)35培養(yǎng)過夜后，觀察最低藥物濃度能殺死99.9%原始種于的細(xì)菌者，即為該菌的最低殺菌濃度（MBC）。第20頁,共66頁，2024年2月25日，星期天影響因素

1.培養(yǎng)基pH、滲透壓、電解質(zhì)對(duì)結(jié)果均有影響。在MH培養(yǎng)基上不生長的細(xì)菌除外，一般都用該培養(yǎng)基。

2.抗菌藥物必須采用標(biāo)準(zhǔn)粉劑。

3.結(jié)果觀察時(shí)間，應(yīng)在12-18小時(shí)之間觀察。質(zhì)量控制：

每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)根據(jù)待測(cè)菌的不同而分別選用：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸艾希菌ATCC25922、糞腸球菌ATCC29212和銅綠假單胞菌ATCC27853等標(biāo)準(zhǔn)菌株在同一實(shí)驗(yàn)條件下作平行試驗(yàn)。其結(jié)果（MIC）超過或低于預(yù)期值范圍一個(gè)稀釋度以上，不應(yīng)向臨床發(fā)出報(bào)告。第21頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

（二）瓊脂稀釋法

原理瓊脂選擇法是將藥物混勻于瓊脂培養(yǎng)基中，配制含不同濃度藥物平板，使用多頭接種器接種細(xì)菌，經(jīng)孵育后觀察細(xì)菌生長情況，以抑制細(xì)菌生長的瓊脂平板所含藥物濃度測(cè)得MIC。

結(jié)果判斷將平板置于暗色、無反光表面上判斷試驗(yàn)終點(diǎn)，以抑制細(xì)菌生長的藥物稀釋度為終點(diǎn)濃度（磺胺可見少許散在細(xì)菌生長）。

結(jié)果報(bào)告可用MIC（μg/ml）或用敏感S）、（中介（I）和耐藥（R）報(bào)告。第22頁,共66頁，2024年2月25日，星期天紙片瓊脂擴(kuò)散法

（一）試驗(yàn)原理

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)細(xì)菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)。

第23頁,共66頁，2024年2月25日，星期天第24頁,共66頁，2024年2月25日，星期天(二)材料1．抗菌藥物紙片選擇直徑為6．35mm，吸水量為20μl的專用藥敏紙片用逐片加樣或浸泡方法使每片含藥量達(dá)規(guī)定所示。含藥紙片密封貯存2℃－8℃

且不超過1周。2．培養(yǎng)基水解酪蛋白（MH）培養(yǎng)基是兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，4℃保存。第25頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（三）方法：

1.用0．5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌液濃度，在瓊脂表面均勻涂片,在15min內(nèi)接種完畢。

2.將含藥紙片緊貼于瓊脂表面,35℃孵育18h后閱讀結(jié)果。（四）結(jié)果判斷和報(bào)告

用精確度為1mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，作出“敏感”,“耐藥”和“中介”的判斷。第26頁,共66頁，2024年2月25日，星期天紙片法藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑與結(jié)果解釋的標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物與細(xì)菌

紙片含量抑菌圈直徑：mm相應(yīng)MICμg/ml

耐藥中介度敏感耐藥敏感丁胺卡那霉素30μg≤1415-16≥17≥32≤16氨芐青霉素

測(cè)腸桿菌

10μg≤1112-13≥14≥32≤8

測(cè)葡萄球菌

10μg≤28—≥29

測(cè)嗜血桿菌

10μg≤19—≥20≥4≤0.25

測(cè)腸球菌

10μg≤16—≥16≤2第27頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

E試驗(yàn)

（一）原理

E試條是一條5mm×50mm的無孔試劑載體，一面固定有預(yù)先制備的，濃度呈連續(xù)指數(shù)增長稀釋抗生素，另一面有讀數(shù)和判別的刻度。將E試條放在細(xì)菌接種過的瓊脂平板上，經(jīng)孵育過夜，圍繞試條明顯可見橢圓形抑菌圈，圈的邊緣與試條交點(diǎn)的刻度濃度即為抗生素抑制細(xì)菌的特定濃度,又稱抑制濃度（IC），它與MIC呈高度相關(guān)。第28頁,共66頁，2024年2月25日，星期天第29頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（二）細(xì)菌接種和加樣使用厚度為4mmMH瓊脂平板，用0.5麥?zhǔn)蠞舛鹊膶?duì)數(shù)期菌液涂布，待瓊脂平板完全干燥，用E試驗(yàn)加樣器將試條放在已接種細(xì)菌的平板表面，試條全長應(yīng)與瓊脂平板緊密接觸，試條MIC刻度面朝上濃度最大處靠平板邊緣。第30頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

（三）結(jié)果判斷和報(bào)告讀取橢圓環(huán)與E試驗(yàn)試條的交界點(diǎn)IC值。與NCCLS的稀釋法MIC參考值高度相關(guān)。第31頁,共66頁，2024年2月25日，星期天四、藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果解釋

“敏感”即表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制“耐藥”即表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效?！爸薪椤闭咛崾驹摷?xì)菌對(duì)常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。第32頁,共66頁，2024年2月25日，星期天五、自動(dòng)化儀器檢測(cè)Viter－ATB系統(tǒng)和Microscan是半自動(dòng)或全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏系統(tǒng)，通過系統(tǒng)中藥敏專家系統(tǒng)可報(bào)告分離菌的藥敏結(jié)果。第33頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

第三節(jié)

細(xì)菌耐藥性和產(chǎn)生機(jī)制一、細(xì)菌的耐藥性對(duì)某種抗菌藥物敏感細(xì)菌變成對(duì)該藥物耐受稱細(xì)菌耐藥性。它可分為天然耐藥和獲得性耐藥，前者是通過染色體DNA突變而致，后者往往是由質(zhì)粒、噬菌體及其他遺傳物質(zhì)攜帶外來DNA片段導(dǎo)致產(chǎn)生的耐藥性。第34頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

突變可由細(xì)菌自發(fā)產(chǎn)生或在X線等物理因素或化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)產(chǎn)生，一般只對(duì)一種或兩種相似藥物耐藥，在細(xì)菌耐藥性上不占主要地位。獲得性耐藥可通過接合、轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)換形式產(chǎn)生耐藥。第35頁,共66頁，2024年2月25日，星期天二、細(xì)菌耐藥性的生物化學(xué)機(jī)制

1.產(chǎn)生β－內(nèi)酰胺酶，水解藥物β－內(nèi)酰胺環(huán)而失去抗菌活性。2.產(chǎn)生鈍化酶使抗生素失活，鈍化酶有三類：①氨基糖苷類鈍化酶；②氯霉素乙酸轉(zhuǎn)移酶；③紅霉素酶和其他滅活酶。第36頁,共66頁，2024年2月25日，星期天3.青霉素結(jié)合蛋白改變，導(dǎo)致對(duì)抗生素的親和力下降。4.藥物作用靶位的改變使抗生素不易結(jié)合產(chǎn)生耐藥性。5.抗菌藥物滲透障礙，如外膜蛋白減少和藥物外排作用等。6.代謝途徑的改變。第37頁,共66頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)

細(xì)菌耐藥性檢測(cè)

一、特殊菌耐藥性表型檢測(cè)（一）耐藥篩選試驗(yàn)：瓊脂篩選試驗(yàn)以單一藥物單一濃度檢測(cè)某種細(xì)菌的耐藥性。在含一定濃度測(cè)試藥物的特殊培養(yǎng)上，點(diǎn)種0.5麥?zhǔn)媳葷岫戎苯泳渑渲萍?xì)菌懸液，35℃孵育24h后觀察平板上是否有菌落生長識(shí)要有1個(gè)菌落生長，均視為耐藥。臨床上常用于對(duì)耐甲氧西林葡萄球菌、耐萬古霉素腸球菌，對(duì)慶大霉素或鏈霉素高水平耐藥的腸球菌的檢測(cè)。第38頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（二）折點(diǎn)敏感試驗(yàn)僅用特定抗生素濃度（敏感、中介或耐藥折點(diǎn)MIC）而不使用測(cè)定MIC時(shí)所用系列對(duì)倍抗生素濃度測(cè)試細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性稱折點(diǎn)敏感試驗(yàn)。當(dāng)選擇區(qū)分中介和耐藥折點(diǎn)值藥物濃度時(shí)，若兩種抗藥物濃度培養(yǎng)基均生長可判斷為耐藥；如在兩種藥物濃度均不生長則為敏感；僅在較低藥物濃度培養(yǎng)基中生長提示為中介。第39頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

（三）雙相紙片試驗(yàn)

挑取血平板上菌落，稀釋成0.5麥?zhǔn)蠞舛染?。均勻涂布于MH平板。中央貼上阿莫西林/克拉維酸紙片，在距該紙片25mm處分別貼頭孢噻肟或頭孢曲松、頭孢他啶和氨曲南等藥敏紙片作為指示劑，35℃孵育18h觀察結(jié)果。若指示劑在朝向阿莫西林/克拉維酸方向有抑菌圈擴(kuò)大的現(xiàn)象（協(xié)同現(xiàn)象），則說明待檢菌產(chǎn)生超廣譜β－內(nèi)酰胺酶。第40頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（四）自動(dòng)化儀器

自動(dòng)化儀器Microscan有測(cè)定抗菌藥物抑菌的MIC值功能。原理是先測(cè)定細(xì)菌對(duì)抗生素的MIC值，當(dāng)頭孢他啶與頭孢他啶十克拉維酸的MIC比值或頭孢噻肟與頭孢噻肟十克拉維酸的MIC比值大于或等于8（即3個(gè)對(duì)倍稀釋度）即判定為此細(xì)菌產(chǎn)生ESBL。第41頁,共66頁，2024年2月25日，星期天二、β－內(nèi)酰胺酶檢測(cè)1.頭孢哨噻吩濾紙片法用接種環(huán)挑取受試菌于商品化頭孢哨噻吩濾紙片上，于10分鐘內(nèi)由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色即陽性結(jié)果，示產(chǎn)色頭孢菌素的

β－內(nèi)酰胺環(huán)被酶打開。第42頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

2.碘淀粉測(cè)定法

用接種環(huán)挑取受試菌混于青霉素溶液中，室溫下振搖30分鐘。加入淀粉液后，再加入碘液，溶液變藍(lán)，繼續(xù)振搖。若檢測(cè)菌產(chǎn)生酶，則可水解青霉素β－內(nèi)酰胺環(huán)變?yōu)榍嗝顾剜邕蛩?，后者與碘結(jié)合，使碘淀粉復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色，10分鐘之內(nèi)藍(lán)色消失者為產(chǎn)酶株。第43頁,共66頁，2024年2月25日，星期天四、特殊耐藥菌檢測(cè)

（一）耐甲氧西林葡萄球菌檢測(cè)1．定義對(duì)1μg苯唑西林紙片的抑菌圈直徑＜

10mm，或其MIC＞4μg／ml的金黃色葡萄球菌；

對(duì)1μg苯唑西林抑菌圈直徑＜17mm，或MIC＞

0．5μg／ml的凝固酶陰性葡萄球菌；

都稱耐甲西林葡萄球菌（MRS）。第44頁,共66頁，2024年2月25日，星期天2．臨床意義MRS不論其體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果，所有的β－內(nèi)酰胺類藥物和β－內(nèi)酰胺／β－內(nèi)酰胺酶抑制劑均無臨床療效；絕大多數(shù)的MRS常示多重耐藥，包括氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類。第45頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（二）耐青霉素肺炎鏈球菌檢測(cè)1.定義當(dāng)對(duì)1μg／ml苯唑西林紙片抑菌圈＜20mm或MIC＞0．06μg／ml互應(yīng)視為耐青霉素肺炎鏈球菌（PRSP）。2.臨床意義PRSP對(duì)氨芐西林、氨芐西林／舒巴坦、頭孢克肟、頭孢唑肟，臨床治療的療效很低。但應(yīng)檢測(cè)對(duì)頭孢曲松、頭孢噻肟和美咯培南的MIC以判斷是否對(duì)這些抗生素敏感。第46頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（三）耐萬古霉素腸球菌檢測(cè)1．定義對(duì)30μg萬古霉素紙片抑菌圈直徑＜14mm或其MIC＞32μg／ml應(yīng)視為耐萬古霉素腸球菌（VRE）。2．臨床意義對(duì)青霉素敏感的VRE可用青霉素和慶大霉素聯(lián)合治療，若對(duì)青霉素耐藥而不是高水平耐氨基糖苷類可用壁霉素＋慶大霉素。第47頁,共66頁，2024年2月25日，星期天（四）超廣譜β－內(nèi)酰胺酶

腸桿菌科細(xì)菌檢測(cè)

1．定義

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶就是能水解青霉素、頭孢菌素及單胺類的酶，主要由克雷伯菌和大腸埃希菌、腸桿菌等細(xì)菌產(chǎn)生。第48頁,共66頁，2024年2月25日，星期天

初篩試驗(yàn)使用1種以上藥物，其抑菌環(huán)直徑滿足以下條件：對(duì)頭孢泊肟、頭孢他啶（10ug／片）抑菌圈≤22mm

或氨曲南、頭孢噻肟（30ug／片）≤27mm

為初篩試驗(yàn)陽性即為產(chǎn)ESBL菌株。

確證試驗(yàn)經(jīng)頭孢他啶（30ug／片）、頭孢他啶／克拉維酸（30／10ug）；

頭孢噻肟30ug、頭孢噻肟／克拉維酸（30／10ug）兩組中任何一組藥物加克拉維酸與不加克拉維酸相比，其抑菌環(huán)增大≥5mm者，判斷為產(chǎn)ESBL菌株。2.試驗(yàn)方法

同K-B法第49頁,共66頁，2024年2月25日，星期天單紙片擴(kuò)散法（初篩試驗(yàn)）

將0.5麥?zhǔn)蠁挝坏拇龣z菌液涂抹于MH瓊脂平板上，稍干后，在瓊脂培養(yǎng)基上貼

頭孢他啶(Ceftazidime,CAZ)、

頭孢噻肟(Cefotaxime,CTX)、

頭孢曲松(Ceftriaxone,CRO)、

氨曲南(Aztreonam,ATM)、

頭孢泊肟(Cefprozil,CPD)紙片，

置35℃過夜培養(yǎng)，若抑菌環(huán)直徑CAZ≤22mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm、ATM≤27mm、CPD≤22mm時(shí)可疑為產(chǎn)ESBLs菌株。第50頁,共66頁，2024年2月25日，星期天雙紙片增效法（確認(rèn)試驗(yàn)）

將0.5麥?zhǔn)蠁挝坏拇龣z菌液涂抹于MH瓊脂平板上，稍干后，在瓊脂培養(yǎng)基上分別貼頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟/克拉維酸、頭孢曲松/克拉維酸、氨曲南/克拉維酸、頭孢泊肟/克拉維酸紙片，置35℃過夜培養(yǎng)后量取抑菌環(huán)直徑，與單紙片平皿對(duì)照，若加克拉維酸紙片較未加克拉維酸紙片抑菌環(huán)直徑≥5mm，即為ESBL陽性。

第51頁,共66頁，2024年2月25日，星期天3．臨床意義產(chǎn)ESBL克雷伯菌和大腸埃希菌不論其體外藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果如何，對(duì)青霉素、頭孢菌素和氨曲南治療無效。第52頁,共66頁，2024年2月25日，星期天第五節(jié)抗分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)

一、抗分枝桿菌藥物第一線藥物為異煙肼、利福平、吡酸胺、乙胺丁醇和鏈霉素；第二線藥物包括對(duì)氨基水楊酸、乙硫異煙胺、環(huán)絲氨酸、卷曲霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素和利福布丁。第53頁,共66頁，2024年2月25日，星期天二、結(jié)核分枝桿菌和緩慢生長分枝桿菌體外抑菌試驗(yàn)

（一）結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)指征首次分離的分枝桿菌需做藥敏試驗(yàn)，有助于合理用藥和監(jiān)測(cè)藥物敏感性。另外經(jīng)過三個(gè)月正規(guī)治療，標(biāo)本分離培養(yǎng)仍為陽性患者，或感染的嚴(yán)重疾患（如播散性結(jié)核病和結(jié)核性腦膜炎）以及來自高耐藥流行區(qū)的患者，均須做體外藥敏試驗(yàn)。第54頁,共66頁，2024年2月25日，星期天1．培養(yǎng)基Middlebrook7H10瓊脂添加油酸、白蛋白、葡聚精觸酶是慢生菌比例法的推薦培養(yǎng)基；2．藥敏試驗(yàn)藥物抗菌藥物直接來自廠商，不能用治療的抗結(jié)核藥物作為試驗(yàn)用藥。藥物原液濃度至少為1000μg/ml，－20℃貯存期6個(gè)月。第55頁,共66頁，2024年2月25日，星期天3．細(xì)菌接種直接比例法藥敏試驗(yàn)采用涂片陽性患者標(biāo)本；接種物是充分消化、無雜菌污染的標(biāo)本,接種菌液的稀釋方法如下：抗酸染色（1000×）未見細(xì)菌，熒光染色（450×）＜25，菌液不稀釋?？顾崛旧?000×）l－10，熒光染色（450×）25－250，菌液稀釋或10－1，10－2。第56頁,共66頁，2024年2月25日，星期天觀察含藥瓊脂格細(xì)菌生長情況用以＋～4＋表示：（＋：50－100個(gè)菌落；2＋：100－200個(gè)菌落；3＋：200－500個(gè)菌落；4＋：500個(gè)以上菌落）。若測(cè)試菌生長數(shù)大于對(duì)照格菌落數(shù)1％，即判讀為耐藥菌。第57頁,共66頁，2024年2月25日，星期天6．質(zhì)量控制結(jié)核分枝桿菌H37RVATCC27294為一線、二線藥的敏感質(zhì)控菌株；H37RVATCC35820為鏈霉素耐藥質(zhì)控菌株；H37RVATCC3582