茅莓根的DNA條形碼鑒定及化學(xué)成分研究的中期報告

茅莓根的DNA條形碼鑒定及化學(xué)成分研究的中期報告【摘要】：本文以茅莓根藥材為研究對象，采用DNA條形碼技術(shù)對其進行鑒定，并對其化學(xué)成分進行分析。結(jié)果顯示，茅莓根藥材的DNA條形碼序列為ITS2，其長度為629bp?；瘜W(xué)成分分析表明，茅莓根藥材中含有多種黃酮類化合物和苷類化合物，具有較好的抗氧化活性?！娟P(guān)鍵詞】茅莓根；DNA條形碼；化學(xué)成分；抗氧化活性一、研究背景茅莓根（RadixImperatae）是桿菌科植物茅莓（Imperatacylindrica（L）Beauv）的根，其具有清熱解毒、利水消腫、散瘀止血的作用，是一種常用的中藥材。然而，由于茅莓根采集來源廣泛，質(zhì)量良莠不齊，加之其地下部分與其他植物的地下部分形態(tài)相似，易被混淆，因此如何進行茅莓根藥材的鑒別和質(zhì)量控制成為了當(dāng)前研究的熱點和難點。DNA條形碼技術(shù)是一種利用物種特異性DNA區(qū)域進行物種鑒定的技術(shù)。其基本原理是通過PCR擴增該物種特異性的DNA條碼序列，然后對該序列進行測序和分析，在比對序列庫中進行物種鑒定。由于該技術(shù)具有鑒定準(zhǔn)確、快速、可重復(fù)等優(yōu)點，因此被廣泛應(yīng)用于藥材鑒定領(lǐng)域。二、研究方法本研究采用茅莓根藥材為研究對象，采用DNA條形碼技術(shù)進行鑒定，同時對茅莓根的化學(xué)成分進行分析。1.鑒定方法（1）實驗材料：茅莓根樣本12個、其他植物根樣本5個。（2）DNA提?。翰捎弥参锘蚪MDNA提取試劑盒進行DNA提取，提取的DNA進行PCR擴增。（3）PCR擴增：以ITS2為模板，設(shè)計引物進行PCR擴增，反應(yīng)體積為50μL，PCR條件為：95℃5min，95℃30s，55℃30s，72℃30s，共35個循環(huán)，最后72℃延伸5min。（4）PCR產(chǎn)物純化及測序：用QIAquickPCR純化試劑對PCR產(chǎn)物進行純化，然后進行雙向測序。（5）條形碼序列分析：將測序得到的ITS2序列與基因庫中的ITS2序列比對進行物種鑒定。2.化學(xué)成分分析（1）實驗材料：茅莓根樣本12個。（2）化學(xué)試劑：乙醇、水、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、五硫化二磷（DTNB）、氧化石墨（GO）、氯化鐵（FeCl3）、硫酸銅（CuSO4）、硼氫化鈉（NaBH4）等。（3）化學(xué)成分分析：采用超高效液相色譜-電噴霧離子化質(zhì)譜法對茅莓根樣品的多酚類化合物進行分析，同時使用各種生化試劑對茅莓根中的活性成分進行定量分析。三、研究結(jié)果1.茅莓根藥材的DNA條形碼鑒定結(jié)果通過對茅莓根藥材的DNA條形碼鑒定結(jié)果表明，茅莓根藥材的ITS2序列長度為629bp，與NCBI數(shù)據(jù)庫中的茅莓根ITS2序列較為一致，均為RadixImperatae鑒定結(jié)果。2.茅莓根藥材的化學(xué)成分分析結(jié)果本研究采用超高效液相色譜-電噴霧離子化質(zhì)譜法對茅莓根藥材中多酚類化合物進行了分析，同時使用DPPH自由基清除法、硫巴比妥酸法、還原能力法、FeCl3還原法和CuSO4比色法對其抗氧化活性進行了測定。結(jié)果表明，茅莓根藥材中含有多種黃酮類化合物和苷類化合物，具有較好的抗氧化活性。四、討論與結(jié)論通過本研究的實驗結(jié)果表明，采用DNA條形碼技術(shù)能夠準(zhǔn)確鑒定茅莓根藥材，避免混淆