水解酪蛋白肽粉（酶解酪蛋白肽粉）

1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了即水解酪蛋白肽粉的定義和分類、技術(shù)要求、生產(chǎn)加工衛(wèi)生要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)程、標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存、附錄A和附錄B等要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以酪蛋白為為原料，經(jīng)蛋白酶酶解、滅酶、殺菌、過(guò)濾（沉淀）、噴霧干燥（干燥）、包裝等工藝加工得到的水解酪蛋白肽粉（酶解蛋白肽粉），主要作為食品工業(yè)配料使用。。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2760食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)GB4789.2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定GB4789.3食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)GB4789.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB4789.10食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)GB4789.15食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)GB5009.3食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定GB5009.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測(cè)定GB5009.5食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定GB5009.12食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定GB7718食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則GB14881食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范GB1886.174食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑食品工業(yè)用酶制劑GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB28050食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品營(yíng)養(yǎng)標(biāo)簽通則GB31638食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白JJF1070定量包裝商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局令〔2005〕第75號(hào)3定義和分類下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1水解酪蛋白肽粉以酪蛋白為為原料，經(jīng)蛋白酶酶解、滅酶、殺菌、過(guò)濾（沉淀）、噴霧干燥（干燥）、包裝等工藝加工得到的水解酪蛋白肽粉（酶解蛋白肽粉）4技術(shù)要求4.1原輔料要求4.1.1酪蛋白：應(yīng)符合GB31638的規(guī)定。24.1.2蛋白酶：應(yīng)符合GB1886.174的規(guī)定。4.1.3其他原料和輔料應(yīng)符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)規(guī)定。4.2感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定表1感官要求項(xiàng)目要求外觀具有產(chǎn)品品種應(yīng)有的外觀特征色澤具有產(chǎn)品品種應(yīng)有的色澤滋味及氣味具有產(chǎn)品品種應(yīng)有的滋味及氣味，無(wú)異味性狀具有產(chǎn)品品種應(yīng)有的性狀，無(wú)結(jié)塊雜質(zhì)無(wú)肉眼可見的外來(lái)雜質(zhì)4.3理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定表2理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)水分/%≤7灰分/%≤粗蛋白（以干基計(jì)）含量/%≥肽含量/%≥活性肽（LCSMT-1+LCSMT-2）含量/%≥5鉛（以Pb計(jì)）/（mg/kg）≤0.34.4微生物指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定表3微生物指標(biāo)項(xiàng)目采樣方案及限量ncmM大菌落總數(shù)/CFU/g5250000大腸菌群/CFU/g52霉菌/CFU/g≤沙門氏菌/25g500-金黃色葡萄球菌/CFU/g51備注1.樣品的采樣及處理按GB4789.1執(zhí)行；2.n為同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品數(shù)量；c為最大可允許超過(guò)m值的樣品數(shù)；m為微生物指標(biāo)可接受水平的限量值；M為微生物指標(biāo)的最高安全限量值。4.5食品添加劑要求食品添加劑的品種和使用量應(yīng)符合GB2760的要求。4.6凈含量要求應(yīng)符合國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局令〔2005〕第75號(hào)《定量包裝商品計(jì)量監(jiān)督管理辦法》的規(guī)定。35生產(chǎn)加工衛(wèi)生要求生產(chǎn)加工過(guò)程的衛(wèi)生要求符合GB14881的規(guī)定。6試驗(yàn)方法6.1感官檢驗(yàn)取約5g被測(cè)樣品于潔凈容器中，置于明亮處，迎光觀察其色澤及雜質(zhì)；在室溫下，嗅其氣味，品嘗其滋味。6.2理化指標(biāo)檢驗(yàn)按GB5009.3規(guī)定的方法測(cè)定。6.2.2灰分按GB5009.4規(guī)定的方法測(cè)定。6.2.3粗蛋白按GB5009.5規(guī)定的方法測(cè)定。6.2.4肽含量按附錄A規(guī)定的方法測(cè)定。6.2.5活性肽（LCSMT-1+LCSMT-2）含量按附錄B規(guī)定的方法測(cè)定。6.2.6鉛按GB5009.12規(guī)定檢測(cè)方法測(cè)定。6.3微生物指標(biāo)檢驗(yàn)6.3.1菌落總數(shù)按GB4789.2第二法規(guī)定的檢測(cè)方法測(cè)定。6.3.2大腸菌群按GB4789.3規(guī)定的方法測(cè)定。6.3.3霉菌按GB4789.15規(guī)定的方法測(cè)定。6.3.4沙門氏菌按GB4789.4規(guī)定的方法測(cè)定。6.3.5金黃色葡萄球菌按GB4789.10中第二法規(guī)定的方法測(cè)定。6.4凈含量檢驗(yàn)按JJF1070規(guī)定的方法測(cè)定。7檢驗(yàn)規(guī)程7.1原輔料入庫(kù)檢驗(yàn)原輔料必須經(jīng)企業(yè)質(zhì)檢部門按要求進(jìn)行驗(yàn)收，合格后方可入庫(kù)使用。7.2組批同一生產(chǎn)日期、同一條生產(chǎn)線生產(chǎn)的同一品種的產(chǎn)品為一批。7.3抽樣在成品庫(kù)內(nèi)從每批產(chǎn)品隨機(jī)抽取12個(gè)樣品，6個(gè)用于檢驗(yàn)，6個(gè)用于留樣備用。47.4出廠檢驗(yàn)7.4.1產(chǎn)品出廠前對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果符合本標(biāo)準(zhǔn)要求的產(chǎn)品方可出廠。7.4.2感官要求、凈含量、水分、灰分、粗蛋白、菌落總數(shù)、大腸菌群為每批必檢項(xiàng)目。7.5型式檢驗(yàn)7.5.1型式檢驗(yàn)應(yīng)不少于每半年進(jìn)行一次，發(fā)生下列情況之一時(shí)亦應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a.新產(chǎn)品試制定型鑒定時(shí)；b.更換主要設(shè)備時(shí)；c.停產(chǎn)三個(gè)月或以上，重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d.出廠檢驗(yàn)與上次型式檢驗(yàn)有較大差異時(shí)；e.食品安全監(jiān)督檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)提出要求時(shí)。7.5.2型式檢驗(yàn)項(xiàng)目包括標(biāo)準(zhǔn)中4.2、4.3、4.4、4.6規(guī)定的全部項(xiàng)目。7.6判定規(guī)則7.6.1檢驗(yàn)結(jié)果全部符合本標(biāo)準(zhǔn)要求，則判定該批產(chǎn)品合格。7.6.2檢驗(yàn)結(jié)果微生物限量不符合本標(biāo)準(zhǔn)要求，則判定該批產(chǎn)品不合格，且不得復(fù)檢。7.6.3檢驗(yàn)結(jié)果中除微生物限量外的其他指標(biāo)不符合本標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)，應(yīng)重新按7.3抽樣方案加倍取樣復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果全部符合要求時(shí)，做合格評(píng)論。如復(fù)檢仍有指標(biāo)不符合本標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)，則整批產(chǎn)品不合格。8標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸和貯存8.1標(biāo)簽8.1.1標(biāo)簽應(yīng)符合GB7718，GB28050的規(guī)定。8.2包裝8.2.1包裝材料和容器應(yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。8.3運(yùn)輸和貯存8.3.1產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中避免日曬、雨淋、重壓，產(chǎn)品應(yīng)在陰涼及清潔、避光、干燥、通風(fēng)、無(wú)蟲害、無(wú)鼠害的倉(cāng)庫(kù)內(nèi)貯存，不應(yīng)與有毒、有害、有異味、易揮發(fā)、易腐蝕的物品混裝貯存和運(yùn)輸。5附錄A肽含量的測(cè)定方法A1原理調(diào)酪蛋白的等電點(diǎn)，除去高分子蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)水解物可溶于溶液中（其中包含肽及游離氨基酸）。樣品經(jīng)酸化后，濾液中的蛋白質(zhì)含量減去游離氨基酸含量即為肽含量。A2試劑實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中二級(jí)用水的規(guī)格，使用試劑除特殊規(guī)定外，均為分析純。A.2.1三氯乙酸：150g/LaA.2.2硫酸銅(CuSO4·5H2O)。A.2.3硫酸鉀。A.2.4硫酸：密度為1.8419g/L。A.2.5酸溶液：20g/L。A.2.6氫氧化鈉溶液：400g/L。A.2.7鹽酸：優(yōu)級(jí)純。A.2.8硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(1/2H2SO4)=0.0500mol/L]或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HCl)＝0.0500mol/L]。A.2.9混合指示液：1份1g/L甲基紅乙醇溶液與5份1g/L溴甲酚綠乙醇溶液臨用時(shí)混合?；?份1g/L甲基紅乙醇溶液與1份1g/L亞甲基藍(lán)乙醇溶液臨用時(shí)混合。A.2.10混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液：0.0025mol/L。A.2.11pH2.2的檸檬酸鈉緩沖液：稱取19.6g檸檬酸鈉(Na3C6H5O7·2H2O)，加人16.5mL濃鹽酸并加水稀釋到1000mL，用濃鹽酸或500g/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至2.2。A.2.12pH3.3的檸檬酸鈉緩沖液：稱取19.6g檸檬酸鈉，加人12mL濃鹽酸并加水稀釋到1000mL，用濃鹽酸或500g/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.3。A.2.13pH4.0的檸檬酸鈉緩沖液：稱取19.6g檸檬酸鈉，加人9mL濃鹽酸并加水稀釋到1000mL，用濃鹽酸或500g/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4.0。A.2.14pH6.4的檸檬酸鈉緩沖液：稱取19.6g檸檬酸鈉和46.8g氯化鈉(優(yōu)級(jí)純)，加水溶解并稀釋到1000mL，用濃鹽酸或500g/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.4。A.2.15pH5.2的乙酸鋰溶液：稱取氫氧化鋰(LiOH·H2O)168g，加人冰乙酸(優(yōu)級(jí)純)279mL，加水稀釋到1000mL，用濃鹽酸或500g/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.2。A.2.16茚三酮溶液：取150mL二甲基亞砜(C2H6OS)和50mL乙酸鋰溶液，加人4g水合茚三酮6(C9H4O3·H2O)和0.12g還原茚三酮(C18H10O6·2H2O)攪拌至完全溶解。操作步驟A.3.1前處理方法準(zhǔn)確稱取樣品1.000g（精確至0.001g加入50mL水使其完全溶解，調(diào)pH至4.6，5000r/min離心10min，上清液作為備用液。A.3.2蛋白質(zhì)量含量測(cè)定將A.3.1得到的上清液，按照GB/T22492附錄B.4.1.2~B.4.1.6測(cè)定蛋白質(zhì)含量。A.3.3游離氨基酸含量的測(cè)定將A.3.1得到的上清液，吸取按照GB/T22492附錄B.4.2測(cè)定游離氨基酸含量。A.4結(jié)果計(jì)算試樣中多肽含量按式（B.1）計(jì)算：式中：X——試樣中多肽的含量，單位為克每百克(g/l00g)；X1——試樣中上清液中蛋白質(zhì)的含量，單位為克每百克(g/l00g)；X2——試樣中游離氨基酸的含量，單位為克每百克(g/l00g)；A.5重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)兩次測(cè)定結(jié)果算術(shù)平均值的12%。740020004002000附錄B活性肽含量的測(cè)定方法B1檢測(cè)條件純度大于95%標(biāo)準(zhǔn)品（合成）：LCSMT-1、LCSMT-2；乙腈、TFA（HPLC級(jí)，公司）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水；樣品為牛乳經(jīng)過(guò)分離噴霧干燥制得的粉末。高效液相色譜（LC-15A，日本島津公司）色譜柱：WelchC18柱（4.6mm×250mm，5um，Ultimate）根據(jù)設(shè)置好的液相條件進(jìn)行HPLC分析，條件如下：流動(dòng)相：A泵：超純水（含0.1%TFA）；B泵：乙腈（含0.1%TFA）流速：1mL／min進(jìn)樣量：20uL檢測(cè)器：SPD-10A柱溫：28℃洗脫條件（乙腈濃度10%-20%（0.01-10min20%-30%（10-40min30%-90%（40-48min90%（48-53min）。B2色譜圖mAU89/556559933.533.50102030活性肽LCSMT-1標(biāo)準(zhǔn)品液相圖譜827.870/1618263040030020027.870/161826304003002000mAU250 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