




版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
丹馳小伙表演吐火爆火原因以馬原角度看-目錄目錄5.實驗數(shù)據(jù)6.實驗結果7.實驗討論徐佳龍202212211305015掌握電泳分離蛋白質的基本原理掌握醋酸:纖維薄膜電泳分離蛋白質技術實驗原理徐佳龍202212211305015電泳的主要影響因素1)電場強度:越大,移動速度越快2)溶液的PH:等電點,帶電荷數(shù)徐佳龍2022122113050153)溶液的離子強度:|越大,速度越慢;緩沖效果越好,0.02-0.2之間4)電滲現(xiàn)象:液體在電場中相對于固體支持物的相對移動。盡量避免有高電滲作用的支持物3)溶液的離子強度:|越大,速度越慢;緩沖效果越好,0.02-0.2之間4)電滲現(xiàn)象:液體在電場中相對于固體支持物的相對移動。盡量避免有高電滲作用的支持物3)溶液的離子強度:|越大,速度越慢;緩沖效果越好,0.02-0.2之間4)電滲現(xiàn)象:液體在電場中相對于固體支持物的相對移動。盡量避免有高電滲作用的支持物3)溶液的離子強度:|越大,速度越慢;緩沖效果越好,0.02-0.2之間徐佳龍2022122113050154)電滲現(xiàn)象:液體在電場中相對于固體支持物的相對移動。盡量避免有高電滲作用的支持物蛋白質在不同溶液中電離帶電情況不同PH=Pl時為等電點血清中各種蛋白質電場中的移動速度不同PH=Pl時為等電點血清中各種蛋白質電場中的移動速度不同1.等電點不同,在同一pH下帶電數(shù)量不同2.各蛋白質的分子大小有差別分子小而帶電荷多的蛋白質泳動較快徐佳龍202212211305015蛋白質名稱等電點pl分子質量占總蛋白的百分數(shù)%清蛋白4.886750057.45~71.73α1-球蛋白5.002000001.76~4.48α2-球蛋白5.063000004.04~8.28β-球蛋白5.129000~1500006.79~11.39γ-球蛋白6.85~7.50156000~30000011.18~22.97分子大而帶電荷少的蛋白質泳動較慢可將血清中的蛋白質分離成數(shù)條區(qū)帶血清蛋白質等電點徐佳龍202212211305015醋酸纖維素薄膜電泳1234561)以醋酸纖維薄膜(CAM)作支持物的一種區(qū)帶電泳技術,將血清樣品點樣于醋纖膜上,在pH8.6的緩沖液中電泳,血清蛋白質均帶負電荷移向正極2)電泳后,CAM經染色和漂洗,可清晰呈現(xiàn)清蛋白、a1、a2、
β、7-球蛋白5條區(qū)帶,還可將色帶分別溶于堿溶液再進行比色測定,從而計算出血清蛋白的百分含量醋酸纖維素薄膜電泳1)以醋酸纖維薄膜(CAM)作支持物的一種區(qū)帶電泳技術,將血清樣品點樣于醋纖膜上,在pH8.6的緩沖液中電泳,血清蛋白質均帶負電荷移向正極2)電泳后,CAM經染色和漂洗,可清晰呈現(xiàn)清蛋白、a1、a2、
β、7-球蛋白5條區(qū)帶,還可將色帶分別溶于堿溶液再進行比色測定,從而計算出血清蛋白的百分含量徐佳龍202212211305015醋酸纖維素薄膜電泳1)以醋酸纖維薄膜(CAM)作支持物的一種區(qū)帶電泳技術,將血清樣品點樣于醋纖膜上,在pH8.6的緩沖液中電泳,血清蛋白質均帶負電荷移向正極2)電泳后,CAM經染色和漂洗,可清晰呈現(xiàn)清蛋白、a1、a2、
β、7-球蛋白5條區(qū)帶,還可將色帶分別溶于堿溶液再進行比色測定,從而計算出血清蛋白的百分含量3.實驗材料與試劑(一)材料:血清(冰箱)(二)試劑:巴比妥緩沖液(pH8.6,
離子強度0.075)、染色液、漂洗液(三)器材:醋酸纖維素薄膜、培養(yǎng)皿、電泳儀、鑷子、載玻片3.實驗材料與試劑徐佳龍202212211305015(一)材料:血清(冰箱)(二)試劑:巴比妥緩沖液(pH8.6,
離子強度0.075)、染色液、漂洗液(三)器材:醋酸纖維素薄膜、培養(yǎng)皿、電泳儀、鑷子、載玻片3.實驗材料與試劑(一)材料:血清(冰箱)(二)試劑:巴比妥緩沖液(pH8.6,
離子強度0.075)、染色液、漂洗液(三)器材:醋酸纖維素薄膜、培養(yǎng)皿、電泳儀、鑷子、載玻片3.實驗材料與試劑(一)材料:血清(冰箱)徐佳龍202212211305015NEXT(二)試劑:巴比妥緩沖液(pH8.6,
離子強度0.075)、染色液、漂洗液(三)器材:醋酸纖維素薄膜、培養(yǎng)皿、電泳儀、鑷子、載玻片4.實驗步驟1)準備電泳槽:將電泳槽洗凈后分別倒入等體積的巴比妥緩沖液2)制作濾紙橋:在電泳槽的兩個膜支架上,各放兩層濾紙條并使濾紙一端長邊與支架前沿對齊,另一端浸入電泳緩沖液中,待濾紙完全潤濕后,用玻璃棒輕輕擠壓濾紙驅趕氣泡使得濾紙一端緊貼膜支架,即為濾紙橋3)浸泡與點樣:將2.5cmX8cm醋酸纖維素薄膜條置于巴比妥緩沖液中完全浸透30min后取出,吸干后平放大濾紙上,在無光澤面進行點樣點樣時用毛細管吸取血清,在蓋玻片一端均勻涂抹,樣品連續(xù)、均勻、適量,把蓋玻片在薄膜毛面.上輕而溫和地印一下(蓋章法),點樣區(qū)距陰極端1.5cm。點樣后待血清滲入薄膜后,將薄膜兩端緊貼在濾紙橋上,點樣面朝下,加蓋,平衡1~2min后,通電徐佳龍202212211305015NEXT4)電泳:調節(jié)電壓140V,電流0.5mA/cm,時間45~60min4.實驗步驟1)準備電泳槽:將電泳槽洗凈后分別倒入等體積的巴比妥緩沖液2)制作濾紙橋:在電泳槽的兩個膜支架上,各放兩層濾紙條并使濾紙一端長邊與支架前沿對齊,另一端浸入電泳緩沖液中,待濾紙完全潤濕后,用玻璃棒輕輕擠壓濾紙驅趕氣泡使得濾紙一端緊貼膜支架,即為濾紙橋3)浸泡與點樣:將2.5cmX8cm醋酸纖維素薄膜條置于巴比妥緩沖液中完全浸透30min后取出,吸干后平放大濾紙上,在無光澤面進行點樣點樣時用毛細管吸取血清,在蓋玻片一端均勻涂抹,樣品連續(xù)、均勻、適量,把蓋玻片在薄膜毛面.上輕而溫和地印一下(蓋章法),點樣區(qū)距陰極端1.5cm。點樣后待血清滲入薄膜后,將薄膜兩端緊貼在濾紙橋上,點樣面朝下,加蓋,平衡1~2min后,通電4)電泳:調節(jié)電壓140V,電流0.5mA/cm,時間45~60min徐佳龍2022122113050154.實驗步驟1)準備電泳槽:將電泳槽洗凈后分別倒入等體積的巴比妥緩沖液2)制作濾紙橋:在電泳槽的兩個膜支架上,各放兩層濾紙條并使濾紙一端長邊與支架前沿對齊,另一端浸入電泳緩沖液中,待濾紙完全潤濕后,用玻璃棒輕輕擠壓濾紙驅趕氣泡使得濾紙一端緊貼膜支架,即為濾紙橋3)浸泡與點樣:將2.5cmX8cm醋酸纖維素薄膜條置于巴比妥緩沖液中完全浸透30min后取出,吸干后平放大濾紙上,在無光澤面進行點樣點樣時用毛細管吸取血清,在蓋玻片一端均勻涂抹,樣品連續(xù)、均勻、適量,把蓋玻片在薄膜毛面.上輕而溫和地印一下(蓋章法),點樣區(qū)距陰極端1.5cm。點樣后待血清滲入薄膜后,將薄膜兩端緊貼在濾紙橋上,點樣面朝下,加蓋,平衡1~2min后,通電4)電泳:調節(jié)電壓140V,電流0.5mA/cm,時間45~60min徐佳龍2022122113050154.實驗步驟1)準備電泳槽:將電泳槽洗凈后分別倒入等體積的巴比妥緩沖液2)制作濾紙橋:在電泳槽的兩個膜支架上,各放兩層濾紙條并使濾紙一端長邊與支架前沿對齊,另一端浸入電泳緩沖液中,待濾紙完全潤濕后,用玻璃棒輕輕擠壓濾紙驅趕氣泡使得濾紙一端緊貼膜支架,即為濾紙橋3)浸泡與點樣:將2.5cmX8cm醋酸纖維素薄膜條置于巴比妥緩沖液中完全浸透30min后取出,吸干后平放大濾紙上,在無光澤面進行點樣點樣時用毛細管吸取血清,在蓋玻片一端均勻涂抹,樣品連續(xù)、均勻、適量,把蓋玻片在薄膜毛面.上輕而溫和地印一下(蓋章法),點樣區(qū)距陰極端1.5cm。點樣后待血清滲入薄膜后,將薄膜兩端緊貼在濾紙橋上,點樣面朝下,加蓋,平衡1~2min后,通電4)電泳:調節(jié)電壓140V,電流0.5mA/cm,時間45~60min徐佳龍2022122113050154.實驗步驟1)準備電泳槽:將電泳槽洗凈后分別倒入等體積的巴比妥緩沖液2)制作濾紙橋:在電泳槽的兩個膜支架上,各放兩層濾紙條并使濾紙一端長邊與支架前沿對齊,另一端浸入電泳緩沖液中,待濾紙完全潤濕后,用玻璃棒輕輕擠壓濾紙驅趕氣泡使得濾紙一端緊貼膜支架,即為濾紙橋3)浸泡與點樣:將2.5cmX8cm醋酸纖維素薄膜條置于巴比妥緩沖液中完全浸透30min后取出,吸干后平放大濾紙上,在無光澤面進行點樣點樣時用毛細管吸取血清,在蓋玻片一端均勻涂抹,樣品連續(xù)、均勻、適量,把蓋玻片在薄膜毛面.上輕而溫和地印一下(蓋章法),點樣區(qū)距陰極端1.5cm。點樣后待血清滲入薄膜后,將薄膜兩端緊貼在濾紙橋上,點樣面朝下,加蓋,平衡1~2min后,通電4)電泳:調節(jié)電壓140V,電流0.5mA/cm,時間45~60min徐佳龍2022122113050154.實驗步驟1)準備電泳槽:將電泳槽洗凈后分別倒入等體積的巴比妥緩沖液2)制作濾紙橋:在電泳槽的兩個膜支架上,各放兩層濾紙條并使濾紙一端長邊與支架前沿對齊,另一端浸入電泳緩沖液中,待濾紙完全潤濕后,用玻璃棒輕輕擠壓濾紙驅趕氣泡使得濾紙一端緊貼膜支架,即為濾紙橋3)浸泡與點樣:將2.5cmX8cm醋酸纖維素薄膜條置于巴比妥緩沖液中完全浸透30min后取出,吸干后平放大濾紙上,在無光澤面進行點樣點樣時用毛細管吸取血清,在蓋玻片一端均勻涂抹,樣品連續(xù)、均勻、適量,把蓋玻片在薄膜毛面.上輕而溫和地印一下(蓋章法),點樣區(qū)距陰極端1.5cm。點樣后待血清滲入薄膜后,將薄膜兩端緊貼在濾紙橋上,點樣面朝下,加蓋,平衡1~2min后,通電4)電泳:調節(jié)電壓140V,電流0.5mA/cm,時間45~60min徐佳龍2022122113050154.實驗步驟1)準備電泳槽:將電泳槽洗凈后分別倒入等體積的巴比妥緩沖液2)制作濾紙橋:在電泳槽的兩個膜支架上,各放兩層濾紙條并使濾紙一端長邊與支架前沿對齊,另一端浸入電泳緩沖液中,待濾紙完全潤濕后,用玻璃棒輕輕擠壓濾紙驅趕氣泡使得濾紙一端緊貼膜支架,即為濾紙橋3)浸泡與點樣:將2.5cmX8cm醋酸纖維素薄膜條置于巴比妥緩沖液中完全浸透30min后取出,吸干后平放大濾紙上,在無光澤面進行點樣點樣時用毛細管吸取血清,在蓋玻片一端均勻涂抹,樣品連續(xù)、均勻、適量,把蓋玻片在薄膜毛面.上輕而溫和地印一下(蓋章法),點樣區(qū)距陰極端1.5cm。點樣后待血清滲入薄膜后,將薄膜兩端緊貼在濾紙橋上,點樣面朝下,加蓋,平衡1~2min后,通電4)電泳:調節(jié)電壓140V,電流0.5mA/cm,時間45~60min徐佳龍2022122113050155)染色:電泳完畢,調節(jié)旋鈕使電流為零,關閉電源后用鑷子將薄膜取出,直接浸入氨基黑染色液中5
min,取出后.用漂洗液漂洗3~4次,每次3~5min,直至背景藍色脫盡,取出后晾干5.實驗數(shù)據(jù)15.實驗數(shù)據(jù)6.實驗結果26.實驗結果血清蛋白albuminα1-globulinα2-globulin
β-globulin
y-globulin圖2血清蛋白醋酸纖維電泳標注圖7.實驗討論37.實驗討論實驗結果:五條條帶清晰明顯,充分證明分子小而帶電荷多的蛋白質泳動較快分子大而帶電荷少的蛋白質泳動較慢,將血清中的蛋白質分離成數(shù)條區(qū)帶注意事項:1.點樣時不要沾得太多血清,用點樣器輕輕點2.薄膜放入電泳槽時,點樣端靠近負極端,點樣面朝下,保證薄膜平整3.點樣線不能放在電泳橋上,點樣端放橋內側思考題:1)為什么蛋白質電泳需要支持介質?支持介質起
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025年青海省安全員-B證考試題庫及答案
- 2025-2030年中國電熱水器產業(yè)市場發(fā)展前景與投資趨勢分析報告
- 長春工業(yè)大學人文信息學院《BM安裝工程計量》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 南昌理工學院《現(xiàn)代控制》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 昆明幼兒師范高等??茖W?!督鹑趯W前沿動態(tài)》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 信陽農林學院《臺港暨海外華文文學研究》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 西安體育學院《大數(shù)據(jù)機器學習》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 濰坊工商職業(yè)學院《機器學習實驗》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 廣東信息工程職業(yè)學院《UML及形式化建?!?023-2024學年第二學期期末試卷
- 山西旅游職業(yè)學院《化工原理(Ⅰ)》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 飲酒與糖尿病
- 大學體育與健康 教案 保?。ò硕五\)4
- 非遺資源數(shù)據(jù)庫建設
- 銀屑病診療指南2024
- (高清版)DB43∕T 1734-2020 快開門式壓力容器聯(lián)鎖裝置安全技術要求
- 2024年安防監(jiān)控系統(tǒng)技術標準與規(guī)范
- 出生醫(yī)學證明警示教育培訓
- DB11-T 2324-2024腳手架鋼板立網防護應用技術規(guī)程
- 供應鏈資源開發(fā)年終總結
- 作業(yè)區(qū)鐵路專用線工程項目可行性研究報告
- 金礦探礦權合作協(xié)議書范文范本
評論
0/150
提交評論