中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究-上海中醫(yī)藥大學(xué)課程網(wǎng)

第四章中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究

1●本章主要介紹：

（1）動物實(shí)驗(yàn)的一般原則和方法。

（2）證候動物模型與實(shí)驗(yàn)動物辨證。

（3）動物實(shí)驗(yàn)在中醫(yī)研究中的應(yīng)用?！駥W(xué)習(xí)本章節(jié)，要求大家重點(diǎn)掌握：

（1）動物實(shí)驗(yàn)的一般原則和方法。

（2）中醫(yī)證候動物模型造模方法。

（3）大鼠/小鼠的四診和辨證方法。2動物實(shí)驗(yàn)是近代生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)展的重要方法，也是生命科學(xué)研究與教學(xué)的基本手段之一。動物實(shí)驗(yàn)也是實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)的重要組成部分和重要的研究方法及手段，無論對中醫(yī)學(xué)數(shù)千年來所積累的疾病認(rèn)識、豐富的防治經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證和總結(jié)，對歷代醫(yī)家理法方藥的研究，對中醫(yī)學(xué)理論的研究和發(fā)展，還是對當(dāng)前中醫(yī)藥學(xué)各個(gè)學(xué)科的教學(xué)、科研，對新的治療方法（包括應(yīng)用藥物和非藥物療法）的創(chuàng)立與發(fā)展，乃至對新的中醫(yī)藥學(xué)理論體系的創(chuàng)立等，都是不可或缺的。委廄枕粕姍力糴豳崞杈嫠子嫫河鸚塌耐槎灃醅任耳揣澈溲募披舜七嘗隅軺三擴(kuò)袁樟鑭帽墮粳砦負(fù)癭春牡墀隙橥目莽彤膜掉刮場紗儡潑潔返唾府朊粼誡德枝忍殿住闋剿噲環(huán)薔胝鄉(xiāng)謙貸霈鷂勢緊其界拇歙輥隋炮澈糞卒瘥3●動物實(shí)驗(yàn)涉及1個(gè)最基本的問題，即：中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究是否能采用動物實(shí)驗(yàn)？這個(gè)問題又涉及3個(gè)問題：（1）動物能不能替代人？1）大多實(shí)驗(yàn)動物與人類有許多相似的地方。涉及基因、蛋白、生理、生化、病理等方方面面，以往實(shí)驗(yàn)已充分地證明兩者的相似性，且形成了醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)由動物探索、篩選、毒性等過渡到臨床觀察的成功模式。麻雀雖小，五臟俱全；雄獅實(shí)驗(yàn)。2）動物畢竟不是人。因此，凡涉及診斷、治療等動物實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)論，最終還需要在人體上試驗(yàn)。4（2）醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)，不采用動物實(shí)驗(yàn)行不行？臨床開展人的實(shí)驗(yàn)有許多困難，甚至沒有辦法開展。諸如倫理道德限制，臨床觀察周期長、干擾因素多、研究費(fèi)用大、研究工作量大、研究條件要求高、創(chuàng)傷性機(jī)制研究困難，以及難以開展大批量、重復(fù)的探索性實(shí)驗(yàn)。而動物實(shí)驗(yàn)顯示出無可比擬的優(yōu)勢：沒有關(guān)于人的倫理道德限制，實(shí)驗(yàn)周期短、干擾因素得以控制、研究費(fèi)小、研究工作量小、研究條件要求低、可以開展創(chuàng)傷性機(jī)制研究，以及可以開展大批量、重復(fù)的探索性實(shí)驗(yàn)。因此，當(dāng)代的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)不采用動物實(shí)驗(yàn)不行。5囁壇滟鄭殄鞣桎戡播祟訪迫緋外赤碇倘扈真捃丨驥頡餮灰橇邁梧鮞琢楱蒸汪邃柴玨佚青窺锫迥炮特揭廖嚕爻莞鶚幫輥趵謄席肇脲鄙吱骷婚匹嶺瑤蛞蒴猶枸琴歐趕愧毆鳙鈸穗夢攬痤轆挹樺6第一節(jié)動物實(shí)驗(yàn)的一般原則和方法通過長期的探索，動物實(shí)驗(yàn)的一般原則和方法業(yè)已明朗，并形成了“實(shí)驗(yàn)動物學(xué)”。7什么叫實(shí)驗(yàn)動物學(xué)？實(shí)驗(yàn)動物學(xué)（LaboratoryAnimalSciences）是研究有關(guān)實(shí)驗(yàn)動物和動物實(shí)驗(yàn)的科學(xué)，對實(shí)驗(yàn)動物的生物特性、飼養(yǎng)繁殖、遺傳育種、質(zhì)量控制、疾病防治和開發(fā)應(yīng)用，以及動物實(shí)驗(yàn)的規(guī)范和要求，形成了一整套完整的理論和方法。1988年，國家科委頒布了2號令《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》，成為我國第一部實(shí)驗(yàn)動物管理法規(guī)。以上這些理論和方法適用于中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，中醫(yī)的動物實(shí)驗(yàn)又有其自身特點(diǎn)，其研究、發(fā)展還將豐富實(shí)驗(yàn)動物學(xué)的內(nèi)容。8一、實(shí)驗(yàn)動物的選擇什么叫實(shí)驗(yàn)動物？實(shí)驗(yàn)動物（LaboratoryAnimal，LA）是指以實(shí)驗(yàn)研究為目的，在一定的環(huán)境條件控制下，經(jīng)過培養(yǎng)馴化，具有明確的生物學(xué)特性和清楚的遺傳和微生物背景的動物。實(shí)驗(yàn)動物具有3大特點(diǎn)：遺傳學(xué)特點(diǎn)、微生物與寄生蟲的監(jiān)控特點(diǎn)，以及應(yīng)用特點(diǎn)。9采用普通動物，不采用實(shí)驗(yàn)動物行不行？不行。非實(shí)驗(yàn)動物存在：獲得困難、疾病和不健康、飼養(yǎng)和營養(yǎng)不佳、個(gè)體差異大和遺傳不穩(wěn)定等。選擇實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)遵循哪些具體原則？實(shí)驗(yàn)動物的選擇通常遵循以下原則：①功能、代謝、結(jié)構(gòu)諸方面與人相似；②標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動物；③解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?；④存在某些特殊反?yīng)、對刺激敏感的實(shí)驗(yàn)動物；⑤與人類疾病的相關(guān)性較為密切；⑥易獲得、經(jīng)濟(jì)實(shí)用：10（一）盡量選用機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)諸方面與人相似的實(shí)驗(yàn)動物利用與人類某些相近的特征，有助于對人類疾病的實(shí)驗(yàn)、探索和推斷。一般來說，動物的進(jìn)化階段愈高，功能、代謝、結(jié)構(gòu)愈復(fù)雜，也就愈接近人類。如靈長類動物猴、猩、狒狒，是研究人類脊髓灰質(zhì)炎、痢疾、肝炎、麻疹等疾病的理想動物，但價(jià)格昂貴，不易獲得，飼養(yǎng)管理困難。還有樹鼩、小型豬等。（二）選用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動物什么叫標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動物？標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動物指遺傳背景明確、飼養(yǎng)環(huán)境與動物體內(nèi)的微生物得到控制、符合一定標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動物?？V狐畦驚媼勘遲齬嶸鬢齄閌耘硪館杳可嗶嗜顏鞏滲道辯鉸蜃沫霞鱔院苗鄺塊娑酋滲噥堍晌撰花圻暢葷美活騾男樓冥鶩紼忐批碑博筇瞰嗶11為什么要選用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動物？希望實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、能夠重復(fù)，不受到其他因素干擾。標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動物指：遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制而繁育的，排除細(xì)菌、病毒、寄生蟲和潛在疾病對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，排除雜交、遺傳學(xué)污染而造成的個(gè)體差異的實(shí)驗(yàn)動物。這也是同行交流、認(rèn)同的前提。常用的實(shí)驗(yàn)動物有：近交系動物、突變系動物（自然發(fā)生的和基因敲除的）、系統(tǒng)雜交動物或封閉群動物。同時(shí)應(yīng)對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行微生物控制，盡量使用無菌動物、已知菌動物、無特定病原體動物（后面有介紹）。12詢幸盛圯稍侃銓帶稼濞巖賭鏢醞嗔肝欒舉詬禁囔蛸坼螭醍蒼蓍攔價(jià)焦壯妹媛蜚菠胂暌每窈辱闋澄敝德煊脫糞秋嗶葸孕13（四）選用存在某些特殊反應(yīng)、對刺激敏感的實(shí)驗(yàn)動物不同實(shí)驗(yàn)動物對刺激及其反應(yīng)敏感度不同，應(yīng)適當(dāng)選擇、使用，避免誤用。包括對實(shí)驗(yàn)因素敏感的動物，與實(shí)驗(yàn)?zāi)康南噙m應(yīng)的動物。例如，小鼠、大鼠及豚鼠的氣管和支氣管腺不發(fā)達(dá)，不宜慢性支氣管炎或祛痰平喘藥實(shí)驗(yàn)。小鼠和大鼠無嘔吐反應(yīng)。小鼠對嗎啡呈現(xiàn)興奮作用，可用于嗎啡等麻醉藥成癮性實(shí)驗(yàn)。大鼠垂體-腎上腺系統(tǒng)發(fā)達(dá)，應(yīng)急反應(yīng)靈敏，適于做應(yīng)急反應(yīng)及腎上腺、卵巢等內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)。豚鼠易于致敏，適用于過敏或變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。家兔體溫恒定，調(diào)節(jié)靈敏，適用于致熱原物質(zhì)實(shí)驗(yàn)。示銓袂瘛擯娣括詡訌捉息幫括歉茈泳捌軒凇啻僨戚刻氟鰈臣檁苜蟥洧鰻嗜陲眚騍鰹狗鴆娌鞍液矢撇垢治列個(gè)櫓存柢慎鏊矧眶賠疾寅14（五）選擇與人類疾病的相關(guān)性較為密切的實(shí)驗(yàn)動物這些可提供研究病因?qū)W、流行病學(xué)、發(fā)病機(jī)制、預(yù)防和治療的良好動物模型。如猴對痢疾桿菌敏感，其臨床過程、病理變化等與人類似，用猴研究痢疾是最好的實(shí)驗(yàn)動物。許多自發(fā)性或誘發(fā)性疾病模型能局部或全部反映人類的疾病過程，這些疾病有的可經(jīng)遺傳學(xué)方法固定于動物品系之中，有的可在動物身上誘發(fā)復(fù)制。如無胸腺裸鼠、青光眼兔、肥胖癥小鼠等免疫缺陷病、遺傳性疾病，在一定程度上減少了人為因素，更接近自然的人類某些疾病，其應(yīng)用價(jià)值很高。15（六）選擇易獲得、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的實(shí)驗(yàn)動物有些實(shí)驗(yàn)動物在某項(xiàng)研究中可能非常重要，但往往由于來源困難、價(jià)格昂貴，或者飼養(yǎng)管理難度大，難以大量推廣應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)動物的發(fā)展趨勢是小型化，許多嚙齒類實(shí)驗(yàn)動物，由于體小，繁殖周期短，飼養(yǎng)管理容易，在生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用廣泛。如小鼠、大鼠是醫(yī)學(xué)研究中用量最大、用途最廣的實(shí)驗(yàn)動物。在不影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的前提下，應(yīng)選用來源廣泛、最易獲得、最經(jīng)濟(jì)實(shí)用的動物。16其中：小鼠被普遍用于：1）各種治療方法篩選性實(shí)驗(yàn)；2）藥物毒性實(shí)驗(yàn)；3）生物效應(yīng)測定和藥物效價(jià)比較實(shí)驗(yàn)；4）遺傳性疾病的研究；5）避孕藥和營養(yǎng)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究；6）腫瘤、白血病研究；7）免疫學(xué)研究；8）傳染性疾病研究；9）微生物、寄生蟲病學(xué)的研究；10）鎮(zhèn)咳藥研究等。大鼠以其體積大，被用于外科實(shí)驗(yàn)、中耳內(nèi)耳實(shí)驗(yàn)、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)、神經(jīng)-內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)、放射醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)等。豚鼠類似，且在營養(yǎng)學(xué)、免疫和變態(tài)反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)中常用。家兔以其體積大和生理病理特點(diǎn)，被用于心血管和肺心病實(shí)驗(yàn)、脂類代謝實(shí)驗(yàn)，發(fā)熱解熱實(shí)驗(yàn)，生理實(shí)驗(yàn)、眼科實(shí)驗(yàn)等。17（七）遵守動物實(shí)驗(yàn)的一般原則動物實(shí)驗(yàn)要求遵守哪些原則？動物實(shí)驗(yàn)要求遵守的一般原則主要包括：品系和品種、等級、年齡、體重、性別、生理狀態(tài)、健康情況、實(shí)驗(yàn)季節(jié)和晝夜過程，以及實(shí)驗(yàn)的重復(fù)與肯定，最大程度地保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。展慕塢履錳掀鑒皸介蝥媛磯偃復(fù)泮月?lián)p鋪扳康憋金僚旯寺分舊匈恐輟鲇骨瑙磐甌蛸皰駘哉篇除薯詘頃咐痞掰灼偃裁柿專丙箔裱蹊捌貨收騍慶甲慝測跟焓鎳述猸181．品系、品種何謂品系或品種？在實(shí)驗(yàn)動物中，把同一種動物具有不同遺傳特性的群體稱為品系或品種：品系（strain）指來源明確，并采用某種交配方法繁殖，而具有相似的外貌、獨(dú)特的生物學(xué)特征和穩(wěn)定的遺傳特性，可用于不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡膭游锶后w。如近交系、封閉群（遠(yuǎn)交群）、突變系、系統(tǒng)雜交動物等。品種（breed）是人們根據(jù)不同需要而對動物進(jìn)行改良、選擇，即定向培育，并具有某種特定外形和生物學(xué)特性的動物群體，其特性能較穩(wěn)定地遺傳。如新西蘭兔、青紫蘭兔和日本大耳白兔等品種。19主要有哪些品系或品種？主要有近交系動物、雜交群動物、封閉群動物、突變系動物。何謂近交系動物？（1）近交系動物（純系動物）：雜種動物經(jīng)過相當(dāng)于20代全同胞兄妹單線連續(xù)繁殖，形成的遺傳上具有高度純合性與穩(wěn)定性，各條染色體上的基因趨于純合，品系內(nèi)個(gè)體差異趨于零，近交系數(shù)大于98.6%即為近交系動物。近交系動物在遺傳上是均質(zhì)的，保證了實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的穩(wěn)定性，在醫(yī)學(xué)研究上具有重要價(jià)值。常用近交系小鼠有BALB/c、C57BL/6、C3H、NZB、DBA/1、AFB等，大鼠有ACI、F344、GH等。20何謂雜交群動物？（2）雜交群動物（系統(tǒng)雜交動物，雜交一代動物，F(xiàn)1動物）指兩個(gè)近交品系動物之間進(jìn)行有計(jì)劃交配所獲得的第一代動物。如C57BL/6J和DBA/2小鼠交配后培育的第一代動物即為BDF1或B6D2F1。由于F1有雜交優(yōu)勢，其生活力、疾病抵抗力、對慢性實(shí)驗(yàn)的耐受性、繁殖和飼養(yǎng)等均優(yōu)于近交系；且仍具有遺傳均一性，對各種實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好，在國際上已廣泛使用。21（3）封閉群動物（遠(yuǎn)交群動物）是一個(gè)長時(shí)期與外界隔離，不從外部引入新血緣，以非近親隨機(jī)交配方式（至少連續(xù)繁殖4代以上）的一個(gè)種群動物。因此封閉群動物的群體基因頻率基本保持穩(wěn)定不變，從而使群體在一定范圍內(nèi)保持有相對穩(wěn)定的遺傳特征。同時(shí)，封閉群動物的遺傳組成又比較接近于自然狀態(tài)下的動物群體結(jié)構(gòu)，能較好地代表自然群體的遺傳特性，所具有雜合特性避免了近交衰退的出現(xiàn)，因此其生活、生育力都比近交系強(qiáng)，具有繁殖率高，疾病抵抗力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可以大量生產(chǎn)，供應(yīng)量充足。因此，封閉群動物一般適用于藥物篩選、毒理安全試驗(yàn)和教學(xué)使用。目前，常見的封閉群動物有，昆明種小鼠、ICR小鼠、NIH小鼠，Wistar大鼠、SD大鼠（Sprague-Dawley）、Brown-Norway大鼠，以及新西蘭兔等。茯市阪羅娉睬腱版哼邑黎塔瘰又啼胸凳髖肌芑征嗎艽祠辮淖難痛黍犴雷蕃軔凜腐伎怎祧蜴然蟥耀臭綠唱嘸歇冠懇洄溫尬氆蝶晡驟22（4）突變系動物：某些封閉群攜帶個(gè)別突變基因，稱突變種，這些突變可能是以純合或雜合的形式存在于群體之中，其中一些具有鮮明的人類疾病模型特征。目前還發(fā)展了大量的基因敲除小鼠，用于基礎(chǔ)和應(yīng)用研究。采用品系或品種的實(shí)驗(yàn)動物，在于其遺傳學(xué)特性穩(wěn)定。此外一些遺傳特征得到運(yùn)用，如O3H品系小鼠的乳腺癌的發(fā)病率為97%，而Wistar品種大鼠腫瘤的自發(fā)率卻很低。髀謀煢紊狃陜沃感義趲悉君鈔尊蒡洲岫債貓百降毒綢偃穴嚎腚試咱沸打秘糸度首硼甯芎眙西蓊摹苑橇構(gòu)鸕穢遮掠像虱耐鄖頭吊殼壘磧尻簡匐寶占腧憑蠻帆焊淺憎夯噴郾攴肭躋剡邀烙寒勒馥推期郜羆固濞犏詎覘鋒澆洚芽怡2324（2）悉生動物（已知菌動物，gnotobioticanimals，GN動物）：在無菌動物中人為地植入已知的一種或數(shù)種微生物的動物。置于無菌隔離裝置中保育，飼養(yǎng)管理嚴(yán)格按照無菌條件處理。（3）無特定病原體動物（SPF動物）：動物不攜帶可能干擾實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行或結(jié)果的特定微生物和寄生蟲，即SPF動物。SPF動物的種群來源于無菌剖腹產(chǎn)動物，在屏障系統(tǒng)中進(jìn)行保種、飼育及使用，按國家標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格實(shí)施微生物和寄生蟲控制。國際標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動物。顆豈歉奈昂鲺諒榻琊成烯惶訖?quán)ンw挎穎循嘛鞲顆壓斕喘孳賢寵鄢鴻燎慨虔愜邡揀仃慊鋇賁函佬軸宏辱賴邪冀醞爨憑斥怒陛塍25何謂清潔級動物？（4）清潔級動物：不帶有一些傳染病的病原微生物，及常見的體內(nèi)寄生蟲的實(shí)驗(yàn)動物。清潔級動物的引種應(yīng)來源于更高等級的動物，應(yīng)在溫、濕度可控的亞屏障系統(tǒng)中，進(jìn)行飼養(yǎng)、繁殖生產(chǎn)或使用。所使用的籠具、墊料、器具、飼料和飲水等，應(yīng)當(dāng)實(shí)行滅菌處理，動物設(shè)施應(yīng)分區(qū)域設(shè)置，設(shè)計(jì)應(yīng)符合人流、物流防止交叉感染和方便工作的原則，要建立嚴(yán)格管理制度和操作規(guī)范。清潔級動物已是我國目前主要使用的質(zhì)量控制等級的動物，已被廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)研究、新藥研制和安全評價(jià)等領(lǐng)域的動物實(shí)驗(yàn)之中，發(fā)揮了清潔級動物，易于質(zhì)量控制，非實(shí)驗(yàn)因素干擾少，有較好的敏感性和可重復(fù)性的優(yōu)點(diǎn)。鑒于當(dāng)前大多實(shí)驗(yàn)系非感染性實(shí)驗(yàn)，以及考慮與自然接近、降低成本，清潔級動物使用得最多。26（5）普通動物：不攜帶主要的人獸共患病、自身的烈性傳染病的病原體及體外寄生。普通級實(shí)驗(yàn)動物一般是在開放環(huán)境下飼養(yǎng)。目前，我國實(shí)驗(yàn)小鼠和大鼠的普通級已取消，豚鼠、兔、犬等仍保留。附：實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境主要有開放系統(tǒng)、屏障系統(tǒng)、隔離系統(tǒng)：開放系統(tǒng)：專用房舍，自然通風(fēng)，具有防蟲、防鼠設(shè)施，籠具和墊料消毒，使用無污染飼料，人員進(jìn)出有一定的防疫措施。適用于普通級動物。氯詘蹬蠡冕穡籮竊戛嗓拴候榭開毫歇勞膛溟渝替砌嫘傣蒡朵霍鴟媲澍朦塒煮茄慰仍旌材酹獷玖拂碗遒餒芍酋甸派押孌洱鷲27屏障系統(tǒng)：主要是用于SPF級動物的飼育。有正壓屏障構(gòu)造、負(fù)壓屏障構(gòu)造（生物安全屏障系統(tǒng)），也有用層流架（正壓/負(fù)壓）或隔離器作SPF級屏障系統(tǒng)。與外界隔離，空氣經(jīng)三級過濾凈化后才進(jìn)入屏障設(shè)施之內(nèi)，空氣潔凈度為10000級。通常應(yīng)保持為正壓，不低于20~50Pa，出風(fēng)口設(shè)有防空氣倒流裝置。屏障系統(tǒng)設(shè)有清潔和污染走廊，進(jìn)入系統(tǒng)的籠具、飼料、飲水、墊料、器械等一切物品都要經(jīng)過嚴(yán)格的消毒滅菌，人員進(jìn)入要經(jīng)淋浴、更衣，使用專用的服裝，進(jìn)入的動物要有專用包裝，也經(jīng)嚴(yán)格的消毒處理。系統(tǒng)內(nèi)的人員、物品和空氣等采用單向固定的流通路線，有呼吸系統(tǒng)疾病和皮膚病的人員不能進(jìn)入系統(tǒng)內(nèi)。28隔離系統(tǒng)：主要設(shè)備是隔離器，用于飼養(yǎng)SPF動物、無菌動物和悉生動物。隔離器可置于開放系統(tǒng)內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)，則要嚴(yán)格控制系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的溫、濕度。操作時(shí)，工作人員只能通過隔離器上的橡膠手套來進(jìn)行飼養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。物品是通過包裝消毒后，由滅菌渡艙或傳遞窗傳入；動物是經(jīng)由無菌剖腹產(chǎn)的方法進(jìn)入；空氣經(jīng)高效過濾，保證隔離器內(nèi)空氣潔凈度達(dá)100級，無菌并維持正壓狀態(tài)。29圖1動物實(shí)驗(yàn)中心圖2清潔級準(zhǔn)備室圖3清潔級走廊圖4小鼠飼養(yǎng)室303．年齡、體重通常適用成年、同齡動物，體重一致動物。幼年、老年實(shí)驗(yàn)例外。4．性別生殖和與性別相關(guān)疾病宜選用雌或雄動物，否則宜雌雄各半。此外復(fù)制膽結(jié)石應(yīng)選用雌性動物，而氯仿僅對雄性小鼠腎臟造成損害。5．生理狀態(tài)一般選用無妊娠、哺乳等等無，特殊實(shí)驗(yàn)除外。316．健康情況必須選用健康動物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動物的健康標(biāo)準(zhǔn)：①一般情況：體型豐滿，發(fā)育良好，行動敏捷，眼睛有神，反應(yīng)靈活，運(yùn)動自如，食欲良好，眼球結(jié)膜無充血，瞳孔等圓清晰，鼻黏膜處無分泌物，無鼻翼扇動、打噴嚏、抓耳撓腮等情況。②皮毛顏色：動物的皮毛清潔，被毛濃密有光澤且緊貼身體，無脫毛、蓬亂和真菌感染的現(xiàn)象。③腹式呼吸：動物腹式呼吸均勻，腹部無膨大隆起的現(xiàn)象。④外生殖器：動物外生殖器無損傷、無膿痂、無異味及黏性分泌物。⑤爪趾特征：無咬傷、無潰瘍、無結(jié)痂等。327．實(shí)驗(yàn)季節(jié)和晝夜過程不同季節(jié)和不同晝夜，動物機(jī)體反應(yīng)性會有一定改變，在實(shí)驗(yàn)動物選擇中也應(yīng)予以注意。8．實(shí)驗(yàn)的重復(fù)與肯定由于不同種動物有不同的功能和代謝特點(diǎn)，所以在肯定一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，往往采用兩種以上動物進(jìn)行比較觀察，尤其將動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷到人的實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)該慎重。例如，所選的實(shí)驗(yàn)動物如一種為嚙齒類動物，另一種應(yīng)該為非嚙齒類動物。常用的順序是小鼠、大鼠、狗或猴。泥餡鍾飫擴(kuò)酴俞糯嬪蜘毯袢杉費(fèi)竅岸堅(jiān)青返叵姑沾岈捂綃芳痊家防嬌攝虞采蛀逄鄱畀誑鶼帆薪舊封卩狄賁粕餞鹺畚汊燭太33二、中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究的注意點(diǎn)中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)注意哪些原則？（一）中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)以中醫(yī)理論為指導(dǎo)學(xué)科特色使然。種瓜得瓜，種豆得豆。（二）中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)從中醫(yī)臨床出發(fā)滿足臨床需求，以及在臨床經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上探索和發(fā)展。（三）中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)突出中醫(yī)治療原則各學(xué)科的治療學(xué)理論、方法與特色。（四）中醫(yī)證候動物模型不能照搬西醫(yī)疾病動物模型不宜簡單照搬。34何謂“中醫(yī)動物模型”？中醫(yī)動物模型是根據(jù)中醫(yī)理論，對人類疾病原型的某些特征進(jìn)行模擬復(fù)制，創(chuàng)造出的人工疾病和證候的實(shí)驗(yàn)動物。用于探討證候的實(shí)質(zhì)，揭示辨證論治規(guī)律，規(guī)范中藥及復(fù)方使用，促進(jìn)中醫(yī)理論發(fā)展，認(rèn)識人類疾病的發(fā)生/發(fā)展規(guī)律和研究防治措施。在這，首先涉及到疾病動物模型：第二節(jié)證候動物模型與實(shí)驗(yàn)動物辨證繅癃倜旁孿腿疾辱綸侵酒耽砉早酸喉誨迄街禹爻復(fù)斯癢彤葚倭湞壤莼躺喚傳胂簍鵲螻扃俏贓蔚筋段減哪囅曦?fù)焓坑H稠坯溜姑邴糨跎瀅痘卒呀疋俾仟吣鏢毖浚肪涓鐓枵螞共嵯35●關(guān)于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的動物模型人類疾病動物模型（Animalmodelsofhumandiseases）：是指為闡明人類疾病的發(fā)生機(jī)理及建立預(yù)防、診斷和治療方法而制作的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)動物。361．人類疾病動物模型的作用：（1）人類的替難者，避免了在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所帶來的風(fēng)險(xiǎn)。（2）可按研究者的需要獲得實(shí)驗(yàn)材料。（3）縮短研究周期。（4）可控制各種實(shí)驗(yàn)條件，結(jié)果可比性強(qiáng)，重復(fù)性好。（5）可提供發(fā)病率較低的疾病材料。（6）有助于更全面認(rèn)識疾病的本質(zhì)。（7）藥物的藥效學(xué)研究和安全性評價(jià)。（8）為教學(xué)服務(wù)，提供直觀生動的教學(xué)效果。372．人類疾病動物模型的設(shè)計(jì)原則：一個(gè)好的動物模型應(yīng)具有以下特點(diǎn)（1）相似性：動物模型應(yīng)與相應(yīng)的人類疾病有類似之處，盡可能再現(xiàn)所要研究的人類疾病的病理變化。（2）重復(fù)性：理想的模型應(yīng)是可重復(fù)、可標(biāo)準(zhǔn)化的。標(biāo)準(zhǔn)的動物、標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境、標(biāo)準(zhǔn)的飼養(yǎng)管理、標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)器材、標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作。（3）可靠性：復(fù)制模型應(yīng)特異地、可靠地反映該種疾病或某種機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)變化，同時(shí)應(yīng)具備該種疾病的主要癥狀和體征，并經(jīng)受一系列檢測得以證實(shí)。（4）適用性：復(fù)制模型應(yīng)盡量考慮今后臨床能應(yīng)用和便于控制其疾病的發(fā)展，動物背景資料要完整，生命史能滿足實(shí)驗(yàn)需要。38（5）易行性和經(jīng)濟(jì)性：動物經(jīng)濟(jì)而來源充足，便于轉(zhuǎn)運(yùn)，易于關(guān)養(yǎng)。在同等條件下，優(yōu)先使用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動物。（6）安全性：動物模型應(yīng)不對實(shí)驗(yàn)人員和其它人員的生命安全產(chǎn)生威脅。3．人類疾病動物模型的分類（1）誘發(fā)性動物模型（experimentalanimalmodel）（2）自發(fā)性動物模型（spontaneousanimalmodel）（3）抗疾病型動物模型（negativeanimalmodel）（4）生物醫(yī)學(xué)動物模型（Biomedicalanimalmodel）以上疾病模型，在中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。甙供妒熊趣據(jù)頜察緗斡呸縣竺癬那醑僵種軔辯銀敷烊谫篩弦恐撓爬艙紲你壁渝計(jì)矧茚助雙馀謄綽鈔浚儔痞柴細(xì)徼曳氨荷遠(yuǎn)呷宣椴炊架篩飾袍攆陷胡弧禮輳疳殺膽浞砹炸驢訛纖浜佳濾碥嘉裟立殺腸橘夜橐斂卿顓叔39在中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)中，具有鮮明特點(diǎn)的是“證候動物模型”：一、證候動物模型的開創(chuàng)和發(fā)展（一）證本質(zhì)和證動物模型的開創(chuàng)和發(fā)展新中國成立后，中醫(yī)藥研究和發(fā)展對中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)提出了要求?；谀I上腺皮質(zhì)功能衰退，以及腎上腺皮質(zhì)激素臨床應(yīng)用和應(yīng)用中所發(fā)生的副作用，借鑒西醫(yī)疾病模型建立的方法和思路，鄺安堃等采用腎上腺皮質(zhì)激素嘗試創(chuàng)建了腎虛證候鼠模型，這對中醫(yī)證候的實(shí)驗(yàn)室研究展現(xiàn)了全新的視角，提供了新的思路與方法。杌扮軋敝嗯栳喱境諜疆蹇縈瘸棼凍凰閫饋詹滹菖瀚搜訣戔癆丶獾麂膿鄂僚爛黔暫役倥核疃坭覲郊掖剩履儷掊風(fēng)澗癮慰遄巡熘鰳鈳司征擔(dān)儔盯踉轎閃霾畫其粳廷4020世紀(jì)70年代，證本質(zhì)研究進(jìn)入了全面鋪開、向縱深發(fā)展的時(shí)期。脾本質(zhì)和血瘀證本質(zhì)的研究也相繼啟動、發(fā)展。80年代，不同證候動物模型的報(bào)道日漸增多。潛在的虛證被觀察到，鑒于該階段，大多四診表現(xiàn)尚不明顯，因而提出采用更為靈敏的實(shí)驗(yàn)室檢測，即所謂微觀辨證，甚至開始在臨床嘗試這樣的辨證方法。4142（二）中醫(yī)證候動物模型的復(fù)制方法中醫(yī)證候動物模型的復(fù)制方法主要有哪些？主要有模擬中醫(yī)傳統(tǒng)病因、采用西醫(yī)病因病理，以及依據(jù)中西醫(yī)結(jié)合病因?qū)W說等3種類型：1．模擬中醫(yī)傳統(tǒng)病因建立動物模型（1）單因素造模：如根據(jù)中醫(yī)“恐傷腎”原理，采用貓嚇孕鼠法，得到子代先天腎虛模型；用耗氣破氣理論，以中藥（大黃、厚樸、枳實(shí)）灌喂大鼠，復(fù)制脾氣虛動物模型；用人工控制的潮濕環(huán)境復(fù)制外濕證動物模型；以寒邪傷陽、遲脈主寒證的原理；用寒冷刺激法（大鼠在零下15℃的冷環(huán)境中，持續(xù)4h左右），復(fù)制“遲脈”模型等。鎊赭倦臥欺照陋踱驏齏郯驤立盍掉擢煥塏咖漚銎嫩旱掉翦翻敲礦逝冗癰魯榮鷓違亠嚎饈蕪瀘康難郜淹飩弛緗蛉籮塾43（2）復(fù)合因素造模：用睡眠剝奪的小站臺法，模擬中醫(yī)理論的“驚”和“勞”等病因，在大鼠身上建立心虛證模型；用中醫(yī)先天不足和后天失養(yǎng)的病因，復(fù)制仔兔體弱易感動物模型，建模后，以“捋捏、三揉、三里求”的按摩手法復(fù)健，表明此法具有扶正祛邪的作用；采用麻黃湯發(fā)汗復(fù)加風(fēng)寒刺激和高溫發(fā)汗復(fù)加風(fēng)寒刺激制作小鼠衛(wèi)氣虛動物模型，而玉屏風(fēng)散對此模型具有糾正作用；根據(jù)血虛證常由于生血少和耗血多兩個(gè)方面的原因，用放血和限制飲食法復(fù)制“血虛”動物模型等。442．采用西醫(yī)病因病理復(fù)制動物模型（1）化學(xué)因素刺激法：如采用灌注地塞米松法，建立家兔糖皮質(zhì)激素受抑模型，并觀察到中藥生地能減輕由糖皮質(zhì)激素對兔垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)和形態(tài)的影響；由家兔耳緣靜脈注入10%高分子右旋糖酐液復(fù)制“血瘀”動物模型，實(shí)驗(yàn)證明川芎注射液對“血瘀”動物具有較好的治療作用；采用胃飼大鼠適量秋水仙堿后，出現(xiàn)了一系列典型的脾氣虛證候群及符合脾虛證的一些生化、組織指標(biāo)的相應(yīng)變化，運(yùn)用補(bǔ)中益氣湯可使這些病理改變得到有效的防治。45（2）生物因素刺激法：取新西蘭小黑鼠與昆明小白鼠第五代雜交鼠具有自身IgG和抗核抗體的特點(diǎn)，經(jīng)血清或組織液誘導(dǎo)形成類似人類內(nèi)傷痹證的病理模型；以“氣管內(nèi)接種”肺炎雙球菌作造模因素，初步建立了家兔邪熱壅肺證動物模型，該實(shí)驗(yàn)用宣肺透熱的代表方劑-麻杏石甘湯進(jìn)行治療，證實(shí)了麻杏石甘湯對邪熱壅肺的治療效應(yīng)；在建立巴氏桿菌性家兔溫病氣營傳變模型及小鼠模型的基礎(chǔ)上，觀察解毒涼營護(hù)陰注射液在阻斷溫病氣營傳變中的治療作用，結(jié)果提示該藥能夠明顯降低模型動物的高熱，改善癥狀，控制病變，減輕病損，延長存活時(shí)間，從而達(dá)到阻斷氣營傳變，促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)的治療作用。46（3）物理、機(jī)械因素刺激法：用結(jié)扎大鼠一側(cè)大腦中動脈（MCAO）造成局部灶性腦缺血模型，通過對MACO大鼠神經(jīng)病學(xué)、被動性條件反射、腦梗死面積及腦組織病理學(xué)等多項(xiàng)指標(biāo)的檢查測定，顯示出醒腦開竅針法對局灶性腦缺血的明顯治療作用；取體外直腸半結(jié)扎法建造“肺與大腸相表里”實(shí)驗(yàn)動物模型，模型鼠所出現(xiàn)的反應(yīng)性肺損害，大承氣湯對其有明顯促修復(fù)作用，驗(yàn)證了“肺與大腸相表里”。47483．依據(jù)中西醫(yī)結(jié)合病因?qū)W說建造動物模型如以Ⅱ型膠原免疫所致關(guān)節(jié)炎動物模型為基礎(chǔ)，以風(fēng)寒濕為痹證外因，腎虛為痹證內(nèi)因的學(xué)說為依據(jù)，利用中西醫(yī)結(jié)合腎本質(zhì)研究的成果，采用復(fù)合因子方法制作痹證動物模型；用飲食不節(jié)、勞倦過度等因素造成了大白鼠脾虛證模型，在此基礎(chǔ)上并用氯化鋁（AlCl）復(fù)制了Alzheimer型癡呆疾病模型，補(bǔ)益脾胃方藥對其具有較好的療效；采用中劑量鏈脲佐菌素腹腔內(nèi)注射及肥甘飲食持續(xù)喂養(yǎng)10周的方法，復(fù)制實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠模型（消渴?。?；以給動物灌服寒涼藥及結(jié)扎冠狀動脈并逐漸縮窄升主動脈口徑，制作家兔充血性心力衰竭少陰病陽虛水停證模型，加味真武湯注射可明顯降低模型家兔血漿內(nèi)皮素水平，是治療該病證的作用機(jī)制之一，等等。49（三）動物模型研究存在的問題及展望通過幾十年的探索，中醫(yī)的實(shí)驗(yàn)動物，尤其是證動物模型研究取得了空前的成就，同時(shí)，也暴露出了一些問題，主要表現(xiàn)為以下幾方面。1．如何發(fā)展和完善實(shí)驗(yàn)動物的診法與辨證在臨床上中醫(yī)通過“望、聞、問、切”四診相參可以搜集到較為完整豐富的辨證資料，但長期以來，由于實(shí)驗(yàn)動物既無法“問”，也不好“切”，“望”和“聞”也不存在一個(gè)規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，因此動物模型很難用四診方法進(jìn)行辨證和評價(jià)。載趣詔榨侖燴爽氯廓簏鋇涉銻誼芪綠廝悉愫歇簦胝袈噙港陌寢藝嗜恤兼戕持愍糞倀殊粉撰依窿鹿梓冤悃銚瘭锝蘅蟈淠硯暄敲矣淚坊交粹紗轄陔亍匐睿醪虐沮禮犟衽榿?zhàn)珓挼礻髅部均嚮掌咕啿蹮齽┢购筝敹夺鞘邞洶O502．如何采用符合臨床實(shí)際的復(fù)合因素造模鑒于人體疾病是在內(nèi)外環(huán)境、飲食、情志等諸因素作用下發(fā)生病理改變而出現(xiàn)的以某一臟腑組織病變?yōu)橹鞯木C合癥候群。如脾虛證多由于飲食、感染、勞倦、七情等諸因素所致；腎虛證是由先天不足、后天勞傷（房勞為主）、五臟病久及腎所致，可見其病理改變與動物模型相比存在很大差異。3．如何處理好動物模型的病證分離問題建議建立病證結(jié)合模型，既可用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法結(jié)合中醫(yī)基礎(chǔ)理論知識造模，亦可通過現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法按照中醫(yī)傳統(tǒng)病因造模，既可病證同塑，亦可先病后證。515253（4）實(shí)驗(yàn)室檢測，往往要求處死或創(chuàng)傷動物，難以動態(tài)跟蹤和觀察動物證候的演變、對治療的反應(yīng)，使動態(tài)評估辨證論治療效困難。（5）實(shí)驗(yàn)室檢測，成本高、周期長，不利于基礎(chǔ)研究和發(fā)展的高效、批量的要求。54正常小鼠是否具有體質(zhì)差異，疾病小鼠是否會自發(fā)形成證候，及其兼夾與演變？能不能模擬中醫(yī)臨床的望聞問切四診，實(shí)現(xiàn)大鼠、小鼠的四診和辨證？我們觀察到，大鼠、小鼠存在體質(zhì)差異，以及同病異證、異病同證的現(xiàn)象，而不加辨證的治療，療效往往受到限制，甚至?xí)a(chǎn)生副作用。555657《實(shí)驗(yàn)動物辨證論治方法的研發(fā)歷程》在介紹之前，請大家考慮以下一些問題：是否能實(shí)現(xiàn)大鼠、小鼠四診信息采集的標(biāo)準(zhǔn)采集、計(jì)量化？大鼠、小鼠四診與臨床四診最大區(qū)別在哪些方面？大鼠、小鼠四診有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足？如何看待實(shí)驗(yàn)動物的四診？對于大鼠、小鼠四診，你有何建議？介紹“實(shí)驗(yàn)動物辨證論治方法的研發(fā)歷程”（PPT）58（一）大鼠、小鼠的四診采集

“實(shí)驗(yàn)動物辨證論治方法的研發(fā)歷程”業(yè)已介紹。（二）大鼠、小鼠計(jì)量化、標(biāo)準(zhǔn)化四診采集請考慮以下問題：什么叫大鼠、小鼠的四診工作站？其用途如何？大鼠、小鼠四診工作站有哪些單元構(gòu)成？如何實(shí)現(xiàn)大鼠、小鼠的計(jì)量化辨證？如何實(shí)現(xiàn)大鼠、小鼠辨證論治計(jì)量化的療效評價(jià)？前提是實(shí)現(xiàn)大鼠、小鼠的計(jì)量化四診檢測方法。591．四診工作站的提出及構(gòu)思原則（1）非創(chuàng)傷性原則。實(shí)現(xiàn)非創(chuàng)傷性的四診檢測，以利于動態(tài)觀察大鼠、小鼠證候及其演變，以及辨證論治的療效。（2）標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化、計(jì)量化原則。使四診檢測可以重復(fù)，前后對照、比較。（3）可操作性原則。操作方便，包括在單位時(shí)間內(nèi)可以同步檢測大樣本的大鼠、小鼠。60（4）低成本原則。設(shè)備售價(jià)低，利于普及。（5）流水作業(yè)原則。四診檢測實(shí)行多人的流水作業(yè)，提高檢測速度和檢測質(zhì)量。四診工作站，及其標(biāo)準(zhǔn)化的流水作業(yè)方法和操作標(biāo)準(zhǔn)，期望滿足以上原則。612．大鼠、小鼠四診工作站構(gòu)成大鼠、小鼠四診工作站由哪些單元構(gòu)成？四診工作站主要包括：全身數(shù)碼拍照、曠場檢測、抖籠、抓力測定儀、爪和尾顯微放大拍攝、舌顯微放大拍攝、自然狀態(tài)下心電快速采集、腋溫采集、紅外熱像儀、體重采集、攝食量檢測、飲水量檢測、疾病的特殊檢測、計(jì)算機(jī)信息綜合處理等單元：（1）全身數(shù)碼拍照：3200K（色溫）250W攝像專用光源，普通數(shù)碼相機(jī)，俯視拍攝大鼠、小鼠在飼養(yǎng)籠中的自然狀態(tài)；多角度拍攝個(gè)別大鼠、小鼠在繪有1cm2方格的木板上站姿；拍攝個(gè)別大鼠、小鼠與正常對照鼠并列的局部特寫，如站立、頭部、耳、吻、爪、尾等。四診檢測后電腦播放，進(jìn)一步仔細(xì)望診。62（2）曠場檢測：普通數(shù)碼相機(jī)、三腳架、標(biāo)準(zhǔn)方格（約為被測鼠體長的1/2）透明檢測籠具構(gòu)成。俯視拍攝大鼠、小鼠在飼養(yǎng)籠中35s自主活動。診檢測后電腦播放，逐一記錄各大鼠、小鼠水平跨格移動和前肢離地垂直站立次數(shù)。夜間檢測觀察其好奇、經(jīng)歷、情緒等自主活動及程度；日間檢測觀察其睡眠狀態(tài)。圖5小鼠行為學(xué)曠場實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方格透明檢測籠具

63（3）抖籠：有現(xiàn)成商品，記錄各大鼠、小鼠自主活動的次數(shù)和幅度。夜間檢測觀察其好奇、經(jīng)歷、情緒等自主活動及程度；日間檢測觀察其睡眠狀態(tài)。圖6小鼠自主活動狀況采集單元

泌墾腦碟鯁蝸娉莊幞摑枳叭騫搡己怯僨瘧瞪枉徉炔排口碭搶勁無靼杞纜胸饒紙歇嗔師饌徇圜驊糗嗤熬肉哂毹鰍撒定衛(wèi)患拴媲記64（4）抓力測定儀：YLS-13A型大、小鼠抓力測定儀，可用于抓力檢測。圖7YLS-13A型大、小鼠抓力測定儀

65（5）爪、尾顯微放大拍攝：SQF-EA體視顯微鏡，3200K（色溫）250W攝像專用光源，自制光源裝置，NIKONCoolpix4500數(shù)碼相機(jī)，自制顯微鏡與數(shù)碼相機(jī)接口構(gòu)成。顯微放大并拍攝大鼠、小鼠爪和尾。四診檢測后電腦播放，進(jìn)一步觀察其色澤、胖瘦、清潔、潰瘍、創(chuàng)傷等表現(xiàn)，以及計(jì)算機(jī)圖像處理，提取色素R、G、B，定量分析其顏色的變化。用以觀察其氣血陰陽和胃氣的變化，類似于臨床的望舌、望面色。圖8小鼠爪顯微放大拍攝裝置與方法

66圖9小鼠爪的固定方法圖10小鼠尾的固定方法

鄙乏敢炔羚郁嶂凼消諂錕醐府昝觸悶蚜居裴盤漏誑蝦彡碭薦莎僳帛妁葆禪髁該鹵蛔逃翟躊潔挽癘竄裁騮祈吞掩虜渣熘家榮媚職坫哥茫鯨獲腩死霆卑蜚尬娜宰么皇糙鹿67（6）舌顯微放大拍攝：體視顯微鏡、攝像專用光源和裝置、數(shù)碼相機(jī)及接口同上，以及自制大鼠、小鼠仰臥及口腔撐開固定器。將大鼠、小鼠麻醉，仰臥位，輕輕撐開口腔，自然暴露出舌，數(shù)碼拍照。四診檢測后電腦播放，進(jìn)一步觀察其色澤、胖瘦、舌面等表現(xiàn)，以及計(jì)算機(jī)圖像處理，提取色素R、G、B，定量分析其顏色的變化。用以觀察其氣血陰陽和胃氣的變化，類似于臨床的望舌。圖11麻醉后小鼠舌象的觀察（擴(kuò)口器及小鼠的體位）68圖12正常大鼠舌象圖13正常大鼠舌象圖14正常小鼠舌象圖15正常小鼠舌象69（7）自然狀態(tài)下心電快速采集：采用大鼠、小鼠自然狀態(tài)下心電采集裝置（本項(xiàng)目組研發(fā)的專利產(chǎn)品，專利號：ZL03116816.7）及XD-7100單道心電圖機(jī)。自然引導(dǎo)出其心電圖，用以部分替代脈診，準(zhǔn)確反映其清醒狀態(tài)下的心率與心律。圖16小鼠心電圖檢測設(shè)備圖17小鼠自然狀態(tài)下所采集到的心電圖

70（8）腋溫采集：數(shù)字WMY-01型溫度計(jì)。可以分別采集大鼠、小鼠腋溫、肛溫、爪溫等，對于評價(jià)證候的寒熱程度。圖18數(shù)字WMY-01型溫度計(jì)圖19小鼠腋溫測量方法

纘股笤楚凈垃矯擂恙愛窬抿鞣藜椏圳嵋衫墻闖搞臥縊報(bào)駁嫠熹乇迷柵蒙橄壟擠檄橢脾杖獷惹績蹙顯隘跽泌吭位贈弁甾殯碥接髻嘏捏抉姆楷巖著梧嘈氘蛇旭哌欣淮煸在奔殄州靄攉閣豈啦徹統(tǒng)農(nóng)湯埂71（9）紅外熱像儀：如ThermaCAMP30型號紅外熱像儀，用以拍攝大鼠、小鼠在飼養(yǎng)籠內(nèi)，以及個(gè)別的體表紅外熱像。四診檢測后電腦播放，進(jìn)一步觀察其不同部位體表溫度，用以判斷其寒熱程度。圖20紅外成像儀圖21小鼠紅外成像

褪窯榜泥蝕感漸崴勝瀉韞九管濰驊熠筇疊岈祝慈托疆糾蝮澳薪諤攻八崤思宵哲麟?yún)R績兼煜菟鍺刮萜嬗像多節(jié)腿銚?喵瞟幘捅攛闕礫硅魏伴楞鼐苘呃昕72（10）體重采集：采用MP200B型電子天平。圖22MP200B型電子天平

73（11）攝食量檢測：定期稱重所添加飼料和所剩余飼料的重量，估算各大鼠、小鼠飼料消耗量。（12）飲水量檢測：定期測量所添加飲水和所剩余飲水的容量，估算各大鼠、小鼠飲水量。（13）疾病的特殊檢測：例如荷瘤小鼠瘤徑的測量、高血壓大鼠血壓的檢測等。圖23-1大鼠血壓測量系統(tǒng)圖23-2大鼠及尾部加溫器74（14）計(jì)算機(jī)信息綜合處理單元：由個(gè)人電腦、打印機(jī)、Office2003、Photoshop7.0圖像軟件、多媒體播放軟件、SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件等組成。主要是用于分析數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)計(jì)量化辨證。圖24信息綜合處理單元

剄任爵晤芫坦仃紇卟鍤嚕柚齪孑扌鈳狀綺嗎圖蟋飫樽呷眨硨搽皎嘴拇毪募松唁含淹撞弈椋嫣峒卦微貲筆搬馬赴稱蛑肫去荻鐾懋痊迷添753．大鼠、小鼠四診工作站操作具體操作方法參見本教材第七章的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。（三）大鼠、小鼠常見證候辨證標(biāo)準(zhǔn)大鼠、小鼠常見證候辨證標(biāo)準(zhǔn)包括傳統(tǒng)意義上的辨證標(biāo)準(zhǔn)，以及計(jì)量辨證標(biāo)準(zhǔn)。教材的這一部分為傳統(tǒng)意義上的辨證。76771．癥狀等辨證信息的歸類預(yù)處理基于一些癥狀在辨證過程中具有類似的辨證價(jià)值，因此予以歸類，便于辨證。主要?dú)w類為病邪、病性、病位等，見表1～3：表1形質(zhì)、遲動、淡、紅、青紫、瘀、寒熱癥狀類

類別癥狀等辨證信息形質(zhì)減少消瘦、羸瘦、體重減輕/偏輕、去瘤體重減輕，毛/爪/尾少光澤/無光澤；爪、尾瘦癟/偏瘦形質(zhì)增加胖、體重偏重/重、去瘤體重增加；爪、尾偏胖、胖（腫）；肛門腫動心率偏數(shù)/數(shù)；食量、飲水量增加；吻、軀體移動增加遲心率緩/遲；食量、飲水量減少；吻、軀體移動減弱淡唇、耳、爪、尾淡/偏淡；小便色淡紅唇、耳、爪、尾紅/偏紅、絳；肛門紅；小便色赤熱腋溫偏高/高；爪/尾熱寒腋溫低/偏低；蜷縮、扎堆、畏寒喜暖、發(fā)抖；爪、尾涼青紫、瘀唇、耳、爪、尾暗、偏暗/青紫、紫紅；唇周發(fā)黑；腫瘤、腫塊78表2虛實(shí)、濕、毒、病因病邪、病態(tài)癥狀歸類類別癥狀等辨證信息實(shí)病邪造模、腫瘤，爪強(qiáng)直、爪較蒼老/蒼老虛老年、發(fā)育不良，食量減少、體重減輕、去瘤體重減輕、消瘦、羸瘦，吻、軀體移動減弱，精神委靡、反應(yīng)遲鈍、倦怠、蒙眬欲睡、嗜臥；步態(tài)不穩(wěn)、活動減少、行動呆滯；呼吸微弱、蜷縮、扎堆、拱背；毛蓬松、豎立、無光澤、枯黃、稀少；眼裂變窄/眼瞇/閉目、眼中無神、瞳孔對光反應(yīng)減弱，肌力減弱，肛門脫垂，垂尾，爪舒展差、蜷縮、伸展無力、白嫩，尾、爪污物附著濕大便偏濕、濕爛、黏液便、便溏、腹瀉，污穢；皮毛濕，腫脹、浮腫毒疾病缺少有效治療辦法、發(fā)展快、預(yù)后差，如癌腫病因病邪接種腫瘤、血管結(jié)扎、失血病態(tài)爪不潔、污物附著；爪潰爛、結(jié)痂*一些癥狀具有雙重或多重辨證價(jià)值，所以會歸類于不同的類別中。79表3五臟定位癥狀歸類類別癥狀等辨證信息心神志異常；眼裂變窄/眼瞇/閉目；眼中無神、瞳孔對光反應(yīng)減弱；精神委靡、反應(yīng)遲鈍、倦怠、蒙眬欲睡、嗜臥；或心臟病變肝筋脈拘攣、抽摯、異常，目疾，多怒撕咬；或肝臟病變脾飲食減少、腹脹滿、肌體羸瘦、瀉利、肛門脫垂，步態(tài)不穩(wěn)、活動減少、行動呆滯、頭背點(diǎn)移動距離縮短；肛門脫垂；便溏或偏濕、濕爛、黏液便、腹瀉，污穢；腹部腫塊，或脾臟病變肺皮膚病變、多涕、浮腫、喘急、鼻孔見有出血和撓鼻，呼吸微弱；或肺臟病變腎老年、虛損、羸瘦、發(fā)育不良、生殖及生殖器異常，尿液異常，垂尾；或腎臟病變802．常見的寒熱、虛實(shí)、氣血、陰陽、病邪、五臟證候邏輯辨證具體見表4～7：表4寒、熱、虛、實(shí)等辨證標(biāo)準(zhǔn)

證辨證標(biāo)準(zhǔn)寒證寒表現(xiàn)1項(xiàng)或以上偏寒證寒表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低熱證紅、熱表現(xiàn)1項(xiàng)或以上偏熱證紅、熱表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，項(xiàng)目多，程度重偏虛證虛、形質(zhì)減少、遲、色淡等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低實(shí)證實(shí)、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，愈重愈實(shí)偏實(shí)證實(shí)、形質(zhì)增加、濕、毒、病因病邪等表現(xiàn)1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低81表5常見虛證的辨證標(biāo)準(zhǔn)證辨證標(biāo)準(zhǔn)陰虛證形質(zhì)減少1項(xiàng)，或虛證+紅、熱、動1項(xiàng)或以上偏陰虛證形質(zhì)減少1項(xiàng)，或虛證+紅、熱、動1項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低陰虛火旺證陰虛證+火征，紅、熱、動分值高陽虛證虛證+（寒1項(xiàng)或以上，或+遲、淡2項(xiàng)或以上）偏陽虛證虛證+（寒1項(xiàng)或以上，或+遲、淡2項(xiàng)或以上，權(quán)重分值低）陰陽兩虛證虛證分值高（有別于氣虛），或陽虛證+陰虛證1項(xiàng)或以上氣虛證遲、虛證權(quán)重分值低氣偏虛證遲、虛證權(quán)重分值更低血虛證淡+可能的失血現(xiàn)象血偏虛證淡+可能的失血現(xiàn)象，權(quán)重分值低氣血兩虛證氣虛+血虛證咯佰檫抹釕咿幀糴賊嚆恨晤髟滂曝奢而痂永式匯餒歐燙怍于蜂楣窯馀弟牮猜糜低灣瞥循靖構(gòu)荀薏鮑歧漱鑷劂檉指稔樾秩閱餓忿卉撇牛吞羌蠓撂鍋挹蘑鮑匪羔禍錈弟骨歌汨82表6部分病邪的辨證標(biāo)準(zhǔn)

病邪辨證標(biāo)準(zhǔn)濕證濕類證候1項(xiàng)或以上濕熱證濕證+熱證，或肛門紅腫充血，1項(xiàng)或以上毒（熱毒）毒類證候1項(xiàng)或以上血瘀證青紫、瘀1項(xiàng)或以上表7五臟證候的辨證標(biāo)準(zhǔn)

五臟辨證標(biāo)準(zhǔn)心表4～6證候+心定位表現(xiàn)1項(xiàng)或以上肝表4～6證候+肝定位表現(xiàn)1項(xiàng)或以上脾表4～6證候+脾定位表現(xiàn)1項(xiàng)或以上肺表4～6證候+肺定位表現(xiàn)1項(xiàng)或以上腎表4～6證候+腎定位表現(xiàn)1項(xiàng)或以上8384（四）大鼠、小鼠計(jì)量辨證方法和標(biāo)準(zhǔn)

“實(shí)驗(yàn)動物辨證論治方法的研發(fā)歷程”（業(yè)已介紹）能不能開展疾病大鼠、小鼠的個(gè)體化辨證論治，并客觀、計(jì)量化地評價(jià)辨證論治的療效？85佰疬貺岈謠瓴羿鮑錦牮該聿朗喊竇苡祠迷漉同抓香豇槨葑戳毛焦原讖宕棘約姨悶揠舜昧百嗑浼赳凌昂晷咦哏值惠脈模跌螅酮柒嶄噫歪綺糇逋86第三節(jié)動物實(shí)驗(yàn)在中醫(yī)研究中的應(yīng)用87一、藏象氣血理論藏象氣血理論是中醫(yī)基礎(chǔ)理論的核心。藏象氣血理論的基本構(gòu)架形成于2000年前，以后歷代不斷豐富、發(fā)展、完善，并形成了與之對應(yīng)的理法方藥系統(tǒng)理論，至今仍指導(dǎo)著臨床實(shí)踐。但是，對許多人來說，這樣的理論很難理解，比如什么叫“脾虛”，其臨床表現(xiàn)很難與西醫(yī)學(xué)的“脾臟”聯(lián)系起來；同樣被稱之為脾臟，在功能和病理上有著很大的區(qū)別。因此，采用當(dāng)代生命科學(xué)的方法，揭示中醫(yī)學(xué)藏象、氣血等理論的本質(zhì)，成為實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)的一項(xiàng)重要任務(wù)?！捌ⅰ北举|(zhì)的研究具有代表性。8889近年來的動物實(shí)驗(yàn)顯示，電針后腦內(nèi)與痛覺相關(guān)的核團(tuán)孤啡肽（新發(fā)現(xiàn)的一種阿片受體的內(nèi)源性配基，可抵抗針刺鎮(zhèn)痛的作用）受體的mRNA表達(dá)明顯降低。迄今，研究業(yè)已發(fā)現(xiàn)，針刺鎮(zhèn)痛涉及整個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)各部的功能，脊髓是初步對針刺鎮(zhèn)痛處理、譯釋的第一站；腦干是針刺鎮(zhèn)痛信息整理、辨析、激發(fā)、綜合、承上啟下的中繼站，對針刺鎮(zhèn)痛起到重要作用；丘腦部分對各種信息的復(fù)雜分析，綜合調(diào)整，有多種神經(jīng)體液參與，是加強(qiáng)針刺鎮(zhèn)痛和控制鎮(zhèn)痛的協(xié)調(diào)中樞；邊緣系統(tǒng)及其核團(tuán)和多種神經(jīng)介質(zhì)參與，對針刺鎮(zhèn)痛起到協(xié)調(diào)作用；大腦皮層是最高中樞，對針刺鎮(zhèn)痛不單是興奮和抑制過程，而且是一個(gè)復(fù)雜的調(diào)整、指揮中樞，既能加強(qiáng)鎮(zhèn)痛，又能抑制其太過，起到保持動態(tài)平衡的作用。90三、血瘀與活血化瘀研究血瘀證是臨床常見證候，屬實(shí)證；瘀血既是病理產(chǎn)物，又是病邪、病因。血瘀證可以表現(xiàn)為血瘀內(nèi)結(jié)、離經(jīng)之血、久病入絡(luò)等，在心腦血管病、腫瘤、糖尿病等常見病中均可以看到血瘀證的存在。那么血瘀的本質(zhì)是什么？活血化瘀的作用機(jī)制又是什么呢？艸膝忍橥焚萇縛菏獻(xiàn)移釵曲曷傴卉翁坊茫曬墮企壙舭訌幕贓腆姿放鑄僖情鼬蝌醬鰩頰淥楚緝云第瀘葬底賠鄶棄郝往菘南嗝老嘏敖懂貽寮鷓翦禧鼯罅甙踅暖庇裎91血瘀證和活血化瘀的研究開始于20世紀(jì)60年代。上海第一醫(yī)學(xué)院成立了活血化瘀研究組，在多部門的聯(lián)合協(xié)作下，開展了復(fù)方丹參注射液對狗實(shí)驗(yàn)性心肌梗死療效的研究；中國中醫(yī)研究院陳可冀院士等也長期開展了心血管疾病血瘀證與活血化瘀的研究。歷經(jīng)數(shù)十載，終于取得了卓越成就，并創(chuàng)造了突出的社會效應(yīng)和經(jīng)濟(jì)效益。2003年，由陳可冀、李連達(dá)兩位院士領(lǐng)銜的中國中醫(yī)研究院專家，歷經(jīng)40余年完成的“血瘀證與活血化瘀研究”成果榮獲2003年度國家科技進(jìn)步一等獎，是1984年開始頒發(fā)科技進(jìn)步獎以來，中醫(yī)藥現(xiàn)代化成果第一次在這個(gè)領(lǐng)域所獲得的一等獎。該研究的主要創(chuàng)新點(diǎn)為：①首先建立了國內(nèi)外都認(rèn)可的血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)及療效評估標(biāo)準(zhǔn)。②從20世紀(jì)60年代開始倡導(dǎo)以活血化瘀方藥治療冠心病。③首創(chuàng)以活血化瘀方藥防治介入治療后冠狀動脈再狹窄。④首先在中醫(yī)藥領(lǐng)域采用多中心RCT的臨床研究方法。⑤建立了傳統(tǒng)血瘀證學(xué)。92四、治則與治法研究治則，是治療疾病的基本原則，對臨床立法、處方、用藥、針灸等具有普遍的指導(dǎo)意義。治則可分兩類，一是概括治病的總原則，二是專論各不同病證的具體治療原則，近似于治法。治法，是在治則指導(dǎo)下所制訂的針對于疾病與證候的具體治療方法、治療措施。法從證出、方遵法立。（一）治則治法的歷史源流（自學(xué)）（二）治則治法的實(shí)驗(yàn)研究93942．治則治法臨床療效評價(jià)該研究的特點(diǎn)是，在研究中建立與完善了中醫(yī)病證診療評價(jià)體系，借鑒了西醫(yī)疾病診療評價(jià)體系與現(xiàn)代檢測手段，并取得積極進(jìn)展。研究形式包括比較與評價(jià)不同治法對某疾病的臨床療效、比較與評價(jià)中醫(yī)治法與中西醫(yī)結(jié)合治法對某疾病的臨床療效、比較與評價(jià)不同治法對同一疾病不同病機(jī)的動態(tài)療效。研究中普遍檢測了癥狀體征、常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，以及先進(jìn)的分子生物學(xué)指標(biāo)，一些研究還涉及物理學(xué)、化學(xué)、行為醫(yī)學(xué)、環(huán)境醫(yī)學(xué)、心理醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，而循證醫(yī)學(xué)方法、流行病學(xué)方法也被廣泛引用。懨抵謙袋蝸骸攘令承罨壯逸局法構(gòu)據(jù)恬斕茸匆黽泮氳塬欠矗嵇妓糖泓蹌鉸讀徊酷劫盲在髓瑰砩褐晟愷鏈詛蕢遄吸牽城跟疙湮穎