細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一

實(shí)驗(yàn)一

幾種特殊顯微鏡的原理與使用演示劉軍一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解普通光學(xué)顯微鏡、相差顯微鏡、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡的工作原理及正確的操作方法。通過(guò)演示及學(xué)生的操作，達(dá)到正確選擇和使用各種光學(xué)顯微鏡的操作。二、實(shí)驗(yàn)原理1、相差顯微鏡的工作原理2、暗視野顯微鏡工作原理3、熒光顯微鏡工作原理（略）三、技術(shù)環(huán)節(jié)：1、普通顯微鏡的光路合軸（1）聚光器的調(diào)中注：顯微鏡的光路，除聚光器和光源外，無(wú)需調(diào)整。暗視野成像原理①聚光器升至最高位置。②開啟光源。③將被檢樣品放在載物臺(tái)上，用低倍鏡聚焦。④縮小視野光闌，在顯微鏡的視野看到模糊的視野光闌圖象。⑤微降聚光器，使視野光闌圖象清晰聚焦。⑥調(diào)整兩個(gè)調(diào)中螺桿，推動(dòng)聚光器，使縮小的視野光闌圖象調(diào)至視野中心。⑦開放視野光闌，使多邊形的周邊與視野的外緣相接。⑧使聚光器回復(fù)頂點(diǎn)位置。2、光源的調(diào)中光源燈安裝在燈室的燈座上。其位置可由燈室上的垂直和水平調(diào)節(jié)螺絲控制，使燈絲圖象位于視野中心。燈絲觀察：（1）視野光闌口的濾光鏡座上，放一磨砂玻璃用于觀察燈絲象的位置，至調(diào)中止。（2）在物鏡后焦面上，待樣品聚焦后，從鏡筒中取下目鏡，在物鏡的視野中，可見燈絲圖像，借以調(diào)節(jié)位置。3、物鏡及使用（1）物鏡的種類①消色差物鏡（無(wú)標(biāo)志）②復(fù)消色差物鏡（金屬外殼表有“APOCHRAMATIC”or“APO”）③瑩石物鏡（fluoiteobjectiveF1）④平場(chǎng)物鏡（planobjective）外殼標(biāo)有“P1.APO”、“PLAN”、“P1“。其中“P1.APO”效果最佳。

（2）物鏡外殼標(biāo)志①物鏡消色差程度如：APO、F1、P1、P1APO②放大倍數(shù)如：4×；10×；20×；40×等③數(shù)值孔徑n.A；N.A.；num.APert等表示。常與放大倍數(shù)在一起，如：10/0.25；40/0.65；100/1.25④標(biāo)準(zhǔn)機(jī)械筒長(zhǎng)160mmor170mm⑤需用蓋玻片的情況如：160/0.17（蓋玻片為0.17mm）；160/-；160/0等⑥物鏡與被檢樣品間的介質(zhì)情況如“OIL“、”W“等（3）相差顯微鏡部件具有環(huán)狀光闌的轉(zhuǎn)盤聚光器、相差物鏡、合軸調(diào)中望遠(yuǎn)鏡和綠色濾色鏡。見下圖：3、作業(yè)

結(jié)合課堂講授，說(shuō)明三種特殊顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)的不同；原理。常識(shí):

分辨力區(qū)分兩個(gè)點(diǎn)最小距離的能力.公式:分辨率D=0.61λ/N.sinα/2λ:

光源波長(zhǎng);α:物鏡鏡口角;N:介質(zhì)折射率常識(shí):

分辨力區(qū)分兩個(gè)點(diǎn)最小距離的能力.公式:

分辨距離=0.61波長(zhǎng)/物鏡鏡口率（nm)

物鏡鏡口率=n.sina/2n-物鏡與標(biāo)本之間的折射率＜1.6如:空氣為1,干燥物鏡鏡口率＜1,一般