鏈球菌 鏈球菌

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：方勤鏈球菌屬（Streptococcus）鏈球菌屬是革蘭陽性球菌，種類多，在自然界分布甚廣，有些能引起人及多種動物發(fā)病，導致化膿、肺炎、乳腺炎、敗血癥等病癥。與獸醫(yī)學有關的鏈球菌有無乳鏈球菌（S.agalactiae）、停乳鏈球菌（S.dysgalactiae）、釀膿鏈球菌（S.pyogenes）、肺炎鏈球菌（S.pneμmoniae）、馬鏈球菌獸疫亞種（S.equissp.zooepidimicus）、豬鏈球菌（S.suis）等。其中，豬鏈球菌2型可引起豬腦膜炎、敗血癥、膿腫等；本菌也可感染人，引起腦膜炎、感染性休克，嚴重時可導致人死亡。豬鏈球菌（S.suis）1.形態(tài)染色革蘭陽性，圓形或橢圓形，單個或雙個，少數(shù)呈短鏈狀排列。陳舊培養(yǎng)物可能呈革蘭陰性，在液體培養(yǎng)基中以鏈狀為主，能形成莢膜，無芽孢。2.培養(yǎng)特性多數(shù)兼性厭氧，最適pH為7.4～7.6，最適培養(yǎng)溫度為36℃。營養(yǎng)要求豐富，接種在哥倫比亞（TSA、腦心浸液瓊脂）血平板上36℃培養(yǎng)24h，形成細小、圓形微凸、表面光滑而濕潤的灰白色菌落，菌落直徑1～2μm。α或β溶血，有的為α溶血，但延時培養(yǎng)后則變?yōu)棣氯苎Ｘi鏈球菌2型在綿羊血平板上呈α溶血，而在馬血平板上則為β溶血。在BHI、TSB、馬丁肉湯（添加動物血清）等液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，肉湯混濁。3.生化反應觸酶陰性，七葉苷、精氨酸雙水解酶、淀粉水解試驗陽性，不分解甘露醇，V-P、馬尿酸鈉試驗陰性，10℃、45℃、6.5%NaCl、pH9.6肉湯中均不生長。4.分離鑒定（1）豬鏈球菌分離鑒定流程：扁桃體、鼻腔拭子可接種到選擇性THB增菌液試管中，36℃培養(yǎng)24～48h后再劃線接種到血平板上。豬鏈球菌在血平板上形成α或β溶血、圓形的小菌落，革蘭陽性，短鏈；觸酶試驗陰性，不分解甘露醇，純培養(yǎng)細菌可以進一步用商品化細菌鑒定試劑盒進行鑒定。（2）豬鏈球菌與其他細菌鑒別：主要有以下幾種。①豬鏈球菌與腸球菌鑒別：豬鏈球菌在45℃、6.5%NaCl、pH9.6肉湯中均不生長，而腸球菌均生長。②豬鏈球菌與葡萄球菌鑒別：豬鏈球菌觸酶試驗陰性，6.5%NaCl培養(yǎng)基不能生長；葡萄球菌觸酶試驗陽性，6.5%NaCl培養(yǎng)基能生長。③豬鏈球菌與馬鏈球菌獸疫亞種鑒別：按蘭氏分群，豬鏈球菌為R群，馬鏈球菌獸疫亞種為C群。按菌落形態(tài)分，豬鏈球菌為光滑、圓形的小菌落，短鏈；馬鏈球菌獸疫亞種為黏液的露滴狀菌落，長鏈。按溶血性分，豬鏈球菌為α溶血或β溶血，β溶血不明顯；馬鏈球菌獸疫亞種在血平板上為明顯的β溶血。（3）豬鏈球菌血清型鑒定：豬鏈球菌根據(jù)莢膜抗原的不同分為33個血清型（1～31、33及1/2）及相當數(shù)量無法定型的菌株（non-typeablestrains，NT），其中1、2、7、9型為豬的致病菌。血清凝集或協(xié)同凝集是當前鑒定豬鏈球菌各血清型的經(jīng)典方法。將待檢菌落接種THB肉湯，于36℃培養(yǎng)18h±2h，取1.5ml培養(yǎng)物經(jīng)10000r/min離心3min，棄上清，加100μl生理鹽水將沉淀懸浮，取25μl菌體懸液分別與豬鏈球菌標準血清和生理鹽水進行玻片凝集試驗，同時設陽性對照，生理鹽水對照不凝集、陽性菌株凝集，試驗成立。（4）PCR檢測①對病料分離的純培養(yǎng)物可進行豬鏈球菌、豬鏈球菌1、2、7、9型、豬鏈球菌毒力因子和豬鏈球菌MLSTPCR（分子分型）檢測，可用煮沸法提取細菌DNA。②豬鏈球菌通用擴增體系：premix12.5μl，ddH2O8.5μl，引物各0.5μl，模板2μl。擴增條件為：94℃預熱5min；94℃30s，56℃30s，72℃1min，擴增30個循環(huán)；72℃延伸10min。③豬鏈球菌1、2、7、9型擴增體系：premix12.5μl，ddH2O8.5μl，引物各1μl，模板2μl。擴增條件為：94℃預熱5min；94℃30s，各自退火溫度30s，72℃1min，擴增30個循環(huán)；72℃延伸10min。④豬鏈球菌7個毒力因子擴增體系：可分為以下兩個擴增體系。a.擴增體系1（fbps、gdh、orf2和mrp）:premix12.5μl，引物fbps0.6μl、gdh0.7μl、orf21.2l、mrp0.2μl各1μl，模板3μl，用ddH2O調整終體積至25μl。擴增條件為：94℃預熱5min；94℃30s，56℃30s，72℃1min，擴增40個循環(huán)；72℃延伸10min。b.擴增體系2（sly、gapdh、epf）:premix12.5μl，引物sly、gapdh各0.7μl，epf0.2μl，DNA模板3μl，用ddH2O調整終體積至25μl。擴增條件：94℃預熱5min，94℃30s，52℃30s，72℃1min，擴增40個循環(huán)；72℃延伸10min。⑤豬鏈球菌