生物技術(shù)實(shí)踐-2021屆高三生物模擬試卷分類(lèi)匯編（10月刊）

專(zhuān)題19生物技術(shù)實(shí)踐

54.(黑龍江省實(shí)驗(yàn)中學(xué)2020-2021學(xué)年高三8月階段測(cè)試生物試題)高溫淀粉酶在大規(guī)模

工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，其

隨

活

匚＞

測(cè)

(1)I號(hào)培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來(lái)看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)要加入作為凝固劑，

平板冷凝后要將平板放置。

(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是。

A.計(jì)算、稱(chēng)量、倒平板、溶化、滅菌

B.計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、倒平板、滅菌

C.計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌、倒平板

D.計(jì)算、稱(chēng)量、滅菌、溶化、倒平板

(3)溶化時(shí)，燒杯中加入瓊脂后要不停地,防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對(duì)培養(yǎng)基

滅菌的方法一般為o

(4)①過(guò)程是②過(guò)程所使用的接種方法是法。

(5)部分嗜熱菌在I號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周?chē)?/p>

形成透明圈，挑選相應(yīng)的菌落，接種到n號(hào)培養(yǎng)基上進(jìn)一步分離純化后，再對(duì)菌種進(jìn)行擴(kuò)大

培養(yǎng)。

(6)微生物的菌種保藏可以采用臨時(shí)保藏法——將菌種接種到試管的培養(yǎng)基上,

在e的冰箱中，每隔3-6個(gè)月轉(zhuǎn)接種。

【答案】(1).瓊脂(2).倒過(guò)來(lái)(3).C(4).攪拌(5).高壓蒸汽滅菌法

(6).稀釋(7).稀釋涂布平板(8).淀粉酶(9).固體斜面(10).4

【解析】

【分析】

1、分析題圖：①過(guò)程是梯度稀釋?zhuān)谶^(guò)程是稀釋涂布平板法接種，目的是篩選單菌落。從

功能上看，I號(hào)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基；從物理狀態(tài)上來(lái)說(shuō)，1號(hào)培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基。

2、微生物常見(jiàn)的接種的方法①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接

種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng).在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，

菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋

后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】（1）I號(hào)培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來(lái)看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)要加入瓊脂作為凝固劑,

平板冷凝后要將平板倒過(guò)來(lái)放置，以防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。

（2）配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌、倒平板，C正確。故選C。

（3）溶化時(shí)，燒杯中加入瓊脂后要不停地?cái)嚢?，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。?duì)培養(yǎng)基滅

菌的方法一般為高壓蒸汽滅菌法。

（4）分析題圖可知，①過(guò)程是梯度稀釋?zhuān)康氖菍?duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)虎谶^(guò)程是用稀釋涂布平

板法進(jìn)行接種。

（5）分解淀粉的嗜熱菌在I號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌

落周?chē)纬赏该魅?，透明圈越大淀粉酶的活性越?qiáng)，所以要從中挑出透明圈大的菌落，接種

到H號(hào)培養(yǎng)基上進(jìn)一步分離純化后，再對(duì)菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

（6）微生物的菌種保臧可以采用臨時(shí)保臧法——將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，

在4°C的冰箱中，每隔3-6個(gè)月轉(zhuǎn)接種。

【點(diǎn)睛】本題考查微生物選擇、培養(yǎng)、利用等相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生從材料中獲取相關(guān)的

生物學(xué)信息，并能運(yùn)用這些信息，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問(wèn)題。

14.（湖南省長(zhǎng)沙市長(zhǎng)郡中學(xué)2020-2021學(xué)年高三入學(xué)摸底考試生物試題）玉米經(jīng)深加工后可

用于生產(chǎn)酒精、玉米胚芽油、葡萄糖等產(chǎn)品（流程如下）。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

K米

A.玉米胚芽油易溶于有機(jī)溶劑，可選用萃取法提取

B.水解玉米秸稈纖維素的醐是一種復(fù)合酶，其中Cx酶的作用是將纖維二糖分解成葡萄糖

C.探究水解玉米淀粉的酶的最適用量時(shí)，需保持溫度、pH、加入的淀粉量等無(wú)關(guān)變量相同

且適宜

D.纖維素分解菌可用于玉米秸稈還田，鑒別纖維素分解菌可用剛果紅染色法

【答案】B

【解析】

【分析】

1、剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理：剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的

多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤?/p>

有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。纖維素

分解菌能分解纖維素，會(huì)形成以分解菌為中心的透明圈，這樣，我們就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透

明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。

2、纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括Ci酶、Cx酶、葡萄糖甘酶，其中Ci、Cx酶可使纖維素分

解為纖維二糖，葡萄糖甘酶可將纖維二糖分解成葡萄糖。

【詳解】A、玉米胚芽油易溶于有機(jī)溶劑，可選用萃取法提取，A正確；

B、纖維素酶是一種復(fù)合酶，它至少包括三種組分，即Ci酶、Cx酶和葡萄糖甘酶，其中葡

萄糖甘酶的作用是將纖維二糖分解成葡萄糖，B錯(cuò)誤；

C、為避免浪費(fèi)，需對(duì)催化玉米淀粉水解的酶的最適用量進(jìn)行探究，實(shí)驗(yàn)的自變量是酶的用

量，淀粉的水解量為因變量，無(wú)關(guān)變量有溫度、pH、加入的淀粉量、反應(yīng)時(shí)間等，C正確;

D、鑒別纖維素分解菌時(shí)用剛果紅染色法，培養(yǎng)基上的菌落周?chē)鷷?huì)形成透明圈，D正確。

故選Bo

【點(diǎn)睛】本題考查纖維素分解菌篩選的原理、酶最適用量的探究實(shí)驗(yàn)等知識(shí)，意在考查考生

對(duì)所學(xué)知識(shí)的識(shí)記和理解能力。

20.（湖南省長(zhǎng)沙市長(zhǎng)郡中學(xué)2020-2021學(xué)年高三入學(xué)摸底考試生物試題）表中生物工程實(shí)驗(yàn)

選擇的材料與實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇钆浜侠淼氖牵ǎ?/p>

組

實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)材料材料特點(diǎn)

別

獲得生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的轉(zhuǎn)基因

A乳腺細(xì)胞分泌乳汁將相應(yīng)產(chǎn)物排出體外

動(dòng)物

分生區(qū)附近病毒極少，甚至不含病

B獲得脫毒苗莖尖

毒

C獲得植物突變體愈傷組織細(xì)分裂能力強(qiáng)，易誘發(fā)突變

胞

囊胚內(nèi)細(xì)胞

D胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)能分化形成各種組織和器官

團(tuán)

A.AB.BC.CD.D

【答案】BCD

【解析】

【分析】

囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞屬于胚胎干細(xì)胞，具有很強(qiáng)的分裂能力，可以用胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)；采用

基因工程技術(shù)培養(yǎng)乳腺生物反應(yīng)器時(shí)，受體細(xì)胞是受精卵，因?yàn)槭芫讶苄宰罡摺?/p>

【詳解】A、采用基因工程技術(shù)培養(yǎng)乳腺生物反應(yīng)器時(shí)，受體細(xì)胞是受精卵而不是乳腺細(xì)胞,

因?yàn)槭芫讶苄宰罡撸珹錯(cuò)誤；

B、植物分生區(qū)附近(如莖尖)含病毒極少，甚至不舍病毒，因此可采用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)

獲得脫毒苗，B正確；

C、愈傷組織分裂能力強(qiáng)，易發(fā)生突變，容易獲得突變體，C正確；

D、囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞具有很強(qiáng)的分裂能力，可以用于胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)，進(jìn)而誘導(dǎo)培養(yǎng)成

各種組織和器官，D正確。

故選BCD。

25.近期冷泉港實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)門(mén)為城市農(nóng)業(yè)培育了像葡萄一樣的小番茄，這種小番茄也適合在太

空種植?？茖W(xué)家利用基因突變將控制生長(zhǎng)的終止基因(SP)改造為SP1基因，利用基因敲

除(將同源DNA片段導(dǎo)入受體細(xì)胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段)的

方法使小番茄的成熟期縮短為40天。如圖為SP基因兩端的序列和質(zhì)粒中相關(guān)的序列，已知

限制酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一G2ATCC,限制酶II的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-GATC。

CCTA<M""'E"E""CTAG

力,.?陋Cicnc1和《knell衣東四種標(biāo)記選岡

Gene肉后#"腌0|Q-示奴制“儀」的識(shí)別序列放大

回答下列問(wèn)題：

(1)除限制酶以外，基因工程中常用的工具還有__________。在上述實(shí)例中，為了便于重

組和篩選，需使用分別切割目的基因和質(zhì)粒0質(zhì)粒中標(biāo)記基因的作用是

(2)利用物理因素和化學(xué)因素處理SP基因可，使篩選出SPi基因的概率增大。

可利用技術(shù)擴(kuò)增SPi基因，將搭載SPi基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法有

____________(答出兩種)。

(3)利用SPi基因敲除SP基因?qū)儆谏镒儺愔械?SPi基因成功表達(dá)的個(gè)體

生物學(xué)水平鑒定標(biāo)準(zhǔn)為。

【答案】(D.DNA連接酶、運(yùn)載體⑵.限制酶I［和限制酶I⑶.鑒別受體細(xì)胞

中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)(4).誘發(fā)SP基因突變

(5).PCR(6).農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基困槍法、花粉管通道法(7).基因重組(8).小番

茄的成熟期約為40天

【解析】

【分析】

基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目

的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。

在獲取目的基因時(shí)，需要用到限制酶；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，還需要用到DNA連接酶和運(yùn)

載體。作為運(yùn)載體，要有合適的限制酶切割位點(diǎn)，具有復(fù)制原點(diǎn)，有啟動(dòng)子和終止子，還需

要有標(biāo)記基因。

將目的基因?qū)е率荏w細(xì)胞時(shí)，依據(jù)操作對(duì)象不同而采用不同的方法，對(duì)于植物采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)

化法、基因槍法、花粉管通道法，對(duì)于動(dòng)物常用顯微注射法，對(duì)微生物常用Ca2+處理然后

再進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

目的基因的檢測(cè)與鑒定分三個(gè)方面：一是用DNA分子雜交檢測(cè)目的是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；二

是檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，用DNA-RNA分子雜交；三是個(gè)體水平的檢測(cè)，檢測(cè)受體生物

是否表達(dá)出相應(yīng)的性狀。

【詳解】⑴基因工程的工具有限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體。限制酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)

是一G2ATCC,限制的II的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一IGATC,限制酶II能識(shí)別并切割限制前I

的識(shí)別序列，所以切割質(zhì)粒時(shí)，只能用限制酶I,因?yàn)橄拗魄癐I能將質(zhì)粒切割成兩段。切割

目的基因里，需要將兩端都切割，選用限制酶n即可。標(biāo)記基因可隨重組運(yùn)載體一起進(jìn)入

受體細(xì)胞，使受體細(xì)胞獲得標(biāo)記基因所控制的性狀，根據(jù)標(biāo)記基因的有無(wú)，可將含有重組運(yùn)

載體(即含有目的基因)的受體細(xì)胞篩選出來(lái)。

⑵物理因素和化學(xué)因素處理SP基因可導(dǎo)致發(fā)生基因突變。增加目的基因時(shí)，可采用PCR技

術(shù)擴(kuò)增目的基因。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法有農(nóng)村菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道

法。

⑶利用SP|基因敲除SP基因，并未改變基因的結(jié)構(gòu)，而是將整個(gè)基因插入，使目的基因與

染色體上原有基因進(jìn)行了重新組合，屬于基因重組。SP1基因能夠縮短縮短小番茄的成熟時(shí)

間，若成功表達(dá)，則小番茄的成熟期約為40天。

【點(diǎn)睛】在構(gòu)建基本的表達(dá)載體時(shí)，必須選擇合適的限制酶。要能夠?qū)⑦\(yùn)載體切開(kāi)，形成與

目的基因連接的缺口，但要注意不能將運(yùn)載體切成兩段，會(huì)導(dǎo)致目的基因無(wú)法與運(yùn)載體正確

連接。選擇限制酶時(shí)，要保證至少保留一個(gè)完整的標(biāo)記基因以便進(jìn)行篩選。

45.（吉林省白城市通榆縣一中2020-2021學(xué)年高三上學(xué)期第一次月考生物試題）某科研小組

研究發(fā)現(xiàn)，若長(zhǎng)期使用殺蟲(chóng)劑S（一種有機(jī)磷農(nóng)藥）可造成其在土壤中嚴(yán)重殘留，而木霉能

有效將其降解。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：

（1）木霉可用加入作為唯一碳源的（按用途分）培養(yǎng)基

加以分離。

（2）配制培養(yǎng)基還需滿(mǎn)足木霉對(duì)pH的需求，應(yīng)在滅菌_____________（填“前”或"后”）調(diào)

節(jié)pH。探究木霉降解殺蟲(chóng)劑S的適宜pH,可向含有等量木霉、不同pH的培養(yǎng)基中分別加

入等量殺蟲(chóng)劑S,幾天后檢測(cè)O

（3）配制好的培養(yǎng)基應(yīng)在適宜的環(huán)境中放置一段時(shí)間，觀(guān)察培養(yǎng)基上______________,以

判別培養(yǎng)基是否被污染。欲測(cè)定木霉的數(shù)目，可用計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)。若將

100mL含木霉的土壤樣液稀釋1伊倍，取0.1mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測(cè)

得菌落數(shù)的平均值為121個(gè)（空白對(duì)照組無(wú)污染），則原來(lái)的100mL樣液中含有木霉

個(gè)，而原土壤樣液中的實(shí)際值與計(jì)算值相比會(huì)。（偏大、偏小

或相等）

【答案】（1）.殺蟲(chóng)劑S（2）.選擇（3）.前（4）.殺蟲(chóng)劑S的殘留量（5）.是

否產(chǎn)生菌落（6）.血細(xì)胞（血球）（7）.1.21x1010（8）.偏大

【解析】

【分析】

1.選擇培養(yǎng)基是指一類(lèi)根據(jù)特定微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某理化因素抗性的原理而設(shè)

計(jì)的培養(yǎng)基。具有只允許特定的微生物生長(zhǎng)，而同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的功能。

2.微生物常見(jiàn)的接種的方法①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，

劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)

逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，

均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。其中，稀釋涂布平板法可用于計(jì)數(shù)活菌。

【詳解】（1）要分離出能降解殺蟲(chóng)劑S的木霉，需要以殺蟲(chóng)劑S作為唯一碳源培養(yǎng)基，在

該培養(yǎng)基上只有能降解殺蟲(chóng)劑s的木霉能生存，其它微生物都不能生存，因此該培養(yǎng)基屬

于選擇培養(yǎng)基。

（2）培養(yǎng)基在滅菌前應(yīng)調(diào)節(jié)pH值。探究木霉降解殺蟲(chóng)劑S的適宜pH?？上蚝械攘磕久?

不同pH的培養(yǎng)基中分別加入等量殺蟲(chóng)劑S,該實(shí)驗(yàn)的自變量是pH值，因變量是殺蟲(chóng)劑S

的含量，所以幾天后檢測(cè)殺蟲(chóng)劑S的殘留量。

（3）判別培養(yǎng)基是否被污染需要將空白培養(yǎng)基在在適宜的環(huán)境中放置一段時(shí)間，觀(guān)察培養(yǎng)

基上是否有菌落產(chǎn)生，若沒(méi)有菌落產(chǎn)生則培養(yǎng)基沒(méi)有被污染，否則被污染。測(cè)定木霉的數(shù)目，

可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)，也可以使用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)。根據(jù)題干信息可知100mL

樣液中木霉的數(shù)目為121+0.1x100x105=1.21x101。個(gè)，培養(yǎng)基上的菌落可能是由兩個(gè)或多個(gè)

細(xì)胞繁殖的后代形成的，所以原土壤樣液的實(shí)際值一般會(huì)比計(jì)算值偏大。

【點(diǎn)睛】本題主要考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的基本成分、種類(lèi)及功能;

識(shí)記接種微生物常用的兩種方法，掌握微生物計(jì)數(shù)的方法。

11.（吉林省長(zhǎng)春外國(guó)語(yǔ)學(xué)校2020-2021學(xué)年高三上學(xué)期期初考試生物試題）請(qǐng)回答以下與微

生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)有關(guān)的問(wèn)題：

（1）上圖是利用法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步

分散到培養(yǎng)基的表面。

（2）在制備固體培養(yǎng)基時(shí)需加入的常用凝固劑是,若培養(yǎng)基需調(diào)節(jié)pH,則應(yīng)

在滅菌之（填"前"或"后"）調(diào)節(jié)。

（3）在培養(yǎng)過(guò)程中，關(guān)鍵。

（4）如圖為接種后的示意圖，在劃線(xiàn)接種的整個(gè)操作過(guò)程中，對(duì)接種環(huán)至少需要進(jìn)行

次灼燒滅菌。接種后蓋上皿蓋，將平板放入恒溫箱中培養(yǎng)，這樣放置的

目的是o

（5）用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，每隔一個(gè)“時(shí)間間隔”統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選

取作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而遺漏菌落

的數(shù)目。

【答案】（1）.平板劃線(xiàn)（2）.稀釋?zhuān)?）.瓊脂（4）.前（5）.防止外來(lái)雜菌的

污染（6）.6（7）.倒置（8）.避免培養(yǎng)基被污染和防止培養(yǎng)基水分過(guò)快揮發(fā)（9）.

菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄

【解析】

【分析】

圖中接種的方式是平板劃線(xiàn)法.平板劃線(xiàn)法是將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中制成平板，

用接種環(huán)沾取少量待分離的材料，在培養(yǎng)基表面平行或分區(qū)劃線(xiàn)，然后，將培養(yǎng)皿放入恒溫

箱里培養(yǎng).在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最

后可能形成純種的單個(gè)菌落。

培養(yǎng)基配置的步驟：計(jì)算-稱(chēng)量-溶解-滅菌-倒平板.

【詳解】（1）上圖使用了接種環(huán)，所以采用平板劃線(xiàn)法進(jìn)行接種；把聚集的菌種逐步稀釋分

散到培養(yǎng)基表面。

（2）固體培養(yǎng)基中常用凝固劑是瓊脂；應(yīng)該在滅菌之前調(diào)節(jié)pH。

（3）微生物的培養(yǎng)過(guò)程中，關(guān)鍵是要做到防止外來(lái)雜菌的污染。

（4）圖中一共劃線(xiàn)5個(gè)區(qū)域，每次劃線(xiàn)之后都要灼燒接種環(huán)，同時(shí)接種之前也要灼燒，所

以一共進(jìn)行6次灼燒；為了防止培養(yǎng)基被污染和防止培養(yǎng)基水分過(guò)快揮發(fā)，所以培養(yǎng)時(shí)需要

將平板倒置放入恒溫箱中。

（5）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，需要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)作為記錄的結(jié)果。

【點(diǎn)睛】本題以培養(yǎng)基的配方為載體，考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生掌

握微生物分離與純化的兩種方法和培養(yǎng)基配置的步驟。

（欽州一中2021屆高三8月月考理科綜合）11.回答與胡蘿卜有關(guān)的問(wèn)題：

（1）胡蘿卜含有的胡蘿卜素中，根據(jù)將胡蘿卜素分為三類(lèi)，最主要的是P?胡

蘿卜素，該胡蘿卜素在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)變成兩分子o

（2）從胡蘿卜中提取胡蘿卜素時(shí)，通常在萃取前要將胡蘿卜粉碎和,以提高萃取

效率：水蒸氣蒸儲(chǔ)法不適合胡蘿卜素的提取，原因是。

（3）現(xiàn)有乙醇和乙酸乙酯兩種溶劑，應(yīng)選用其中的作為胡蘿卜素的萃取劑，萃

取的效率主要取決于。

（4）鑒定萃取物中是否含有胡蘿卜素時(shí)，通?？刹捎梅?。

【答案】（1）.碳碳雙鍵（2）.維生素A（3）.干燥（4）.水蒸氣蒸儲(chǔ)法適用于分

離揮發(fā)性物質(zhì)，而胡蘿卜素為非揮發(fā)性物質(zhì)，不能隨水蒸氣蒸儲(chǔ)出（5）.乙酸乙酯（6）.

萃取劑的性質(zhì)和用量（7）.紙層析

【解析】

【分析】

1.提取胡蘿卜素的提取流程為：胡蘿卜-粉碎-干燥-萃取-過(guò)濾-濃縮-胡蘿卜素。胡蘿卜素常

用來(lái)總量因缺乏維生素A引起的疾病。

2.胡蘿卜素的提?。?/p>

（1）胡蘿卜素的性質(zhì)：胡蘿卜素是橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙

醇，易溶于石油酸等有機(jī)溶劑。

（2）胡蘿卜素的提取來(lái)源：提取天然胡蘿卜素的方法主要有：一是從植物中提?。欢菑?/p>

大面積養(yǎng)殖的巖藻中荻得；三是利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn).

（3）萃取劑：最適宜作胡蘿卜素萃取劑的是石油酸。

（4）實(shí)驗(yàn)流程：胡蘿卜一粉碎一干燥一萃?。ㄊ退幔┮贿^(guò)濾_一濃縮一胡蘿卜素一鑒定

（紙層析法）。

（5）胡蘿卜素常用來(lái)治療因缺乏維生素A引起的疾病；還是常用的食品色素；還具有使癌

變細(xì)胞恢復(fù)為正常細(xì)胞的作用。

【詳解】（1）胡蘿卜含有的胡蘿卜素中，根據(jù)碳碳雙鍵，胡蘿卜含有的胡蘿卜素中，最主要

的是胡蘿卜素，該胡蘿卜素在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)變成兩分子維生素A,后者缺乏會(huì)引起人在

弱光下視物不清的病癥，該疾病稱(chēng)為夜盲癥，胡蘿卜素是非揮發(fā)性物質(zhì)。

（2）從胡蘿卜中提取胡蘿卜素時(shí)，通常在萃取前要將胡蘿卜粉碎和干燥，以提高萃取效率:

水蒸氣蒸儲(chǔ)法不適合胡蘿卜素的提取，原因是水蒸氣蒸播法適用于分離揮發(fā)性物質(zhì)，而胡蘿

卜素為非揮發(fā)性物質(zhì)，不能隨水蒸氣蒸播出。

（3）現(xiàn)有乙醇和乙酸乙酯兩種溶劑，應(yīng)選用其中的乙酸乙酯作為胡蘿卜素的萃取劑，乙酸

乙酯沸點(diǎn)比較高，萃取的效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和用量。

（4）鑒定萃取物中是否含有胡蘿卜素時(shí)，通?？刹捎眉垖游龇?。

【點(diǎn)睛】本題考查植物有效成分的提取的有關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知

識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問(wèn)題

的能力。

(桂林十八中18級(jí)高三第一次月考考試試卷理科綜合)11.枯草芽抱桿菌產(chǎn)生的蛋白酶在

醫(yī)藥和化工等領(lǐng)域具有重要的價(jià)值。為篩選蛋白酶產(chǎn)量高的枯草芽泡桿菌菌株，分別將浸過(guò)

不同菌株的提取液(a-e)及無(wú)菌水⑴的無(wú)菌圓紙片置于平板培養(yǎng)基表面，在37七恒溫箱中放

置2-3天，結(jié)果如圖1。請(qǐng)回答問(wèn)題：

⑴在篩選枯草芽抱桿菌蛋白酶高產(chǎn)菌株時(shí)，培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)包括水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、

葡萄糖、一。培養(yǎng)枯草芽抱桿菌時(shí)，常用搖床進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，目的是o

(2)a-e中蛋臼酶產(chǎn)量最高的菌株是—(用字母回答)，判斷依據(jù)是一。

涂上蛋白,經(jīng)煮沸的

滅*后郎界”中而法度的膜的皎片洗衣希溶液

蛋白質(zhì)導(dǎo)致培養(yǎng)“不透明

圖1圖2

(3)利用凝膠色譜法分離提取到部分蛋白質(zhì)時(shí)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，加入pH為7.0、

濃度為20mmol/L的到適當(dāng)高度進(jìn)行洗脫，結(jié)果先洗脫出來(lái)的是的

蛋白質(zhì)。

(4)質(zhì)監(jiān)局為了檢驗(yàn)標(biāo)有含該蛋白酶的加酶洗衣粉質(zhì)量，設(shè)計(jì)了如圖2所示實(shí)驗(yàn)。如果實(shí)驗(yàn)

結(jié)果是一，則說(shuō)明該洗衣粉中含有蛋白醐。若用該實(shí)驗(yàn)來(lái)判斷此酶活性大小可通過(guò)觀(guān)察

一實(shí)現(xiàn)。

【答案】(1).蛋白質(zhì)(酪蛋白)(2).增加培養(yǎng)液中的溶氧量并使菌株與培養(yǎng)液充分

接觸，有利于目的菌的生長(zhǎng)繁殖(3).a(4).a周?chē)耐该魅ψ畲?，說(shuō)明其產(chǎn)生的蛋白

酶數(shù)量多或活性高(5).磷酸緩沖液(6).相對(duì)分子質(zhì)量較大(7).A組膠片上的蛋

白膜消失，B組膠片上的蛋白膜未消失(8).膠片上的蛋白膜消失所需時(shí)間的長(zhǎng)短(相同

時(shí)間內(nèi)蛋白膜消失的面積)

【解析】

【分析】

培養(yǎng)基的成分：水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子。

分離蛋白質(zhì)的方法：凝膠色譜法，是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。相對(duì)

分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部，路程較短，移動(dòng)速度較快。

加酶洗衣粉指含有酶制劑的洗衣粉，常見(jiàn)的酶制劑有蛋白醒、脂肪酶、淀粉前和纖維素酶。

【詳解】(1)蛋白酶高產(chǎn)菌株可以分解蛋白質(zhì)，在篩選枯草芽抱桿菌蛋白的高產(chǎn)菌株時(shí)，培養(yǎng)

基營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)包括水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、葡萄糖、蛋白質(zhì)。培養(yǎng)枯草芽抱桿菌時(shí)，為了增

加培養(yǎng)液中的溶氧量并使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，有利于目的菌的生長(zhǎng)繁殖，常用搖床進(jìn)行

振蕩培養(yǎng)。

(2)由圖1可知，菌株a的透明圈最大，說(shuō)明其蛋白酶含量高或活性高，故a的蛋白酶的產(chǎn)量

最高。

(3)利用凝膠色譜法分離提取到的部分蛋白質(zhì)時(shí)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，加入pH為7.0、

濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度進(jìn)行洗脫，由于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法

進(jìn)入凝膠內(nèi)部，路程較短，移動(dòng)速度較快，故最先洗脫出來(lái)。

(4)圖2中，自變量是洗衣粉是否煮沸，因變量是觀(guān)察蛋白膜的消失時(shí)間。若洗衣粉中含有

蛋白酶，加熱煮沸后會(huì)導(dǎo)致蛋白酶變性失活，蛋白膜不會(huì)消失，故結(jié)果是A組膠片上的蛋

白膜消失，B組膠片上的蛋白膜未消失。本實(shí)驗(yàn)可以通過(guò)觀(guān)察膠片上的蛋白膜消失所需時(shí)間

的長(zhǎng)短來(lái)判斷酶活性的大小，酶活性越強(qiáng)，蛋白膜消失所需的時(shí)間越短。

【點(diǎn)睛】蛋白酶分解菌培養(yǎng)在含蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基中，蛋白酶的含量越高，活性越強(qiáng)，則分解

蛋白質(zhì)產(chǎn)生的透明圈越大。

(欽州一中2021屆高三開(kāi)學(xué)摸底考試?yán)砜凭C合)11.某興趣小組為了檢測(cè)某品牌酸奶中乳

酸桿菌數(shù)量，進(jìn)行了如圖所示的實(shí)驗(yàn)操作?；卮鹣铝袉?wèn)題。

(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基中的碳源是指。對(duì)未倒

平板前的空培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌的常用方法是法。

(2)圖示實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行接種的方法叫做法，①過(guò)程中10g酸奶相當(dāng)于被稀釋了

,倍。若培養(yǎng)基滅菌合格，培養(yǎng)適宜時(shí)間后A、B、C三個(gè)培養(yǎng)皿中的乳酸菌菌落數(shù)依次

為45、48、42個(gè)，則該品牌酸奶中每10g樣品中的乳酸桿菌數(shù)量約為個(gè)。

（3）接種過(guò)程應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行，目的是o

（4）培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，培養(yǎng)皿需置于無(wú)氧環(huán)境中培養(yǎng)，原因是。

【答案】（1）.能為微生物的生長(zhǎng)提供碳元素的物質(zhì)（2）.干熱滅菌（法）（3）.稀

釋涂布平板（法）（4）.10（5）.4.5x108（6）.防止雜菌污染（7）.乳酸菌是厭

氧菌，需在無(wú)氧條件中才能生存（受氧氣抑制）

【解析】

【分析】

據(jù)圖分析，圖示為利用稀釋涂布平板法對(duì)某品牌酸奶中乳酸桿菌數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)的過(guò)程，圖

中顯示酸奶樣品一共稀釋了5次，每一次稀釋10倍，最后取0.1mL涂布于A(yíng)、B、C三個(gè)

平板上，據(jù)此分析答題。

【詳解】（1）微生物培養(yǎng)基的主要成分包括碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽，其中碳源指的是能為

微生物的生長(zhǎng)提供碳元素的物質(zhì)。

（2）圖示為稀釋涂布平板法的操作過(guò)程，根據(jù)以上分析已知，酸奶樣品一共稀釋了5次，

每一次稀釋10倍，且三個(gè)培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)=（45+48+42）+3=45個(gè)，則每克樣品中的

活菌數(shù)=平均菌落數(shù)x稀釋倍數(shù)+涂布所用稀釋液體積=45x105+0.1=4.5x107個(gè)，因此10g樣品

中的總活菌數(shù)=4.5x107x10=4.5x108個(gè)。

（3）為了防止雜菌污染，接種過(guò)程應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行。

（4）乳酸菌是厭氧菌，需在無(wú)氧條件中才能生存（受氧氣抑制），所以培養(yǎng)乳酸菌時(shí)，培養(yǎng)

皿需置于無(wú)氧環(huán)境中。

【點(diǎn)睛】解答本題的關(guān)鍵是掌握微生物的培養(yǎng)與分離的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，了解微生物培養(yǎng)基的成

分、常用的接種方法，能夠利用公式和題干數(shù)據(jù)計(jì)算乳酸菌的數(shù)量，并能夠解釋實(shí)驗(yàn)過(guò)程中

的無(wú)菌操作。

（河北省唐山市路北區(qū)H■?一中2020-2021學(xué)年高三入學(xué)檢測(cè)）25.I回答下列與細(xì)菌培養(yǎng)相

關(guān)的問(wèn)題。

（1）在細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中能同時(shí)提供碳源、氮源的成分是（填蛋白陳、

葡萄糖或NaNCh）。通常，制備培養(yǎng)基時(shí)要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來(lái)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,其

原因是。硝化細(xì)菌在沒(méi)有碳源的培養(yǎng)基上（填能夠或不能）生長(zhǎng)，原因是

（2）用平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)一般需要將平板（填倒置或正置）。

（3）單個(gè)細(xì)菌在平板上會(huì)形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征

來(lái)初步區(qū)分不同種的微生物，原因是o

n培養(yǎng)胡蘿卜根組織可獲得試管苗，獲得試管苗的過(guò)程如圖所示。回答下列問(wèn)題。

①②③④⑤⑥

（1）利用胡蘿卜根段進(jìn)行組織培養(yǎng)可以形成試管苗。用分化的植物細(xì)胞可以培養(yǎng)成完整的

植株，這是因?yàn)橹参锛?xì)胞具有。

（2）從步驟⑤到步驟⑥需要更換新的培養(yǎng)基，其原因是。在新的培養(yǎng)基上愈

傷組織通過(guò)細(xì)胞的過(guò)程，最終可形成試管苗。

（3）步驟⑥要進(jìn)行照光培養(yǎng)，其作用是。

（4）經(jīng)組織培養(yǎng)得到的植株，一般可保持原品種的,這種繁殖方式屬于

繁殖。

【答案】（1）.蛋白陳（2）.不同細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的最適pH不同（3）.能夠

（4）.硝化細(xì)菌可以利用空氣中的C02作為碳源（5）.倒置（6）.在一定的培養(yǎng)條件下，

不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征（7）.全能性（8）.誘導(dǎo)愈傷組織形成和誘

導(dǎo)愈傷組織分化形成試管苗所需的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例不同（9）.分化（或答：再

分化）（10）.誘導(dǎo)葉綠素的形成，使試管苗能夠進(jìn)行光合作用（11）.遺傳特性（12）.

無(wú)性

【解析】

【分析】

本題主要考察了微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的過(guò)程。微生物培養(yǎng)需要提供水、碳源、

氮源和無(wú)機(jī)鹽等，同時(shí)還需要滿(mǎn)足某些微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的需求。植物組

織培養(yǎng)利用了細(xì)胞的全能性，已經(jīng)分化的細(xì)胞會(huì)經(jīng)過(guò)脫分化和再分化，從而形成幼苗。

【詳解】I。）葡萄糖只含有C、H、O,它只能提供碳源，NaNCh可以提供氮源，蛋白豚

可以同時(shí)提供碳源、氮源；不同的細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的最適pH不同，因此配制培養(yǎng)基時(shí)需

要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH；硝化細(xì)菌在沒(méi)有碳源的培養(yǎng)基上能夠生長(zhǎng)；其是一種自養(yǎng)型生物，可

以利用空氣中的CO2作為碳源；

（2）用平板培養(yǎng)細(xì)菌的時(shí)候需要將平板倒置，可以防止培養(yǎng)時(shí)的水珠滴落造成培養(yǎng)基的污

染等；

（3）在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，因此菌落的性狀、

大小、顏色等特征可以作為初步區(qū)分不同種微生物的依據(jù)：

II（1）從一個(gè)已經(jīng)分化的細(xì)胞，培養(yǎng)成完整的植株，者是植物細(xì)胞具有全能性的表現(xiàn)；

（2）誘導(dǎo)愈傷組織形成和誘導(dǎo)愈傷組織分化形成試管苗所需生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例

不同，所以在愈傷組織培育完成后需要更換培養(yǎng)基；愈傷組織會(huì)經(jīng)歷細(xì)胞的再分化發(fā)育成試

管苗；

（3）步驟⑥屬于細(xì)胞再分化，需要形成葉肉細(xì)胞，而誘導(dǎo)葉綠素的形成需要光照，同時(shí)使

試管苗能夠進(jìn)行光合作用；

（4）植物組織培養(yǎng)屬于無(wú)性繁殖；該繁殖過(guò)程不會(huì)改變親本的遺傳特性，保持親本的優(yōu)良

性狀。

【點(diǎn)睛】該題考察了兩個(gè)方向，其一是微生物的實(shí)驗(yàn)時(shí)培養(yǎng)，重點(diǎn)側(cè)重在培養(yǎng)基的成分、培

養(yǎng)過(guò)程等，其次是植物組織培養(yǎng)，需要識(shí)記組培的原理、過(guò)程和優(yōu)點(diǎn)等知識(shí)點(diǎn)，考察較為基

礎(chǔ)。

（河南省部分學(xué)校2020-2021學(xué)年高三開(kāi)學(xué)考試（一））30.形形色色的發(fā)酵食品在食品業(yè)

中占有重要地位，發(fā)酵食品的制作離不開(kāi)微生物。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）為了提高果酒的品質(zhì)、產(chǎn)量和節(jié)約生產(chǎn)成本，廠(chǎng)家提出了如下革新，請(qǐng)將其完善：

①榨汁時(shí)添加適量__________________以提高果汁的出汁率并使果汁變得澄清；

②使用培養(yǎng)基篩選出優(yōu)質(zhì)酵母菌。

（2）在果酒的制作過(guò)程中，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“酒敗成酷'’的情況，其中導(dǎo)致釀酒失敗的微生物是

.在__________充足、溫度適宜的條件下，該微生物能將酒精轉(zhuǎn)變成乙醛,

進(jìn)而轉(zhuǎn)變成醋酸。

（3）泡菜和腐乳因獨(dú)特的風(fēng)味深受?chē)?guó)人喜愛(ài)，腐乳的制作過(guò)程中，加鹽的作用有

_________________________（答出2點(diǎn)即可）。

（4）果酒的制作離不開(kāi)酵母菌，傳統(tǒng)方法制作腐乳時(shí)也有酵母菌參與，制作腐乳時(shí)，酵母

菌的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)來(lái)自:以葡萄糖為底物制作果酒的過(guò)程中，酵母菌產(chǎn)生的二氧化碳量與

酒精量的比值大于1,原因是o

【答案】（1）.果膠酶（2）.選擇（3）.醋酸菌（4）.氧氣（5）.①析出豆腐中

的水分，使豆腐塊變硬，在后期制作過(guò)程中不會(huì)過(guò)早酥爛；②抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐

塊腐敗變質(zhì)（或調(diào)味）（6）.豆腐塊（7）.初期酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，產(chǎn)生二氧化碳不

產(chǎn)生酒精，無(wú)氧呼吸時(shí)產(chǎn)生的二氧化碳量與產(chǎn)生的酒精量相等

【解析】

【分析】

果酒制備的菌種是酵母菌，條件：溫度18-25C,缺氧、酸性。參與腐乳制作的微生物主要

是毛霉，其新陳代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將

豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。

【詳解】（1）果膠酶能分解果膠，瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層，將果膠分解成可溶性的半乳

糖醛酸，提高了果汁的出汁率并使果汁變得澄清；使用選擇培養(yǎng)基篩選出優(yōu)質(zhì)酵母菌。

（2）導(dǎo)致釀酒失敗的微生物是醋酸菌；在氧氣充足、溫度適宜的條件下，該醋酸菌能將酒

精轉(zhuǎn)變成乙醛，進(jìn)而轉(zhuǎn)變成醋酸。

（3）腐乳的制作過(guò)程中，加鹽的作用有析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期制作過(guò)

程中不會(huì)過(guò)早酥爛；抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)；調(diào)味。

（4）豆腐塊富含營(yíng)養(yǎng)，制作腐乳時(shí)，酵母菌的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)來(lái)自豆腐塊；以葡萄糖為底物制作

果酒的過(guò)程中，初期酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，產(chǎn)生二氧化碳，不產(chǎn)生酒精，無(wú)氧呼吸時(shí)產(chǎn)生的

二氧化碳量與產(chǎn)生的酒精量相等，因此，制作果酒過(guò)程中，酵母菌產(chǎn)生的二氧化碳量與酒精

量的比值大于1。

【點(diǎn)睛】本題考查果酒和果醋的制作、腐乳的制作、泡菜的制作，要求考生識(shí)記參與果酒、

果醋、腐乳和泡菜制作的微生物及其代謝類(lèi)型，掌握果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作原理及

條件，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。

].（2020學(xué)年高三上學(xué)期8月執(zhí)信、廣雅、六中三校聯(lián)考試卷）某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液

為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)

生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）為了縮短泡菜制作時(shí)間，有人會(huì)在冷卻的鹽水中加入少量陳泡菜液，推測(cè)加入陳泡菜

液的目的是。

（2）泡菜液中的乳酸來(lái)自乳酸菌的過(guò)程。在制作泡菜初期，泡菜壇水槽總是

有氣泡冒出的主要原因是。隨著泡制時(shí)間的延長(zhǎng)，泡菜壇中亞硝

酸鹽的含量變化趨勢(shì)為。亞硝酸鹽和對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與

N-1蔡基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成色染料，可用于亞硝酸鹽含量的檢測(cè)。

（3）從功能上，分離純化所用固體培養(yǎng)基屬于。為分離純化出優(yōu)質(zhì)的乳酸菌,

應(yīng)挑選的菌落作為候選菌.

（4）為長(zhǎng)期保存純化得到的優(yōu)質(zhì)乳酸菌，可以將培養(yǎng)的菌液與充分混勻后，

置于"C以下的冷凍箱中保存。

【答案】(1).增加乳酸菌數(shù)量(2).無(wú)氧呼吸(乳酸發(fā)酵)(3).混入的其它微生

物呼吸作用釋放了CO2(4).先增加后下降(5).玫瑰紅(6).鑒別培養(yǎng)基(7).

溶鈣圈(透明圈)大(8).滅菌的甘油(9).-20

【解析】

【分析】

泡菜發(fā)酵的實(shí)驗(yàn)原理：

(1)乳酸菌在無(wú)氧條件下，將糖分解為乳酸；

(2)利用乳酸菌制作泡菜的過(guò)程中會(huì)引起亞硝酸鹽的含量的變化；

溫度過(guò)高，食鹽用量不足10%、腌制時(shí)間過(guò)短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增

加.一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開(kāi)始下降；

(3)測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化

反應(yīng)后，與N-1-蔡基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)

比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。

【詳解】(1)由于陳泡菜水中含有乳酸菌，在鹽水中加入陳泡菜水的目的是加進(jìn)乳酸菌的菌

種，使乳酸菌的種群數(shù)量快速增加；

(2)泡菜中乳酸的發(fā)酵過(guò)程既是乳酸菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸的過(guò)程，在制作泡菜初期，

泡菜壇水槽總是有氣泡冒出的主要原因是混入的其它微生物呼吸作用釋放了CO2,泡菜制作

過(guò)程中，隨著炮制時(shí)間的增加，亞硝酸鹽含量先升高后降低，亞硝酸鹽和對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生

重氮化反應(yīng)后，與N-1蔡基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，可用于亞硝酸鹽含量的

檢測(cè)；

(3)從功能上，分離純化所用固體培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，分離純化所用固體培養(yǎng)基中因

含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，因此，分離純化時(shí)應(yīng)挑

選出具有透明圈的菌落作為候選菌；

(4)微生物菌種的保藏有臨時(shí)保藏和長(zhǎng)期保藏之分。對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用

甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌，將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到

甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱中保存。

【點(diǎn)睛】本題的知識(shí)點(diǎn)是泡菜制作原理，影響亞硝酸鹽含量的因素，在泡菜制作過(guò)程中乳酸

菌和雜菌的種群數(shù)量變化，對(duì)于泡菜制作過(guò)程這原理的掌握及影響種群數(shù)量變化因素的理解

是解題的關(guān)鍵。

2.（2021屆廣東省廣州市六區(qū)高三9月教學(xué)質(zhì)量檢測(cè)（?））牛奶消毒不過(guò)關(guān)容易攜帶細(xì)菌。

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB19645—2010）規(guī)定，每亳升合格的牛奶細(xì)菌總數(shù)不能超過(guò)50000個(gè)。某

興趣小組利用恒溫水浴鍋對(duì)新鮮牛奶進(jìn)行消毒然后檢測(cè)消毒的效果，如下圖所示。

5mL生牛奶

IniLImL1niL1mL

養(yǎng)

培

數(shù)

計(jì)

阡

肉

牛

陳

口

蛋

養(yǎng)

培基

（1）圖中步驟①對(duì)牛奶的消毒的方法是,一般采用對(duì)牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基進(jìn)

行滅菌，蛋白陳的作用有（寫(xiě)兩點(diǎn)）。

（2）步驟②將牛奶進(jìn)行梯度稀釋的目的是使聚集在一起的微生物分散，便于能在培養(yǎng)基表

面形成。步驟③的接種方法是，這種方法可以用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目,

其原理是

（3）興趣小組通過(guò)步驟①?③接種了3個(gè)平板和1個(gè)未接種的平板放入恒溫培養(yǎng)箱，在適

宜的溫度條件下培養(yǎng)48h,然后統(tǒng)計(jì)出4個(gè)平板上的菌落數(shù)分別是57、53、55和9。根據(jù)這

樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（填“能''或"不能”）判斷該興趣小組消毒后的牛奶細(xì)菌超標(biāo)，原因是

（4）如果要檢測(cè)牛奶中是否含有大腸桿菌，需要在培養(yǎng)基中加入（填物質(zhì)），觀(guān)察是

否出現(xiàn)黑色（或藍(lán)黑色）的菌落。

【答案】（1）.巴氏消毒（2）.高壓蒸汽滅菌（3）.提供碳源、氮源等（4）.單個(gè)

菌落（5）.稀釋涂布平板法（6）.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌

落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中大約含有

多少活菌（7）.不能（8）.因?yàn)槲唇臃N的培養(yǎng)基上有菌落出現(xiàn)，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹

底，則其它培養(yǎng)基上的菌落數(shù)不能表示牛奶中細(xì)菌數(shù)量（9）.伊紅美藍(lán)

【解析】

【分析】

（1）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、

實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、

灼燒滅菌、化學(xué)消毒、紫外線(xiàn)滅菌、巴氏消毒法。

（2）接種最常用的方法是平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。接種的目的是使聚集在一起的微

生物分散成單個(gè)細(xì)胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的子細(xì)胞群體，即菌落。

【詳解】（1）圖中步驟①對(duì)牛奶的消毒方法是巴氏消毒，既可以殺滅牛奶中的微生物，又可

以使牛奶中的營(yíng)養(yǎng)成分不會(huì)被破壞。對(duì)牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌常用高壓蒸汽滅菌法，

蛋白陳含多種有機(jī)物，能為微生物提供碳源、氮源、維生素等。

（2）步驟②將牛奶進(jìn)行梯度稀釋的目的是使聚集在一起的微生物分散，便于能在培養(yǎng)基表

面形成單個(gè)菌落。步驟③的接種方法是稀釋涂布平板法，這種方法可以用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌

的數(shù)目，其原理是樣品稀釋度足夠高時(shí)，稀釋液中的一個(gè)活菌可在平板上長(zhǎng)出一個(gè)單菌落，

通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。

（3）由于未接種的平板上也有菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不合格，則其它培養(yǎng)基上的菌落數(shù)不

能表示牛奶中細(xì)菌數(shù)量，故不能由上述平板上菌落數(shù)計(jì)算消毒后的牛奶細(xì)菌是否超標(biāo)。

（4）伊紅美藍(lán)可使大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，所以要檢測(cè)牛奶中是否含有大腸桿菌，需要

在培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)，觀(guān)察是否出現(xiàn)黑色（或藍(lán)黑色）的菌落。

【點(diǎn)睛】本題考查無(wú)菌技術(shù)、微生物的接種方法以及微生物的計(jì)數(shù)等知識(shí)，意在考查考生對(duì)

所學(xué)知識(shí)的理解和應(yīng)用能力。

3.（2021屆廣東省仲元中學(xué)、中山一中等七校聯(lián)合體高三上學(xué)期第一次聯(lián)考）為解決生活污

水中油脂對(duì)環(huán)境造成的污染?？蒲腥藛T要從污水中篩選出分解油脂能力最強(qiáng)的微生物。請(qǐng)分

析回答：

圖甲圖乙

（1）首先取生活污水，與特定液體培養(yǎng)基混合培養(yǎng)。取生活污水的目的是

,該液體培養(yǎng)基有什么特別之處?。這一輪培養(yǎng)的目的

是o

（2）圖甲和圖乙所代表的方法中能對(duì)微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)的是法。用該方法統(tǒng)

計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)（"需要''或"不需要”）設(shè)置空白對(duì)照組，原因是。

（3）科研人員按圖乙方法培養(yǎng)了3個(gè)平板，一段時(shí)間后得到的菌落數(shù)依次為485、501、523,

出現(xiàn)這樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其可能的原因是。

（4）從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，確定分解油脂能力最強(qiáng)的微生物的方法是。

【答案】（1）.獲取分解油脂的微生物（2）,以油脂為唯一碳源（3）.增大分解油脂

的微生物濃度（4）.稀釋涂布平板（5）.需要（6）.因?yàn)樾枰袛嗯囵B(yǎng)基是否被污

染（7）.菌液稀釋度不夠（8）.單菌落（面積）最大

【解析】

【分析】

微生物常見(jiàn)接種的方法：

①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)。

在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成

單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可

形成單個(gè)菌落。

據(jù)圖分析，圖甲表示平板劃線(xiàn)法，可以用于對(duì)菌種的分離；圖乙表示稀釋涂布平板法，可以

用于對(duì)菌種的分離和計(jì)數(shù)。

【詳解】（1）該實(shí)驗(yàn)的目的是從污水中篩選出分解油脂能力最強(qiáng)的微生物，因此取生活污水

的目的是為了獲取分解油脂的微生物，使用的特定液體培養(yǎng)基應(yīng)該以油脂為唯一碳源，這一

輪培養(yǎng)的目的是增大分解油脂的微生物濃度。

（2）根據(jù)以上分析已知，圖甲表示平板劃線(xiàn)法，圖乙表示稀釋涂布平板法，后者可以用于

菌種的計(jì)數(shù)；稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)需要設(shè)置空白對(duì)照，以判斷培養(yǎng)基是否被污染。

（3）微生物計(jì)數(shù)的范圍是30-300,若利用圖乙方法得到的菌落數(shù)依次為485、501、523,

說(shuō)明菌液稀釋度不夠。

（4）該實(shí)驗(yàn)的目的是從污水中篩選出分解油脂能力最強(qiáng)的微生物，單菌落（面積）最大的

應(yīng)該是分解油脂能力最強(qiáng)的微生物。

【點(diǎn)睛】解答本題的關(guān)鍵是掌握微生物分罔與計(jì)數(shù)的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，了解微生物常見(jiàn)的兩種接

種方法，準(zhǔn)確判斷圖中兩種接種方法的名稱(chēng)，明確只有稀釋涂布平板法可以用于菌種的計(jì)數(shù)。

（大同市2021屆高三學(xué)情調(diào)研測(cè)試試題）30.隨著口罩需求的與日俱增，住建部對(duì)不同場(chǎng)所產(chǎn)

生的廢棄口罩提出了明確的處理要求?為加快廢棄口罩的處理，某科研團(tuán)隊(duì)準(zhǔn)備從土壤中篩

選能高效降解一次性口罩（熔噴布）的細(xì)菌，請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

（1）居民小區(qū)、辦公場(chǎng)所、商場(chǎng)產(chǎn)生的廢棄口罩可作為生活垃圾中的其他垃圾進(jìn)行收集轉(zhuǎn)

運(yùn)。為避免環(huán)境污染和病原體的傳播，廢棄口罩必須先進(jìn)行嚴(yán)格的處理。

（2）細(xì)菌大多分布在距地表約3?8cm的潮濕土壤層，因此土壤取樣時(shí)，一般

。熔噴布主要成分為聚丙烯纖維（PP，組成僅含有C、H兩種元素），用

于篩選的固體培養(yǎng)基除需加入經(jīng)過(guò)處理的聚丙烯粉末外，還應(yīng)加入。對(duì)培養(yǎng)基滅菌常

用法。在接種到鑒別培養(yǎng)基之前，可以通過(guò)的方法增加目的菌的

濃度。

（3）在培養(yǎng)基中加入能與PP結(jié)合而顯色的染色劑，可使目的菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈，如

下圖所示，D表示透明圈直徑，d表示菌落直徑。為保證篩選出的細(xì)菌分解PP的能力最強(qiáng),

應(yīng)當(dāng)選擇的菌落作為目的菌群。

（4）已知目的菌分解PP需要多種酶的共同參與，工廠(chǎng)化降解PP時(shí),常采用

法來(lái)固定目的菌，采用該方法的原因_______________。

【答案】（1）.滅菌（2）.鏟去表層土（3）.水、氮源、無(wú)機(jī)鹽和瓊脂（4）.高壓

蒸汽滅菌（5）.選擇培養(yǎng)（6）.D/d比值最大（或d/D比值最?。?）.包埋法（8）.

體積大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合，不易從包埋材料中漏出

【解析】

【分析】

1、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)關(guān)鍵做到無(wú)菌操作，培養(yǎng)基的滅菌常用高壓蒸汽滅菌法，培養(yǎng)皿常

用干熱滅菌法。

2、固定化酶和固定化細(xì)胞是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包

括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。一般來(lái)說(shuō)，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固

定，而細(xì)胞多采用包埋法固定化，這是因?yàn)榧?xì)胞個(gè)大，而酶分子很小：個(gè)大的細(xì)胞難以被吸

附或結(jié)合，而個(gè)小的酶容易從包埋材料中漏出。

【詳解】（1）為避免環(huán)境污染和病原體的傳播，廢棄口罩必須先進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理。

（2）絕大多數(shù)細(xì)菌分布在距地表約3?8cm的土壤層，因此，土壤取樣時(shí)一定要鏟去表層

土壤。除了聚丙烯纖維外，要配制用于篩選的固體培養(yǎng)基還需要加入瓊脂以及基本的水、氮

源和無(wú)機(jī)鹽。培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。在液體培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)的目的是

增加目的菌的濃度。

（3）從圖中可以看出，D/d比值越大，菌株降解PP的能力越強(qiáng)，因此應(yīng)當(dāng)選擇D/d比值最

大的菌落作為目的菌群。

（4）固定目的菌株常用的方法是包埋法，原因是體積大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合，不易從

包埋材料中漏出。

【點(diǎn)睛】本題是對(duì)用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方及營(yíng)養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、常

用的接種方法、無(wú)菌操作技術(shù)、固定化技術(shù)等相關(guān)知識(shí)的綜合性考查，回憶微生物培養(yǎng)的培

養(yǎng)基的配方和營(yíng)養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、常用的接種方法的具體操作和目的，無(wú)菌

操作技術(shù)、常用的固定化技術(shù)后結(jié)合問(wèn)題進(jìn)行解答。

（山東省2021屆高三開(kāi)學(xué)質(zhì)量檢測(cè)）13.我國(guó)利用不同微生物的發(fā)酵作用制作食品，歷史

悠久，在多種文獻(xiàn)中均有記載：

①《齊民要術(shù)》中記載：“作鹽水，令極咸，于鹽水中洗菜，即內(nèi)雍中?！?/p>

②《北山酒經(jīng)》中記載：“每壇加蠟三錢(qián)，竹葉五片，隔水煮開(kāi)，乘熱灌封壇口?！?/p>

③《齊民要術(shù)》中記載了二十三種利用谷物釀制食醋的工藝。其經(jīng)歷的三個(gè)主要發(fā)酵過(guò)程為:

糖化一酒化一醋化。

④《本草綱目拾遺》中記述：“豆腐又名菽乳，豆腐腌過(guò)酒糟或醬制者，味咸甘心?！?/p>

下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.①介紹的是泡菜制作技術(shù)，配制的鹽水要煮沸冷卻后使