寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范

T/CASXXXX—2021寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑的術(shù)語(yǔ)和定義、技術(shù)要求、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑的加工和質(zhì)量控制。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB/T26428飼用微生物制劑中枯草芽孢桿菌的測(cè)定GB27951-2011皮膚消毒劑衛(wèi)生要求GB27954-2020黏膜消毒劑通用要求GB38456抗菌和抑菌洗劑衛(wèi)生要求NY/T1151.2農(nóng)藥登記衛(wèi)生用殺蟲劑室內(nèi)藥效試驗(yàn)方法及評(píng)價(jià)第2部分：滅螨和驅(qū)螨劑JJF1070定量包裝商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則T/CGAPA003-2019寵物營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑標(biāo)準(zhǔn)綜合體團(tuán)體規(guī)范國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局令（2005）第75號(hào)定量包裝商品計(jì)量監(jiān)督管理辦法《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1寵物范疇凡是人工飼養(yǎng)的非食用的供觀賞、娛樂(lè)、休閑、陪伴等服務(wù)的陸生或水生動(dòng)物，統(tǒng)稱為寵物。文件中的寵物范疇只包括犬和貓。3.2寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌劑含有益生菌（芽孢桿菌類）成分，用于寵物體表除菌的產(chǎn)品。3.3寵物用益生菌（芽孢桿菌類）清潔劑含有益生菌（芽孢桿菌類）成分，用于寵物體表清潔的產(chǎn)品。2T/CASXXXX—20213.4寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除臭劑含有益生菌（芽孢桿菌類）成分，用于寵物用品或?qū)櫸矬w表除臭的產(chǎn)品。4要求4.1材料要求產(chǎn)品配方中含有純凈水、益生菌（芽孢桿菌類）。4.2性能要求4.2.1感官要求產(chǎn)品感官要求應(yīng)符合表1。表1感官要求4.2.2產(chǎn)品成分分析保證值產(chǎn)品成分分析保證值應(yīng)符合表2。表2產(chǎn)品成分分析保證值4.2.3抑菌和驅(qū)螨性能產(chǎn)品的抑菌和驅(qū)螨性能應(yīng)符合表3。表3抑菌和驅(qū)螨性能3T/CASXXXX—20214.2.4產(chǎn)品衛(wèi)生指標(biāo)產(chǎn)品衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合表4。表4衛(wèi)生指標(biāo)4.3安全要求產(chǎn)品各項(xiàng)安全指標(biāo)應(yīng)符合表5。表5安全指標(biāo)5試驗(yàn)方法5.1感官取適量樣品，置于干燥潔凈的100ml燒杯內(nèi)，在非直射光線下進(jìn)行觀察，按指標(biāo)要求進(jìn)行評(píng)判。5.2芽孢桿菌數(shù)按GB/T26428規(guī)定進(jìn)行。5.3汞按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版中第四章1.2規(guī)定進(jìn)行。5.4鉛按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版中第四章1.3規(guī)定進(jìn)行。5.5砷按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版中第四章1.4規(guī)定進(jìn)行。5.6大腸菌群和金黃色葡萄球菌4T/CASXXXX—2021按GB27951-2011規(guī)定進(jìn)行。5.7抑制石膏樣小孢子菌性能按附錄A規(guī)定進(jìn)行。5.8抑制須癬毛癬菌性能按附錄B規(guī)定進(jìn)行。5.9抑制犬小孢子菌性能按附錄C規(guī)定進(jìn)行。5.10抑制厚皮馬拉色菌性能按附錄D規(guī)定進(jìn)行。5.11抑制假中間型葡萄球菌性能按附錄E規(guī)定進(jìn)行。5.12驅(qū)螨率按NY/T1151.2規(guī)定進(jìn)行。5.13一次完整皮膚刺激試驗(yàn)和急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)按GB27951-2011規(guī)定進(jìn)行。5.14凈含量按JJF1070規(guī)定進(jìn)行。6檢驗(yàn)規(guī)則6.1出廠檢驗(yàn)6.1.1產(chǎn)品經(jīng)生產(chǎn)廠家質(zhì)量檢驗(yàn)部門檢驗(yàn)，保證各項(xiàng)指標(biāo)符合要求，檢驗(yàn)合格并簽發(fā)產(chǎn)品合格證后方可出廠。6.2型式檢驗(yàn)6.2.1正常生產(chǎn)時(shí)每年進(jìn)行一次，有下列情況之一時(shí)必須進(jìn)行：——新產(chǎn)品投產(chǎn)前；——出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)有較大差異；——更換設(shè)備、主要原輔材料或更改關(guān)鍵工藝可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)；——停產(chǎn)半年及以上，在恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；——市場(chǎng)監(jiān)督管理部門提出進(jìn)行型式檢驗(yàn)要求時(shí)。T/CASXXXX—20216.2.2檢驗(yàn)項(xiàng)目為本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的全部項(xiàng)目。7標(biāo)志及包裝包裝標(biāo)志應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定，使用的容器與材料應(yīng)符合相應(yīng)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)規(guī)定。8運(yùn)輸和貯存8.1運(yùn)輸運(yùn)輸時(shí)應(yīng)有防曬、防雨淋等設(shè)施；不得與有毒、有害、易燃易爆或影響產(chǎn)品質(zhì)量的物品混裝運(yùn)輸。裝卸應(yīng)避免倒置。8.2貯存8.2.1應(yīng)貯存在溫度不高于45℃的通風(fēng)干燥倉(cāng)庫(kù)，不得靠近水源、火爐和暖氣裝置。8.2.2貯存應(yīng)離地至少20cm,離內(nèi)墻至少20cm,距外墻至少50cm,中間留有通道，按箱子圖示標(biāo)志堆放，并嚴(yán)格掌握先進(jìn)先出原則。6T/CASXXXX—2021（規(guī)范性）產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制石膏樣小孢子菌效果測(cè)試方法A.1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制石膏樣小孢子菌效果測(cè)試方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制石膏樣小孢子菌效果測(cè)試方法。A.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑配制A.2.1實(shí)驗(yàn)器材錐形瓶、細(xì)菌培養(yǎng)皿、量筒、精密pH試紙、無(wú)菌試管、無(wú)菌刻度吸管、移液槍、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、菌落計(jì)數(shù)器、酒精燈、電動(dòng)混合器、恒溫干燥箱、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、電子天平、生物安全柜等微生物實(shí)驗(yàn)器材。A.2.2試劑配制A.2.2.1沙氏瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，瓊脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于石膏樣小孢子菌的平板菌落計(jì)數(shù)。A.2.2.2沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基不含氯霉素及其他抑菌劑）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于石膏樣小孢子菌的增菌培養(yǎng)。A.2.2.3石膏樣小孢子菌繁殖體懸液的制備在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，塞上透氣塞子，121℃高壓滅菌20min，備用。取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開(kāi)，用無(wú)菌吸管吸取0.5ml左右液體培養(yǎng)基于管中將凍干菌粉全部溶解。取沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基5.0ml-10ml試管，滴入少許菌種懸液，置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用接種環(huán)取第一代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于斜面上，與28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h即為第3代培養(yǎng)物；取菌種新鮮培養(yǎng)物，吸取5ml稀釋液加入斜面試管中，反復(fù)吹吸，洗下菌苔，隨后將洗液移至另一根無(wú)菌試管中，用電動(dòng)混合器混勻。繁殖體懸液保存在4℃冰箱中備用，應(yīng)當(dāng)天使用，不應(yīng)過(guò)夜。用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌懸液的菌數(shù)。用生理鹽水作適當(dāng)?shù)南♂尯?，選取其中2-3個(gè)稀釋度的稀釋液。吸取樣液1ml，置于滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)樣液接種三個(gè)滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿。用涼至40-45℃的培養(yǎng)基作傾注，繞8字混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后倒扣細(xì)菌培養(yǎng)皿于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。菌懸液先保存在4℃冰箱中備用，待菌數(shù)結(jié)果出來(lái)后再使用。細(xì)菌繁殖體懸液濃度應(yīng)為106-107CFU/ml，若測(cè)定結(jié)果高于此范圍，則用生理鹽水做稀釋；若測(cè)定結(jié)果低于此范圍，則采用離心的方法將其濃縮。7式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%T/CASXXXX式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%A.3操作步驟在無(wú)菌操作下，吸取石膏樣小孢子菌懸液1ml接種于89ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混合均勻，再加入10ml產(chǎn)品；另取1ml石膏樣小孢子菌懸液接種于89ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，加入10ml無(wú)菌水作為空白對(duì)照組，混合均勻。將兩組混合培養(yǎng)物放置于28℃條件下培養(yǎng)，48h后測(cè)定共培養(yǎng)后兩組混合培養(yǎng)物中石膏樣小孢子菌的菌數(shù)。計(jì)數(shù)方法同上。A.4計(jì)算公式式中：X——抑菌率，%A——共培養(yǎng)后對(duì)照組平均菌落數(shù)B——共培養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)組平均菌落數(shù)A.5活菌計(jì)數(shù)中誤差分析活菌計(jì)數(shù)中細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率、稀釋度間菌落數(shù)誤差率不宜超過(guò)10%，對(duì)誤差率的自檢，可以按式①——式⑥計(jì)算。S=……………① 式中：S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)之和Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù) N…………②式中：D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù)dD=根100%………………③ D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù) L L= 式中： 式中：L——稀釋度間菌落平均數(shù)L——各稀釋度平均菌落之和M——稀釋度數(shù)……………………④8T/CASXXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤ L——稀釋度間菌落平均數(shù)Lm L——稀釋度間菌落平均數(shù)Lm——各稀釋度菌落數(shù)M——稀釋度數(shù) dL=根100 dL=根100%…………………⑥D(zhuǎn)——稀釋度間菌落數(shù)平均差 L——稀釋度間菌落數(shù)平均9T/CASXXXX—2021（規(guī)范性）產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制須癬毛癬菌效果測(cè)試方法B.1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制須癬毛癬菌效果測(cè)試方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制須癬毛癬菌效果測(cè)試方法。B.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑配制B.2.1實(shí)驗(yàn)器材錐形瓶、細(xì)菌培養(yǎng)皿、量筒、精密pH試紙、無(wú)菌試管、無(wú)菌刻度吸管、移液槍、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、菌落計(jì)數(shù)器、酒精燈、電動(dòng)混合器、恒溫干燥箱、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、電子天平、生物安全柜等微生物實(shí)驗(yàn)器材。B.2.2試劑配制B.2.2.1沙氏瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，瓊脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于須癬毛癬菌的平板菌落計(jì)數(shù)。B.2.2.2沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基不含氯霉素及其他抑菌劑）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于須癬毛癬菌的增菌培養(yǎng)。B.2.2.3須癬毛癬菌繁殖體懸液的制備在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，塞上透氣塞子，121℃高壓滅菌20min，備用。取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開(kāi)，用無(wú)菌吸管吸取0.5ml左右液體培養(yǎng)基于管中將凍干菌粉全部溶解。取沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基5.0ml-10ml試管，滴入少許菌種懸液，置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用接種環(huán)取第一代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于斜面上，與28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h即為第3代培養(yǎng)物；取菌種新鮮培養(yǎng)物，吸取5ml稀釋液加入斜面試管中，反復(fù)吹吸，洗下菌苔，隨后將洗液移至另一根無(wú)菌試管中，用電動(dòng)混合器混勻。繁殖體懸液保存在4℃冰箱中備用，應(yīng)當(dāng)天使用，不應(yīng)過(guò)夜。用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌懸液的菌數(shù)。用生理鹽水作適當(dāng)?shù)南♂尯?，選取其中2-3個(gè)稀釋度的稀釋液。吸取樣液1ml，置于滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)樣液接種三個(gè)滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿。用涼至40-45℃的培養(yǎng)基作傾注，繞8字混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后倒扣細(xì)菌培養(yǎng)皿于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。菌懸液先保存在4℃冰箱中備用，待菌數(shù)結(jié)果出來(lái)后再使用。細(xì)菌繁殖體懸液濃度應(yīng)為106-107CFU/ml，若測(cè)定結(jié)果高于此范圍，則用生理鹽水做稀釋；若測(cè)定結(jié)果低于此范圍，則采用離心的方法將其濃縮。式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%T/CASXXXX式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%B.3操作步驟在無(wú)菌操作下，吸取須癬毛癬菌懸液1ml接種于89ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混合均勻，再加入10ml產(chǎn)品；另取1ml須癬毛癬菌懸液接種于89ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，加入10ml無(wú)菌水作為空白對(duì)照組，混合均勻。將兩組混合培養(yǎng)物放置于28℃條件下培養(yǎng)，48h后測(cè)定共培養(yǎng)后兩組混合培養(yǎng)物中須癬毛癬菌的菌數(shù)。計(jì)數(shù)方法同上。B.4計(jì)算公式式中：X——抑菌率，%A——共培養(yǎng)后對(duì)照組平均菌落數(shù)B——共培養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)組平均菌落數(shù)B.5活菌計(jì)數(shù)中誤差分析活菌計(jì)數(shù)中細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率、稀釋度間菌落數(shù)誤差率不宜超過(guò)10%，對(duì)誤差率的自檢，可以按式①——式⑥計(jì)算。S=……………① 式中：S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)之和Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù) N…………②式中：D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù)dD=根100%………………③ D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù) L L= 式中： 式中：L——稀釋度間菌落平均數(shù)L——各稀釋度平均菌落之和M——稀釋度數(shù)……………………④T/CASXXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤式中：D——稀釋度間菌落數(shù)平均差L——稀釋度間菌落平均數(shù)Lm——各稀釋度菌落數(shù) dL dL=根100%…………………⑥式中：dL——稀釋度間菌落數(shù)誤差率，% D——稀釋度間菌落數(shù)平均差 L——稀釋度間菌落數(shù)平均T/CASXXXX—2021（規(guī)范性）產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制犬小孢子菌效果測(cè)試操作規(guī)程C.1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制犬小孢子菌效果測(cè)試方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制犬小孢子菌效果測(cè)試方法。C.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑配制C.2.1實(shí)驗(yàn)器材錐形瓶、細(xì)菌培養(yǎng)皿、量筒、精密pH試紙、無(wú)菌試管、無(wú)菌刻度吸管、移液槍、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、菌落計(jì)數(shù)器、酒精燈、電動(dòng)混合器、恒溫干燥箱、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、電子天平、生物安全柜等微生物實(shí)驗(yàn)器材。C.2.2試劑配制C.2.2.1沙氏瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，瓊脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于犬小孢子菌的平板菌落計(jì)數(shù)。C.2.2.2沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基該培養(yǎng)基不含氯霉素及其他抑菌劑）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于犬小孢子菌的增菌培養(yǎng)。C.2,2,3犬小孢子菌繁殖體懸液的制備在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，塞上透氣塞子，121℃高壓滅菌20min，備用。取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開(kāi)，用無(wú)菌吸管吸取0.5ml左右液體培養(yǎng)基于管中將凍干菌粉全部溶解。取沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基5.0ml-10ml試管，滴入少許菌種懸液，置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用接種環(huán)取第一代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于斜面上，與28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h即為第3代培養(yǎng)物；取菌種新鮮培養(yǎng)物，吸取5ml稀釋液加入斜面試管中，反復(fù)吹吸，洗下菌苔，隨后將洗液移至另一根無(wú)菌試管中，用電動(dòng)混合器混勻。繁殖體懸液保存在4℃冰箱中備用，應(yīng)當(dāng)天使用，不應(yīng)過(guò)夜。用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌懸液的菌數(shù)。用生理鹽水作適當(dāng)?shù)南♂尯?，選取其中2-3個(gè)稀釋度的稀釋液。吸取樣液1ml，置于滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)樣液接種三個(gè)滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿。用涼至40-45℃的培養(yǎng)基作傾注，繞8字混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后倒扣細(xì)菌培養(yǎng)皿于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。菌懸液先保存在4℃冰箱中備用，待菌數(shù)結(jié)果出來(lái)后再使用。細(xì)菌繁殖體懸液濃度應(yīng)為106-107CFU/ml，若測(cè)定結(jié)果高于此范圍，則用生理鹽水做稀釋；若測(cè)定結(jié)果低于此范圍，則采用離心的方法將其濃縮。式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%T/CASXXXX式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%C.3操作步驟在無(wú)菌操作下，吸取犬小孢子菌懸液1ml接種于89ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混合均勻，再加入10ml產(chǎn)品；另取1ml犬小孢子菌懸液接種于89ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，加入10ml無(wú)菌水作為空白對(duì)照組，混合均勻。將兩組混合培養(yǎng)物放置于28℃條件下培養(yǎng)，48h后測(cè)定共培養(yǎng)后兩組混合培養(yǎng)物中犬小孢子菌的菌數(shù)。計(jì)數(shù)方法同上。C.4計(jì)算公式式中：X——抑菌率，%A——共培養(yǎng)后對(duì)照組平均菌落數(shù)B——共培養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)組平均菌落數(shù)C.5活菌計(jì)數(shù)中誤差分析活菌計(jì)數(shù)中細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率、稀釋度間菌落數(shù)誤差率不宜超過(guò)10%，對(duì)誤差率的自檢，可以按式①——式⑥計(jì)算。S=……………① 式中：S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)之和Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù) N…………②式中：D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù)dD=根100%………………③ D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù) L L= 式中： 式中：L——稀釋度間菌落平均數(shù)L——各稀釋度平均菌落之和M——稀釋度數(shù)……………………④T/CASXXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤ L——稀釋度間菌落平均數(shù)Lm L——稀釋度間菌落平均數(shù)Lm——各稀釋度菌落數(shù)M——稀釋度數(shù) dL=根100 dL=根100%…………………⑥ D——稀釋度間菌落數(shù)平均差 L——稀釋度間菌落數(shù)平均T/CASXXX—2021（規(guī)定性）產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制厚皮馬拉色菌效果測(cè)試方法D.1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制厚皮馬拉色菌效果測(cè)試方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制厚皮馬拉色菌效果測(cè)試方法。D.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑配制D.2.1實(shí)驗(yàn)器材錐形瓶、細(xì)菌培養(yǎng)皿、量筒、精密pH試紙、無(wú)菌試管、無(wú)菌刻度吸管、移液槍、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、菌落計(jì)數(shù)器、酒精燈、電動(dòng)混合器、恒溫干燥箱、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、電子天平、生物安全柜等微生物實(shí)驗(yàn)器材。D.2.2試劑配制D.2.2.1沙氏瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基含氯霉素）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，瓊脂15g/L，氯霉素0.1g/L。用于厚皮馬拉色菌的平板菌落計(jì)D.2,2,2沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（該培養(yǎng)基不含氯霉素及其他抑菌劑）蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L。用于厚皮馬拉色菌的增菌培養(yǎng)。D.2.2.3細(xì)菌繁殖體懸液的制備在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，塞上透氣塞子，121℃高壓滅菌20min，備用。取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開(kāi)，用無(wú)菌吸管吸取0.5ml左右液體培養(yǎng)基于管中將凍干菌粉全部溶解。取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基5.0ml-10ml試管，滴入少許菌種懸液，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用接種環(huán)取第一代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于斜面上，與37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h即為第3代培養(yǎng)物；取菌種新鮮培養(yǎng)物，吸取5ml稀釋液加入斜面試管中，反復(fù)吹吸，洗下菌苔，隨后將洗液移至另一根無(wú)菌試管中，用電動(dòng)混合器混勻。細(xì)菌繁殖體懸液保存在4℃冰箱中備用，應(yīng)當(dāng)天使用，不應(yīng)過(guò)夜。用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌懸液的菌數(shù)。用生理鹽水作適當(dāng)?shù)南♂尯螅x取其中2-3個(gè)稀釋度的稀釋液。吸取樣液1ml，置于滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)樣液接種三個(gè)滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿。用涼至40-45℃的培養(yǎng)基作傾注，繞8字混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后倒扣細(xì)菌培養(yǎng)皿于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。菌懸液先保存在4℃冰箱中備用，待菌數(shù)結(jié)果出來(lái)后再使用。細(xì)菌繁殖體懸液濃度應(yīng)為106-107CFU/ml，若測(cè)定結(jié)果高于此范圍，則用生理鹽水做稀釋；若測(cè)定結(jié)果低于此范圍，則采用離心的方法將其濃縮。式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%T/CASXXX式中：dD——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率，%D.3操作步驟在無(wú)菌操作下，吸取厚皮馬拉色菌懸液1ml接種于89ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中混合均勻，再加入10ml產(chǎn)品；另取1ml厚皮馬拉色菌懸液接種于89ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，加入10ml無(wú)菌水作為空白對(duì)照組，混合均勻。將兩組混合培養(yǎng)物放置于37℃條件下培養(yǎng)，48h后測(cè)定共培養(yǎng)后兩組混合培養(yǎng)物中厚皮馬拉色菌的菌數(shù)。計(jì)數(shù)方法同上。D.4計(jì)算公式式中：X——抑菌率，%A——共培養(yǎng)后對(duì)照組平均菌落數(shù)B——共培養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)組平均菌落數(shù)D.5活菌計(jì)數(shù)中誤差分析活菌計(jì)數(shù)中細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)誤差率、稀釋度間菌落數(shù)誤差率不宜超過(guò)10%，對(duì)誤差率的自檢，可以按式①——式⑥計(jì)算。S=……………① 式中：S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)之和Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù) N…………②式中：D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均數(shù)S——各細(xì)菌培養(yǎng)皿菌落數(shù)Ν——細(xì)菌培養(yǎng)皿總數(shù)dD=根100%………………③ D——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落數(shù)平均差S——細(xì)菌培養(yǎng)皿間菌落平均數(shù) L L= 式中： 式中：L——稀釋度間菌落平均數(shù)L——各稀釋度平均菌落之和M——稀釋度數(shù)……………………④T/CASXXX—2021DL=Lm(M>1)………………⑤ L——稀釋度間菌落平均數(shù)Lm L——稀釋度間菌落平均數(shù)Lm——各稀釋度菌落數(shù)M——稀釋度數(shù) dL=根100%…………………⑥ 式中：dL——稀釋度間菌落數(shù)誤差率，% D——稀釋度間菌落數(shù)平均差 L——稀釋度間菌落數(shù)平均T/CASXXX—2021（規(guī)范性）產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制假中間型葡萄球菌效果測(cè)試方法E.1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制假中間型葡萄球菌效果測(cè)試方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于“寵物用益生菌（芽孢桿菌類）除菌、清潔、除臭劑通用技術(shù)規(guī)范”中產(chǎn)品共培養(yǎng)抑制假中間型葡萄球菌效果測(cè)試方法。E.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑配制E.2.1實(shí)驗(yàn)器材錐形瓶、細(xì)菌培養(yǎng)皿、量筒、精密pH試紙、無(wú)菌試管、無(wú)菌刻度吸管、移液槍、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、菌落計(jì)數(shù)器、酒精燈、電動(dòng)混合器、恒溫干燥箱、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、電子天平、生物安全柜等微生物實(shí)驗(yàn)器材。E.2.2試劑配制E.2.2.1營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制備分別稱取牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、瓊脂粉15.0g、氯化鈉5.0g置于1000ml燒杯中，加純化水1000ml使其溶解，煮沸，冷卻至60℃,用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸將pH值調(diào)節(jié)為7.2~7.4，分裝到250ml三角瓶，121℃高壓滅菌20min，冷藏備用。E.2.2.2營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基制備分別稱取牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化鈉5.0g置于1000ml燒杯中，加純化水1000ml使其溶解，煮沸，冷卻至60℃,用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸將pH值調(diào)節(jié)為7.2～7.4，分裝到500ml三角瓶，每瓶裝89ml，塞上透氣塞子，121℃高壓滅菌20min，冷藏備用。E.2.2.3假中間型葡萄球菌測(cè)試片（球菌測(cè)試片）用于假中間型葡萄球菌的菌落計(jì)數(shù)。E.2.2.4細(xì)菌繁殖體懸液的制備在500ml三角瓶中加入100ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，塞上透氣塞子，121℃高壓滅菌20min，備用。取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開(kāi)，用無(wú)菌吸管吸取0.5ml左右液體培養(yǎng)基于管中將凍干菌粉全部溶解。取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基5.0ml-10ml試管，滴入少許菌種懸液，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用接種環(huán)取第一代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于斜面上，與37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h即為第3代培養(yǎng)物；取菌種新鮮培養(yǎng)物，吸取5ml稀釋液加入斜面試管中，反復(fù)吹吸，洗下菌苔，隨后將洗液移至另一根無(wú)菌試管中，用電動(dòng)混合器混勻。細(xì)菌繁殖體懸液保存在4℃冰箱中備用，應(yīng)當(dāng)天使用，不應(yīng)過(guò)夜。T/CASXXX—2021用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌懸液的菌數(shù)。用生理鹽水作適當(dāng)?shù)南♂尯?，選取其中2-3個(gè)稀釋度的稀釋液。吸取樣液1ml，置于滅菌細(xì)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)樣液接種三