22.6其他組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)講解

第二十二章

免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)知識目標(biāo)1.掌握：免疫組化技術(shù)的定義、基本過程、抗原的修復(fù)方法（重難點(diǎn)），抗體的選擇和保存；酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色（直接、間接法）的原理，熒光免疫組化標(biāo)本類型和保存。2.熟悉：免疫組化標(biāo)本來源、固定于保存，結(jié)果判斷；非標(biāo)記酶免疫組化的常見類型及原理、親和組織化學(xué)技術(shù)的定義及分類（重點(diǎn)）。3.了解：常見親和組織化學(xué)技術(shù)的原理、優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握抗原的修復(fù)方法，免疫組化標(biāo)本的采集、固定于保存、結(jié)果判斷。思政-素質(zhì)目標(biāo)責(zé)任心、質(zhì)控、生物安全意識、臨床免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)目錄概述一免疫組化技術(shù)基本知識二酶免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)四親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)五其他免疫組織化檢驗(yàn)技術(shù)六其他免疫組織化檢驗(yàn)技術(shù)六一、金免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學(xué)活性沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如SPA)等作為探針，能對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位或定量研究。（一）免疫金（銀）光鏡染色技術(shù)

基本原理是通過免疫反應(yīng)沉積在抗原位置的膠體金顆粒起著一種催化劑作用，用對苯二酚還原劑將銀離子(Ag＋)還原成銀原子(Ag)，被還原的銀原子圍繞金顆粒形成一個“銀殼”，“銀殼”一旦形成，本身亦具有催化作用，從而使更多銀離子還原并促使“銀殼”不斷變大，最終使抗原位置得到更清楚的放大，在光鏡下就可觀察到被放大的抗原位置呈現(xiàn)黑色或黑褐色。

（二）免疫金電鏡染色技術(shù)膠體金與鎳網(wǎng)上待檢標(biāo)本的相應(yīng)蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合，由于膠體金具有高電子密度，故金標(biāo)蛋白結(jié)合處，電鏡下可見黑褐色顆粒，從而可對細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)進(jìn)行定性與定位分析。二、酶標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)

酶標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)是用酶標(biāo)抗體與組織或細(xì)胞抗原發(fā)生特異性結(jié)合后，加酶底物顯色，在電鏡下觀察顯色反應(yīng)的強(qiáng)度。它是將電鏡的高分辨力與酶免疫技術(shù)的特異性結(jié)合，在亞細(xì)胞和超微結(jié)構(gòu)水平上對抗原物質(zhì)進(jìn)行定性分析的一種高度精確、靈敏的方法。

三、免疫膠體鐵細(xì)胞組織化學(xué)技術(shù)

膠體鐵是一種陽離子膠體，將抗體分子標(biāo)記上膠體鐵，通過普魯藍(lán)反應(yīng)呈色，膠體鐵顆粒有一定大小和電子密度，可用在電鏡和光鏡水平的抗原（抗體）的定位研究。1.掌握免疫組化技術(shù)的定義、基本過程、抗原的修復(fù)方法（重難點(diǎn)），抗體的選擇和保存；酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色（直接、間接法）的原理，熒光免疫組化標(biāo)本類型和保存。2.熟悉免疫組化標(biāo)本來源、固定于保存，結(jié)果判斷；非標(biāo)記酶免