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文檔簡介

1鵝星狀病毒感染診斷技術(shù)規(guī)范臨床癥狀、病理變化；實(shí)驗(yàn)室診斷包括樣品的采集與保存、病毒分離鑒定、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)GB/T27401實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范動物NY/T541—2016獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范4.1環(huán)境2熟悉RT-PCR、qRT-PCR與間接EL5.1儀器設(shè)備5.2試劑與材料），5.3樣品采集與運(yùn)送5.3.2組織樣品：采集疑似鵝星狀病毒感染死亡鵝的肝臟、脾臟和腎臟等組織樣品。采集病料時(shí)，用5.4樣品處理與保存5.4.1樣品應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行處理，取10g～20g樣品放入滅菌的研缽中磨碎。研磨充分的組織35.5檢測要求47.2.1.1.3臺式低溫高速離心機(jī)（最大轉(zhuǎn)速為15000r/min）。7.2.1.2.51.0%瓊脂糖凝膠，見A.2。），7.2.1.2.11陰性對照標(biāo)準(zhǔn)品，為健康5染料溶液，混勻后倒入放置在水平臺面上的凝膠盤中，膠板厚5mm左右。依據(jù)樣品數(shù)選用適宜的梳子。6mol/L。0.4μL，探針P（10μmol/L）0.8μL，模板RNA2μL，加ddH2O至20μL。反應(yīng)液混勻后置于7），鵝星狀病毒間接ELISA檢測方法陰性對照OD均值=（ODA1+ODA2）/2；陽性對8.4.2.3當(dāng)樣品0.17＜OD450＜0.219鵝星狀病毒感染綜合判定8A.1磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01mol/LpH7.NaClNa2HPO4.12H2OA.3.1配制0.5mol/L乙二胺四乙酸鈉（EDTA-Na2）溶滅菌雙蒸水氫氧化鈉調(diào)pH至A.3.2配制50×TAE電泳緩沖液0.5mol/L乙二胺四乙酸鈉（EDTA-Na2）A.5包被液（0.05mol/L9Na2CO3NaHCO3A.7樣品稀釋液（封閉液）水養(yǎng)物保藏中心（CCTCC其保藏編號為CCTCCNO:V201808。該病毒根據(jù)SDPY株ORF2基因序列設(shè)計(jì)一對特異性引物，序ORF2-R：5’-TGCGGCCGCAAGCTTGTCGACGTCGACTCATGTCCGCCCTT-3’，擴(kuò)增片段長度為759bp，引物在0.1mmol/LIPTG濃度下誘導(dǎo)4h，進(jìn)行蛋白表達(dá)。經(jīng)SDS電泳后，

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