微生物檢驗(yàn)技術(shù)考試要點(diǎn)整理中級(jí)樣本

檢查技術(shù)資格考試考點(diǎn)精要——微生物學(xué)檢查（中級(jí)）1.生物學(xué)按界門綱目科屬種分類，種是最小單位。病毒分類：目、科、亞科、屬、種。屬名--VRirus結(jié)尾單詞,亞科名--VRirinae結(jié)尾單詞,科名--VRiridae結(jié)尾單詞。目名—VRirales。ICTV發(fā)布病毒分為：73個(gè)科、11個(gè)亞種、289個(gè)屬。2.結(jié)核菌可運(yùn)用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流感嗜血桿菌要Ⅴ，Ⅹ因子才干生長。3.藥物敏感實(shí)驗(yàn)：紙碟法、小杯法、凹孔法、試管法。慣用單片紙碟法、試管稀釋法（以抗菌藥物最高稀釋度仍能抑制細(xì)菌生長或殺菌管為終點(diǎn)，該管含藥濃度為最低抑菌濃度MIC或最低殺菌濃度MBC），兩值越低則表達(dá)越敏感。MIC與抑菌圈呈負(fù)有關(guān)，即抑菌環(huán)直徑越大，MIC越小。各藥敏紙片間距不少于24mm，距平板內(nèi)緣不不大于15mm。藥物敏感實(shí)驗(yàn)鑒定原則：抑菌圈直徑（毫米）：20以上極敏、15~20高敏、10~14中敏、10如下低敏。不同菌株、不同抗生素紙片需參照NCCLs原則或者CLSI原則。多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上為高敏，6—9毫米為低敏，無抑菌圈為不敏。4.慣用免疫技術(shù)：酶免疫技術(shù)（EIA）、協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)（IF）、對流免疫電泳（CIE）、免疫印跡技術(shù)。5.病原菌核酸檢測：核酸雜交、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)。PCR技術(shù)—是選取DNA或RNA體外擴(kuò)增技術(shù)，用標(biāo)本提取DNA為擴(kuò)增模板，選用一對特異寡核苷酸為引物，PCR普通要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，經(jīng)不同溫度變性93-94℃（作用1min氫鍵斷裂形成單鏈DNA）、退火40-60℃（迅速冷卻30-60s引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈）、延伸70-75℃（在TaqDNA聚基因芯片技術(shù)（DNA芯片、DNA微陣列）—重要過程：DNA微陣列制備、、靶分子和探針之間雜交、雜交信號(hào)檢測與分析。具備迅速、敏感、高通量檢測平臺(tái)。核酸雜交（基因探針雜交技術(shù)）--是指單鏈RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，依照堿基配對原則，借氫鍵相連而形成雜交分子過程。雜交百分率＞70%（≥69%）為高度同源性，同源性在60%以上是一種種，同源性在60%--70%是同一種內(nèi)不同亞種，同源性在20%--60%同一屬內(nèi)不同菌種，同源性20%≤不同屬菌種。AFLP含義是擴(kuò)增片段長度多態(tài)性。有很大功能DNA指紋技術(shù)。一種是罕見切割酶，一種是慣用切割酶。具備RFLP技術(shù)可靠性和PCR技術(shù)高效性。6.細(xì)菌診斷流程有：雙岐索引法，表解法，數(shù)字編碼鑒定法。致病性島：由基因編碼決定一團(tuán)與致病性有關(guān)基因組。7.病原細(xì)菌擬定原則：（郭霍Koch原則）1、從一種疾病病人中能有規(guī)律地發(fā)現(xiàn)一種細(xì)菌2、可以分離這種細(xì)菌獲得純培養(yǎng)3、把這種細(xì)菌培養(yǎng)物引入易感動(dòng)物體內(nèi)，可以引起與病人類似疾病4、在實(shí)驗(yàn)感染引起疾病中依然可以分離同一種細(xì)菌。8.桿菌肽用于A（敏感）與非A群鏈球菌鑒定。O/129抑菌實(shí)驗(yàn)對弧菌有用而對氣單胞菌無用。9.奧普托欣實(shí)驗(yàn)：肺炎鏈球菌敏感。10.雜交分：斑點(diǎn)，菌落原位，Southern（DNA）印跡，Northern（RNA，DNA）印跡。11.L型細(xì)菌：細(xì)胞壁缺陷（形態(tài)多樣，染色不定，可過濾，滲入壓敏感，生化削弱等）培養(yǎng)應(yīng)高滲入壓（3-5%氯化鈉、20%蔗糖），瓊脂濃度0.5如下半固體培養(yǎng)基。染色多為G染陰性，形態(tài)不一（巨球形是特性），固定要用10g/L鞣酸不能用火焰。增殖：以二分裂、出芽、巨形體釋放顆粒方式。普通菌落有：油煎蛋樣（L），顆粒型（G），絲狀菌落（F），鑒定要點(diǎn)：染色易變多形性，生長在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或沿試管壁生長，返祖現(xiàn)象。致病特點(diǎn)：慢性和重復(fù)發(fā)作性感染，致病物質(zhì)是毒素。L型細(xì)菌在體內(nèi)體外都可形成。原生質(zhì)體與原生質(zhì)球都是細(xì)胞壁缺陷細(xì)菌。12.細(xì)菌突變：基因突變（又稱點(diǎn)突變；有堿基對置換、插入、或缺失、錯(cuò)碼）、染色體畸變（易位、倒位、重復(fù)、缺失）。突變：自發(fā)突變、誘發(fā)突變。質(zhì)粒在細(xì)菌自發(fā)突變中起重要作用。細(xì)菌質(zhì)粒在重組DNA技術(shù)中慣用載體。質(zhì)粒分離提純使用酚解決，用乙醇沉淀。13.噬菌體--是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物病毒，具備病毒基本特性，專性胞內(nèi)寄生，有嚴(yán)格宿主特異性。由核酸和蛋白質(zhì)構(gòu)成。大多數(shù)DNA噬菌體DNA為線狀雙鏈（有尾噬菌體核酸）；RNA噬菌體RNA為線狀單鏈（無尾噬菌體核酸為環(huán)狀單鏈DNA或線狀單鏈RNA）。對紫外線敏感10-15分鐘失去活性。噬菌體分毒性噬菌體、溫和噬菌體（溶原性噬菌體）；毒性噬菌體以復(fù)制方式增殖，過程吸附、穿入、生物合成、成熟與釋放，少脫殼。在液體培養(yǎng)基中使混濁菌液變澄。14.肽聚糖構(gòu)造由聚糖骨架，四肽側(cè)鏈和五肽交聯(lián)橋（G－無交聯(lián)橋）。磷壁酸為G＋特有，分壁和膜兩種。外膜層由脂多糖，脂質(zhì)雙層，脂蛋白構(gòu)成。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有核蛋白體（蛋白合成地），核質(zhì)（重要遺傳物質(zhì)）質(zhì)粒，胞質(zhì)顆粒，是細(xì)菌蛋白質(zhì)和酶類合成重要場合。鞭毛是由細(xì)胞質(zhì)伸出蛋白性絲狀物。性菌毛僅有1～10根，毒力和耐藥質(zhì)粒都能通過它轉(zhuǎn)移，有致病性。15.免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾和黏膜免疫系統(tǒng)。免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板。免疫分子：補(bǔ)體、免疫球蛋白、細(xì)胞因子中樞免疫器官：骨髓、胸腺、鳥類法氏囊。外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾和粘膜有關(guān)淋巴組織特異性免疫：體液免疫、細(xì)胞免疫。體液免疫：（B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，CD4+Th輔助，Th2細(xì)胞能分泌細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10）；效應(yīng)是抗體（Ab）；1、病毒中和抗體（不能直接滅活病毒，IgG、IgM、IgA）2、血凝抑制抗體（HLAb）3、補(bǔ)體結(jié)合抗體。IgG在體液中含量最多，分子量小是唯一能通過胎盤抗體。IgM分子量大，是最早產(chǎn)生抗體，中作初期診斷。IgA存在黏膜分泌液中，在局部可制止病毒侵入，能抵抗蛋白酶水解作用，具局部抗體。IgE可與肥大細(xì)胞膜上Fc受體結(jié)合。補(bǔ)體C：存在血清中，不耐熱，可輔助特異性抗體介導(dǎo)溶菌作用，是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞作用必要補(bǔ)充條件。由9種成分，11種蛋白構(gòu)成。補(bǔ)體激活兩個(gè)途徑：老式途徑（一）被Ag-Ab免疫復(fù)合物IC活化，順序C1、C4、2C、3C、5C、6C、7C、8C、C9。旁路途徑（二）被細(xì)胞脂多糖激活。補(bǔ)體激活酶促級(jí)連反映。細(xì)胞免疫（T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，效應(yīng)細(xì)胞：細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）、CD4+Th1細(xì)胞、CD8+毒性T細(xì)胞CTL）。Th1細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反映（DTH）16.測特異性抗原最慣用實(shí)驗(yàn)：17.細(xì)菌營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)方式有：離子，透性酶，磷酸酶。營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體方式：易化擴(kuò)散、積極運(yùn)轉(zhuǎn)（由透性酶完畢）、基團(tuán)移位（糖類由磷酸酶磷酸化進(jìn)入胞內(nèi)，不能再透出菌體）。18.細(xì)菌生長繁殖條件:充分營養(yǎng)、適當(dāng)溫度、適當(dāng)酸堿度、必要?dú)怏w環(huán)境。細(xì)菌生長溫度極限-7--90℃：嗜冷菌最適溫為10～20℃，嗜溫菌為20～40℃，嗜熱菌為50～60℃19.（腸道桿菌）細(xì)菌四種生化反映：吲哚（I）、甲基紅（M）、VP（V）、枸櫞酸鹽運(yùn)用（C），合稱為IMViC。大腸桿菌呈++--，產(chǎn)氣桿菌呈--++。還需做糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，KIA產(chǎn)酸產(chǎn)氣，MIU＋――，有菌體（O）莢膜（K）鞭毛（H）三抗原。腸桿菌科分型多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽實(shí)驗(yàn)?？梢删謩e接種克氏雙糖鐵（KIA）尿素靛基質(zhì)動(dòng)力（MIU）來定屬。細(xì)菌代謝所需能量重要以生物氧化作用而來。細(xì)菌新陳代謝產(chǎn)物：熱原質(zhì)、毒素與酶、色素、抗生素、細(xì)菌素。熱原質(zhì)除去最佳辦法蒸餾。內(nèi)毒素（G-脂質(zhì)A）、外毒素（G+產(chǎn)生毒性蛋白質(zhì)產(chǎn)物，具備抗原性強(qiáng)、毒性強(qiáng)、作用特異性強(qiáng)、不耐熱、人工化學(xué)可脫毒性，0.4%甲醛脫毒后形成類毒素進(jìn)行人工免疫）。據(jù)親和性及作用靶點(diǎn)分為:神經(jīng)毒素、細(xì)胞毒素、腸毒素。細(xì)菌內(nèi)毒素普通由：脂質(zhì)A（重要成分），非特異性核心多糖，菌體特異性多糖。普通7～10天后機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。IgG和IgM能在血中直接中和病毒。熱原質(zhì)：脂多糖，多由G-產(chǎn)生，耐20.細(xì)胞壁作用：承受胞內(nèi)高滲壓、支持細(xì)胞膜、維持細(xì)菌形態(tài)；是鞭毛運(yùn)動(dòng)支點(diǎn)。細(xì)胞壁重要成分：肽聚糖（又稱黏肽、胞壁質(zhì)），是原核生物特有成分，能破壞肽聚分子構(gòu)造或抑制其合成物質(zhì)，均有抑菌和殺菌作用。G-菌細(xì)胞壁重要成分：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（類脂A、核心多糖、特異性多糖），菌體脂多糖（LPS）能引起發(fā)熱故稱熱原質(zhì)，又稱為細(xì)菌內(nèi)毒素。細(xì)胞膜重要功能：物質(zhì)納泄、生物合成、呼吸作用、形成中介體。細(xì)胞質(zhì)中異染顆粒重要成分：RNA、多偏磷酸鹽22.紫外線波長265～266nm時(shí)殺菌力最強(qiáng)。日光燈波長約0.5μm。23.濾菌器用于除菌孔徑是0.22μm，此外以石棉板為濾板金屬濾器稱Seitz濾器（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EK-S最小，可制止大病毒通過EK：居中，除去普通細(xì)菌。玻璃濾菌器分G1～G6，G5，G6兩型能制止細(xì)菌通過。24.高壓滅菌批示物：嗜熱脂肪芽胞桿菌（ATCC7053），紫外線殺菌批示物：枯草芽胞桿菌黑色變種（ATCC9372）。25.細(xì)菌遺傳物質(zhì)重要在于染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子中。質(zhì)粒：不依賴染色體而復(fù)制，不相容性，轉(zhuǎn)移性，指令性，大多數(shù)質(zhì)粒在自然狀態(tài)下是一種閉合環(huán)狀雙鏈DNA。重要有耐藥質(zhì)粒，Col質(zhì)粒（編碼腸毒素）Vi質(zhì)粒（編碼細(xì)菌與致病性關(guān)于蛋白）。轉(zhuǎn)位因子為存在于細(xì)菌染色體或質(zhì)粒上一特異核苷酸序列可在DNA中移動(dòng)，重要有三類：插入順序（最小轉(zhuǎn)位因子），轉(zhuǎn)座子，轉(zhuǎn)座噬菌體。質(zhì)粒載體具備特點(diǎn)：復(fù)制起點(diǎn)、抗菌素抗性基因、各種限制酶單一切點(diǎn)、較高拷貝數(shù)26.病毒特性：1、只含一種核酸2、基因組復(fù)制3、缺少完整酶系統(tǒng)4、RNA病毒RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA（CDNA）。甘油（10％）或10%二甲基亞砜血清作懸浮細(xì)胞液體在液氮中保存細(xì)胞，在干冰溫度（-70℃）和液態(tài)氮溫度（-196℃）下長期保存其感染性；將凍存在小管或安瓿里細(xì)胞以較慢冷凍速率（1℃／分鐘）冷凍，直至—150℃，再將這些小管貯存在—150～－196℃液氮中，解凍做法是：將封口小管迅速放入27.超凈工作臺(tái)應(yīng)采用層流技術(shù)凈化空氣、選取垂直氣流通風(fēng)方式。干凈度可達(dá)百級(jí)，只保護(hù)樣品。28.菌體蛋白電離后帶負(fù)電荷；而堿性染料電離時(shí)染料離子帶正電。29.染色程序及辦法：制片→固定→媒染→染色→脫色→復(fù)染→水洗→干燥→鏡檢。革蘭染色法：初染（草酸銨結(jié)晶紫）、媒染（碘液）、脫色（95%酒精）、復(fù)染（番紅）?？顾崛旧ǎ?%石炭酸復(fù)紅、5%鹽酸酒精脫色、美蘭復(fù)染。芽胞染色：菌懸液→孔雀綠→水浴15-20分鐘→涂片→干燥→固定→水洗脫色→番紅或稀釋石炭酸復(fù)紅復(fù)染→水洗→晾干莢膜染色：（負(fù)染色法、墨水法）。負(fù)染色法：制片（蒸餾水+菌）→干燥（晾干）→染色（復(fù)紅）→水洗→干燥（晾干）→涂墨素。背景灰色、菌體紅色、莢膜無色透明鞭毛染色鍍銀法；媒染A液—10%單寧酸10ml+5ml飽和硫酸鉀鋁水溶液+1ml苯胺飽和水溶液+5%氯化鐵水溶液成墨色。銀染B液—5%硝酸銀+濃氨水（比重0.88）成薄霧狀。制片（蒸餾水+菌）→干燥（晾干）→染色（A液3—5分鐘）→水洗→干燥（晾干）→染色（B液稍加熱分30—60秒）→水洗→干燥（晾干）。菌體深褐色、鞭毛褐色。30.病毒吸附蛋白（VAP）；血凝素（HAs）。病毒復(fù)制周期：吸附、穿入、脫殼、生物合成及組裝、成熟和釋放31.病毒突變株分：條件致死性突變株，空斑和宿主依賴性。遺傳型變異機(jī)制有突變，基因轉(zhuǎn)移，重組。突變：突變率由復(fù)制精確度，DNA發(fā)生損傷機(jī)會(huì)，及對損傷DNA修復(fù)限度來決定。32.非特異性免疫：干擾素（IFN）、NK細(xì)胞。干擾素（IFN）--具備廣譜抗病毒作用，只能抑制病毒，即通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)。33.小淋巴細(xì)胞分為：T細(xì)胞、B細(xì)胞、K細(xì)胞。T細(xì)胞來自骨髓，在胸腺成熟。在人體血液中T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)60—70%，；在胸導(dǎo)管則占95%以上。B細(xì)胞第一種合成產(chǎn)物是u鏈。34.堿基置換：嘌呤換嘌呤，嘧啶換嘧啶為轉(zhuǎn)換，嘌呤換嘧啶為顛換。影響基因表達(dá)因素有：調(diào)控部位，調(diào)節(jié)蛋白，效應(yīng)分子。35.轉(zhuǎn)化：受體菌直接攝取供體菌提供游離DNA片段，整合重組（與染色體重組）使受體菌性狀發(fā)生變異。普通有鏈，嗜血，芽胞菌有此功能。36.G＋菌等電點(diǎn)pI=2～3，G－菌等電點(diǎn)pI=4～5。RNA重要存在于細(xì)胞質(zhì)中占細(xì)菌干重10%，DNA存在于染色體和質(zhì)粒中。G+菌感受態(tài)是由感受態(tài)因子（CF）胞外信號(hào)誘導(dǎo)。37.轉(zhuǎn)導(dǎo)：38.接合：39.溶源性轉(zhuǎn)換：是噬菌體DNA與細(xì)菌染色體重組，使宿主遺傳構(gòu)造發(fā)生變異。40.原生質(zhì)融合：兩種通過解決失去細(xì)胞壁原生體混合和可發(fā)生融合后雙倍體可發(fā)生染色體間重組。41.基因重組可使基因再激活體現(xiàn)為：交叉復(fù)活和多重復(fù)活。42.粘附素是細(xì)菌表面蛋白質(zhì)有菌毛和非菌毛。進(jìn)入宿主：黏附，定植，侵入，轉(zhuǎn)歸。毒力有侵襲力和毒素。43.侵襲力：菌體表面構(gòu)造，菌毛，侵襲性酶（凝固酶，透明質(zhì)酸酶，鏈激酶，膠原酶等）。是指病原突破宿主機(jī)體防御功能，并能在體內(nèi)定居、繁殖和擴(kuò)散能力。45.細(xì)菌種科學(xué)命名采用拉丁文種屬雙命名法，前一字為屬名，名詞，后一為種名，形容詞。當(dāng)前國際上普遍采用伯杰分類系統(tǒng)，也有用CDC（USA）。當(dāng)前以細(xì)菌細(xì)胞壁構(gòu)造特點(diǎn)作最高一級(jí)分類根據(jù)將原核界分為薄，堅(jiān)，軟，疵壁四門?？疲瑢?，種分類重要依托生化特性和抗原構(gòu)造。46.顯微鏡分辯率為波長一半。熒光顯微鏡光源為超高壓汞燈（50—200W）。47.油浸物鏡工作距離普通是0.2mm。普通光學(xué)顯微鏡不能觀測細(xì)胞和細(xì)菌亞構(gòu)造。相差顯微鏡特殊裝置—--環(huán)狀光闌、相板，運(yùn)用光干涉現(xiàn)象。合用于對活體細(xì)胞生活狀態(tài)下生長、運(yùn)動(dòng)、增殖狀況、及細(xì)微構(gòu)造觀測。用綠色濾光片。48.不能立即接種血應(yīng)用SPS（氯化鈉溶液）抗凝。懷疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時(shí)血培養(yǎng)不少于三次。49.腸桿菌科強(qiáng)選取（SS瓊脂）弱選?。‥MB，麥康凱）。50.直接鏡檢2h報(bào)告，最后鑒定和藥敏普通但是3天，除血外，必要在24h內(nèi)預(yù)報(bào)53.α溶血是草綠色，β溶血是透明環(huán)，γ溶血紅細(xì)胞不溶解，雙環(huán)。54.細(xì)菌數(shù)量達(dá)106~107CFU/ml時(shí)培養(yǎng)肉湯才見混濁。55.血培養(yǎng)中有105菌落形成單位（CFU）/ML時(shí)才干通過革蘭氏染色檢出細(xì)菌。56.AMS系統(tǒng)是當(dāng)前微生物鑒定中最慣用自動(dòng)化儀器。57.突變種純系動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常染色體中某個(gè)基因發(fā)生了變異具備各種遺傳缺陷突變品系動(dòng)物。58.純***動(dòng)物：無籌劃隨意交配動(dòng)物。近交系動(dòng)物：采用兄妹交配（或親子交配）繁殖20代以上純品系動(dòng)物。無菌動(dòng)物：體表腸道內(nèi)無菌、體內(nèi)無抗體。悉生動(dòng)物：給出無菌動(dòng)物引入已知5～17種正常腸道菌動(dòng)物。59.小白鼠對肺鏈，破傷外毒素敏感，豚鼠對結(jié)核白喉易感，貓對金葡萄菌腸毒敏感。測定病原體感染性最佳選用無菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物。60.菌種保存：“凍干”保存—穩(wěn)定劑（脫脂乳、蔗糖）。凍干菌種只能使用一次，凍干菌種打開后需要以傳代保存形式保存工作菌種。凍干菌種在使用時(shí)須“復(fù)蘇”且須傳代才干恢復(fù)原生長特性。低溫保存：-20℃或-80℃61.在細(xì)菌生長到足夠量時(shí)加入抑制蛋白質(zhì)合成抗生素，在細(xì)菌停止繁殖后質(zhì)粒還在復(fù)制，可以提高質(zhì)粒收獲量。62.糞便嘔吐物應(yīng)接種高鹽卵黃或高鹽甘露醇瓊脂，觸酶陽性，凝固酶陽性玻片法篩選，試管法確證。必要做苯唑西林敏感實(shí)驗(yàn)。63.真菌，霍亂，銅綠及糞堿需在室溫保存，而腦膜炎，淋球，初次分離流感嗜血菌保存于37℃65.葡萄球菌：產(chǎn)生脂溶性色素，多數(shù)分解甘露醇產(chǎn)酸液化明膠和產(chǎn)生血漿凝固酶。蛋白抗原（A蛋白）種屬特異無型特異，多糖抗原（A，B，C）是半抗原，有型特異。是抵抗力最強(qiáng)無芽胞菌。66.布魯司菌：無鞭無芽G-呈散沙狀，S型有莢膜，專性需氧，抵抗力強(qiáng)，37℃，PH6.6～6.8，血液、血清、肝浸液可增進(jìn)生長，48小時(shí)形成微小，無色透明光滑凸起菌落。6個(gè)種19個(gè)生物型，對人致病是羊、牛、豬種。血清凝集實(shí)驗(yàn)（SAT）是慣用診斷實(shí)驗(yàn)，虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)（RBPT），補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT）、免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFT）等。靜脈血3—5毫升。用肝浸液瓊脂培養(yǎng)基、蛋白胨、土豆浸液瓊脂等。動(dòng)物分離診斷原則：血清試管凝集實(shí)驗(yàn)（SAT）1：100++以上，補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT）：1；10++67.萊姆病原：伯道疏螺旋體引起萊姆病，細(xì)胞構(gòu)造：原生質(zhì)柱、表層、外膜、鞭毛。微嗜氧G-，能自身合成類脂化合物、重要脂肪酸，并將嘌呤堿結(jié)合到核酸中，但不能合成長鏈脂肪酸，發(fā)展酵代謝產(chǎn)物乳酸。蜱傳播媒介，鼠重要宿積極物，標(biāo)本在-20—4℃標(biāo)本制成懸液，暗視野顯微鏡20×10或40×10下檢查。病原分離：接種BSK培養(yǎng)基33℃68.鉤端螺旋體：原核細(xì)胞型微生物，雙股DNA。需氧或微需氧，是致病性螺旋體中唯一能人工培養(yǎng)。其中鼠類和豬為重要傳染源和儲(chǔ)存宿主，通過人皮膚黏膜侵入。慣用柯夫培養(yǎng)基或EMJH培養(yǎng)基，需加入10%兔血清或牛血清，培養(yǎng)液透明有輕度乳光，搖動(dòng)時(shí)有云霧狀混濁。G-Fontana鍍銀染色成棕色。對酸堿敏感，最適是PH7.2～7.5，低于6.8，高于7.7生長不良，最適溫28～30℃標(biāo)本：血液、腦脊液在發(fā)病后10天內(nèi)，浮現(xiàn)發(fā)熱但未用藥前，不能即時(shí)送檢，血液用不含枸櫞酸鈉抗凝5-20℃病原鑒定：血清群用顯微凝集實(shí)驗(yàn)（MAT），血清型用交叉凝集吸取實(shí)驗(yàn)，分子生物學(xué)技術(shù)。69.致病性鏈球菌：沉淀生長（肺鏈為混濁），在含腹水培養(yǎng)物上生長良好，溶血株呈絮狀或顆粒狀生長，不溶血株呈均勻混濁生長。（一）化膿性鏈球菌：標(biāo)本1天內(nèi)送，不超過2天。THB增菌肉湯、5%脫纖維羊血胰酶消化大豆瓊脂培養(yǎng)基，血液和腦脊液應(yīng)先增菌后接種平板，膿液、咽拭子直接種于血平板。A群鏈對桿菌肽敏感青霉素G為首選，抑環(huán)＞10cm敏感。(90%對人致病)B群鏈CAMP實(shí)驗(yàn)陽性（鑒定指標(biāo)35℃D群鏈七葉甘水解實(shí)驗(yàn)變黑色為陽性，6.5%氯化鈉生長實(shí)驗(yàn)(黃色)迅速檢測:酶標(biāo)免疫測定法、PCR（A群鏈致熱外毒素A，B，C基團(tuán)speA，speB，speC各溶血素O基團(tuán)slo）?？谷苎豋抗體溶血法、膠乳凝集法。（二）肺炎鏈球菌：37.5℃pH7.4—7.6初次CO2卵育，在含3%～5%兔血清中生長良，血平板上草綠色a溶血環(huán)。如G+具備矛頭狀雙球菌可初步診斷。培養(yǎng)時(shí)間過長會(huì)自溶管底澄清，以奧普托欣實(shí)驗(yàn)、分解菊糖，膽汁溶菌陽性區(qū)別于甲型溶血性鏈球菌。重要抗原有：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核蛋白抗原。膽汁溶菌實(shí)驗(yàn)0.5ml生理鹽水細(xì)胞懸液制成相稱于0.取細(xì)胞懸液0.25ml+0.25ml2%脫氧膽酸35--37℃培養(yǎng)2小時(shí)，管液清澈或濁氨基糖苷類合用，β溶鏈致病性最強(qiáng)，α溶鏈為條件致病菌。幾乎所有肺鏈對Optochin敏感。（三）豬鏈球菌：人感染致?。耗X膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、中毒性休克。35個(gè)血清型。2型致病其屬于R群，屬特異基團(tuán)tuf、種特異基團(tuán)16SrRNA70.腸球菌屬：能在高鹽（6.5%NaCl）高堿（pH9.6）40%膽汁培養(yǎng)基上和10～45℃71.腦膜炎奈瑟菌：腦液中位于中性細(xì)胞內(nèi)，大多能分解葡萄糖、麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，具備氧化酶和觸酶。能產(chǎn)生自溶菌不適當(dāng)冰箱應(yīng)及時(shí)保溫送檢，冬末春初為流行高峰，青霉素G為首選。根據(jù)莢膜分13個(gè)血清型，重要是ABC三個(gè)血清型及W135、Y。普通采3管腦脊液（化學(xué)、微生物、細(xì)胞學(xué)）含添加劑巧克力平板（CAP）和血瓊脂平板（BAP），如不能及時(shí)接種，，則接種至預(yù)熱35℃轉(zhuǎn)運(yùn)—鏡檢：腦脊液r/min離心20分鐘，沉淀物鏡檢腦膜炎雙球菌常在多核白細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外。病原鑒定：Kovac氧化酶實(shí)驗(yàn)10秒內(nèi)呈紫色陽性反映。迅速檢測：乳膠凝集實(shí)驗(yàn)測抗原。上清液可—20度凍存長時(shí)間。72.淋球奈瑟菌：G-人類是唯一天然宿主和傳染源。不耐干燥，35—36℃，2.5—5%CO2生長,最適pH7.5，對糖類生化最低只能發(fā)酵葡萄糖，重要有菌毛蛋白，脂多糖，外膜蛋白抗原。細(xì)菌培養(yǎng)是當(dāng)前世衛(wèi)推薦唯一辦法，用培養(yǎng)法查女病人宮頸口表面分泌物。培養(yǎng)基中應(yīng)含萬古霉素、多粘菌素B。73.梅毒病原：菌體形似彈簧，運(yùn)動(dòng)活潑，兩端尖直，有細(xì)胞壁和膜，原生質(zhì)圓柱體且有3-4根周漿鞭毛，G-抵抗力極弱，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素、砷劑敏感。標(biāo)本：Ⅰ期梅毒取下疳滲出液（20分鐘內(nèi)查）；Ⅱ梅毒取梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)抽出液；先天性梅毒取臍血；神經(jīng)梅毒取腦脊液。鏡檢：新鮮標(biāo)本加蓋片暗視野顯微鏡下檢查，漿液不能具有紅細(xì)胞、微生物、組織碎片。熒光標(biāo)記、ELISA普光下查，鍍銀染色螺旋體染成棕褐色光鏡下查。病原分離：人工培養(yǎng)基上不易生長，接種兔睪丸或眼前房內(nèi)繁殖，并能保持毒力。34-35℃抗體檢測：產(chǎn)生特異性抗體、反映素抗體（表面脂質(zhì)引起），有非密螺和密螺抗原實(shí)驗(yàn)。初篩實(shí)驗(yàn)和療效觀測非密螺抗原實(shí)驗(yàn)，正常牛心肌心脂質(zhì)為抗原測患者血清中反映素，判斷與否復(fù)發(fā)及再感染。最慣用VDRE、RPR實(shí)驗(yàn)。VDRE以膽固醇為載體。玻片凝集可定性和半定量，低倍觀測。RPR用未解決活性炭顆粒吸附VDRE抗原。專用紙片圈內(nèi)（18mm）可定性和半定量。密螺抗原實(shí)驗(yàn)（證明實(shí)驗(yàn)）FTA-ABS作為診斷梅毒“金原則”實(shí)驗(yàn)。它是間接熒光抗體檢測辦法，75.腸產(chǎn)毒型（ETEC）：作用小腸，霍亂樣腸毒腹瀉，是5歲如下嬰幼兒和旅游者腹瀉重要病原菌；腸毒素有耐熱和不耐熱，LT-Ⅰ是引起人類重要致病物質(zhì)，對熱不穩(wěn)定，65℃腸致病型（EPEC）：作用小腸，水樣腹瀉，是嬰兒腹瀉重要病原菌。腸侵襲性型（EIEC）：作用大腸，志賀樣腹瀉，很像菌痢，發(fā)熱腹痛膿血便及里急后重。腸出血型（EHEC）：腸集聚型（EAggEC）：嬰兒和旅游者腹瀉持續(xù)性水樣腹瀉。76.志賀氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鮑氏（C群）（半透明、光滑型菌落），宋內(nèi)（D群）（扁平粗糙型菌落）四群，國內(nèi)以福氏和宋內(nèi)常用，無莢無芽無鞭，KIA：K/A，產(chǎn)氣＋/－，H2S－，MIU－＋/――，最后可用診斷血清作群型鑒定群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鳥氨酸脫羧酶痢疾志賀菌A1-10+福氏B1-6+-+-鮑氏C1-18+-+-宋內(nèi)D1+-++只有一種血清型，Ⅰ相和Ⅱ相加熱60℃測志賀菌侵襲力用Sereny實(shí)驗(yàn)，接種于豚鼠眼結(jié)膜囊內(nèi)。迅速診斷：1、免疫染色法2、免疫熒光菌法3、協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn)4、膠乳凝集實(shí)驗(yàn)5、分子生物學(xué)辦法77.傷寒與副傷寒菌：無芽無莢有鞭毛（除雞沙門）多數(shù)有菌毛，H2S可陽性，傷寒菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，菌體抗原有58種，鞭毛抗原有兩相即特異性和共同，表面抗原有Vi，M，5三種，變異有：S-R，H-O，v-w，相位。傷寒沙門菌、甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌、希氏沙門菌。所致疾病4類型：（1）、腸熱癥：第一次菌血癥，發(fā)熱、不適、全身痛，與菌感染劑量關(guān)于，普通潛伏期為2周，第二次菌血癥，高熱7-10天，緩脈、肝脾腫大，皮膚浮現(xiàn)玫瑰疹，外周白細(xì)胞明顯下降，嚴(yán)重者有出血或腸穿孔等并發(fā)癥。（2）、胃腸炎（食物中毒）：由攝入大量＞108被鼠傷寒沙門菌(常引起食物中毒)、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌污染食物引起。致病機(jī)制：細(xì)菌釋放內(nèi)毒素。發(fā)熱、惡寒、嘔吐、腹痛、水樣腹瀉。（3）、敗血癥：4、無癥狀帶菌者：標(biāo)本：第1-2周采血，接種于室溫＞20℃病原鑒定：凡符合克氏雙糖鐵（KIA）斜面或三糖鐵（TSI）：不發(fā)酵乳糖、蔗糖，發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖甘露醇，產(chǎn)氣＋/－，H2S＋，吲哚尿素V-P均－，硝酸鹽還原陽性，多價(jià)血清陽性為沙門屬。尿素酶實(shí)驗(yàn)與變形桿菌區(qū)別。胞內(nèi)寄生菌，臨床上重要為不明因素持續(xù)發(fā)熱。尿素半固體（MIU）。A-F群沙門菌（O）多價(jià)血清作玻片凝集，陽性則選用O2、O4、O7、O9因子定群。血清學(xué)診斷：肥達(dá)實(shí)驗(yàn)，普通傷寒沙門菌O凝集效價(jià)＞1：80、H＞1：160，副傷寒H＞1：160具備診斷意義。新一代疫苗：傷寒Vi莢膜多糖疫苗。78.變形桿菌屬：普通，奇異，產(chǎn)黏。普羅威登斯屬有：產(chǎn)堿，斯氏，雷極，摩根菌只有摩氏摩根菌。有明顯多形性，呈球狀或絲狀，生長于10～43℃，在固體培養(yǎng)基上普通和奇異呈遷徙生長現(xiàn)象，三屬氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陽性G-桿菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使終濃度為1g/L和0.25%可抑制變形菌遷徒樣生長。79.耶爾森氏菌（鼠疫）：有7種，鼠疫，假結(jié)核，小腸與致病關(guān)于。帶有3種質(zhì)粒，重要致病決定基因由質(zhì)粒和染色體上毒力島編碼。鼠疫耶爾森：有莢無芽無鞭，兩極濃染，28～30℃，pH6.9～7.1，液體中培養(yǎng)好，底部可有鐘乳石樣，慣用1%溶血胰酶消化肉瓊脂（赫氏瓊脂）加入亞硫酸鈉或脫纖維血有刺激生長，用腐敗材料分離，培養(yǎng)基中加入甲紫、膽酸鈉抑制雜菌，小腸耶爾森：無動(dòng)無芽無莢G－，25℃有動(dòng)力，有周鞭毛，最適溫20～28℃，VP實(shí)驗(yàn)25℃陽性，37℃陰性，KIA只運(yùn)用葡萄糖，MIU22℃動(dòng)力陽性37℃陰性。假結(jié)核：25典型鼠疫“四步檢查”：顯微鏡檢查（美蘭染色）、培養(yǎng)、鼠疫噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)（初期為暗黃灰色表面粗糙顆粒樣突起，在血培養(yǎng)上有花邊狀薄而透明不整潔邊沿菌落。48小時(shí)為灰白色中央突起菌落，）、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（小鼠、豚鼠）。迅速檢測；PCR（高度特異性基因：fra、pla、inu、hms）、免疫檢測（F1抗原）所有疑似鼠疫病人都需采用血標(biāo)本，疑似腺鼠疫病人取腫大淋巴結(jié)穿剌液；肺鼠疫病人取咳痰、咽拭子標(biāo)本。80.枸櫞酸桿菌：有弗勞地，異型，無丙二酸鹽。只有弗勞地靛基質(zhì)－，H2S＋，僅異型丙二酸鹽＋，β-半乳糖苷酶，賴氨酸脫羧酶，枸櫞酸運(yùn)用三實(shí)驗(yàn)：枸櫞酸菌＋－＋，沙門－/＋＋＋，愛德華－＋－。81.膠體金標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域：免疫層析技術(shù)。其長處標(biāo)記物非常穩(wěn)定。82.細(xì)菌明膠液化實(shí)驗(yàn)原理某些細(xì)菌產(chǎn)生胞外酶-明膠酶，能使明膠分解為氨基酸而液化。氧化酶實(shí)驗(yàn)--用于腸桿菌科與假單胞菌鑒別。膽汁溶菌實(shí)驗(yàn)--用于肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌鑒別ONPG實(shí)驗(yàn)—遲緩分解乳糖細(xì)菌實(shí)驗(yàn)為陽性。83.沙雷菌：最適溫10～36℃85.霍亂菌：呈弧狀或逗點(diǎn)狀，米泔樣糞便作懸滴觀測，細(xì)菌呈穿梭樣或流星狀運(yùn)動(dòng)；糞便涂片鏡檢見排列如“魚群”狀G－菌，耐堿不耐酸，可繁殖pH6.0-9.2。最適當(dāng)生長pH7.2-7.4。血清分型可分為AB小川型，AC稻葉型，ABC彥島型病原分離：水樣便直接接種在硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽鹽－蔗糖平板（TCBS）上37℃形成較大黃菌落，在含亞碲酸鉀或慶大霉素平板選取性平板上呈灰褐色。食品及水樣慣用堿性蛋白胨水增菌培養(yǎng)后再接種，鈉離子可剌激生長，但在＞8%NaACI中不生長。慣用保存或運(yùn)送及增菌用病原鑒定：O1群無芽胞，無莢膜，單一鞭毛；O139群菌體周邊有一層比較薄莢膜。測定耐熱特異性O(shè)抗原，用玻片凝集或ELISA鑒定，血清效價(jià)1：40-1：50。不耐熱非特異性H抗原，有兩個(gè)環(huán)狀染色體，即染色體1、染色體2。進(jìn)一步鑒定：流行株與非流行株依托噬菌體生物分型法。噬菌體（VP1-VP5）將埃爾托型霍亂弧菌提成32個(gè)噬菌體型。依照溶原性、溶原噬菌體敏感性、山梨醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)，將埃爾托型霍亂弧菌提成a-l共12個(gè)生物型。常用流行株為噬菌體1-3型，生物型a-d型，常用有：la、lb、ld。產(chǎn)毒基因鑒定：用PCR檢測ct基因，流行株常帶有霍亂腸毒素。免疫檢測：霍亂為腸為非侵襲性細(xì)菌，重要剌激局部黏膜產(chǎn)生分泌性AgA抗體，同步大量毒素及細(xì)菌脂多糖體產(chǎn)生使機(jī)體產(chǎn)生抗毒和抗菌抗體?；謴?fù)期帶菌者是指臨床癥狀消失后3個(gè)月內(nèi)帶菌者，恢復(fù)期帶菌時(shí)間普通不超過2周，健康帶菌者排菌時(shí)間普通不超過7天。86.副溶血弧菌：嗜鹽性弧菌（與霍亂明顯區(qū)別），是國內(nèi)沿海地區(qū)最常用食物中毒病原菌，兩極濃染，NaCl最適35g/L，無鹽不長，pH7.0～9.5，最適pH7.7，不耐熱，不耐酸，在TCBS上不發(fā)酵蔗糖菌落綠色，＞80g/L鹽內(nèi)不長，神奈川現(xiàn)象（β溶血），KP+87.氣單胞菌最適生長溫度30℃，但在0～4588.彎曲菌屬是一類微需氧菌，不分解糖，氧化酶+，菌體彎曲逞豆點(diǎn)狀，S狀或螺旋狀有動(dòng)力G－菌，5種5亞種，對人致病重要是空腸彎曲菌（人類腹瀉最常用之一，43℃生長，2589.幽門螺桿菌（HP）：慣用布氏培養(yǎng)基或腦心浸液血瓊脂加入5～10%羊血和馬血，在（85%N、10%CO2、5%O2）條件下，37℃3—7天，長成針尖狀半透明菌落，加入萬古霉素、TMP、兩性霉素B等構(gòu)成抑菌劑防止雜菌生長。與十二脂腸潰瘍、胃癌、胃淋巴瘤發(fā)病關(guān)于。傳染源重要是人，糞-口途徑。標(biāo)本：胃黏膜活檢組織；病原鑒定：生物特性是具備大量高活性尿素酶，迅速分解尿素，氧化酶＋、觸酶＋，具備堿性磷酸酶、r-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性，硝酸鹽還原＋，可生長于5%甘氨酸、0.04%氯化三苯四氮唑培養(yǎng)基中，三糖鐵中不產(chǎn)生硫化氫，微需氧5～8%，37℃生長，25℃和42迅速檢測：尿素呼吸實(shí)驗(yàn)簡樸快捷，可以特異地診斷HP現(xiàn)癥感染，敏感性高。重要采用13C、14C（放射性同位素）標(biāo)記尿素，13C用于小朋友和孕婦。90.《伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)分類》原則：G染特性，形態(tài)，鞭毛，芽胞，莢膜，代謝產(chǎn)物。91.有芽胞厭氧菌：只有梭菌屬涉及83個(gè)種。厭氧菌每克糞中高達(dá)1012個(gè)，標(biāo)本絕不能被正常菌污染，應(yīng)盡量避免接觸空氣。最抱負(fù)標(biāo)本是組織，送到實(shí)驗(yàn)室后20～30min內(nèi)解決完不超過2h。應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基，應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min以驅(qū)氧并及時(shí)冷卻。每份標(biāo)本至少接種三個(gè)血平板，置于有氧，無氧，5%～10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)。厭氧手套箱培養(yǎng)法是迄今最佳厭氧培養(yǎng)儀器之一。92.厭氧狀態(tài)批示劑有：美藍(lán)和刃天青，無氧時(shí)白色，有氧時(shí)美藍(lán)藍(lán)色，刃天青粉紅色。紫外線下浮現(xiàn)熒光也是厭氧菌參照之一，卡那霉素用于梭桿菌與類桿菌區(qū)別，甲硝唑用于厭氧菌和非厭氧菌區(qū)別。氣液相色譜已成為鑒定厭氧菌及其分類比較可靠辦法。93.破傷風(fēng)桿菌：鼓槌狀，初期培養(yǎng)G＋，48h后特別是芽胞形成后G－，O和H抗原，重要癥狀為骨骼肌痙攣，不發(fā)酵糖類，能液化明膠產(chǎn)H2S。產(chǎn)生兩種外毒素：破傷風(fēng)溶血素、破傷風(fēng)痙攣毒素94.產(chǎn)氣莢膜梭菌：G＋，20～50℃均能生長，最適為45℃，雙層溶血，可分解糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，浮現(xiàn)洶涌發(fā)酵現(xiàn)象，分5型，重要是A型，外毒素以A毒素為主，本質(zhì)是卵磷脂酶（α毒素），在蛋黃95.肉毒梭菌：G+，芽胞膠囊于次極端呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀，嚴(yán)格厭氧，8型，以A，B多見，毒素不耐熱，1min煮沸即死。96.無芽胞厭氧菌是一大類正常菌群，引起感染是內(nèi)源性感染。97.白喉棒狀桿菌：為放線菌，G+，無莢無芽無鞭無毛，奈瑟（Neisser）染色成黃褐色，一端或兩端染成藍(lán)色或深藍(lán)色顆粒即異染顆粒，阿培特（Albert）染色菌體呈藍(lán)綠色，異染顆粒成藍(lán)黑色。分離培養(yǎng)：棉拭子取咽喉部、鼻腔、皮膚病變部位，血平板，呂氏血清斜面（生長迅速，乳白色，S型，形態(tài)典型），哥倫比亞血培養(yǎng)基及亞碲酸鉀血瓊脂（48小時(shí)以上，菌落黑色，篩選鑒別）。白喉毒素是一種毒性強(qiáng)、抗原性強(qiáng)蛋白質(zhì)，B-棒狀桿菌噬菌體毒素基因（tox+）編碼蛋白質(zhì)，PCR擴(kuò)增tox+基因輔助診斷不能確診。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)（EleK平板實(shí)驗(yàn)）檢測產(chǎn)生白喉外毒素，是診斷白喉核心實(shí)驗(yàn)。細(xì)菌普通不侵入血，但外毒素可入血引起毒血癥，不能及時(shí)送檢時(shí)應(yīng)浸于無菌生理鹽水或15%甘油鹽水中。浮現(xiàn)各種心肌炎，軟腭麻痹是白喉晚期死亡重要因素。（白喉類毒素、百日咳菌苗、破傷風(fēng)類毒素混合疫苗DPT）98.百日咳鮑特菌：專性需氧，慣用包-姜培養(yǎng)基（含青霉素G）細(xì)小S銀灰色不透明珍珠狀菌落，在加血培養(yǎng)基上,周邊有狨毛狀狹窄溶血環(huán)，液體培養(yǎng)基中混濁生長。菌落常S-R相變異，Ⅰ相S型，Ⅱ、Ⅲ相過渡型，Ⅳ相R型。有百日咳毒素，絲狀血細(xì)胞凝聚素和腺嘌呤環(huán)化毒素。細(xì)菌不進(jìn)入血流。臨床分為3個(gè)期：1、卡她期2、痙咳期3、恢復(fù)期。根據(jù)菌落性狀及凝集實(shí)驗(yàn)確診?？乖蠵T、FHA，重要用ELISA辦法。可獲持久免疫力咳碟法：包-姜培養(yǎng)基（含青霉素G）置10cm使飛沫直射于培養(yǎng)基上，37℃鼻咽拭子法：如不能及時(shí)接種可放入0.3毫升PH7.2—7.41%蛋白胨生理鹽水中2小時(shí)內(nèi)檢99.TBE-Tris硼酸緩沖液，長時(shí)間電泳選用。MIC-最小抑菌濃度101．決定細(xì)菌形態(tài)因素：培養(yǎng)基成分、PH、培養(yǎng)時(shí)間、溫度。直接觀測細(xì)菌超微構(gòu)造：超薄切片技術(shù)、電子顯微鏡。102.芽胞：在80℃水中迅速死亡，在100衛(wèi)生毒理學(xué)1．外源化學(xué)物在體內(nèi)生物轉(zhuǎn)運(yùn)：吸取、分布、代謝、排泄四階段?；瘜W(xué)毒物在體內(nèi)代謝分為兩相：Ⅰ反映氧化、還原、水解；Ⅱ反映與體內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)?zāi)浚鹤畲鬅o作用劑量、最大耐受劑量估測閾劑量。（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動(dòng)物）慢性毒性實(shí)驗(yàn)?zāi)浚鹤钚∮凶饔脛┝?、閾劑量、最大未觀測到有害作用劑量（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動(dòng)物）危害性評(píng)價(jià)構(gòu)成：認(rèn)定、描述、接觸評(píng)估、特性分析毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：第一階段：急性毒性實(shí)驗(yàn)。第二階段：遺傳毒性實(shí)驗(yàn)。第三階段：亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)。第四階段：慢性毒性實(shí)驗(yàn)和致癌實(shí)驗(yàn)GB19489—《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用規(guī)定》分級(jí)：危害級(jí)別Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。生物安全防護(hù)水平（BSL-1、2、3、4）。生物安全柜一級(jí)：可保護(hù)工作人員和環(huán)境。生物安全柜二級(jí)：分A1、A2、B1、B2可保護(hù)工作人員、環(huán)境、樣品。生物安全柜三級(jí)：2．普通光學(xué)顯微鏡：最高辨別率0.2um,不能觀測細(xì)菌亞構(gòu)造3．暗視野顯微鏡：辨別率0.02-0.04um,載玻片厚度1.0mm、蓋玻片0.17mm4．熒光顯微鏡：5．滴定管精度為0.2—0.1ml,微量滴定管精度為0.005ml。微量吸管5—1000ul。培養(yǎng)皿分：5、7.5、9、10cm蛋白質(zhì)、核酸提取及有關(guān)設(shè)備一、蛋白質(zhì)分離純化實(shí)驗(yàn)室慣用鹽析法（硫酸銨）。核酸純化酚、氯仿抽提制備細(xì)胞外膜蛋白超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)。大多數(shù)限制內(nèi)切酶使用溫度37℃，保存溫度是-20二、層析凝膠過濾法（分子篩層析法）重要用于蛋白或核酸分離。介質(zhì)：葡聚糖。過濾中先洗脫是大分子物質(zhì)，后小分子物質(zhì)。原理：纖維素或凝膠介質(zhì)帶電荷不同。三、檢測儀1、分光光度計(jì)及檢測物質(zhì)分光光度計(jì)波長nm比色皿檢測細(xì)菌濃度可見分光光度計(jì)600玻璃測定顏色可見分光光度計(jì)450檢測蛋白紫外分光光度計(jì)280石英檢測核酸紫外分光光度計(jì)260石英2、紫外透射儀：暗室紫外線下看DNA條帶。3、測序儀：蛋白測序儀測定氨基酸排列順序DNA測序儀測核苷酸排列順序。物質(zhì)是；質(zhì)粒、噬菌體、PCR產(chǎn)物4、擴(kuò)增儀：能做PCR稱DNA擴(kuò)增數(shù)5、酶標(biāo)儀：二、電泳類：用于原理聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）蛋白質(zhì)、核酸分離十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）蛋白分離聚丙烯酰胺濃度越大，線性分離范疇越小。十二烷基硫酸鈉作用是解離蛋白，慣用蛋白染料--考馬斯亮藍(lán)，甘氨酸—緩沖瓊脂免疫電泳蛋白分離和鑒定脈沖電場凝膠電泳（PFGE）核酸分離用瓊脂糖作介質(zhì)。為正交交變脈沖電場；條帶接近負(fù)極為大片段DNA，接近正極為小片段DNA。DNA染色用溴化乙錠（EB）或硝酸銀。（分析大分子物質(zhì)）瓊脂糖凝膠電泳核酸分離與純化1%瓊脂糖作支持介質(zhì)，有“分子篩”和“電泳”雙重作用。用水平電泳槽，充分分離DNA片段最佳范疇200bp-50kb等電聚焦電泳（IFE）蛋白質(zhì)分離以兩性電解質(zhì)制造凝膠有不同PH，使帶不同電荷多肽在電泳條件下于等電點(diǎn)停留。用聚丙烯酰胺制備等電聚焦電泳凝膠。濃縮效應(yīng)、辨別率高、重復(fù)性好、用時(shí)少對流免疫電泳（CIE）測定抗體或抗原緩沖液是PH8.6巴比妥液，使抗原抗體均帶負(fù)電，抗原向正泳，抗體電滲作用向負(fù)泳。火箭電泳測抗原量交叉定量免疫電泳醋酸纖維膜電泳免疫球蛋白鑒定變性聚丙烯酰胺凝膠單鏈（DNA或RNA）片段分離與純化四、迅速斑點(diǎn)免疫金滲濾法（滴金免疫法）：屬于慣用膠體金技術(shù)。辦法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑和標(biāo)本滴加在膜上，通過滲濾而逐漸反映，全程可于數(shù)分鐘內(nèi)完畢，陽性在膜上呈紅色斑點(diǎn)?；驹硎情g接法或夾心法免疫膠體金技術(shù)用于檢測：抗原、半抗原、抗體ATCC是指美國典型培養(yǎng)物保藏中心。MPS單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，又稱巨噬細(xì)胞系統(tǒng)。玻片凝集反映2-3分鐘當(dāng)作果；試管凝集反映18—24小時(shí)當(dāng)作果；沉淀反映72小時(shí)當(dāng)作果；補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT）30分鐘當(dāng)作果過濾式微生物采樣器依照過濾材料不同有：薄膜過濾器、玻璃纖維過濾器、凝膠過濾器、谷氨酸堿過濾器。病毒分子生物學(xué)鑒定：病毒核酸和蛋白質(zhì)測定。蛋白質(zhì)使用--免疫測定技術(shù)、電泳技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)；核酸使用—探針技術(shù)、雜交技術(shù)、聚合酶鏈反映技術(shù)構(gòu)建基因組文庫，初始DNA長度須在90kb以上。純化mRNA在70%乙醇中可保存1年以上。絕大多數(shù)Ⅱ類限制酶辨認(rèn)長度為4或6個(gè)核苷酸。為獲得條帶清晰DNA電流圖譜DNA用量為0.5—1.0ug.在酶切圖譜制作過程中,分離鑒定和純化DNA片段原則辦法聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、瓊脂糖凝膠電泳。普通水平電泳制備染色體DNA酶切圖譜時(shí)，DNA電泳遷移率對數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系，分離＜0.5kbDNA片段所需膠濃度是1.2%-1.5%，分離＞10kbDNA片段所需膠濃度是0.3%-0.7%，在低電壓時(shí)，線狀DNA片段遷移率與所加電壓成正比，電壓增長，瓊脂糖凝膠有效分離范疇將縮小。要使＞2kbDNA片段分辯率達(dá)到最大，所加電壓不得超過5V/cm。細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)基：1、營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨、肉浸汁和牛肉膏、糖醇類、血液、動(dòng)物血清與雞蛋、無機(jī)鹽類、生長因子。二、水分。三、凝固物：瓊脂、明膠、卵蛋白及血清瓊脂：成分為多糖，賦形物。固培養(yǎng)基2—3%，半固培養(yǎng)基0.2—0.5%明膠:主含蛋白質(zhì),24℃以上溶解,20四、抑制劑：五、批示劑：酚紅、溴甲酚紫、中性紅、甲基紅、溴香草酚藍(lán)、中華人民共和國藍(lán)、酸性復(fù)紅等酸堿批示劑；美藍(lán)氧化還原批示劑。普通培養(yǎng)基高壓121℃，1培養(yǎng)螺旋體慣用培養(yǎng)基Korthof，溫度28℃MPN法稀釋培養(yǎng)測數(shù)法。適當(dāng)測定土壤中微生物中特定生理群?；罹?jì)數(shù)最精確辦法傾注平板計(jì)數(shù)法。最快細(xì)菌計(jì)數(shù)辦法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法?？瞻咝纬蓴?shù)PFU國內(nèi)最早實(shí)驗(yàn)室生物安全衛(wèi)生行業(yè)原則是：微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用守則。8月1日實(shí)行。國內(nèi)第一部實(shí)驗(yàn)室生物安全國標(biāo)是：《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用規(guī)定》。10月1日執(zhí)行。WHO制定生物安全指南：《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊》11月出版第3版。細(xì)菌生化反映實(shí)驗(yàn)糖醇類代謝實(shí)驗(yàn)：糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、甲基紅實(shí)驗(yàn)、V-P實(shí)驗(yàn)、葡萄糖氧化/發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（O/F實(shí)驗(yàn)）、七葉苷水解實(shí)驗(yàn)、B-半乳糖苷滲入酶實(shí)驗(yàn)。糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)原理：多糖→單糖→丙酮酸→酸性產(chǎn)物（或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）→PH下降→批示劑呈酸性變色。蛋白質(zhì)類代謝實(shí)驗(yàn)：靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)、硫化氫實(shí)驗(yàn)、苯丙氨脫氨實(shí)驗(yàn)、尿素酶實(shí)驗(yàn)雙糖：葡萄糖、乳糖；三糖：葡萄糖、乳糖、蔗糖；雙糖高層斜面發(fā)酵管：葡萄糖/乳糖=1：10三糖鐵與雙糖鐵區(qū)別：TI-Ag特點(diǎn)：非胸腺依托性抗原,不需T細(xì)胞輔助即可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。少數(shù)Ag屬此類。如細(xì)菌多糖、聚合鞭毛蛋白等。共同特點(diǎn)：TI-Ag刺激機(jī)體產(chǎn)生Ab僅是免疫球蛋白M，不引起回憶應(yīng)答，不引起細(xì)胞免疫。鑒定腸桿菌科基本條件；發(fā)酵葡萄糖、氧化酶陰性、還原硝酸鹽。

核酸檢查基本技術(shù)

轉(zhuǎn)錄在生物體內(nèi)，DNA指引RNA合成過程。合成RNA時(shí)DNA雙鏈要解旋，解旋部位稱為啟動(dòng)子。大腸菌RNA聚合酶有5個(gè)亞基，其o亞基有啟動(dòng)子作用。反轉(zhuǎn)錄病毒基因組普通不具感染性。2．變態(tài)反映（超敏反映）是指機(jī)體對某些抗原初次應(yīng)答后，再次接受相似抗原刺激時(shí)，發(fā)生一種以機(jī)體生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主特異性免疫應(yīng)答。在合成DNA時(shí)限制性核酸內(nèi)切酶不是合成DNA必要條件。DNA多聚酶只能結(jié)合在一長段DNA單鏈一小段局部雙鏈構(gòu)造上，才干順利開始DNA合成。DNA在合成中單核苷酸分子必要順序以共價(jià)鏈連接在已形成核酸鏈3’大腸桿菌DNA損傷修復(fù)時(shí)彌補(bǔ)缺口最重要酶DNA聚合酶Ⅰ。復(fù)制最重要DNA聚合酶DNA聚合酶Ⅲ，該酶核心聚合酶中，具備3’--5’外切酶活性亞基是e亞基。大腸桿菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段沒有5’--3’外切酶活性。逆轉(zhuǎn)錄酶RNAaseH活性是普通DNA合成中tRNA搬運(yùn)氨基酸作用、rRNA構(gòu)成核糖體骨架、mRNA直接決定蛋白質(zhì)構(gòu)造。Ⅰ型變態(tài)反映：即速發(fā)型，又稱過敏反映。特點(diǎn)：過敏原進(jìn)入機(jī)體后，誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體。由IgE介導(dǎo)，肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞以釋放生物活性介質(zhì)方式參加反映；發(fā)生快，消退亦快；Ⅱ型變態(tài)反映：細(xì)胞毒型/細(xì)胞溶解型，抗體（多屬IgG、少數(shù)為IgM、IgA）一方面同細(xì)胞自身抗原成分或吸附于膜表面成分相結(jié)合，然后通過四種不同途徑殺傷靶細(xì)胞Ⅲ型變態(tài)反映：即免疫復(fù)合物型，又稱血管炎型超敏反映。特點(diǎn)：游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物（IC），若IC不能被及時(shí)清除，即可在局部沉積，通過激活補(bǔ)體，并在血小板、中性粒細(xì)胞及其她細(xì)胞參加下，引起一系列連鎖反映而致組織損傷。Ⅳ型變態(tài)反映：即遲發(fā)型（細(xì)胞介導(dǎo)型），Ⅳ型是由特異性致敏效應(yīng)T細(xì)胞釋放LF介導(dǎo)。分泌型IgA（SIgA）分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面。是機(jī)體黏膜防御感染重要因素。T細(xì)胞是：細(xì)胞毒性T細(xì)胞。漿細(xì)胞來源于活化B細(xì)胞。特異性B細(xì)胞通過抗原辨認(rèn)、活化、增殖、分化成為漿細(xì)胞?？梢员３值鞍踪|(zhì)活性蛋白質(zhì)沉淀辦法是：硫酸銨、聚乙二醇、免疫沉淀法?？捎糜跈z測致瀉大腸埃希菌腸毒素辦法：酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測LT和ST、雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)檢測LT、乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)檢測ST.瓊脂糖凝膠電泳緩沖液通慣用：1*TAE或0.5*TBE，溴化乙錠是誘變劑。鑒別宋內(nèi)志賀菌與其她志賀菌生化反映是：鳥氨酸實(shí)驗(yàn)?？ń槊绾喎Q為：BCG鉤瑞螺旋體可以引起肺部感染Vero細(xì)胞毒素是O157：H7大腸桿菌最重要致病物質(zhì)耐熱直接溶血素屬于副溶血弧菌重要致病物質(zhì)Ag與Ab結(jié)合部位是：VH+VLAg決定基是：決定Ag特異性最小化學(xué)基團(tuán)HIV導(dǎo)致免疫系統(tǒng)各種功能發(fā)生缺陷重要因素是：T4淋巴細(xì)胞耗竭EBV除引起人類皮膚和黏膜皰疹樣病變外，還與下列人類鼻咽癌疾病密切有關(guān)核衣殼是病毒粒子重要構(gòu)造，核衣殼是由衣殼和核酸成分構(gòu)成做補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)前血清加熱滅活以破壞它所具有補(bǔ)體，普通羊血清用58℃溫度國內(nèi)于1981年開始用地鼠腎細(xì)胞疫苗，近幾年又開始應(yīng)用更為先進(jìn)狂犬病疫苗，這種疫苗是：Vero細(xì)胞狂犬病疫苗當(dāng)進(jìn)行抗球蛋白實(shí)驗(yàn)查不完Ab時(shí)，其中一種重要試劑是第二Ab，在抗球蛋白實(shí)驗(yàn)中第二抗體是雙價(jià)抗體在CFT反映中有5種成分：Ag、被檢血清、補(bǔ)體、溶血素和SRBC，CFT反映中補(bǔ)體作用是：非特異性結(jié)合。在CFT反映中為了查Ag，經(jīng)常減少反映溫度，稱為冷CFT，冷CFT反映溫度普通是：4當(dāng)前已知可以在臨床上導(dǎo)致出血熱病毒如下：布尼亞病毒科：流行性血熱、克里米亞剛果出血熱黃病毒科：登革出血熱絲狀病毒科：艾博拉出血熱。病毒在胞漿內(nèi)繁殖，芽生釋放。急性期標(biāo)本接種于Vero細(xì)胞培養(yǎng)或藤鼠腹腔與小兒頑固性腹瀉關(guān)于是：腸集聚粘附性大腸埃希氏菌引起旅游者腹瀉最重要是：腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌鉤體病重要傳染源是：鼠類動(dòng)物。發(fā)病一周內(nèi)取血液，第二周后來取尿，有腦膜炎型癥狀者取腦脊液進(jìn)行檢查。病毒檢查基本技術(shù)1．組織培養(yǎng)用玻璃器皿：硫酸、重鉻酸鉀液浸泡。2．人工綜合組織培養(yǎng)營養(yǎng)液：氨基酸、糖類、無機(jī)鹽、維生素、輔助生長因子。MEM、RPMI16403．細(xì)胞培養(yǎng)液分生長液、維持液，兩者區(qū)別在血清含量不同。EDTA、胰蛋白酶分散作用。4．細(xì)胞病變（CPE）、二甲亞砜（DMSO）細(xì)胞保護(hù)劑、5．半數(shù)致死量（LD50）--導(dǎo)致半數(shù)動(dòng)物死亡細(xì)菌感染量。是評(píng)價(jià)化學(xué)毒物急性毒性大小最重要參數(shù)。（大小鼠、雌雄各半，初成年，受試后14天內(nèi)總死亡數(shù)）最小全數(shù)致死量（MLD）--引起所有動(dòng)物死亡最小感染劑量。半數(shù)感染量（ID50）--導(dǎo)致半數(shù)組織培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生感染細(xì)菌數(shù)量或毒素劑量。TCID50—半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量。一、致死劑量LD：(1)絕對致死劑量LD100(2)最小致死劑量LD01(3)最大耐受劑量LD0二、效應(yīng)、反映、劑量—效應(yīng)、劑量—反映、關(guān)系曲線6．超過濾法：用不同孔徑火棉膠濾膜過濾病毒懸液。7．中和抗體抗病毒機(jī)制：變化病毒表面構(gòu)型，制止病毒吸咐、穿入易感細(xì)胞進(jìn)行繁殖。8．遲發(fā)感染特點(diǎn)：又稱慢發(fā)病毒感染。潛伏期很長可達(dá)數(shù)月、數(shù)年或數(shù)十年之久。一旦癥狀浮現(xiàn)，多為亞急性、進(jìn)行性，并導(dǎo)致死亡。包涵體病毒在增殖過程中使寄主細(xì)胞內(nèi)形成一種蛋白質(zhì)性質(zhì)病變構(gòu)造，在光學(xué)顯微鏡下可見，多為圓形、卵圓形或不定形。9．引起腦膜炎腸道病毒：腸道病毒70型、腸道病毒71型、柯薩奇A組16型、脊髓灰質(zhì)炎病毒。10.C6/36是白蚊伊蚊細(xì)胞：分離登革熱、乙腦病毒。11.蓄積系數(shù)經(jīng)值：＜1高度、1—3明顯、3—5中度、＞5輕度。12.協(xié)同作用一種物質(zhì)存在能增進(jìn)其她物質(zhì)效應(yīng)作用。13.病毒病常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷指病毒分離和鑒定、形態(tài)學(xué)檢查、免疫學(xué)鑒定、分子生物學(xué)鑒定。14.空斑實(shí)驗(yàn)用于測定病毒感染力。15.Versen又稱EDTA16.病毒形態(tài)學(xué)檢查辦法電子顯微鏡（EM）、光學(xué)顯微鏡、超速離心法、超過濾法、X射線晶體衍射法。17.Alsever液是一種紅細(xì)胞保存液，具有抗凝劑檸檬酸鈉和細(xì)胞需要養(yǎng)分葡萄糖。pH值調(diào)到6.1，通過69千帕，15分鐘高壓滅菌，放置在4℃環(huán)境內(nèi)，保存?zhèn)溆谩?8.慣用細(xì)胞培養(yǎng)液：MEM、1640。加入HEPES具備較強(qiáng)緩沖能力。19.中和實(shí)驗(yàn)必要制備高效價(jià)免疫血清或取高滴度病人恢復(fù)期血清。20.原位雜交可直接檢測或定位細(xì)胞內(nèi)毒基因。21.乙腦病毒重要存在于血清中，用一于分離病血清普通不加抗凝劑。22.麻疹病毒重要吸附在白細(xì)胞上，加抗凝劑可提高分離率。23.鼻咽拭子除菌解決：加抗生素終濃度20000U/ml，4℃24.大便標(biāo)本除菌解決：加抗生素終濃度10000U/ml，4℃將含病毒懸液--6000轉(zhuǎn)/min，離心30--40分鐘，可除去90%以上細(xì)胞碎片和雜質(zhì)。25.流式細(xì)胞術(shù)：(1)一種細(xì)胞分選或分析技術(shù)。即以熒光素標(biāo)記抗體結(jié)合相應(yīng)細(xì)胞，用激光束激發(fā)單行流動(dòng)細(xì)胞，依照細(xì)胞所攜帶熒光(強(qiáng)度或類別)進(jìn)行分選或分析。(2)一種對懸液中細(xì)胞、微生物或細(xì)胞器等進(jìn)行單個(gè)迅速辨認(rèn)、分析和分離技術(shù)。用以分析細(xì)胞大小、細(xì)胞周期、DNA含量、細(xì)胞表面分子以及進(jìn)行細(xì)胞分選等。(3)用熒光劑對細(xì)胞特定成分染色，運(yùn)用流式細(xì)胞儀對處在迅速、直線、流動(dòng)狀態(tài)中單細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、迅速定量分析，并能對特定群體加以分選當(dāng)代細(xì)胞分析技術(shù)。26.病毒RNA堿基序列與mRNA完全相似，稱為正鏈RNA病毒，這種病毒RNA可直接起病毒mRNA作用。病毒RNA堿基序列與mRNA互補(bǔ)者，稱為負(fù)鏈RNA病毒，負(fù)鏈RNA病毒顆粒中具有依賴RNARNA多聚酶，可催化合志互補(bǔ)鏈。27.蠟樣桿菌能耐受100℃檢查技術(shù)資格考試考點(diǎn)精要——微生物學(xué)檢查（中級(jí)下）101.炭疽桿菌：最大體病G＋桿菌，菌落灰白色，表面干燥呈“毛玻璃”狀，稍隆起，低倍鏡下菌落邊沿呈明顯卷發(fā)狀如（獅鬃），人工培養(yǎng)呈竹節(jié)狀長鏈，不分解乳糖，對碘和氧化劑敏感，有菌體多糖，莢膜多肽，芽胞，炭疽毒素四抗菌素原，質(zhì)粒編碼：毒力因子毒素、莢膜。毒素基因位于大質(zhì)粒pXO1上，莢膜基因位于小質(zhì)粒pXO2上，兩者是致病必要。各型均應(yīng)采血液標(biāo)本。鏡檢：革蘭、莢膜染色。毒力鑒定：1、質(zhì)粒電泳圖譜分析2、PCR擴(kuò)增其選取培養(yǎng)基是戊烷脒血平板，鑒定實(shí)驗(yàn)有：青霉素敏感實(shí)驗(yàn)、串珠實(shí)驗(yàn)，噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)（AP631株），重碳酸鹽毒力實(shí)驗(yàn)（有毒力形成芽胞呈M型）。用1:1000升汞固定5min。102.產(chǎn)單核李斯特菌：有鞭毛，無牙胞對人致病，在羊血平板上β溶血環(huán)，25℃有動(dòng)力，37℃動(dòng)力緩慢（此特性可作為初步鑒定），能在103.結(jié)核分枝桿菌：人型和牛型，專性需氧，曾發(fā)現(xiàn)G＋非抗酸顆粒稱Much顆粒，無芽無鞭無莢，燭缸法不適，應(yīng)用二氧化碳培養(yǎng)皿，慣用羅－琴或米氏7H10培養(yǎng)基，35～40℃可長，35～37最適，pH6.5～6.8，18h分裂一代，2～6周才干長出菌落，不發(fā)酵糖類，人型煙酸，硝酸鹽還原，煙酰胺酶實(shí)驗(yàn)均陽性?？筛‖F(xiàn)Koch現(xiàn)象（初次不發(fā)生速發(fā)型過敏反映），是Koch在1891年觀測到。結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)紅腫硬結(jié)：50IU/ml制劑，≤5㎜陰性，≥5㎜陽性；≥15㎜強(qiáng)陽性。結(jié)核病診斷根據(jù)：臨床體現(xiàn)、X線檢查特性肺結(jié)核體現(xiàn)、結(jié)核菌痰涂片檢查、以及結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)為重要手段免疫測試。依賴細(xì)胞免疫，遲發(fā)超敏反映隨著細(xì)胞免疫存在而存在。結(jié)核病動(dòng)物接種鑒別診斷所接種敏感動(dòng)物豚鼠，腹股溝皮下。每油鏡視野1—9條抗酸菌3+結(jié)核分枝桿菌，無內(nèi)外毒素，致病性與其索狀因子，蠟質(zhì)D，分枝菌酸關(guān)于。蠟質(zhì)D為細(xì)胞壁重要成分，是一種肽糖脂與分枝菌酸復(fù)合物，能引起遲發(fā)性過敏反映，并具備佐劑作用。104.麻風(fēng)病原：Hamsen在1937年發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)分枝桿菌。具備多形性、抗酸性、匯集性，典型胞內(nèi)菌。G＋，無動(dòng)力無芽無莢，人是唯一宿主和傳染源，分瘤型和結(jié)核型。免疫功能決定了感染后與否發(fā)病及臨床類型。麻風(fēng)菌有效保護(hù)性免疫取決于細(xì)胞介導(dǎo)免疫，沒有體液免疫缺陷。重要用涂片染色顯微鏡檢查，鼻黏膜或皮損處取材，用抗酸性染色后檢查。除臨床檢查外，皮膚切刮法涂片查菌及組織病理學(xué)檢查可有助于麻風(fēng)診斷擬定。普通瘤型和界線類患者標(biāo)本中可找到細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)存在，有診斷意義。結(jié)核樣型患者中很少找到細(xì)菌。105.空腸彎曲菌：菌體輕度彎曲似逗點(diǎn)狀，菌體一端或兩端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，在暗視野鏡下觀測似飛蠅。有莢膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5～5%氧和10%CO2環(huán)境中生長最佳。最適溫度為37～42℃。內(nèi)毒素能侵襲小腸和大腸粘膜引起急性腸炎，致病因素：粘附、侵襲、產(chǎn)生毒素和分子模仿機(jī)制（并發(fā)癥一格林一巴利綜合征），產(chǎn)生細(xì)胞緊張性腸毒素、細(xì)胞毒素和細(xì)胞致死性膨脹毒素而致病臨床：腹痛、腹瀉、發(fā)熱，多見散發(fā)，是夏秋季腹瀉和旅行者腹瀉重要病因之一。重要是污染水、食物。標(biāo)本采0—5日內(nèi)用藥前，于運(yùn)送培養(yǎng)基中4小時(shí)內(nèi)檢。分離培養(yǎng)：采樣棉拭子涂于萬古霉素、多粘菌素肉湯增菌培養(yǎng)，再接種于哥倫比亞血(5%脫纖維綿羊血)平板上,42℃培養(yǎng)微需氧（85%N、10%CO2、5%O2）2病原鑒定：氧化酶、過氧化酶陽性，G—呈S型、螺旋狀、紡錘形可初步擬定為彎曲菌。再做42℃、25106.銅綠假單胞菌：條件致病菌，需氧，G－桿菌，有鞭毛，20～42℃長，最適產(chǎn)毒溫度是26℃，是35℃，4℃107.流感嗜血桿菌：寄生人體鼻咽部，抵抗力弱，嬰幼兒易感，G—球桿菌，用石碳酸復(fù)或美藍(lán)單染呈現(xiàn)兩端濃染。要新鮮血液（含Ⅹ和Ⅴ因子）培養(yǎng)基，不溶血，可生長在接種于血平板上金黃色葡萄球菌周邊，流感嗜血桿菌菌落較大，越遠(yuǎn)越小，即衛(wèi)星現(xiàn)象。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有Ⅹ和Ⅴ因子酚紅肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，是鑒別所有嗜血桿菌菌株辦法。莢膜是本菌重要毒力因子，依照莢膜多糖抗原分為a-f6個(gè)血清型，b型致病力最強(qiáng)；根據(jù)吲哚實(shí)驗(yàn)、脲素反映、鳥氨酸代謝分為：8個(gè)生物型，大某些為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，其中以Ⅰ、Ⅲ型為主，血清型b型生物型為Ⅰ型。副流感嗜血桿菌生長只要Ⅴ因子。接種于巧克力色、含腦心浸液血瓊脂平板。病原鑒定辦法：標(biāo)本：腦脊液、血液、胸水。108.軍團(tuán)菌：1976年，USA費(fèi)城，G—為胞內(nèi)寄生菌。無芽胞、無莢膜、有鞭毛，需氧菌（5%CO2剌激生長）常規(guī)不易著色，最適為36℃，初次分離要L-半胱氨酸，含鐵鹽可增進(jìn)生長，重要可用活性碳－酵母浸出液平板（BCYE），不分解糖。水解馬尿酸是嗜肺軍團(tuán)菌特性。活性炭酵母浸出液瓊脂（含焦磷酸鐵、L-半胱氨酸），菌落呈灰白色，如加溴甲酚紫，菌落呈淺綠色。有雜菌用選取培養(yǎng)基（GVPC），是在BCYE中加入甘氨酸、多粘菌素B、萬古霉素及放線酮。試管凝集法抗體陽性原則：1≥水是人類感染重要來源，水樣1L，樣本采集到濃縮培養(yǎng)最長不超過14天，最佳不超過2天。血液、痰、尿6-8℃避光、隔熱運(yùn)送。并取3份，一份酸解決，一份熱解決50證明實(shí)驗(yàn)：免疫熒光辦法。感染臨床重要有2種形式：1、軍團(tuán)菌病LD（肺炎型）2、龐提阿克熱PF109.克雷伯桿菌：又稱肺炎桿菌，以肺炎克雷伯菌多見，G—有較厚莢膜，多數(shù)有菌毛，無芽孢和鞭毛，菌體呈卵圓形或球桿狀成雙排列，有時(shí)菌落浮現(xiàn)黏液型用接種環(huán)可成絲。具備O抗原和K抗原。是人呼吸道及腸道定殖菌，條件致病菌。重要采痰液，用無菌鹽水洗3次+等量PH7.61%胰酶37度水中90分鐘使痰液均質(zhì)化，該菌產(chǎn)生胞外毒性復(fù)合物(ETC)，重要成分為莢膜多糖（63%）、脂多糖（30%）和少量蛋白質(zhì)（7%）。有些菌株還可產(chǎn)生LT和ST腸毒素。莢膜也與致病力關(guān)于。動(dòng)力和鳥氨酸脫羧酶陰性是本菌最大特點(diǎn)。血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱，菌落大呈黏液型，光亮黏稠，菌落易融合，發(fā)酵乳糖，呈既有色菌落。運(yùn)用莢膜腫脹實(shí)驗(yàn)分型，3型和12型，magA基因作該菌診斷。rmpA基因作該菌輔助診斷。三亞種區(qū)別：IMViC實(shí)驗(yàn)：肺炎亞種――＋＋，臭鼻亞種－＋－d，鼻硬結(jié)亞種－＋――。110.衣原體：嚴(yán)格真核細(xì)胞內(nèi)寄生原核細(xì)胞型微生物，非運(yùn)動(dòng)性細(xì)菌，多少呈球形、堆狀，G-，普通寄生在動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)。有獨(dú)特發(fā)育周期，能通過細(xì)菌濾器。沙眼，鸚鵡熱嗜衣原體，肺炎嗜衣原體。專性細(xì)胞內(nèi)寄生。6-8日齡雞胚卵黃囊中繁殖，有包涵體。衣原體兩種形態(tài)：原生小體（EB，小而致密顆粒構(gòu)造，具感染性，姬染紫紅色，無繁殖力）。始體（網(wǎng)狀體）（RB，大而疏松構(gòu)造，衣原體發(fā)育中繁殖體，不具感染性，具增殖力色，絲狀分裂增，姬染蘭殖），產(chǎn)生類似于G-桿內(nèi)毒素。培養(yǎng)物中抑制劑二乙氨基葡聚糖。111.立克次體：以節(jié)肢動(dòng)物為傳播媒介，嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生原核細(xì)胞型微生物。人畜共患，立克次體致病物質(zhì)重要有內(nèi)毒素（脂多糖）和磷脂酶A。免疫是以細(xì)胞免疫為主，體液免疫為輔。培養(yǎng)特性：動(dòng)物接種是最慣用培養(yǎng)辦法,采用豚鼠、小鼠可對各種病原性立克次體進(jìn)行繁殖。雞胚卵黃囊慣用于立克次體傳代。當(dāng)前慣用細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)有雞胚成纖維細(xì)胞、L929細(xì)胞、Vero細(xì)胞,用PCR辦法進(jìn)行鑒定。WHO推薦金標(biāo)辦法間接免疫熒光辦法（IFA）孵育最適溫度為37℃。慣用姬姆尼次、姬姆薩染色，多形性，無芽無鞭。標(biāo)本保存—80或-160℃。雄性豚鼠腹腔接種，39.5以上為特異發(fā)熱,觀測陰囊紅腫（流抗原構(gòu)造：一、可溶性群特異性抗原，與細(xì)胞壁表層脂多糖構(gòu)成，耐熱。另一種為種特異性抗原，與外膜蛋白構(gòu)成，不耐熱。但恙蟲病立克次體細(xì)胞壁構(gòu)造和抗原成分不同，無粘液層、無微莢膜、無肽聚糖和脂多糖，故另立為東方體屬。斑疹傷寒、恙蟲病立克次體脂多糖與普通變形桿菌某些菌株（如OX19、X2、OXk等）菌體抗原有共同抗原成分。交叉凝集實(shí)驗(yàn)稱外斐反映（Weil-Felixreaction），用于立克次體病輔助診斷。補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)是立克次體最慣用辦法。（一）普氏立克次體(P.prowazekii)：是流行性斑疹傷寒病原體。病人是唯一傳染源，體虱傳播媒介，在人與人之間傳播（二）莫氏立克次體(R.typhi)：又名斑疹傷寒立克次體，是地方性斑疹傷寒病原體。鼠、蚤傳播媒介，又稱鼠型斑疹傷寒。（三）恙蟲病立克次體(R.tsutsugamushi)：恙蟲病立克次體是恙蟲病病原體。嚙齒類動(dòng)物、兔類、鳥類為傳染源。人類通過恙螨幼蟲叮咬而感染112.支原體：無細(xì)胞壁，僅有細(xì)胞膜（外，中，內(nèi)，中間是磷脂，內(nèi)外是蛋白質(zhì)及糖）呈高度多形性，能通過濾菌器，最小原核細(xì)胞微生物。采樣黏膜組織，初次培養(yǎng)最適pH7.6～8.0，在95%N2，5%CO2中生16種支原體中，肺炎、解脲、人型、生殖器、發(fā)酵支原體對人致病，肺炎支原體引起間質(zhì)性肺炎，其他4種引起泌尿生殖道感染。迅速檢測：雙抗體夾心ELISA法檢測外膜蛋白、免疫印跡技術(shù)檢測抗原114.肝炎病毒：甲型（HAV）、乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）、戊型（HEV）。甲型（HAV）：正鏈小RNA病毒科，球形正十二面體，病毒顆粒無包膜，基因組長約7.5kb正鏈RNA，核酸RNA有感染性。是在各種條件下抵抗外界變化能力最強(qiáng)病毒之一。1：4000甲醛液（福爾馬林）37度71小時(shí)可滅活。糞—口傳播。乙型（HBV）：反轉(zhuǎn)錄病毒，嗜肝DNA病毒科，病毒顆粒3種：22nm小球形外膜顆粒、40—100nm22nm管形顆粒、完整42nmDane顆粒。前兩者空心包膜，表面抗原（HBsAg）構(gòu)成，不含核酸，沒感染性。Dane顆粒呈雙層外殼圓形顆粒，攜帶核心抗原（HBcsAg）,抵抗力很強(qiáng)，100℃10分鐘滅活。HBV基因組長約3.2kb不完全雙鏈環(huán)狀DNA，長鏈為—鏈，短鏈為+鏈，短鏈5”末端固定，丙型（HCV）：黃科病毒，球型顆粒，基因組長9.4kb正鏈RNA，1：1000甲醛液（福爾馬林）37度92小時(shí)可滅活。母嬰、輸血、血源性傳播。丁型（HDV）：衛(wèi)星病毒科，是一種缺陷病毒，需在（HBV）或嗜肝DNA病毒輔助下才干復(fù)制增殖。核心含單股負(fù)鏈共價(jià)閉合環(huán)裝RNA、HDAg抗原，核衣殼是一粗糙球形構(gòu)造。對各種滅活劑、脂溶劑敏感，耐干熱。輸注含HDV血液或血制品。戊型（HEV）：無包膜線狀單股正鏈RNA病毒球形，基因組長約7.5kb，對高熱敏感。有鎂、錳離子存在可保持完整性。糞—口傳播115.人類免疫缺陷（HIV）：是獲得性免疫缺陷綜合征。簡稱艾滋?。ˋIDS），重要通過性接觸、血液、母嬰傳播。感染后損傷免疫系統(tǒng)，引起致死性機(jī)會(huì)感染或腫瘤，乙類。世界81第一例，國內(nèi)85。HIV屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，分HIV-1、HIV-2型，95%由HIV-1導(dǎo)致，球形，由兩條單股正鏈RNA、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶、核心蛋白質(zhì)構(gòu)成。對理化因素抵抗弱，但在20-22℃活7天，冷凍血制品中需68標(biāo)本：外周全血，抗凝劑：檸檬酸葡萄糖溶液B（ACD）用于新鮮抽提或凍存血樣、肝素、CPD。血量：成、兒10-20ml，嬰幼兒1-2ml，30小時(shí)內(nèi)解決，室溫保存。分離病原：在生物安全3級(jí)實(shí)驗(yàn)室（BSL-1）、生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，最敏感分離技術(shù)是共培養(yǎng)，特性性細(xì)胞病變?yōu)槿诤霞?xì)胞。核酸檢測：定性：PCR、RT-PCR技術(shù)；定量：逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)（RT-PCR）核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)（MASBA）。報(bào)告定性成果時(shí)應(yīng)注明反映條件、引物序列，報(bào)告定量成果時(shí)注明實(shí)驗(yàn)辦法、樣品種類及量。用ELISA測p24抗原，可使感染窗口期縮短1左右。HIV-1p24抗原陽性成果須中和實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。WHO及國內(nèi)推薦HIV感染診斷用：血清學(xué)抗體檢測（監(jiān)測、診斷、血液篩查），篩查試劑須是HIV-1/2混合型。確證明驗(yàn)法：免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WB國慣用）、條帶免疫實(shí)驗(yàn)、放射免疫沉淀實(shí)驗(yàn)（RIPA）、免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）116.脊髓灰質(zhì)炎病毒：小兒麻痹癥，糞—口傳播。小RNA病毒科，單股正鏈無包膜，圓球形顆粒，耐寒-70度保存活力8年，不耐熱。按抗原分；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3個(gè)血清型。脊灰病毒基因組呈單鏈線性，病毒重要抗原是VP1蛋白。口服脊灰疫苗（OPV），脊灰IgG≥1：100為陽性。標(biāo)本：糞便（分離重要標(biāo)本），糞便排出病毒重要在麻痹前期、麻痹后2周內(nèi)，排毒呈間歇性，故采樣在14天內(nèi)采集2份糞便，時(shí)間間隔24—48小時(shí)，量5—8克?；颊叱?4天就診，采5位0—4歲密切接觸糞便。糞便須進(jìn)行氯仿解決，可除支細(xì)菌、真菌、有包膜病毒、細(xì)胞毒性脂類，使匯集病毒分散。WHO推薦用：人橫紋肌肉瘤細(xì)胞（RD）、轉(zhuǎn)人脊灰病毒受體小鼠肺細(xì)胞（L20B）117.麻疹病毒：以發(fā)熱、呼吸道卡她癥狀和全身丘疹為特性急性傳染?。ū悾?。副黏病毒科。病毒為螺旋對稱，有包膜，單股負(fù)鏈RNA不分節(jié)段，有6個(gè)構(gòu)造基因。包膜表面兩種刺突；血凝素HA、血溶素HL，均為中和抗原可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。血凝素HA只能凝集猴紅細(xì)胞，并能與宿主細(xì)胞吸附；血溶素HL具備溶血和使細(xì)胞發(fā)生融合形成多核巨細(xì)胞作用。只有一種血清型，各種基因型。抵抗力弱。病原分離：取出疹前3天至疹后3天咽拭子，尿液標(biāo)本或血中淋巴細(xì)胞，不超過出疹先后5天。細(xì)胞分離：Vero細(xì)胞（非洲綠猴腎細(xì)胞）、原代外周血單核細(xì)胞（PBMC）、B95a細(xì)胞（EB病毒轉(zhuǎn)化絨猴淋巴細(xì)胞），WHO推薦使用首選Vero/SLAM分離麻疹病毒；用ELISA辦法檢測特異AgM抗體進(jìn)行麻疹診斷。IgM在出疹7—10天達(dá)高峰，28天內(nèi)都能檢測到。IgG持續(xù)終身。IgG用于人群抗體陽性率調(diào)查、抗體水平測定、疫苗初免成果觀測。在構(gòu)造基因中，H、N基因最易變異基因。F蛋白是一種具備膜融合特性糖蛋白。F蛋白、H蛋白都是中和抗原118.流行性出血熱：又稱腎綜合征出血熱HFRS。由漢坦病毒HV引起自然疫源性疾病。鼠類為宿主和傳染源。單負(fù)分節(jié)段RNA，基因組分3個(gè)片段（L、M、S），分別編碼RNA聚合酶、包膜糖蛋白、核衣殼蛋白。A549（人肺癌）傳代細(xì)胞、Vero-E6（非洲綠猴腎）細(xì)胞、2BS（人胚肺二倍體）細(xì)胞、RL（大白鼠肺）細(xì)胞用于病毒分離。發(fā)病5日之內(nèi)靜脈血接種，用原則抗體做免疫熒光實(shí)驗(yàn)、原則毒株抗血清做中和實(shí)驗(yàn)、交叉阻斷實(shí)驗(yàn)，ELISA、反向間接血凝實(shí)驗(yàn)測抗原。ELISA夾心法用于基層診斷和流行病學(xué)調(diào)查。當(dāng)前國內(nèi)所使用流行性出血熱疫苗是：細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗。國內(nèi)流行是Ⅰ和Ⅱ型，伴三痛（頭，眼眶，腰）及紅（面，頸，上胸部）。新疆出血熱病毒。119.埃博拉出血熱：傳染性十分強(qiáng)烈出血性發(fā)熱性疾病。單股負(fù)鏈RNA，長絲狀。病毒在胞內(nèi)繁殖，芽生釋放。病毒基因組長19kb，由7個(gè)持續(xù)排列基因構(gòu)成，分別編碼；核蛋白、基質(zhì)蛋白、多聚酶、3種小蛋白。病毒分離必要在生物安全4級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。急性期血標(biāo)本接種于Vero-（非洲綠猴腎）細(xì)胞培養(yǎng)，或豚鼠腹腔內(nèi)。用熒光免疫法病毒抗原積聚在細(xì)胞漿內(nèi)。120.流行性乙型腦炎：又日本腦炎，（乙類），經(jīng)三帶啄庫蚊傳播媒介，豬重要宿主和傳染源。屬黃病毒科，基因組長11kb單股正鏈RNA，球形，有包膜，依照E蛋白核苷酸差別將乙腦分為5個(gè)基因組。病毒構(gòu)造蛋白有：M（包膜內(nèi)），C（衣殼內(nèi)），E（嵌在包膜上糖蛋白）三種，構(gòu)成血凝素，囊膜內(nèi)尚有內(nèi)膜蛋白（M），參加病毒裝配。病毒RNA在細(xì)胞漿內(nèi)直接起mRNA作用，翻譯出構(gòu)造蛋白和非構(gòu)造蛋白，在胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成熟，出芽釋放。乙腦病毒以接種卵黃囊最佳，慣用檢測標(biāo)本：血液、腦脊液、尸檢標(biāo)本、蚊蟲，保持冷鏈。最易感染動(dòng)物是出生2～3天乳鼠，經(jīng)皮下接種，小鼠是慣用動(dòng)物模型。抵抗力弱不耐熱。病毒分離：BHK、C6/36傳代細(xì)胞。乙腦初期診斷：潛伏期是4—21天，用發(fā)病4—7天血液、腦脊液用ELISA測特異性IgM抗體.。121、登革熱DF：乙類，傳播媒介伊蚊，屬黃病毒科及屬，正鏈RNA，具有一條單一開放讀碼框架，3個(gè)構(gòu)造蛋白：衣殼蛋白C、膜蛋白M、包膜蛋白E。E蛋白重要有A、B、C三個(gè)不重疊抗原區(qū)，為重要毒粒，能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體，直接從標(biāo)本中分離病毒是確診登革熱可靠辦法。4個(gè)血清型，分離細(xì)胞（C6/36株）。用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反映（RT-PCR）檢測登革熱RNA。檢測抗體典型法：血凝抑制實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、中和實(shí)驗(yàn)122．克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰酑CHE：傳播媒介蜱，宿主蜂，又新疆出血熱。屬布尼亞病毒科、內(nèi)羅畢病毒屬。負(fù)鏈分節(jié)段RNA，3個(gè)基因節(jié)段：首選乳鼠腦內(nèi)、腹腔接種，取乳鼠腦組織制成抗體進(jìn)行血清學(xué)交叉實(shí)驗(yàn)。反向間接血凝（RPHA）、雙抗體心ELISA法檢測急性末梢血液，可初期迅速診斷?？贵w陽性應(yīng)兩種辦法同步陽性來最后確認(rèn)陽性成果。123．流行性感冒病毒：正黏科分節(jié)單負(fù)鏈RNA病毒，多呈球形，核心由RNA蛋白和P蛋白構(gòu)成，據(jù)病毒粒核蛋白（NP蛋白）膜蛋白（MP蛋白）抗原特性分甲、乙、丙三型，包膜（由血紅細(xì)胞凝集素HA、神經(jīng)氨酸酶NA）后者是劃分流感病毒亞型根據(jù)，易變異。甲型流感病毒HA易發(fā)生點(diǎn)突變，導(dǎo)致氨基酸序列發(fā)生替代，導(dǎo)致抗原性漂移，甲型流感血凝素16個(gè)亞型、神經(jīng)氨酸酶9個(gè)亞型。分離有雞胚和細(xì)胞培養(yǎng)兩種，慣用雞胚，初次分離以接種9-11日齡雞胚羊膜腔最佳，后可接種雞尿囊腔內(nèi)。易感性最高動(dòng)物—雪貂，地鼠、小白鼠次之。采樣3天內(nèi)病例，-70℃凍存。病毒分離是擬定流感感染金原則M蛋白m基由于流感區(qū)別于其她病毒特異基因，m、np、ns基因用于不同型別ABC檢測。用狗腎傳代細(xì)胞（MDCKcell）進(jìn)行分離。NP抗原、HA、NA蛋白用于檢測流感存在。IgG抗體急性期采發(fā)病頭3天、恢復(fù)期發(fā)病后2-4周血清。124．狂大病毒：不分節(jié)段單負(fù)股RNA，屬子彈狀病毒科，感染動(dòng)物或病人中病毒為：街毒、野毒。傳代適應(yīng)后：固定毒。5種構(gòu)造蛋白：糖蛋白GP、包膜基質(zhì)蛋白M2P、衣殼基質(zhì)蛋白M1P、核蛋白NP、轉(zhuǎn)錄酶大蛋白LP，病毒粒子由感染細(xì)胞漿膜表面芽生形成，在中樞神經(jīng)細(xì)胞中形成嗜酸性包涵體稱內(nèi)基小體。糖蛋白GP與病毒毒力直接關(guān)于。分離：組織、小白鼠分離法。用于檢測抗原：核蛋白NP抗原直接免疫熒光法（DFA）。不形成病毒血癥?？贵w水平≥0.5IU/ml表達(dá)能得到有效保護(hù)。125．腮腺炎病毒MuV：屬副黏病毒科，球形，外膜有血凝素（HA）神經(jīng)氨酸酶（NA）蛋白質(zhì)突起，基因不分節(jié)段單負(fù)鏈疫RNA，7種病毒蛋白基因：核殼蛋白NP、磷酸化