2021獸醫(yī)檢測實驗室 ELISA 試驗測量不確定度評估指南

ELISA不確定度評估指南第PAGE第1頁共7頁2020032020030120200301獸醫(yī)檢測實驗室ELISA試驗測量不確定度評估指南1、適用范圍本指南規(guī)定了獸醫(yī)檢測實驗室對ELISA試驗進行測量不確定度評估的“從上到下法”和“從下到上法”。本指南適用于獸醫(yī)檢測實驗室對ELISA進行測量不確定度的評估。2、引用文件僅引用的版本適用；未注明日期的，引用文件的最新版本（包括任何修訂）適用。CNASCL01《檢測和校準實驗室能力認可準則》CNAS-CL01-G003:2019《測量不確定度的要求》OIE《ManualofDiagnosticTestsandVaccineforTerrestrialAnimals》“QualitymanagementinveterinarytestingChapter.2.2.4 “Measurementuncertainty”3、術(shù)語和定義測量不確定度：u含于此區(qū)間。A測量不確定度分量的評定。BA量進行的評定。合成標準不確定度：當測量結(jié)果是由若干個其他量的值求得時，按其他各量的方差（和）協(xié)方差算得的標準不確定度。自由度：在方差計算中，和的項數(shù)減去對和的限制數(shù),符號為。（1-為顯著性水平。PKPKP表示。4ELISAELISAAA（但可能不限于不確定度、被檢樣品/試劑盒存放條件引起的不確定度、采樣是否正確及樣品是否被確定度。BB（但可能不限于）酶標儀的分辨力、孵育所用的恒（很大、試劑反復冷藏、人員身體狀況等等。ELISAAA結(jié)果按照如下方式分別計算。XXn=1nxnX ii1n:測量列數(shù)據(jù)的個數(shù)；X:第i個測量值；Sii1 n1inv2vixix

（即：測量結(jié)果減去被測量的最佳估計值）（或稱為平均值的標準偏差）sn=sn為X的實驗標準偏差每個影響因素的標準不確定度評估nu= = snB加樣器產(chǎn)生的不確定度加樣器產(chǎn)生的不確定度來源于加樣器(C)產(chǎn)生的不確定度u(C)和溫度效應(T)產(chǎn)生的不確定度u(T)。3加樣器校準(C)確度為±2%，ELISA100μL，按矩形分布處理，加樣器引入的3標準不確定度為：u(C)=（100μL×2%）/

=1.15(μL)溫度效應(T)20℃20±4℃2.1×10-4/℃，100μL2100μL（V底）u（V底）=[u2(C)+u2(T)]1/2=(1.152+0.0842)1/2=1.153(μL)同理由100μL(V終)所引起的標準合成不確定度u(V終)=（V底=1.153L)；底u(V終u（液層厚厚度）=[u2（V底）+u2(V終)]1/2=1.631(μL)酶標儀的不準確度Bu（酶標儀）=[u12+u22+u32]1/2溫育時間的不確定度ELISA45min±3min30min±3min，3min/31/2=1.732min.u（時間）=[1.7322/452+1.7322/302]1/2=0.069min溫育溫度的不確定度ELISA337℃±t℃t/31/2,所以溫度的相對不確定度為：u（溫度）=[(t/31/2)2+(t/31/2)2+(t/31/2)2]1/2如果t為±2℃,U（溫度）=2.000相對標準不確定度的合成2u=2u=2S2P2N2C2T2T12擴展不確定度的的計算與表示以標準偏差的倍數(shù)表示的不確定度稱為擴展不確定度，以U表示。在自由度ⅴ=n-195％時，最佳估計值的擴展不確定度為

UksxTKELISAK=2。不確定度的報告ELISAX=x±UxOD，UOD，XOD不確定度的應用ELISAOD>0.5ELISAOD＜0.5ELISAELISAX=x±UU±0.02ODOD0.47-0.51U±0.02，實際樣品測得的OD0.51，OD0.49-0.53OD0.480.53ODOD0.5，仍可判為陽性。“對照樣品”/ELISA“評估原理“對照樣品ELISA驗方法的全過程和性能進行監(jiān)控，直接評估該試驗過程的合成不確定度。ELISA計算出檢測結(jié)果的平均值、標準偏差（SD、相對標準偏差（RSD。RSD即為不確定度。假設(shè)數(shù)據(jù)以正態(tài)分布，在閾值附近以95%置信水平計算。擴展不確定度即為：2乘以RSD。評估舉例評估實例ELISA評估測量不確定度的方法。ELISA（本實驗是陽性對照質(zhì)控樣品ODOD1PI所以弱陽性對照血清的OD值（ODL）就轉(zhuǎn)換為：PIL=100X[1-{ODL/ODN}]相對標準偏差就是：試驗檢測次數(shù)PI（%）156256361464551649試驗檢測次數(shù)PI（%）1562563614645516497598709551042經(jīng)過計算可得：10，平均值（Mean）56.3，標準偏差（SD）7.9相對標準偏差（RSD）=SD/Mean=7.9/56.3=0.14假設(shè)數(shù)據(jù)以正態(tài)分布，在閾值附近以95%置信水平計算。擴展不確定度U(95%CI)=2×RSD，即2×0.14=0.28評估結(jié)果的應用ELISAPI50PI>0%PI<50%為陰性。所測