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生物化學實驗南京農業(yè)大學生命科學學院生物化學與分子生物學系1實驗一分光光度計線性分辨范圍測定2一、實驗目的學習分光光度計的工作原理掌握比色測定的基本操作掌握標準曲線的制作及最佳濃度范圍的確定3二、實驗原理當光線通過透明溶液介質時，其輻射的波長有一部分被吸收，一部分透過、因此光線射出溶液之后，部分光波減少，這種光波的吸收和透過可用于某些物質的定性定量分析。Lambert-Beer定律的適用范圍4從上式可以看出，一束單色光通過溶液后，光波被部分吸收，其吸收多少與溶液濃度和溶液厚度（光徑）成正比對于同一臺分光光度計而言，入射光光強不變；對于某一待側物而言，摩爾消光系數為常數，當光徑也保持不變時，吸光度與溶液濃度在一定范圍內成正比相對比較的概念5三、實驗材料及設備1、儀器UV9100分光光度計2、器材普通試管：25mL×9移液管：2mL×1燒杯：250mL×1洗耳球、滴管：各2洗瓶、試管架、移液管架：各16四、試劑的配制硫氰化鐵（Fe(SCN)3）溶液稱取8.95gKSCN和5.00gFeCl3·6H2O

，蒸餾水溶解后定容至2L藥品取用時務必規(guī)范操作！德國女科學家違規(guī)稀釋濃硫酸導致毀容7五、操作步驟1、教師現場演示如何使用分光光度計2、取9支試管，按下表所示操作8六、結果處理1、由0~8號管的數據，以硫氰化鐵含量為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制曲線自學使用軟件繪制2、根據曲線分析分光光度計線性分辨范圍9七、思考題1、在用分光光度計做比色測定時，標準溶液的濃度范圍應怎樣選定？待測樣品溶液的濃度應稀釋在什么范圍？請自行討

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