第一章 微生物技術(shù) 復(fù)習(xí)課件

第一章微生物技術(shù)

復(fù)習(xí)課件第1節(jié)

培養(yǎng)基對微生物的選擇作用1.能說出培養(yǎng)基的類型、用途和基本成分。2.比較消毒和滅菌的區(qū)別。3.舉例說明常用的消毒與滅菌的方法。4.能記住培養(yǎng)基的配制方法。5.研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。一二一、培養(yǎng)基的制備1.培養(yǎng)基（1）概念

培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定和保存各種微生物。（2）成分

一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和無機鹽等。（3）種類

培養(yǎng)基按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。后者常用瓊脂做凝固劑。一二2.培養(yǎng)基的配制和滅菌（1）培養(yǎng)基的制備包括配制和滅菌兩大步驟。（2）配制關(guān)鍵：準確稱量、調(diào)準pH、規(guī)范制作棉塞、徹底滅菌。（3）主要制作流程：稱量→溶化→調(diào)pH→分裝→加塞和包扎→滅菌→擺斜面及倒平板。（4）由于配制培養(yǎng)基的各類營養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有多種不同的微生物，配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，及時殺滅培養(yǎng)基中的微生物，同時防止微生物大量繁殖造成的培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的改變。（5）常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。通過高壓、高溫蒸汽使菌體蛋白質(zhì)凝固變性以達到滅菌的目的。一二思考：

日常生活中的牛奶在進入市場銷售前要進行消毒，可采用哪種消毒方法呢?

提示：用巴氏消毒法對牛奶進行消毒，可以殺死牛奶中的微生物，同時使牛奶的營養(yǎng)成分不會被破壞。一二二、培養(yǎng)基對微生物的選擇作用1.菌落

微生物通過某種方法接種到適于生長的固體培養(yǎng)基表面上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時間后，單個的菌體或孢子就可以生長繁殖成一個個肉眼可見的細胞群體，稱為菌落。2.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用的原理

不同種微生物對營養(yǎng)要求不一樣，通過選擇不同的培養(yǎng)基，人為控制培養(yǎng)基的pH、碳源、氮源、滲透壓等條件，使選擇的培養(yǎng)基利于某類或某種微生物的生長，而不利于其他微生物的生存，可以達到分離、培養(yǎng)不同微生物的目的。

例如，細菌生長需要的氮源高，pH中性或微堿性，因此培養(yǎng)細菌常采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。酵母菌和霉菌生長所需的碳源含量高，pH偏酸性，因此分離真菌常采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。一二3.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用的意義

在科研和生產(chǎn)實踐中具有重要意義，它是分離和純化不同類型微生物的基礎(chǔ)。1.培養(yǎng)基的成分與微生物生長所需的營養(yǎng)2.培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用3.配制培養(yǎng)基的原則（1）目的要明確（2）營養(yǎng)要協(xié)調(diào)（3）pH要適宜4.消毒與滅菌的比較

二者的區(qū)別：前者去除的是部分微生物，后者去除的是所有微生物。5.三種常用滅菌方法的比較。6.倒平板的注意事項（1）培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50~60℃后，才能用來倒平板。可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。（2）倒平板前，要將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶瓶口通過火焰灼燒，以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。（3）平板冷凝后，需將平板倒置。平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。（4）倒平板過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，空氣中的微生物可能會在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此不要再繼續(xù)使用這個平板培養(yǎng)微生物。題型一題型二題型三題型四微生物的營養(yǎng)【例題1】下列關(guān)于微生物的營養(yǎng)的說法，正確的是（

）A.同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量C.除水以外的無機物僅提供無機鹽D.無機氮源也可能提供能量

解析：對某些微生物來說，含C、H、O、N的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源。CO2可以作為光能自養(yǎng)微生物的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是無機物，也可以分別作為微生物的碳源和氮源。硝化細菌所利用的氮源是無機氮源氨，同時氨也為硝化細菌提供用以化能合成作用的能量。

答案：D題型一題型二題型三題型四易錯警示：含C、H、O、N的化合物既可以作為一部分微生物的碳源，又可以作為氮源；有機碳源能提供能量，無機碳源不能提供能量。題型一題型二題型三題型四無菌操作相關(guān)技術(shù)【例題2】細菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理方法，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌?（

）A.接種針、手、培養(yǎng)基 B.高壓鍋、手、接種針C.培養(yǎng)基、手、接種針 D.接種針、手、高壓鍋

解析：高壓蒸汽滅菌鍋通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙手可以進行消毒?；鹧孀茻梢匝杆購氐椎販缇?，適用于微生物的接種工具，如接種針。

答案：C題型一題型二題型三題型四反思領(lǐng)悟：微生物培養(yǎng)過程中的無菌操作包括消毒和滅菌兩大類，各自具有不同的方法。應(yīng)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；對用于培養(yǎng)微生物的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌。題型一題型二題型三題型四培養(yǎng)基的制備【例題3】下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是（

）A.操作順序為稱量、溶化、分裝、調(diào)pH、加塞和包扎、滅菌、擺斜面及倒平板B.將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或錐形瓶內(nèi)C.待培養(yǎng)基冷卻至50~60℃后，制成斜面或平板后備用D.配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌

解析：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序是稱量、溶化、調(diào)pH、分裝、加塞和包扎、滅菌、擺斜面及倒平板。

答案：A題型一題型二題型三題型四選擇培養(yǎng)基的特點與應(yīng)用【例題4】氯苯化合物是重要的有機化工原料，不易降解，會污染環(huán)境。某研究小組依照下列實驗方案（圖甲）篩選出能高效降解氯苯化合物的微生物SP1菌。培養(yǎng)基配方如下表。題型一題型二題型三題型四（1）配制Ⅱ號固體培養(yǎng)基時，除添加Ⅱ號液體培養(yǎng)基成分外，還應(yīng)添加1%的

。（2）培養(yǎng)基配制時，滅菌與調(diào)pH的先后順序是

。（3）從用途上來說，Ⅰ號培養(yǎng)基和Ⅱ號培養(yǎng)基分別屬于

培養(yǎng)基和

培養(yǎng)基。在Ⅱ號培養(yǎng)基中，為SP1菌提供氮源的成分是

。（4）在營養(yǎng)缺乏或環(huán)境惡劣時，SP1的菌體會變成一個圓形的休眠體，這種休眠體被稱為

。題型一題型二題型三題型四（5）將SP1菌接種在含不同濃度氯苯的Ⅲ號培養(yǎng)液中培養(yǎng)，得到生長曲線（圖乙）。從圖乙可知，SP1菌在

的培養(yǎng)條件下最早停止生長，其原因是_______________________________________________________。題型一題型二題型三題型四

解析：（1）固體培養(yǎng)基必須含有適量的瓊脂。（2）配制培養(yǎng)基時應(yīng)先調(diào)pH，后滅菌。（3）Ⅰ號培養(yǎng)基是為了獲得更多的菌株，屬于通用培養(yǎng)基，Ⅱ號培養(yǎng)基是為了選擇出SP1菌株，屬于選擇培養(yǎng)基，Ⅱ號培養(yǎng)基成分中含N物質(zhì)為硝酸銨，則應(yīng)由它為SP1菌株提供氮源。（4）在惡劣環(huán)境下，一些菌體會形成芽孢休眠體，以抵抗不良環(huán)境的影響。（5）SP1菌株以氯苯為碳源，當(dāng)氯苯耗盡時，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生長。

答案：（1）瓊脂（2）先調(diào)pH，后滅菌（3）通用選擇硝酸銨（4）芽孢（5）20mg/L氯苯碳源最早耗盡123451.下列敘述錯誤的是（

）A.微生物學(xué)實驗一般都要求在無菌條件下進行B.細菌生長只需要氮源C.培養(yǎng)基的配制包括配制和滅菌兩大步驟D.不同培養(yǎng)基對微生物的選擇作用是分離和純化不同類型微生物的基礎(chǔ)答案：B123452.在微生物培養(yǎng)過程中，需要對培養(yǎng)基等進行滅菌，其標準是（

）A.殺死所有的病原微生物B.殺死所有的微生物C.殺死所有微生物的細胞、芽孢和孢子D.使病原菌不生長答案：C123453.下列有關(guān)培養(yǎng)基配制的敘述，正確的是（

）A.任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水B.碳源和氮源必須具有一定比例，碳元素的含量最多，其次為氮元素C.微生物的生長除受營養(yǎng)因素影響外，還受到溫度、pH、氧、滲透壓等的影響D.營養(yǎng)物質(zhì)的濃度越高越好答案：C解析：自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要加碳源，自生固氮菌的培養(yǎng)基不需要加氮源。培養(yǎng)基中碳源和氮源必須具有一定比例，但含量最多的元素是氧。營養(yǎng)物質(zhì)的濃度并不是越多越好，濃度過高會導(dǎo)致培養(yǎng)物細胞失水。123454.無菌技術(shù)常圍繞著如何避免雜菌的污染展開，下列常見的無菌技術(shù)中，屬于滅菌處理的是（

）A.操作者的雙手用酒精擦拭B.實驗室用紫外線照射C.對接種環(huán)進行灼燒處理D.水源用氯氣處理答案：C解析：滅菌是用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。123455.微生物培養(yǎng)過程中，肉眼鑒別金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的重要依據(jù)是（

）A.細菌的大小、形狀、顏色

B.菌落的大小、形狀、顏色C.有無鞭毛

D.培養(yǎng)基的不同答案：B解析：金黃色葡萄球菌的菌落呈黃色，菌落較小，圓形、光滑凸起，而枯草桿菌的菌落表面不光滑，菌落較大，呈白色或略帶一些暗黃色，所以可依據(jù)菌落的大小、形狀、顏色，肉眼鑒別兩種細菌，B項正確。由于單個細菌很小，其形狀、顏色以及有無鞭毛都無法用肉眼看到，A、C兩項錯誤。培養(yǎng)基也不是鑒別兩者的依據(jù)，D項錯誤。第2節(jié)微生物的純培養(yǎng)1.闡明接種方法。2.進行微生物的分離和培養(yǎng)。一二一、純培養(yǎng)

人們要研究某種微生物的特性，就要從混雜的樣品中取得所需的純種，或者把受污染的菌種重新分離出來，使該微生物處于純培養(yǎng)狀態(tài)。也就是說，培養(yǎng)物中所有細胞只是微生物的某一個種或株，它們有著共同的來源，是同一細胞的后代。一二二、微生物的分離與純化1.基本思路

一般根據(jù)微生物對營養(yǎng)物質(zhì)、pH、氧氣等條件的要求不同，供給它們適宜的生活條件，或加入某種抑制劑，造成只利于要分離的微生物生長、不利于其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰不需要的微生物，分離得到需要的微生物純種。2.原理

將待檢測微生物樣品通過劃線或涂布接種在固體培養(yǎng)基上，樣品中的每一個細胞或孢子都可以生長繁殖形成單個菌落。將單個菌落接種到斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后，即可得到一個微生物的純種。3.分離步驟

微生物的分離包括樣品稀釋、劃線或涂布及培養(yǎng)三個步驟。一二4.接種方法

劃線或涂布過程包括平板劃線分離法和涂布分離法。常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種。1.平板劃線分離法的操作要點（1）在操作第一步、每次劃線之前及劃線操作結(jié)束時都要灼燒接種環(huán)。操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落；劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境或感染操作者。（2）在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。（3）在進行第二次以及其后的劃線操作時，要從上一次劃線的末端開始劃線。劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。2.涂布分離法的操作要點（1）稀釋操作時，注意每次都要使菌液與水充分混勻。操作時，試管口和移液管應(yīng)在距離火焰1~2cm處。（2）涂布平板時的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行，同時酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適，吸管頭不要接觸任何其他物體等。（3）涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。（4）無菌玻璃涂棒末端浸在盛有體積分數(shù)為70%酒精的燒杯中，取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的玻璃涂棒在酒精燈火焰上引燃以滅菌，同時要注意防火。

平板劃線分離法與涂布分離法各有優(yōu)點，二者的目的都是分離得到單個菌落。平板劃線分離法方法簡單，涂布分離法單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些。3.對分離純化效果的判斷方法（1）培養(yǎng)時，要將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基一同培養(yǎng)。未接種的培養(yǎng)基的作用是對照，若其表面有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底，需要重新進行實驗。（2）如果對照培養(yǎng)基上無菌落形成，可觀察接種后的培養(yǎng)基。如果培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑且有光澤，邊緣整齊，則說明接種成功；如果出現(xiàn)了其他顏色、形狀的菌落，說明有雜菌，需要重新進行分離純化。

規(guī)律總結(jié)：培養(yǎng)時間不同，菌落大小會不同，因為時間越長，菌落中細菌繁殖越多，菌落體積越大；培養(yǎng)時間越長，菌落數(shù)可能會增多，但已有的菌落分布位置應(yīng)相同。題型一題型二接種操作的注意事項【例題1】下列有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是（

）A.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物B.每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上的菌種C.在第二區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液D.劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上的菌種，避免細菌污染環(huán)境或感染操作者解析：在第二區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種來源于第一次劃線的末端。答案：C題型一題型二對特定微生物的分離純化【例題2】有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。請回答下列問題。（1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以

為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基。（2）純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即

和

。（3）為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力

。題型一題型二（4）通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實驗室常用的滅菌方法有火焰滅菌、

和

。無菌技術(shù)要求實驗操作應(yīng)在酒精燈

附近進行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。題型一題型二

解析：（1）要獲得分解原油的細菌，應(yīng)選擇以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基，以保證這種細菌可以大量繁殖，而其他細菌不能生存。此種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。（2）純化菌種常用平板劃線分離法和涂布分離法。（3）在以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基上，菌落周圍的原油被分解而形成分解圈，分解圈越大，說明該菌株降解能力越強。（4）實驗室滅菌的方法有火焰滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法，實驗操作要在酒精燈火焰附近的無菌區(qū)進行。

答案：（1）原油選擇（2）平板劃線分離法涂布分離法（3）強（4）干熱滅菌高壓蒸汽滅菌法火焰1231.涂布分離法是微生物培養(yǎng)中的一種常用的接種方法。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A.操作中需要將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面C.不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落D.操作過程中，培養(yǎng)基和涂布器等均需進行嚴格滅菌處理答案：C解析：涂布分離法是將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)。只有用稀釋度足夠高的菌液涂布，聚集在一起的微生物才能在固體培養(yǎng)基表面分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。1232.為了獲得純度高的大腸桿菌，需要對大腸桿菌進行培養(yǎng)和分離。培養(yǎng)大腸桿菌一般用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。（1）培養(yǎng)大腸桿菌時，配制固體培養(yǎng)基的基本流程是稱量→________→

→

→加塞和包扎→

→擺斜面及倒平板。（2）稱量時，由于牛肉膏比較黏稠，可以用玻璃棒挑取，放在稱量紙上稱量。由于牛肉膏和蛋白胨

，稱量時動作要迅速，稱后要及時蓋上瓶蓋。（3）在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上大腸桿菌能生長，說明培養(yǎng)基含有

等大腸桿菌生長所需的營養(yǎng)要素。（4）微生物純化培養(yǎng)可以通過多種接種方法，如

和

等，使大腸桿菌在固體培養(yǎng)基上形成單個

，從而獲得純菌株。123答案：（1）溶化調(diào)pH分裝滅菌（2）容易吸潮（3）碳源、氮源、無機鹽、水（4）平板劃線分離法涂布分離法菌落1233.分析下表所示培養(yǎng)基的配方，回答下面的問題。123（1）在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是

和

。（2）按物理狀態(tài)劃分該培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基，理由是培養(yǎng)基中含有

。（3）由于培養(yǎng)基中只有尿素一種

源，所以該培養(yǎng)基只能用于能夠合成脲酶（可催化尿素分解）的微生物的培養(yǎng)。將土壤浸出液涂布在此培養(yǎng)基平板上能夠從土壤中篩選出

的細菌。（4）在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，并能抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作

培養(yǎng)基。123答案：（1）葡萄糖尿素（2）固體瓊脂（凝固劑）

（3）氮分解尿素（4）選擇解析：（1）碳源是為微生物的生長提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)，所以該培養(yǎng)基的碳源是葡萄糖，氮源是尿素。（2）根據(jù)物理狀態(tài)可以將培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基中添加了瓊脂做凝固劑。（3）（4）絕大多數(shù)生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以此培養(yǎng)基對微生物有選擇作用，選擇對象是能夠利用尿素的微生物。第3節(jié)微生物數(shù)量的測定1.記住統(tǒng)計菌落數(shù)目、土壤取樣及稀釋的方法。2.能運用從土壤中分離特定微生物及進行平板計數(shù)的方法。

微生物的數(shù)量是一個非常重要的衛(wèi)生指標，在做食品和飲用水的衛(wèi)生學(xué)檢查時，必須測定其中的細菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)。測定土壤中微生物的數(shù)量1.原理

平板菌落計數(shù)法是將待測定的微生物樣品按比例作一系列稀釋后，將其中的微生物充分分散成單個細胞，吸取一定量某幾個稀釋度的菌液接種到平板上，培養(yǎng)一段時間后，每個單細胞生長繁殖形成單個菌落，根據(jù)稀釋倍數(shù)、取樣接種量和菌落數(shù)即可換算出樣品的含菌數(shù)。2.方法步驟（1）制備尿素固體培養(yǎng)基（2）制備土壤樣品稀釋液（3）加樣（4）倒平板（5）培養(yǎng)（6）統(tǒng)計菌落數(shù)（7）計算樣品中的菌數(shù)3.注意事項

統(tǒng)計菌落時，一般選擇在同一稀釋度的3個培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)目相近者，并且要求菌落數(shù)目在一定的范圍內(nèi)。若測定細菌和放線菌，要求每皿以30~300個菌落為宜，若是霉菌則以每皿10~100個菌落為宜。1.顯微鏡直接計數(shù)法與平板菌落計數(shù)法的比較（1）顯微鏡直接計數(shù)法

①原理：利用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)，是一種常用的微生物計數(shù)方法。

②過程：將經(jīng)過適當(dāng)稀釋的菌懸液滲入血球計數(shù)板的計數(shù)室中，在顯微鏡下進行計數(shù)。由于計數(shù)室的容積是一定的，所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來換算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計得的是活菌和死菌的總和，故又稱為總菌計數(shù)法。

③優(yōu)點：直觀、快速。

④缺點：需要與血球計數(shù)板配套使用，且計數(shù)隨機性大，所以不能作出較為宏觀、全面地反映菌體數(shù)量的結(jié)果。不能區(qū)分活菌和死菌。（2）平板菌落計數(shù)法（間接計數(shù)法）

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落只來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)。

②計算公式：每克樣品中的菌數(shù)C：代表某一稀釋度下平板上生長菌落的平均數(shù)；V：代表加入每一平板的稀釋菌液體積；m：代表稀釋倍數(shù)。

③優(yōu)點：能測出樣品中的活菌數(shù)，因此又稱活菌計數(shù)法。

④缺點：操作過程較煩瑣，時間較長，測定值常受各種因素影響。2.平板菌落計數(shù)法注意事項（1）設(shè)置對照

①目的：排除實驗中非實驗因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。

②方法：取一個未接種的培養(yǎng)基與接種好的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)。（2）注意無菌操作

①建立無菌觀念，嚴格控制實驗器材、實驗室、實驗操作者的消毒和滅菌。

②整個實驗過程必須保證無菌操作。

③取樣、稀釋都要在酒精燈火焰附近的無菌環(huán)境中進行。

④規(guī)范操作，防止其他微生物污染，實驗結(jié)束后洗手消毒。（3）準確計數(shù)

①統(tǒng)計結(jié)果時，按照不同微生物選擇不同的稀釋倍數(shù)。

②要設(shè)置3個或3個以上的重復(fù)組，然后求其平均值。題型一題型二測定細菌數(shù)量的原理與方法【例題1】用平板菌落計數(shù)法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋度為10-6的培養(yǎng)皿中，得到以下幾種統(tǒng)計結(jié)果。正確的是（

）A.接種了1個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是230B.接種了2個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是216和260，取平均值238C.接種了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21，212和256，取平均值163D.接種了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是210，240和250，取平均值233題型一題型二解析：在設(shè)計實驗時，一定要接種至少3個平板作為重復(fù)組，才能增強實驗的說服力與準確性，所以A、B兩項不正確。C項雖接種了3個平板，但是，其中一個平板的計數(shù)結(jié)果與另兩個相差太遠，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地用3個平板的計數(shù)值求平均值。答案：D反思領(lǐng)悟在設(shè)計實驗時，一定要接種至少3個平板作為重復(fù)組；在分析實驗結(jié)果時，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，如果結(jié)果差別過大，則意味著操作有誤，需重新進行實驗。題型一題型二平板菌落計數(shù)法的注意事項【例題2】用平板菌落計數(shù)法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。在某稀釋濃度下，某同學(xué)做了若干個平板并統(tǒng)計每個平板的菌落數(shù)，最接近樣品中菌體數(shù)真實值的是（

）A.菌落數(shù)量最多的平板B.菌落數(shù)量最少的平板C.菌落數(shù)量適中的平板D.取若干個平板菌落數(shù)量的平均值解析：用平板菌落計數(shù)法對樣品中活菌數(shù)目進行統(tǒng)計，只是一種估測。根據(jù)此方法的實驗過程可知，在某一稀釋度下平板上生長的菌落數(shù)具有一定的偶然性，并不是絕對均勻，所以取若干個平板菌落數(shù)量的平均值比較接近樣品中菌體數(shù)的真實值。答案：D題型一題型二

反思領(lǐng)悟：由于有的菌落不止是由一個細菌生長而成，可能是由兩個或多個細菌繁殖形成，所以計數(shù)出的樣品的菌數(shù)會與樣品的實際菌數(shù)有偏差，即計算出的樣品的菌數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。12341.下列關(guān)于從土壤中分離細菌的操作步驟，正確的順序是（

）①土壤取樣②稱取10g土壤，加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中③吸取0.1mL待測樣進行平板涂布④制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7不同稀釋度的稀釋液A.①→②→③→④ B.①→③→②→④C.①→②→④→③ D.①→④→②→③答案：C12342.用平板菌落計數(shù)法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)時，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品中的活菌數(shù)。原因是（

）A.平板上的一個菌落就是一個細菌B.菌落中的細菌數(shù)是固定的C.此時的一個菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個活菌D.此方法統(tǒng)計的菌落數(shù)一定與活菌的實際數(shù)相同答案：C解析：用平板菌落計數(shù)法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)時，平板上的一個菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個活菌，但偶爾也能來自兩個或多個細菌，所以此方法統(tǒng)計的菌落數(shù)可能與活菌的實際數(shù)不相同。12343.下列關(guān)于“檢測土壤中細菌總數(shù)”實驗操作的敘述，錯誤的是（

）A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后待用B.取10-4、10-5、10-6稀釋度的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別接種于各組平板上C.將實驗組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)48hD.確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實驗組平板進行計數(shù)答案：D解析：檢測土壤中細菌總數(shù)時，用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后待用，取10-4、10-5、10-6稀釋度的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別接種于各組平板上，倒入冷卻好的培養(yǎng)基并混勻，凝固后將實驗組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)48h，在確認對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30~300的一組平板為代表進行計數(shù)。12344.用平板菌落計數(shù)法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實際值相比（

）A.比實際值高 B.比實際值低C.和實際值一致 D.比實際值可能高也可能低答案：B解析：培養(yǎng)基上的一個菌落可能由相連的兩個或多個菌體繁殖而來，因此統(tǒng)計的活菌數(shù)可能少于菌體實際值。第4節(jié)微生物的利用1.能記住纖維素酶的種類及分布。2.會運用從土壤中分離出分解纖維素的微生物的方法。3.能說出微生物在食品制作等方面的應(yīng)用。一二一、從土壤中分離纖維素分解菌1.纖維素分解菌

土壤中存在大量纖維素分解菌，包括真菌、細菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶，分解和利用纖維素和半纖維素。2.分離纖維素分解菌的原理

在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能很好地生長，并產(chǎn)生黃色或棕綠色色素，其他微生物則不能生長。3.分離纖維素分解菌的意義

目前對纖維素的降解利用主要采用生物手段，即利用纖維素分解菌或其產(chǎn)生的酶來分解纖維素。這項技術(shù)在碳素循環(huán)、提高土壤肥力及解決人類食物問題等方面有重大意義。三一二4.實驗步驟（1）紙條法

①制備培養(yǎng)基；②分裝；③制配土壤稀釋液；④接種培養(yǎng)；⑤觀察。（2）固體培養(yǎng)法

①制備培養(yǎng)基；②接種培養(yǎng)；③觀察。思考：

從土壤中分離纖維素分解菌的實驗中，為什么對土壤溶液進行梯度稀釋?

提示：通過梯度稀釋使聚集在一起的微生物分散成單個細菌，在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。三一二二、微生物對有機物質(zhì)的分解1.不同培養(yǎng)基中，同一菌株或菌群表現(xiàn)出的活力不一致，這可能是由于測定的時間不一致以及培養(yǎng)基中所含酶的濃度、活力不同而造成的。另外，不同的培養(yǎng)基中，底物不同，誘導(dǎo)產(chǎn)物也可能有差異。2.纖維素的分解比較困難，木質(zhì)素的分解比纖維素更難，淀粉和果膠的分解比纖維素容易。纖維素分解菌之所以還能分解其他物質(zhì)是因為它們還能分泌淀粉酶、蛋白酶、果膠酶和木質(zhì)素酶等。三一二三三、利用微生物制作食品1.利用微生物制作豆豉的原理

豆豉是用煮熟的大豆經(jīng)過納豆菌（一種帶芽孢的枯草桿菌）發(fā)酵制成的。納豆菌分泌的蛋白酶能夠分解大豆中的蛋白質(zhì)，產(chǎn)生小分子多肽及多種氨基酸，制成風(fēng)味獨特的發(fā)酵食品。在制備過程中，根據(jù)納豆菌的芽孢對熱不敏感的特性，可采用高溫控制雜菌污染。2.利用微生物制作豆豉的實驗步驟（1）制備豆豉菌懸液；（2）浸泡；（3）煮豆；（4）接種；（5）發(fā)酵。一二三3.發(fā)酵食品是微生物技術(shù)最早開發(fā)應(yīng)用的領(lǐng)域

目前，微生物技術(shù)應(yīng)用已深入到工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)療保健、環(huán)境保護等領(lǐng)域。1.利用剛果紅篩選纖維素分解菌的兩種方法

剛果紅是一種染料，它可以與纖維素等多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。2.篩選纖維素分解菌時在土壤中取樣的要點

要在富含纖維素的環(huán)境中取樣，以提高獲得目的微生物的概率。生物適應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對生物具有選擇作用，只有在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量才會高于其他普通環(huán)境。

也可人工設(shè)置適宜纖維素分解菌生存的環(huán)境。將濾紙埋在土壤中，這樣能使纖維素分解菌相對聚集。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm的腐殖土壤中。3.關(guān)于微生物對有機物質(zhì)的分解的實驗應(yīng)用（1）“探究纖維素分解菌是否只能分解纖維素”的實驗設(shè)計思路——分組設(shè)計實驗方案。

①用同一種分解纖維素的微生物分解不同的物質(zhì)，如淀粉、果膠和木質(zhì)素等?；蛴貌煌纸饫w維素的微生物分解同一種物質(zhì)。

②還需注意在實驗設(shè)計時設(shè)計對照實驗和重復(fù)實驗等。（2）選擇培養(yǎng)的“濃縮”作用。

在選擇培養(yǎng)的條件下，能夠使適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。4.對尿素分解菌和纖維素分解菌的分離實驗的比較。題型一題型二題型三從土壤中分離纖維素分解菌【例題1】某同學(xué)為了從土壤中分離得到纖維素分解菌，進行以下操作。（1）土壤取樣：用小鐵鏟和普通信封將土取回，然后倒入燒瓶中，加蒸餾水稀釋，塞好棉塞。（2）制備培養(yǎng)基。題型一題型二題型三（3）分裝：按每試管5mL分裝，然后加濾紙條，濾紙條緊貼內(nèi)壁，且一半浸入培養(yǎng)基中。（4）制備土壤稀釋液：制備10-1、10-2、10-3、10-4和10-5的土壤稀釋液。（5）接種培養(yǎng)：分別吸取各稀釋度的土壤稀釋液1mL接種到濾紙上，每個稀釋度重復(fù)4次。（6）培養(yǎng)觀察：把接種好的培養(yǎng)皿放到28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14d，觀察濾紙條上出現(xiàn)的菌落和濾紙顏色變化情況。找出該同學(xué)明顯的操作錯誤。題型一題型二題型三

解析：從土壤中分離微生物的一般流程是土壤取樣→制備培養(yǎng)基→分裝→制備土壤稀釋液→接種培養(yǎng)→觀察。該實驗步驟沒有問題，但在前五步操作中都沒有進行無菌操作，因而無法說明分解纖維素的微生物一定來自于土壤。

答案：（1）取樣工具應(yīng)提前滅菌；不能用蒸餾水，應(yīng)用無菌水；該操作應(yīng)在火焰旁進行。（3）培養(yǎng)基分裝并加濾紙條后應(yīng)滅菌。（4）在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁。（5）接種應(yīng)在無菌條件下進行。題型一題型二題型三對微生物分解有機物效力的測定【例題2】在纖維素分解菌的鑒定實驗中，纖維素酶的測定方法一般是（

）A.對纖維素進行定量測定B.對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量測定C.對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的纖維二糖進行定量測定D.對纖維素分解菌進行定量測定

解析：纖維素酶的測定方法一般是對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量測定。

答案：B題型一題型二題型三對