天 然 藥 物 化 學 實 驗 講 義1

PAGEPAGE21天然藥物化學實驗講義蘇州大學藥學系

天然藥物化學實驗講義目錄……………………1實驗一氧化鋁活度測定………………2實驗二薄層層析展開劑的選擇………5實驗三麻黃中麻黃堿的提取、分離，檢識…………6實驗四槐米中蕓香苷的提取、分離，檢識…………9實驗五虎杖中大黃素提取、分離、檢識……………13

實驗六中藥中化學成分的預(yù)試………17實驗一氧化鋁活度測定一、目的要求1．掌握薄層層析制板方法2．了解吸附劑的活度測定法二、實驗原理薄層板根據(jù)在制備過程中是否加入粘合劑分為粘合薄層和非粘合薄層二種，加入粘合劑的為硬板，不加粘合劑的多為軟板（亦有為硬板，如纖維素板）。粘合劑常用的有羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）或煅石膏（G）。加羧甲基纖維素鈉制備的板機械強度較好，但對一些需加熱的腐蝕性顯色劑不適用。加石膏制備的板性能相反，機械強度較差，但適合于使用需加熱的腐蝕性顯色劑。對層析用吸附劑活度的測定，主要是利用吸附劑自身對某些偶氮染料吸附力的大小和在薄層板上展開距離來確定，故用測量比移值的方法來確定吸附劑的極性大小和強度級數(shù).三、實驗材料材料：氧化鋁（層析用，中性70~325目）、四氯化碳（重蒸餾）、偶氮苯（Ajobenjene）、對甲氧基偶氮苯（P-methoxyajobenjene）、蘇丹黃（sudanIbenjen-azo--naphthot）、蘇丹紅（SudanIItetra-ajobenjen---naphthot）、對氨基偶氮苯（P-aminoajobenene）、薄層層析用硅膠G、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）儀器：天平、研缽、藥匙、玻璃板（大、中、?。?、烘箱、干燥器、點樣毛細管、小層析缸四、實驗內(nèi)容（一）薄層層析薄層板的制備1．氧化鋁薄層取表面光滑，直徑均一的玻璃棒一支，依據(jù)所制備薄層的寬度、厚度要求，在玻璃棒兩端各包上橡皮膠，也可以套上塑料管或橡皮管，一般以0.25（用于分析分離）~1mm（用于制備分離）為宜。在一端已包好的橡皮膠上，再多包5~6層橡皮膠或一段橡皮管，作為涂鋪時的固定邊，以防止滑動時邊緣不整齊。操作時，將氧化鋁粉均勻地鋪在玻璃板上，再用玻棒壓在玻板上將吸附劑自一端推向另一端，推移時，不宜太快，也不應(yīng)中途停頓，否則厚薄不均勻，影響層析效果。2．硅膠G薄層取硅膠G1份，置研缽中加水3~4份，研磨均勻，放置片刻，隨即用藥匙取一定量，分別倒在一塊大玻璃板上（或倒入涂布器中，推動涂布），均勻涂布成0.25~0.50mm厚度，輕輕振動玻璃板，使薄層面平整均勻。或取兩塊2.5mm厚度的玻璃長板，中間夾一至幾塊2mm厚的薄層板，將適量硅膠糊倒在中間，用藥匙適當涂勻，另取一塊邊緣平整的玻璃片將硅膠糊刮平，推出薄層板，水平放置，待薄層發(fā)白近干，于烘箱中110℃烘干活化1~2小時，冷后貯于干燥器內(nèi)備用。活化烘干溫度、時間可依需要調(diào)整，一般鑒別水溶性化合物或一些極性大的化合物時，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活化即可貯存?zhèn)溆谩?．硅膠G-羧甲基纖維素鈉薄層取羧甲基纖維素0.2g，溶于25ml蒸餾水中，加熱攪拌使完全溶解，倒入研缽中加硅膠細粉（一般300目的硅膠細粉約用6~8g，200目的則用10~12g），研磨成糊，照硅膠G薄層涂布法制備薄層板。（二）氧化鋁、硅膠活度的測定1．氧化鋁活度的測定，一般可用4~5種偶氮染料以薄層層析法進行測定。（1）染料試劑的配制取偶氮苯60mg，對甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、對氨基偶氮苯各40mg，分別溶于100ml重蒸餾的四氯化碳中。（2）實驗方法①制板：按上述方法制備氧化鋁薄層軟板兩塊，大小約20×6cm。②點樣：以鉛筆尖或毛細管尖在薄層板一端2~3cm處，輕輕觸及薄層再作起始線標記，間隔lcm左右點上5個可以看清的小點，然后分別用毛細管蘸取各種染料分別點在原點上，點樣的斑點直徑不得超過0.5cm。③展開：將點樣的軟板輕輕置于預(yù)先加入重蒸餾四氯化碳的層析槽中（事先墊高層析槽的下行端），勿使展開劑與薄層板接觸，蓋好槽蓋放置半小時，以進行飽和。半小時后，調(diào)換層析槽下支撐物，再墊高層析槽的上行端，使薄層板與容器底部交角為10~40℃之間，令展開劑流集于層析槽的下行端，使與薄層板相接觸（以不淹沒點樣原點為度）以進行展層，當展開劑展至薄層板全長的三分之二時，即可取出薄層板，迅速量出前沿至原點的總長度和原點至各個色斑的長度，依以下公式計算各色點的比移值（Rf）Rf=④結(jié)果判斷根據(jù)測量結(jié)果計算結(jié)果（Rf值），可以下表中查出相應(yīng)活度級數(shù)，以判斷該氧化鋁的活性大小。表1氧化鋁活度的Hermanck定級法（按Brockmenn和Schodder劃分的活度）偶氮染料氧化鋁活度級（Rf值）Ⅱ級Ⅲ級Ⅳ級Ⅴ級偶氮苯0.590.740.850.95對甲基偶氮苯0.160.490.690.89蘇丹黃10.78蘇丹紅0.000.100.330.56對氨基偶氮苯0.000.030.030.19五、實驗說明1．進行層析時，要想得到比較理想的結(jié)果，在各步操作中都應(yīng)嚴格要求。如點樣量的多少及點樣的原點直徑不應(yīng)超過0.5mm；展層時起始線不能浸在展開劑中；層析板或?qū)游黾埐荒芎驼归_容器接觸；層析缸應(yīng)密閉以及選擇靈敏的顯色劑等。2．羧甲基纖維素鈉的溶液一般用0.5~1%濃度，宜預(yù)先配制后靜置，取上層澄清溶液應(yīng)用，則所制備的薄層表面較為細膩平滑。3．點樣量的多少，對有色化合物可直接觀察，對無色化合物可預(yù)先取一個薄層板，按常規(guī)方法進行層析操作。但在點樣時可分別在不同原點點上不同量的樣品溶液，展層顯色后，根據(jù)斑點的大小和顏色的深淺以確定最佳點樣量。4．進行氧化鋁軟板活度測定時，在各步操作中應(yīng)避風，以防吹散吸附劑。六、思考題根據(jù)偶氮苯、對甲基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅和對氨基偶氮苯的結(jié)構(gòu)式，判斷其在氮化鋁薄層板上以苯為展開劑的順序和位置。2．欲使你的實驗得到滿意的結(jié)果時，操作（薄層層析）中應(yīng)注意什么問題？以氧化鋁活度測定為例說明之。

實驗二薄層層析展開劑的選擇一、目的要求1．掌握薄層層析的操作方法。2．了解展開劑與吸附劑和被分離物質(zhì)的三者關(guān)系。二、實驗原理薄層層析在一般情況下是一種吸附層析，利用吸附劑對化合物吸附能力的不同而達到分離，吸附劑吸附能力的大小和化合物極性的大小有關(guān)。在硅膠等極性吸附劑薄層上化合物極性大，被吸附劑吸附得牢，Rf值小；反之化合物極性小，Rf值大。一個化合物在硅膠薄層上的Rf值的大小主要取決于展開劑的極性大小，即展開劑極性大，化合物Rf值大；展開劑極性小，化合物Rf值小。三、實驗器材硅膠CMC-Na薄層板三塊、薄荷油、薄荷腦的乙醇溶液、石油醚、乙酸乙酯、香草醛、濃硫酸、毛細管、層析缸、顯色噴嘴瓶四、實驗內(nèi)容硅膠薄層層析法檢查揮發(fā)油吸附劑：硅膠CMC-Na薄層板樣品：薄荷油、薄荷腦的乙醇溶液展開劑：石油醚、乙酸乙酯、石油醚∶乙酸乙酯（85∶15）顯色劑：香草醛-濃硫酸試劑操作：取CMC-Na薄層板，用軟鉛筆在距1.2~2cm處劃起始線及原點，用毛細管點適量的樣品溶液，待溶劑揮干后，進行上行法展層，當展開劑接近頂部時，取出，用鉛筆繪下溶劑前沿，揮干展開劑，噴灑顯色劑，必要時可適當加熱促進顯色。計算薄荷腦的Rf值，并比較在三種展開劑中的展開情況，由結(jié)果判斷何種展開劑最適合分離薄荷油，亦可用壓板法顯色。五、實驗說明及注意事項實驗用各展開劑試瓶、量筒、層析缸必須干燥無水，不能混淆。2．壓板法操作：點樣展層后，稍干，反扣在一塊同樣大小并涂布一層顯色劑的玻璃板上，再將玻璃片反轉(zhuǎn)，使薄層面向上，觀察顏色變化。六、思考題l．揮發(fā)油在硅膠薄層板上用石油醚、乙酸乙酯、石油醚∶乙酸乙酯（85∶15）三種展開劑分別展開時，結(jié)果不同，其原因是什么？2．欲進行薄層層析鑒定時，應(yīng)如何選擇一個比較理想的層析條件？

實驗三麻黃中麻黃堿的提取、分離與檢識麻黃是一種常用中藥，為我國特產(chǎn)的藥材之一。為麻黃科植物草麻黃（Epheclrasinicastapf）、木賊麻黃（E.equssetinaBunge）和中草麻黃（E.intermediaSchrenkexMeyer）的干燥草質(zhì)莖。具有發(fā)汗、解表、鎮(zhèn)咳、平喘等作用。它的主要成份是生物堿，在草麻黃中的含量為1.3%以上，木賊麻黃中則達1.75%，這些生物堿已知的有六種以上，主要為：(-)麻黃堿（L-ephedrine）一般占總堿60%以上，其次為(+)偽麻黃堿（d-pseudophedrine）和少量甲基麻黃堿、去甲基麻黃堿、甲基偽麻黃堿、去甲基偽麻黃堿等。它們以鹽酸鹽的形式存在于植物體中。一、麻黃中已知主要成份的理化性質(zhì)1．(-)麻黃堿：為無色蠟狀固體或晶形固體，也可能是顆粒。無臭，常含半分子結(jié)晶水，熔點40℃。易溶于水（1∶20）或乙醇，可溶于氯仿、乙醚、苯或甲苯。有揮發(fā)性，可隨水蒸氣蒸餾而不分解。其水溶液呈強堿性（pkb4.42），能與無機酸或酸性較強的有機酸結(jié)合成鹽，這些鹽大多易溶于水（草酸鹽難溶于冷水），要溶于乙醇，但幾不溶于氯仿、乙醚、苯等有機溶劑。2．(+)偽麻黃堿：由乙醚結(jié)晶出來的為長斜方形晶體，易溶于乙醇、乙醚、苯或甲苯等有機溶劑，而難溶于水。堿性較(-)麻黃堿略強（pkb4.26），可應(yīng)用離子交換層析法將兩者分離。(+)偽麻黃堿的鹽類均易溶手水，但其鹽酸鹽能溶于丙酮或氯仿，草酸鹽易溶于冷水，而與鹽酸(-)麻黃堿不同．二、目的要求1．掌握水溶性生物堿類溶劑提取和分離方法。2．熟悉用離子交換樹脂法純化處理水溶性生物堿的操作技術(shù)。3．了解麻黃堿的性質(zhì)和檢識方法。三、實驗原理本實驗是利用麻黃生物堿的鹽酸鹽可溶于水的性質(zhì)，而采用稀鹽酸水溶液為提取溶劑，對麻黃草進行蒸煮或浸漬，提取液經(jīng)堿化后轉(zhuǎn)化為游離麻黃堿，可為氯仿所萃取。麻黃堿的氯仿溶液又可為稀鹽酸轉(zhuǎn)溶成鹽，于此鹽酸麻黃堿的水溶液中加入適量乙醚，則可降低鹽酸麻黃堿的水中溶解度而析出結(jié)晶。所得鹽酸鹽結(jié)晶系鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿混合物，再利用鹽酸偽麻黃堿可溶于氯仿的特性，用氯仿轉(zhuǎn)溶此混合物，即可使之與鹽酸麻典堿相分離。此外，用強酸型陽離子交換樹脂去處理麻黃的酸水提取液，可以得到較純的麻黃生物堿。四、實驗器材麻黃（選擇實驗用材，通常以山西產(chǎn)較好）、0.5%鹽酸水溶液、廣泛PH試紙、乙醚、95%乙醇、甲醇、氨水、茚三酮試劑、硅膠-CMC層析板、1%鹽酸麻黃堿標準品的醇溶液、離子交換樹脂、1000ml燒杯、電熱套（1000ml）、1000ml圓底燒瓶、冷凝管、抽濾瓶、布氏漏斗、圓形濾紙、樹脂柱、層析缸、循環(huán)水泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、索氏提取器、大張濾紙、電吹風五、實驗內(nèi)容（一）總生物堿的提取、分離稱取麻黃粗粉100g，先后以12倍量、10倍量0.5%鹽酸溶液加熱回流提取各1小時，濾過，合并兩次濾液。所得酸水液通過已經(jīng)預(yù)處理的陽離子交換樹脂，再用水洗樹脂柱直至中性，接著用95%乙醇約500ml通過樹脂柱直至洗出液無色為止，并使乙醇全部流出，然后將樹脂柱中的樹脂全部倒出，攤在搪瓷盤中于通風處晾干。所得到的含麻黃堿樹脂用氨水堿化，邊加氨水邊攪拌，以手試之有潮濕感，捏之成團，觸之即散（氨水用量控制在10%左右）為度，再將堿化后的樹脂移入濾紙筒中，用脫脂棉花塞堵濾紙筒口，裝入索氏提取器內(nèi)，以乙醚約500ml為溶劑，于水浴上連續(xù)回流提取5~6小時，直至提盡生物堿為止，回收乙醚至約ml，放置析晶，所得麻黃堿粗品用于鑒別、檢識實驗。（二）離子交換樹脂制取法1．離子交換樹脂的選擇和處理取強酸1號或723型（磺酸氫型聚苯乙烯）陽離子交換樹脂（交聯(lián)度為3~6%）適量，可根據(jù)麻黃中生物堿含量和樹脂的交換容量加以計算。通常樹脂的取用量應(yīng)比計算量多1~3倍。如90~100g樹脂，先用常水浸泡12小時以上（或于80℃水浴上加熱半小時），使樹脂充分膨脹后，再裝入樹脂柱（在裝柱前可先在柱底墊少許玻璃纖維，以防樹脂顆粒漏出），裝柱時，可將樹脂連同水分一起倒入柱內(nèi)，使樹脂隨同水分流出而下沉，自然形成樹脂柱。柱內(nèi)若有空氣泡存在時，應(yīng)設(shè)法使其排出，放出多余水分，只保持樹脂柱面有1cm高度水層，以免空氣進入樹脂內(nèi)。2．轉(zhuǎn)型處理取樹脂用量4倍的2N鹽酸溶液，使全速通過樹脂柱，再取用2倍量的5N鹽酸溶液全速通過樹脂柱，不等酸水流盡樹脂柱面，立即用蒸餾水全速通過樹脂柱進行洗滌，除去余酸，直至洗出水顯中性為止（注意：樹脂柱上面始終應(yīng)保持1cm高的水層）。3．提取液中生物堿成份的交換將上述麻黃的鹽酸提取液全部通過轉(zhuǎn)型后的離子交換樹脂，調(diào)節(jié)流速為10~15ml/min，交換后的流出液作生物堿沉淀反應(yīng)檢查：若仍呈陽性反應(yīng)時，說明生物堿尚未被全部交換完全，應(yīng)當重復(fù)操作或加大樹脂的用量，直至交換完全為止。待提取液交換完全之后，隨即用蒸餾水沖冼樹脂柱，直至洗成中性后，再用95%乙醇洗至醇流出液為無色為止，并使乙醇全部流出。4．生物堿洗脫將樹脂柱內(nèi)的樹脂全部倒出，攤在搪瓷盤內(nèi)于通風處晾干，收集于大燒杯內(nèi)，用氨水堿化，加氨水量不宜過多，可隨加隨攪拌，以手試之有潮濕感，捏之成團，觸之即散（氨水用量控制在10%左右）為度，再將堿化后的樹脂移入連續(xù)回流提取器的濾紙筒中，用脫脂棉花塞堵濾紙筒口，裝入提取器內(nèi)，以乙醚為溶劑，于水浴上連續(xù)回流提取5~6小時，直至提盡生物堿為止，回收乙醚，即得純制麻黃總生物堿。（四）麻黃堿的檢識層析材料：硅膠-CMC硬板展開劑：甲醇∶氨水（10∶1）顯色劑：茚三酮試劑（噴灑后需加熱）對照品：1%鹽酸麻黃堿醇溶液六、實驗說明及注意事項1．麻黃中麻黃堿的含量，往往與產(chǎn)地和采收季節(jié)有密切聯(lián)系，通常以山西麻黃含生物堿較高（2%）左右，可用作實驗材料。而其它麻黃或市售加工的飲片麻黃，含生物堿量多數(shù)較低（1%以下），不可供實驗用，尤其貯存一年以上的麻黃，多數(shù)難以提出麻黃堿。2．存在于麻黃中的鞣質(zhì)成份較多，若用冷浸法提取，則較加熱煮沸法提取的鞣質(zhì)量有明顯地減少，所得產(chǎn)品亦易純化。唯冷浸法提取費時較長，如果采用酸水煮沸法提?。ㄌ崛∪危看?小時），再配用陽離子交換樹脂處理提取液，可以收到滿意的實驗效果。3．麻黃堿為非氮環(huán)類生物堿，分子量較小，游離體可隨水蒸汽揮發(fā)，而且麻黃堿不與一般生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)。4．用酸水冷浸法提取液常含有較多的鈣鹽，若使用離子交換法處理提取液，則對離子交換樹脂的交換率影響甚大，為此，在取用離子交換樹脂時，取量應(yīng)較理論計算值大得多，甚至需要加倍。如果要降低樹脂的用量，就必須避開鈣鹽的干擾?？蓪⑺崴涸诮粨Q之前進行堿化，作水蒸汽蒸餾，收集蒸餾液并用鹽酸調(diào)PH4~6，再進行離子交換樹脂處理。5．麻黃堿的銅絡(luò)鹽顯色反應(yīng)靈敏度較差，若直接用麻黃浸液做此試驗往往不能得到明顯的結(jié)果，因此，需要適當提純之后再試，就可得到正確反應(yīng)結(jié)果。七、思考題1．利用酸水浸漬提取麻黃堿時應(yīng)注意什么問題？本次實驗提取方法有什么特點？2．麻黃堿與偽麻黃堿二者在性質(zhì)上有何差異？除本實驗外還可用何種方法將其二者分離？3．麻黃堿的銅絡(luò)鹽反應(yīng)原理是什么？試寫出反應(yīng)式。4．麻黃堿性質(zhì)能否用生物堿沉淀劑進行檢識？為什么？

實驗四槐花米中蕓香甙的提取、精制和檢識蕓香甙亦稱蘆?。≧utin），廣泛存在于植物界，已發(fā)現(xiàn)的蘆丁植物至少在70種以上，以槐米、蕎麥葉、蒲公英和煙葉中含量較多，本實驗以槐花米作為提取蘆丁的原料?；被紫刀箍浦参颯ophorajoponiaL的未開放花蕾，其中蘆丁含量高達23.5%，槐花開放后降至13.0%。蘆丁除用作治療毛細管脆弱引起的出血癥和高血病的輔助治療劑外，還可作為制藥原料，用于制造槲皮素（Ruercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基蘆丁、二羧丙基蘆丁、-乙基嗎啉蘆丁、6-二乙胺基蘆丁等?；被字谐刑J丁外，還含有白樺脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素（SophorinA、B、C）和多糖粘液質(zhì)等。蕓香甙一、槐花米主要成份的理化性質(zhì)1．蘆丁：是槲皮素3位羧基與蕓香糖（Rutinose）脫水縮合成的甙。淺黃色粉末或極細的針狀結(jié)晶，含3分子結(jié)晶水（C27H36O16·3H2O），mpll7~178℃。在110℃10mmHg下真空干燥12小時變成無水物，無水物易吸濕，可從大氣中吸收約2.5分子水份。無水蘆丁在125℃變褐，在190~192℃變成膠狀，當溫度升至214~215℃發(fā)泡分解。［］XX+1382（乙醇）蘆丁溶解度在冷水中1∶10000，熱水中1∶200，冷乙醇中1∶300，熱乙醇中1∶30，沸甲醇中1∶7，冷吡啶中1∶12，微溶于丙酮、乙醇乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。UVmaxnm：259，266（sh），299（sh），3590IRvmaxcm-2，3400（OH），1670（C∶O），1620∶1520，1470（Ar-）。lXCNMR（DMSO-d6）：156.4（C2），133.6（C3），177.4（C4），161.2（C5），98.8（C6），163.9（C7）,93.6（C8），156.6（C9），104.2（C10），121.6（C1），115.3（C2），144.6（C1），148.3（C4），116.5（C5），67.1（C6），100.7（C1），70.4（C2），70.4（C1），72.2（C4），68.2（C5），17.5（C6）。蘆丁分子中具有較多酚羥基，顯弱酸性，易溶于堿液中，酸化后又析出，因此可以用堿溶液沉的方法提取蘆丁。蘆丁分子因含有鄰二酚羥基，性質(zhì)不太穩(wěn)定，暴露空氣中，在光的作用下，能緩緩分解，變?yōu)榘岛稚?，在堿性條件下更容易被氧化分解，硼酸鹽能與鄰二酚羥基結(jié)合，達到保護的目的，故在堿性條件溶液中加熱提取蘆丁時，往往在加入少量硼砂，就是保護蘆丁減少氧化分解。2．槲皮素：從稀醇中結(jié)晶出來為黃色針狀結(jié)晶，含2分子結(jié)晶水（C15H10O72H2O），在95~97℃變?yōu)闊o水物，失水的槲皮素在空氣中可重新獲得失去的結(jié)晶水。含2分子結(jié)晶水的分解點為313~314℃，無水物的分解點為316~317℃。槲皮素溶于堿水，乙酸和沸醇，在無水醇中的溶解度：冷時1∶290，沸時1∶23，200mg槲皮素在20℃時溶于5ml丙酮或吡啶；在50℃時溶于20ml甲醇，不溶于苯、乙醚、石油醚。在常溫下不溶于水，也難溶于熱水。UVmaxnm（㏒）：258（2.75），375（2.75）。HNMR（DMSO-d6）：6.19（1H，d.d，J=2.20，8.06H2，H-6’），12.48（1H，S，5-OH）。1XCNMR（DMSO-d6）：146.9（C2），135.6（C3），175.7（C4），160.7（C5），98.2（C6），163.9（C7），93.4（C8），156.2（C9），103.0（C10），122.0（Cl’），115.3（C2’），145.0（C3’），147.6（C4’），115.6（C5’），120.0（C6’）。3．皂甙：粗制品為白色粉末，分解點為210~220℃。易溶于起水、吡啶，能溶于甲醇。酸水解后得白樺脂醇、槐二醇、葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸內(nèi)酯。4．白樺醇酯：無色針狀結(jié)晶，mp251~252℃，能溶于乙酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、苯等中，難溶于水、石油醚中。5．槐二醇：無色針狀結(jié)晶，mp219~220℃或224℃，能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，難溶于水。6．槐花米甲素：青黃色針狀結(jié)晶，熔點不定，181~182℃開始發(fā)泡，186℃變形發(fā)泡完，198~203℃透明有質(zhì)變色，244~245℃分爭融熔。溶解度：冷水中1∶60000，熱水中1∶167，冷甲醇中1∶108，熱甲醇中11.2%，冷乙醇中1∶290，熱乙醇中3.5%，冷二氧六環(huán)中1∶30，熱二氧六環(huán)中1∶15，易溶于吡啶，微溶于乙醚、乙酸乙酯，不溶于冰乙酸、石油醚和氯仿。7．槐花米乙素：無色六面體結(jié)晶，mp272~274℃，易溶于濃硫酸，難溶于85%磷酸，略溶于熱甲醇及乙醇，但冷時難溶，在其它非極性溶劑中均不溶，也不溶于水、5%鹽酸、5%氫氧化鈉溶液。8．槐花米丙素：無色棒狀結(jié)晶，mp235~237℃，易溶于甲醇、乙醇及二氧六環(huán)，稍溶于乙醚及丙酮，不溶于水、沸水、5%鹽酸、5%氫氧化鈉、85%磷酸。溶于濃硫酸中呈紅色，放置后轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙?。二、目的要?．掌握用槐花提取，精制蕓香甙的原理和方法。2．熟悉蕓香甙的主要性質(zhì)和檢識方法。三、實驗原理根據(jù)蕓香甙具弱酸性易溶于堿水，加酸分化后又析出結(jié)晶的特性進行提??；又利用蕓香甙對冷水或熱水的溶解度相差較大的特性進行精制。四、實驗器材槐花米、0.4%硼酸水溶液、（2%）石灰乳、6N鹽酸、PH試紙、2%硫酸溶液、氫氧化鋇細粉（或碳酸鋇）、正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶1或4∶I∶5上層）、苯胺-鄰苯二甲酸試劑、1%葡萄糖水溶液、1%鼠李糖水溶液、l%氫氧化鈉、1%鹽酸、鎂粉、1%蕓香甙乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、三氯化鋁試劑、500cc燒杯、聚酰胺薄膜、1000cc圓底燒瓶、抽濾裝置、玻璃漏斗、脫脂棉、250cc圓底燒瓶、冷凝管、層析缸、電熱套、循環(huán)水泵、試管。五、實驗內(nèi)容（一）蕓香甙的提取取槐花米20g，置于1000cc圓底燒瓶中，加0.4%硼砂水溶液200ml，在攪拌下加石灰乳調(diào)PH8，加熱微沸30分鐘，靜置幾分鐘傾出上清液，用棉花過濾，藥渣同上重復(fù)一次。合并濾液用6N鹽酸調(diào)PH2~3，放置（一夜以上）抽濾，得粗蘆?。V餅用水洗3~4次），放置空氣中自然干燥得粗品，稱重、計算提取率。（二）精制取2g加蒸餾水400ml，加熱煮沸溶解，趁熱抽濾，濾液放置過夜，析晶，抽濾，得精制蕓香甙。烘干。（三）蕓香甙的檢識反應(yīng)1．成鹽反應(yīng)：取蕓香甙10mg左右，置試管中加蒸餾水2ml，振搖，觀察試管有無變化，滴加1%氫氧化鈉溶液數(shù)滴，振搖使蕓香甙全部溶解成為黃色澄明溶液，然后再滴加1%鹽酸溶液數(shù)滴至成酸性反應(yīng)，溶液則由澄明轉(zhuǎn)為混濁狀態(tài)（若當時不出現(xiàn)混濁時可放置片刻或放置冰箱中冷凍一定時間后再觀察）。2．鹽酸鎂粉反應(yīng)：取蕓香甙少許，置試管中，加乙醇2ml置熱水浴中至溶解后，加入金屬鎂粉少許，濃鹽酸2~3滴，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)，并逐漸出現(xiàn)紅色至深紅色。（四）蕓香甙的水解取蕓香甙1g，置250cc圓底燒瓶中2%H2SO4溶液80ml，加熱回流30分鐘至1小時，開始加熱10分鐘為澄清液，逐漸析出黃色小針狀結(jié)晶，既為槲皮素，抽濾得結(jié)晶，濾液保留檢查糖（單糖），沉淀物用蒸餾水洗至中性，抽干水份，晾干稱重，得粗制槲皮素。（五）糖的紙層析檢識樣品液的制備：取水解濾液20ml，水浴上加熱，于攪拌下加Ba(OH)2（或BaCO3）細粉中和至中性，濾除白色硫酸鋇沉淀（玻璃漏斗、棉花少許）)，濾液濃縮至1~2ml作層析點樣用。對照品：1%葡萄糖水溶液及1%鼠李糖水溶液層析濾紙：新化一號濾紙展開劑：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶1或4∶1∶5上層）顯色劑：用苯胺-鄰苯二甲酸試劑噴霧后，105℃烘10分鐘，顯棕色或棕紅色斑點。（六）蕓香甙及槲皮素的紙層析和聚酰胺薄膜層析鑒定樣品：（1）自制蕓香甙的乙醇溶液（2）自制槲皮素的乙醇溶液對照品：（1）蕓香丁標準品的乙醇溶液（2）槲皮素標準品的乙醇溶液層析濾紙：新化一號濾紙展開劑：（1）正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶1或4∶1∶5上層）（2）15%乙酸水溶液顯色：（1）先在可見光下觀察斑點顏色，然后在紫外燈下觀察斑點顏色（2）經(jīng)氨氣熏后再觀察（3）噴三氯化鋁試劑后再觀察聚酰胺薄膜層析，用90%乙醇展開，在紫外燈下觀察斑點顏色。六、實驗說明及注意事項1．以堿溶酸沉提取法得到的提取液，通常因大量粘稠的雜質(zhì)較難以過濾，給實驗操作造成困難，為此也可改變堿水提取液的處理方法。如將堿水提取液的粗濾液冷卻至室溫，再繼續(xù)加入足量石灰乳使PH達12以上，使提取液中的雜質(zhì)被石灰乳沉淀，再立即加入20%硫酸溶液調(diào)PH至3，令多余的鈣鹽與硫酸作用生成硫酸鈣沉淀出來。在PH3的酸度下，蕓香甙則可游離，于水浴上加熱至50~60℃迅速過濾，放置濾液于冰箱中直至沉淀完全析出抽濾，洗滌，干燥后即得蕓香甙。2．硼砂的作用，既能調(diào)節(jié)堿性水溶液的PH，又能保護蘆丁減少氧化，但其價格較高，工業(yè)上用較大量的石灰乳加入少量的硼砂，同樣達到提高質(zhì)量的要求。3．加入石灰乳使PH8~9，，既可達到溶解蘆丁的目的，又可以除去槐花米中含有的大量的多糖粘液質(zhì)。但PH不能過高，否則鈣能與蘆丁形成螯合物而析出沉淀。4．用濃鹽酸調(diào)PH2~3，PH過低會使蘆丁形成鋅鹽而降低收率。5．用乙醇重結(jié)晶槲皮素時，若乙醇濃度過高，則不易析出結(jié)晶，此時，可在乙醇溶液中滴加適量蒸餾水使呈微濁狀態(tài)，則槲皮素可大量析出結(jié)晶。七、思考題1．根據(jù)蕓香甙的性質(zhì)，還可采用何種方法進行提取？試設(shè)計自槐花米中提取蕓香甙的另一種方法，并說明方法原理。2．用堿溶酸沉法提取蕓香甙的原理是什么？為什么要控制堿的濃度？3．用堿溶酸沉法提取蕓香甙，為什么要加入硼砂水溶液？4．如何證明蘆丁分子中只含有葡萄糖和鼠李糖？

實驗五虎杖中大黃素的提取、分離和檢識虎杖又名陰陽蓮、土地榆、苦杖，為蓼科植物虎杖（PolygonumcuspidatumsiebetZucc．）的根莖。有活血化瘀，清熱解毒，祛痰止咳等功用。近年來用于治療急性黃疸，降低血脂，升高白血球和血小板，并可治療慢性氣管炎等多種炎癥及燒傷等癥?；⒄雀o中含有大量的蒽醌成份和二苯乙烯類成份。一、虎杖根莖中已知主要成份的理化性質(zhì)1．大黃酚（Chrysophanol）：金黃色片狀結(jié)晶（丙酮）或針狀結(jié)晶（乙醇），mp196~197℃，能升華?？扇苡诒?、氯仿、乙酸、乙醇。NaOH水溶液及熱的Na2CO3水溶液。微溶于石油醚和乙醚，不溶于水，NaHCO3和Na2CO3水溶液。2．大黃素（Emodin）：橙黃色針狀結(jié)晶，mp256~257℃，能升華。易溶于乙醇，可溶于NH4OH、Na2CO3和NaOH水溶液，幾乎不溶于水。3．大黃素甲醚（Physion）：磚紅色針狀結(jié)晶，mp206℃，能升華。易溶于NaOH溶液，可溶于苯、氯仿、吡啶、甲苯，微溶于乙酸、乙酸乙酯、乙醚，不溶于水。4．大黃素葡萄糖甙（Emodinmonoglucoside）：淺黃色針狀結(jié)晶（稀乙醇中析出，含分子結(jié)晶水），mpl90~191℃。5．白藜蘆醇（Resveratol）：無色針狀結(jié)晶，mp256~257℃，216℃，264℃，能升華。易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。6．虎杖甙（白藜蘆醇葡萄糖甙，Polydatin，Piceid）：無色針狀簇晶，mp223~226℃（分解）。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、熱水，可溶于乙酸乙酯，Na2CO3和NaOH的水溶液，微溶于冷水，難溶于乙醚。二、目的要求1．掌握從虎杖中提取羥基蒽醌類成份的方法。2．熟悉用硅膠柱層析方法分離混合羥基蒽醌類成份的一般操作技術(shù)。3．熟悉羥基蒽醌類化合物的主要檢識反應(yīng)。三、實驗原理本實驗是根據(jù)游離蒽醌類成份能溶于含水氯仿的性質(zhì)，先將原料的濃酸溶液濕潤后，加入含水氯仿進行回流提取，在回流過程中即可將結(jié)合態(tài)的蒽醌（甙類）類成份水解成為游離蒽醌，這樣就可連同原存在的游離態(tài)蒽醌成份，一并被含水氯仿提取出來。也可根據(jù)虎杖中的蒽醌類成份能溶于乙醇的性質(zhì)，采用乙醇提取，又利用游離蒽醌類可溶于熱的含水氯仿的性質(zhì)，將乙醇提取物以含水氯仿熱回流，使游離蒽醌與蒽醌甙及其它極性較大的醇溶性雜質(zhì)分離。羥基蒽醌類化合物可以利用化合物酸堿強弱不同進行分離。其羧基或多個－位酚羥基的可溶于碳酸氫鈉溶液，具有一個-位酚羥基的可溶于碳酸鈉溶液，故可以用PH梯度法進行分離，另外，也可根據(jù)化合物極性大小不同用硅膠柱層析法進行分離。大黃素的極性比大黃素甲醚大，在吸附層析中吸附較牢，因此在大黃素甲醚之后洗脫下來。四、實驗材料虎杖粗粉、含水氯仿（水飽和）、苯、乙醇、柱層析用硅膠（100~160目）、硅膠-CMC硬板、苯∶乙酸乙酯（8∶2）、乙醚、碳酸鈉、氫氧化鈉溶液、鹽酸、點滴板、1000cc圓底燒瓶、蒸發(fā)皿、層析柱、試管、梨形分液漏斗、精制棉、循環(huán)水泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、電熱套、水浴鍋。五、實驗內(nèi)容（一）游離蒽醌的提取方法一：稱取虎杖粗粉50g，加10%硫酸溶液50ml，充分攪拌混勻，加氯仿200ml，熱水浴上回流提取1小時，過濾得氯仿濾液。藥渣繼用氯仿200ml回流1小時，過濾，合并兩次氯仿提取液于圓底燒瓶中，加沸石數(shù)粒，水浴上蒸餾回收氯仿至干（可減壓抽干氯仿），得紅棕色殘留物。再加苯30ml于圓底燒瓶中水浴上回流半小時，過濾得苯濾液置于蒸發(fā)皿中，加柱層析用硅膠粉3~5g，攪拌均勻后于通風處晾干，得均勻樣品粉末，供作柱層析分離用。方法二：取虎杖粗粉50g，加95%乙醇500ml加熱回流1小時，傾出液體，再加400ml乙醇回流半小時，合并兩次提取液，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，加入含水氯仿100ml加熱回流提取1小時，傾出氯仿，如果氯仿提取液色深，則再提取1次，提取液合并，用水50ml分2~3次在分液漏斗中洗滌，洗后回收氯仿至剩約10ml，趁熱傾入一小錐形瓶中，放置析晶，抽濾，得橙黃色總游離蒽醌。（二）大黃素柱層析分離1．裝硅膠層析柱，取100~160目柱層析用硅膠粉10~15g，裝入底部墊有少許精制棉花的20×300mm層析柱內(nèi)，輕輕敲擊層析柱，使硅膠粉在柱內(nèi)均勻充實后，即得干硅膠層析柱。2．柱層析分離：取上述提取項下所得游離蒽醌與硅膠粉混合的樣品粉末，仔細加入硅膠層析柱的上端，輕敲層析柱，使樣品粉末平整，打開層析柱的下端活塞，緩緩加入適量苯于層析柱中，使苯慢慢滲入柱內(nèi)，繼以苯為洗脫劑進行洗脫，柱下用錐形瓶收集洗脫液。經(jīng)過一段時間洗脫之后，可以看到在硅膠柱的上段逐漸形成清晰的紅棕色兩個色帶，繼續(xù)用苯洗脫使兩個色帶分開較大距離（2cm左右）時改用乙酸乙酯∶苯（2∶8）混合溶劑繼續(xù)洗脫，更換收集容器，直至柱上第一段色帶開始流出，控制流出液的流量收集（每15ml為l流分），并順次編號，直到層析柱上的兩個色帶全部洗脫下來之后為止。每個流分經(jīng)薄層層析檢查，相同斑點者合并，并分別蒸餾回收溶劑至濃縮。放置析晶，分別濾集結(jié)晶。先被洗脫下來的為大黃素甲醚，后被洗脫下來的為大黃素。（三）大黃素PH梯度分離將總蒽醌，加入乙醚約100ml，使完全溶解（或直接用上述的氯仿提取液進行），加5%碳酸鈉溶液萃取數(shù)次（每次20~30m1），至萃取堿水液呈淡紅色為止。合并萃取堿液，加鹽酸至呈酸性反應(yīng)（PH2~3），析出全部大黃素沉淀。抽濾，水洗，再滴稀乙醇抽洗。所得粗制大黃素可用吡啶或冰醋酸重結(jié)晶。用碳酸鈉液萃取后的乙醚液（方法同上述碳酸鈉溶液的處理）。萃取液經(jīng)酸化后可得大黃素甲醚等弱酸性蒽醌類成份。（四）大黃素的檢識1．熔點：大黃素256~257℃2．堿液反應(yīng)：取實驗產(chǎn)品少許，加2ml乙醇溶解，繼加氫氧化鈉試液2~3滴，溶液立即產(chǎn)生紅色，繼續(xù)加稀鹽酸酸化，紅色即行退去，試寫出反應(yīng)原理。3．醋酸鎂反應(yīng)：取實驗產(chǎn)品少許，加乙醇2ml溶解，加數(shù)滴醋酸鎂試液，即產(chǎn)生橙紅色（或紫紅色）。試寫出反應(yīng)原理。4．薄層層析檢識吸附劑：硅膠-CMC薄層板展開劑：苯∶乙酸乙酯（8∶2）對照品：1%大黃素醇溶液或1%大黃素甲醚溶液供試品：分離后的1%大黃素和1%大黃素甲醚醇溶液顯色劑：自然光下觀察，再用氨氣熏后觀察六、實驗說明及注意事項l．游離蒽醌的提取方法中，結(jié)合狀態(tài)的羥基蒽醌類成份不溶于氯仿故未被提出。方法一先用10%硫酸與氯仿共同回流，其目的使結(jié)合狀態(tài)蒽醌水解為游離狀態(tài)蒽醌易被氯仿提取出來，這樣提取出的蒽醌類成份較為完全。2．柱層析的硅膠用量，應(yīng)視上樣品量的多少而定，一般是樣品與吸附劑之比為1∶100，若用量少則分離效果差，用量過多時又勢必使柱體加長，致使洗脫時間減慢。3．如采用濕法裝柱，可先在層析管中加入苯液，再通過漏斗將硅膠加入柱中，并始終保持硅膠面上有苯存在。樣品上柱時也可采用干法加樣，即將總蒽醌溶于少量丙酮，加降活性的硅膠，拌勻放置，待溶劑自然揮發(fā)或低溫去掉溶劑，小心將其加入柱頂，再以苯洗脫。4．由于大黃酚和大黃素甲醚的極性接近，用硅膠柱層析分離效果不夠理想，可采用磷酸氫鈣作為吸附劑，以石油醚為洗脫劑，則大黃酚和大黃素甲醚可依次洗脫下來。5．按照一般常規(guī)柱層分離操作，本實驗應(yīng)先用苯洗脫大黃素甲醚，后用苯、乙酸乙酯混合液溶劑洗脫大黃素，但為了實驗的進度不致拖延時間，不必全部洗脫大黃素甲醚之后才改換溶劑，只要能看出兩個色帶明顯分離開一定距離時，即可更換溶劑洗脫。這樣操作既可有效地將二種成份分開洗脫，又可加速洗脫時間。6．本實驗多次使用乙醚，因此要特別注意防火安全，絕對禁止有明火的情況下，使用乙醚。七、思考題1．羥基蒽醌類成份具有哪些性質(zhì)？根據(jù)它的性質(zhì)，說明提取與分離的原理。2．大黃素的堿液反應(yīng)和醋酸鎂反應(yīng)的原理是什么？3．如何操作好硅膠柱層析？

實驗六中藥化學成份的預(yù)試驗中藥中所含的化學成份較為復(fù)雜，在提取分離某種中藥成份之前，一般可先進行簡單的預(yù)試驗，初步了解其中可能含有哪些類型的成份，以便對今后的提取分離工作提供一定的參考。預(yù)試驗方法一般可分為兩大類：一類是單項預(yù)試驗，即根據(jù)需要重點檢查某類成份，例如尋找含生物堿成份，僅需進行生物堿的定性反應(yīng)，以檢查生物堿的存在與否。另一類是系統(tǒng)預(yù)試法，即選用簡單的定性方法對中藥中各類成份進行較為全面的試驗。一、目的要求1．學習中藥化學成份的預(yù)試驗方法及原理。2．掌握中藥預(yù)試驗的程序及結(jié)果的判斷。二、實驗原理系統(tǒng)預(yù)試和單項預(yù)試的基本原理基本相似，首先制備供試液，然后進行各類成份的檢識。制備供試液主要是利用各類化學成份在不同溶劑中的溶解度不同分成數(shù)個部份，如水溶性、醇溶性及石油醚溶性部份。有時還可結(jié)合化合物的酸堿性不同，采用酸或堿處理，使其再細分為含酸性、含堿性及含中性的化合物部份。如欲進一步了解預(yù)試的結(jié)果，也可根據(jù)化合物極性大小和分子分配子數(shù)不同采用吸附溥層層析或紙層析進行觀察。制成供試液后就可分別進行各類成份的檢識，根據(jù)檢出結(jié)果確定藥材中含有哪些類型的化學成份。一般預(yù)試的結(jié)果只能參考，因為預(yù)試所采用的檢出反應(yīng)往往不是專屬性很高的反應(yīng)，或是各類成份之間存在干擾，使結(jié)果不明顯或不正確。因此，要學會根據(jù)檢識反應(yīng)的檢識范圍及供試液的制備方法和層析結(jié)果諸因素綜合考慮后再作一個恰當?shù)慕Y(jié)論。三、實驗內(nèi)容（一）實驗樣品制取方法1．水浸液取中藥粉末4g，加40ml蒸餾水浸泡過夜，濾取3ml濾液供檢查氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)，其余部份放在60℃水浴加熱約10min，過濾，濾液供糖、多糖、有機酸、皂甙、甙類、酚類、鞣質(zhì)等項的預(yù)試。2．乙醇提取液取中藥粉末約5g，加60ml95%乙醇，于水浴中加熱回流20min，過濾。其中30ml濾液供黃酮類化合物、蒽醌、鞣質(zhì)、甙類、有機酸、香豆素、萜類、內(nèi)酯、甾體等項的預(yù)試，其余濾液濃縮至1ml，供圓底濾紙層析時點樣用。如中藥中的葉綠素較多，應(yīng)先除去?？蓪⑺幉挠?5%乙醇加熱回流，提取液加水使其含醇量為70%，再傾入分液漏斗中，用等體積的石油醚提取兩次，以除去葉綠素，分出下層70%乙醇提取液，減壓濃縮至糖漿狀，冷卻過濾，再做上述試驗。3．酸性醇提取液取中藥粉末2g，加0.5%鹽酸的乙醇溶液10ml，水浴上回流10min，過濾，濾液供生物堿檢查用。（二）試管及濾紙片預(yù)試法1．檢查生物堿取酸性醇提取液，先用稀NH4OH調(diào)至中性，水浴蒸干。再加5%H2SO44ml溶解殘渣，過濾，濾液供以下試驗用。（1）碘化汞鉀試劑（Mayer）：取濾液lml，加入試劑1~2滴，如有淺黃色或白色沉淀，可能有生物堿。（2）碘化鈉鉀試劑（Dragendorff試劑）：取濾液lml，加入試劑1~2滴，如有紅色沉淀產(chǎn)生，可能有生物堿存在。（3）硅鎢酸試劑：取濾液lml，加入試劑1~2滴，如有淺黃色或灰白色沉淀可能含有生物堿。2．檢查氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)（1）雙縮脲試驗（Biuret反應(yīng)）：取1%硫酸銅溶液與10%氫氧化鈉溶液各lml混合。取1m1冷水浸液，加入上述試劑，搖動后如顯紫紅色，表示含多肽或蛋白質(zhì)。（2）茚三酮試劑（Ninhydrin試劑）：取冷水浸液lml，加入0.2%茚三酮乙醇溶液2~3滴，搖勻，在沸水浴中加熱5min，冷卻后，如顯藍色或藍紫色，表明含有氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)。3．檢查有機酸（1）用PH試紙檢查：將熱水提取液和乙醇提取液分別用PH試紙檢查，如呈酸性，則可能含有游離酸或酚性化合物。（2）溴酚藍試劑：點乙醇提取液于濾紙片上，噴灑0.1%溴酚藍試劑，如在藍色背景上顯黃色斑點，表明可能含有機酸（如不明顯，可再噴灑氨水，然后暴露在鹽酸氣體中，背景逐漸由藍色變?yōu)辄S色，而有機酸斑點為藍色）。4．檢查酚類化合物和鞣質(zhì)（1）1%三氯化鐵試劑：取乙醇提取液lml，提取液如為酸性，即可直接進行檢查，如為酸性，可加乙酸酸化后，再加三氯化鐵試劑1~2滴，如呈藍墨綠色或藍紫色，證明可能含有酚類或鞣質(zhì)。（2）香草醛-鹽酸試劑：將乙醇提取液點在濾紙片上，干燥后噴灑香草醛-鹽酸試劑，如呈不同程度的紅色，表明具有間苯二酚結(jié)構(gòu)的化合物。（3）三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑：將乙醇提取液點在濾紙片上，噴灑三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑，如呈藍色斑點，證明可能含有鞣質(zhì)、酚類或還原性化合物。為了進一步確證是一般酚類化合物還是鞣質(zhì)，可利用鞣質(zhì)與生物堿或明膠產(chǎn)生沉淀而除去鞣質(zhì)后進行試驗（生物堿可選擇0.1%咖啡堿水溶液）。5．檢查還原糖、多糖和甙（1）斐林試劑（Fehling）：取熱水浸液lml，加入新配制的斐林試劑4~5滴在沸水浴上加熱數(shù)分鐘，如產(chǎn)生紅棕色沉淀，證明含有還原糖或其還原性物質(zhì)。為了檢查多糖和甙，另取4ml水浸液加lml斐林試劑，在水浴上加熱10min，濾去沉淀，濾液用10%鹽酸酸化后，再加入過量的鹽酸lml，于沸水浴上加熱半小時，如有混懸物析出，表明可能有甙類，濾去沉淀，加10%氫氧化鈉呈堿性，再加入斐林試劑，加熱10min，如有紅棕色沉淀，表示可能有多糖甙或甙。（2）-萘酚試驗（Molish反應(yīng)）：取水提取液或乙醇提取液lml，加入5%-萘酚乙醇液2~3滴，搖勻，沿試管壁緩緩加入少量濃硫酸，如在濃硫酸的接觸面產(chǎn)生紫紅色環(huán)，證明含有糖類、多糖或甙類。（3）鄰苯二甲酸苯胺試劑：將冷水浸液點在濾紙片上，噴灑鄰苯二甲酸苯胺試劑，在105℃加熱數(shù)分鐘，顯棕色或棕紅色即證明含有還原糖。6．檢查皂甙（1）泡沫試驗：取熱水提取液1~2ml于試管內(nèi)，激烈振搖，發(fā)泡產(chǎn)生多量蜂窩狀泡沫，放置10min以上，甚至加入乙醇，泡沫也不明顯地減少，表明含有皂甙。（2）乙酸酐-濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）：取乙醇提取液l~2ml，揮去乙醇，殘渣溶解或懸浮于乙酸酐中，滴加1滴濃硫酸，如呈紫紅色，并且在溶液上層逐漸變綠，證明含有甾體、三萜類或皂甙。7．檢查甾體膠三萜類化合物（1）乙酸酐-濃硫酸試驗：取乙醇提取液3ml，將溶液揮去，于殘渣中加入lml冰乙酸使其溶解，再加入lml乙酸酐，最后滴入1滴濃硫酸，試管顏色逐漸由黃紅紫藍墨綠，表明含有甾體皂甙、甾醇或三萜類化合物，其中甾體化合物顏色變化較快，而三萜類化合物顏色變化較慢。8．檢查黃酮類化合物（1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液lml于試管中加鎂粉少許，再滴入濃鹽酸數(shù)滴（必要時在沸水中加熱3min），如顯紅紫色說明有黃酮類化合物存在的可能。（2）堿液試驗：取乙醇提取液點于濾紙片上，與氨蒸氣接觸，如顯黃色，當濾紙離開蒸氣數(shù)分鐘后，黃色又消褪，說明有黃酮類化合物存在的可能。（3）1%的三氯化鋁乙醇溶液：將樣品點在濾紙片上，噴灑此試劑，干燥后如呈黃色斑點，而于紫外燈光下如顯極明顯之黃色或黃綠色熒光，表明可能有黃酮類化合物存在。9．檢查內(nèi)酯、香豆素及其甙（1）取乙醇提取液及水提取液點于濾紙片上，放在紫外燈光下觀察，如有藍色熒光，加堿后變成黃色熒光，表明可能含有香豆素及其甙類。（2）重氮化試驗：取乙醇提取液lml，加等量30%碳酸鈉于水浴上煮沸3min，冷卻后，加新配制的重氮化試劑1~2滴，如顯紅色，表明可能含有香豆素及其甙類。（3）異羥肟酸鐵試驗（酯的反應(yīng)）：取乙醇提取液lml，加3滴鹽酸羥胺的飽和乙醇液和10滴氫氧化鈉的飽和乙醇液，加溫至反應(yīng)開始（有氣泡產(chǎn)生），冷卻，加5%鹽酸使成弱酸性，再加5滴1%三氯化鐵溶液。如有橙紅色或紫色反應(yīng)，表明含有酯、內(nèi)酯、香豆素及其甙類。10．檢查強心甙（1）堿性3,5-二硝基苯甲酸試劑（Kedde試劑）：取乙醇提取液0.5ml，加Kedde試劑3~4滴，如呈紅色或紫色，表明可能含有強心甙。（2）堿性苦味酸試劑（Baljet試劑）：取乙醇提取液lml，加入Baljet試劑1滴，如呈橙色或紅色反應(yīng)，表明可能含有強心甙。（3）亞硝酰鐵氰化鈉試劑：取乙醇提取液lml，在水浴上蒸干，用lml吡啶溶解殘渣，加入0.3%亞硝酰鐵氰化鈉溶液4~5滴，混勻，再加入10%氫氧化鈉1~2滴，搖勻，如呈紅色反應(yīng)，而顏色又逐漸消失，表明可能含有強心甙。11．檢查蒽醌類（1）1%硼酸水溶液：將乙醇提取液點于濾紙片上，噴灑1%硼酸水溶液，如呈黃橙、紅色或熒光，表明含蒽醌及其甙類。（2）5%KOH水溶液：將乙醇提取液點于濾紙片上，噴灑5%KOH水溶液，如呈黃橙、紅色或熒光，表明含蒽醌及其甙類。（3）堿性試驗：取乙醇提取液lml，加入1%NaOH溶液lml，如產(chǎn)生紅色，加入少量30%過氧化氫液，加熱后，紅色不褪，用