臨床檢驗基礎課件

紅細胞沉降率的測定

（ErythrocyteSedimentationRate,ESR）

紅細胞沉降率的測定

（ErythrocyteSedimentationRate,ESR）

指紅細胞在一定條件下的沉降速率。ESR用于一些疾病的鑒別診斷及病情觀察；亦是反映紅細胞聚集性的一項常用指標之一概念

1）緡錢狀紅細胞形成期：約數(shù)min～10min。

2）快速沉降期：形成緡錢狀紅細胞下降，約40min。

3）細胞堆積期：細胞堆積在試管底部。ESR分三個時期測定方法及評價1.魏氏法：ICSH推薦的參考方法，為血沉測定的標準方法。

2.潘氏法：適用于兒童臨床應用少

3.血沉儀法：能夠得到動態(tài)血沉結果，并繪出血沉曲線，有利結果分析，應用逐漸增多１、紅細胞因素：1)RBC的數(shù)量：2)紅細胞形態(tài)：3)紅細胞的聚集狀態(tài)：影響血沉的因素緡錢狀緡錢狀２、血漿因素：紅細胞能相當穩(wěn)定的懸浮于血漿中，這一特性稱為紅細胞的懸浮穩(wěn)定性。這種穩(wěn)定，決定于血漿中白蛋白與球蛋白、纖維蛋白原的比例。

纖維蛋白原、球蛋白、膽固醇等可引起血沉增快。

白蛋白、糖蛋白、卵磷脂使血沉減慢。操作魏氏法：取靜脈血1.6ml，按4:1比例與檸檬酸鈉溶液（0.4ml）混勻，然后吸入清潔、干燥的標準魏氏血沉管，并調(diào)至“0”刻度處。血沉管在室溫下（18～25℃）嚴格垂直放置。避免陽光直照、振動和血液外溢。1h后，讀出血漿凹液面底部至沉降紅細胞柱頂部之間距離，即為血沉結果。

魏氏法成年男性：0~15mm/h

成年女性：0~20mm/h

潘氏法成年男性：0~10mm/h

成年女性：0~12mm/h參考值臨床意義

Clinicalsignificance

（一）生理變化新生兒紅細胞含量較高而纖維蛋白含量低，血沉較慢12歲以下兒童紅細胞生理性低下，血沉較快老年人隨著年齡的增長（50歲以后）纖維蛋白含量逐漸增高血沉開始高于青壯年時期，女性高于男性ESR的臨床意義（二）病理性血沉加快各種炎癥組織損傷惡性腫瘤自身免疫性疾病高球蛋白血癥高膽固醇血癥貧血

ESR是一項靈敏但缺乏特異性的指標，很多疾病均表現(xiàn)為ESR加快，但對無癥狀人群的篩檢率很低，約4％~8％.

故ESR不能用來診斷疾病，亦不能作為健康人群的篩檢指標。血沉檢測的適應征

1.急性與慢性感染、炎癥的鑒別診斷2.結核病、風濕病的病情觀察3.組織損傷與壞死的鑒別4.惡性腫瘤與良性腫瘤的鑒別

白細胞計數(shù)無色有核細胞，分為中性粒細胞，嗜酸粒細胞，嗜堿粒細胞，淋巴細胞和單核細胞五種。一．白細胞計數(shù)

是測定單位體積（通常是每升）血液中各種白細胞的總數(shù)。

白細胞成熟過程祖細胞釋放入外周血液血循環(huán)血管壁

邊緣池循環(huán)池原粒細胞早幼粒中幼粒晚幼粒桿狀核分葉核成熟池(髓內(nèi))分裂池(髓內(nèi))貯備池(髓內(nèi))白細胞演變過程二、顯微鏡計數(shù)法原理：用稀乙酸將血液稀釋并破壞紅細胞，混勻后，滴入計數(shù)盤中，在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的白細胞數(shù)，經(jīng)換算求得每升血液中白細胞總數(shù)。器材和試劑白細胞稀釋液：冰乙酸2.0ml10g/L亞甲藍數(shù)滴蒸餾水加至100ml

器材：普通光學顯微鏡、計數(shù)板、微量吸管、蓋玻片、采血針、棉球、試管血標本采集靜脈采血法毛細血管采血法改良計數(shù)板結構思考：計數(shù)板結構操作

a.加白細胞稀釋液0.38ml于一小試管中

b.用微量吸管吸取20ul末梢血。

c.擦去微量吸管外余血，將其插入稀釋液底部，輕輕將血放出，并吸取上清液洗滌微量吸管2~3次（注意每次不能沖渾稀釋液），混勻。

d.用微量吸管或玻璃棒取混勻的細胞懸液1滴，充入計數(shù)池與蓋片的縫隙中，靜置2-3min，使白細胞下沉。

e.低倍鏡計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)。壓線細胞及細胞計數(shù)路線計算

X/4×10×20×106/L=白細胞/L式中：在法定計量單位制中用△.△△×109/L表示

X：為4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)。

÷4：為每大方格（即0.1ul）內(nèi)白細胞平均數(shù)。

×10：1個大方格的容積為0.1ul，換算成1ul。

×20：血液的稀釋倍數(shù)。

×106：將ul換算成L正常參考值成人：（4-10）×109/L新生兒：（15-20）×109/L6月-2歲：（11-12）×109/L6.注意事項⊙采血時不能擠壓過度，因此針刺深度必須適當?！言诖蠓礁駜?nèi)壓線細胞應按計數(shù)原則計數(shù)?！严♂屢阂^濾，小試管、計數(shù)板須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認為細胞?！殉涑厍暗膿u勻要注意，氣泡不能太多。⊙加蓋玻片方式：“推式”，不要“蓋式”。３、質(zhì)量考核與評價（1）經(jīng)驗控制

與紅細胞數(shù)比較

RBC:WBC=500:1

WBC(×109/L)WBC/highpower,HP4~72~47~104~610~136~1013~1810~12

與白細胞分布密度比較１、參考值范圍

成人（4～10）×109/L

兒童（5～12）×109/L6月~2歲(11～12）×109/L

新生兒（15～20）×109/L主要內(nèi)容HCT定義及方法選擇。2.參考值及臨床意義。3.紅細胞平均值計算教學重點及難點重點：

HCT定義；溫氏法測定結果判斷、參考值及臨床意義；紅細胞平均值參考值及應用。難點：

HCT結果判斷、意義；紅細胞平均值計算方法。測定方法手工法分析儀法

血細胞比容測定（hematocrit，Hct）紅細胞比積（Hct、PCV

）：又叫紅細胞體積分數(shù)。指在一定條件下經(jīng)離心沉淀壓緊的紅細胞在全血標本中所占體積的比值。

原理將EDTA鹽抗凝血在一定條件下離心沉淀，由引而測出其紅細胞在全積壓中所占體積的百分比，稱為紅細胞比積測定。紅細胞比積的多少主要與紅細胞數(shù)量及其大小有關。測定方法

1．Wintrobe法目前溫氏法已屬淘汰之列，測定值比真實值高2～3%，標本用量多，費時，漸為微量高速離心法所代頂替。

離心后血液分層

layerafterbloodcentrifugated

血漿plasm

血小板platlet

白細胞whitecell還原血紅蛋白reducedhemoglobin

含氧紅細胞oxygenredcell2.微量法（microhematocrit）因其用血量少，測定時間短，效率高。而且血漿殘留量基本穩(wěn)定，精密度（cv）為1%-2%，測定方法WHO推薦測定方法3．血液分析儀法

Hct=RBC×紅細胞平均體積（MCV）

通過電阻抗法可進行紅細胞比積測定。由于其結果是儀器測定數(shù)千個紅細胞體積產(chǎn)生的脈沖疊加后換算的結果，因此避免了用微量高速離心法?！痉椒▽W評價】1．手工法手工測定血細胞比容的方法較多，如折射計法、粘度法、比重測定法、離心法和放射性核素法（最準確，ICSH定為參考方法）。溫氏法（Wintrobe法），已屬淘汰之列。微量離心法：WHO定為首選常規(guī)方法。

2．血液分析儀法目前常用方法。注意：當患者為紅細胞增多癥或血漿滲透壓異常時，儀器法常會出現(xiàn)誤差?！緟⒖贾怠?/p>

男性：0.380-0.508L/L

女性：0.335-0.450L/L【臨床意義】●紅細胞比積增高：相對性增多（血液濃縮）。絕對性增高（真性紅細胞增多癥）。●紅細胞比積減少：見于各種貧血。紅細胞平均值的計算

通過紅細胞比積、計數(shù)紅細胞、測定血紅蛋白量這三個數(shù)據(jù)，間接計算出平均紅細胞容積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC），以便分析病人紅細胞形態(tài)特征，有助于貧血的分類與鑒定。

紅細胞平均指數(shù)紅細胞平均容積（meancorpuscularvolume,MCV），指每個紅細胞平均體積的大小，以飛升（fl）為單位紅細胞血平均紅蛋白含量(meancorpuscularhemoglobin,MCH)，指每個紅細胞內(nèi)平均所含血紅蛋白的量，以皮克（pg）為單位紅細胞平均血紅蛋白濃度(meancorpuscularHemoglobinconcentration,MCHC)，指平均每升紅細胞中所含血紅蛋白濃度（g/L）。

1．手工法對同一抗凝血標本同時作紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定和血細胞比容測定。

（1）每升血液中紅細胞體積HctMCV=———————————=————（fl）每升血液中紅細胞個數(shù)RBC

（2）每升血液中血紅蛋白含量HbMCH=————————————=————（pg）每升血液中紅細胞個數(shù)RBC

（3）每升血液中血紅蛋白含量HbMCHC=———————————=————

每升血液中血細胞比容Hct

2．血液分析儀能直接導出MCV的值，再結合儀器直接測定的RBC和Hb，計算出MCH和MCHCMCH=Hb/RBCMCHC=Hb/RBC×MCV

【參考值】

手工法：MCV82～92fl；MCH27～31pg；MCHC：320～360g/L。血液分析儀法：MCV80～100fl；MCH27～34pg；MCHC：320～360g/L

貧血分類MCVMCHMCHC貧血正細胞貧血正常

正常正常再生障礙性貧血、急性失血性貧血、某些溶血性大細胞貧血增高

增高正常各種造血物質(zhì)缺乏或利用不良的貧血單純小細胞貧血減低減低正常慢性感染、慢性肝腎疾病性貧血小細胞低色素貧血減低

減低減低

缺鐵性貧血及鐵利用不良貧血，慢性失血性貧血貧血的紅細胞形態(tài)學分類紅細胞平均值必須結合血液涂片來觀察紅細胞形態(tài)才能得出較為準確的診斷。

查體：T36.5℃，P106次/分，R20次/分，Bpl24／72mmHg，一般狀態(tài)好，口唇蒼白，貧血貌，皮膚粘膜無出血點，淺表淋巴結不大，鞏膜無黃染，舌乳頭正常，心肺無異常，肝脾不大。實驗室檢查：血液檢查：Hb64g/L，RBC3.6×1012/L，MCV18fl，MCH18pg，MCHC229g/L，HCT28％，RDW18％，外周血涂片紅細胞以小紅細胞為主；WBC5.6×109/L，分類：Nsg68％，L25％，M2％，PLT240×109/L，Reti2.0%。尿蛋白(一)，鏡檢無異常，大便隱血(一)，血清鐵9.5μmol/L(9～27μmol/L)。1根據(jù)以上資料，請做出初步診斷并簡述其診斷依據(jù)？小結本章節(jié)我們學習了紅細胞比容的測定方法，掌握了紅細胞平均值的計算，我們一定要會根據(jù)紅細胞平均值的數(shù)值判斷貧血的種類，為臨床檢驗結果解釋正確的答案！網(wǎng)織紅細胞（reticulocyte）計數(shù)界于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的過渡階段細胞。因其胞質(zhì)中殘存的核糖核酸經(jīng)堿性染料活體染色后，呈現(xiàn)點狀或線網(wǎng)狀結構，故名網(wǎng)織紅細胞。

網(wǎng)織紅細胞的形態(tài)特點和分型Ret通常較成熟紅細胞稍大，直徑8.0～9.5微米。HeiLmyer分型（五型）NCCLS和ICSH分型（四型）外周血哪型多？花冠型絲球型網(wǎng)型

破網(wǎng)型點粒型HeiLmyer分型(二)染色原理網(wǎng)織紅細胞內(nèi)RNA的磷酸基（帶負電荷）能與燦爛甲酚藍、新亞甲藍等堿性染料的有色反應基團（帶正電荷）結合，形成核酸與堿性染料復合物的多聚體，凝成顆粒，其顆粒又聯(lián)綴成線，而構成淺藍或深藍的網(wǎng)織狀結構。１、計數(shù)方法（1）手工方法：米勒（Miller）窺盤法該方法可明顯提高計數(shù)的準確性和準確性.

B31A將Miller窺盤放在顯微鏡目鏡中,通過窺盤中大小方格間的9比1比例關系計算RBC數(shù)和網(wǎng)織RBC?？鼓邕虺热旧?，用流式細胞儀分析樣本中10000個細胞，報告網(wǎng)織紅細胞%和平均熒光強度。熒光強度越強，細胞越幼稚。流式細胞儀分析簡便，結果精確、靈敏，消除了取樣帶來的誤差。（２）流式細胞儀法：成人：0.005～0.015（0.5%～1.5%)新生兒：0.03～0.06絕對值：(24～84)×109/L２、參考值（1）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型再障時，明顯降低。絕對值低于15×109/L可做為急性再障的輔助診斷指標。失血、多數(shù)溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細胞可明顯高于正常。營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細胞可保持正常、輕度升高或降低。３、臨床意義

（2）評價療效

網(wǎng)織紅細胞反應：IDA或巨幼細胞貧血分別給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療3-5d后，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值開始上升，7-10d達到最高(10%左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細胞、血紅蛋白開始升高。 骨髓移植、EPO治療后：若骨髓開始恢復造血功能，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值上升。３、臨床意義（3）放、化療監(jiān)測機體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才檢測到網(wǎng)織紅細胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復后，又見上述指標依次上升。３、臨床意義（Reticulocyteproductionindex,RPI）病人網(wǎng)織紅細胞/d*病人PCV/正常人PCV（男0.45，女0.40）意義：＞3提示溶血性貧血或急性失血性貧血；＜1提示為骨髓增生低下或紅細胞系成熟障礙性貧血。網(wǎng)織紅生成指數(shù)小結本章節(jié)我們學習了網(wǎng)織紅細胞計數(shù)，我們要知道網(wǎng)織紅是哪個階段的紅細胞，它的升高表示什么，它的減低又代表什么，熟練掌握有助于對疾病的鑒別診斷！復習題一、名詞解釋：網(wǎng)織紅細胞二、填空依據(jù)ICSH的定義，網(wǎng)織紅細胞分（）（）（）（）型。三、是非題1、網(wǎng)織紅細胞是幼稚紅細胞。2、再生障礙性貧血網(wǎng)織紅細胞降低。3、溶血性貧血網(wǎng)織紅細胞增多。4、網(wǎng)織紅細胞是反映骨髓造血狀態(tài)的指標。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemiclupuserythe-matosus,SLE)是一種常見自身免疫性疾病，其發(fā)生率：國外約50/10萬人我國70/10萬人黑人及亞裔人群發(fā)病率高于歐美人一、概述特點累及多系統(tǒng)、多臟器皮膚、腎臟、血液、神經(jīng)系統(tǒng)等具有多種自身抗體多見于青年女性，男女之比約為

1:9發(fā)病年齡高峰

13~40歲，>60歲約5%臨床表現(xiàn)發(fā)熱：可為唯一首發(fā)癥狀皮膚：面部蝶形紅斑、盤狀紅斑骨、關節(jié)：骨無菌性壞死心臟：腎臟：神經(jīng)系統(tǒng)：消化系統(tǒng)：口腔黏膜潰瘍目前仍未真正明了，多因素參與免疫機制缺陷自身抗體、免疫復合物形成和沉積、免疫調(diào)節(jié)障礙等遺傳因素雌激素環(huán)境因素病毒感染、藥物、陽光和紫外線測定方法及評價1.LE細胞顯微鏡檢查

1948年由Hargraves發(fā)現(xiàn)

LE形成需要的條件患者血清中存在LE因子受損或退變的細胞核，即被LE因子作用的核具有吞噬活性的白細胞LE的三種形態(tài)

必須找到典型的吞噬體才能報告陽性結果游離均勻體花形細胞簇吞噬體自身抗體：多種多樣抗核抗體抗ds-DNA抗體抗Sm抗體2.免疫學檢查法嗜酸性粒細胞直接計數(shù)

血液充池計數(shù)換算（個/L）稀釋液

原理:用嗜酸性粒細胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，同時破壞紅細胞和大部分其它白細胞，并將嗜酸性粒細胞著色，然后滴入細胞計數(shù)池中，計數(shù)一定范圍內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)，即可求得每升血液中嗜酸性粒細胞數(shù)。

參考值0.05~0.5×109/L嗜酸性粒細胞略大于中性粒細胞，核一般分兩頁，胞漿內(nèi)充滿粗大、整齊、均勻、排列緊密、有立體感的桔黃色嗜酸性顆粒。臨床意義:1.生理變化:興奮刺激（交感興奮）↓下丘腦↓釋放ACTH腎上腺皮質(zhì)單核—巨噬（產(chǎn)生腎上腺皮質(zhì)激素）吞噬分解E↓

骨髓產(chǎn)生和釋放E受抑制嗜酸性粒細胞增多：過敏性疾?。褐夤芟?、蕁麻疹、過敏性肺炎等寄生蟲?。河绕涫悄c道寄生蟲某些皮膚病：濕疹、皰疹樣皮炎、真菌性皮膚病等某些血液?。郝粤＜毎园籽∧承﹤魅静。盒杉t熱某些惡性腫瘤：霍奇金病等

緒論一、臨床檢驗（clinicallaboratorytechnologyorscience）又稱實驗診斷學，就是通過實驗室的各種檢查方法，包括感官檢查、理學檢查、化學檢查、顯微鏡檢查以及自動化儀器檢查等，對病人的血液、體液、分泌物和排泄物等標本進行檢查、分析，以獲得病原、病理變化及臟器功能狀態(tài)等資料。教學目標1、了解血液的生理特性2、掌握血液標本的采集方法及注意事項3、掌握血液標本的采集部位4、掌握血液標本的抗凝及抗凝劑5、掌握血涂片的制備方法教學內(nèi)容1、一般血液學檢驗概述2、血液的生理特性3、血液標本的采集4、抗凝劑5、血涂片的制備教學重點教學重點：

血液標本的采集方法及注意事項血液標本的采集部位血液標本的抗凝及抗凝劑教學難點

血液標本的抗凝二、臨床檢驗在醫(yī)學中的作用

1、為準確診斷、及時治療提供依據(jù)臨床檢驗的結果是支持診斷、鑒別診斷、甚至確定診斷的主要依據(jù)。例：anemia依據(jù)：血中紅細胞和血紅蛋白量減少leukemia依據(jù)：血象和骨髓象腎臟有實質(zhì)性損傷的依據(jù)尿液中出現(xiàn)蛋白、細胞管型問：tumor？2、為分析病情、觀察療效、判斷預后提供依據(jù)在疾病過程中，血液、體液、分泌物和排泄物也會隨之發(fā)生相應的變化3、為預防疾病提供資料如血象和腫瘤細胞學的普查等三、臨床檢驗的一般方法1、目視檢查直接觀察標本：顏色、透明度、性狀，有無凝塊或寄生蟲2、理學檢查液體的相對密度、血液比粘度、紅細胞沉降率、紅細胞比積等病理變化3、化學檢查定性和定量檢測標本化學成分的病理變化4、顯微鏡檢查觀察有型成分的數(shù)量和形態(tài)5、自動化儀器檢查電子技術、程序控制的發(fā)展四、學習臨床檢驗的目的和要求1、理論聯(lián)系實踐2、操作要求3、檢驗結果必須和臨床表現(xiàn)結合4、檢驗人員的醫(yī)德第一章血液學一般檢驗血液學檢查：反應造血系統(tǒng)本身、機體全身或局部病變有助于疾病的診斷及療效、預后的觀察只能反應疾病某一方面的情況，不能認為是病程的全部反應；不同個體，對同一影響有不同的反應，或也可對不同影響產(chǎn)生相同的反應第一節(jié)概論一、血液生理概要1.血液的組成血細胞（紅細胞、白細胞、血小板）＋血漿組成血清與血漿的概念和區(qū)別血漿缺少某些凝血因子血細胞組成2.血液主要的理化性質(zhì)（1）血量血漿量與血細胞量的總和

成人約4～5升，約占體重的6%～8%（2）顏色紅色,血紅蛋白動脈血:鮮紅色。靜脈血:暗紅色。嚴重貧血患者的血:紅色變淺。嚴重CO中毒或氰化物中毒:櫻紅色高脂膳食后血漿:呈乳白色溶血:呈不同程度的紅色。（3）紅細胞在血漿中的懸浮穩(wěn)定性均勻混懸狀態(tài):1.紅細胞膜唾液酸根帶有負電荷，形成Zeta電位2.血漿成分、血漿粘度及血流動力學等（4）粘滯性取決于血細胞比容和血漿粘度健康成人:

全血粘度為生理鹽水粘度的4～5倍血漿粘度為生理鹽水粘度的1.6倍左右（5）比重和滲透濃度全血比重:

男性約為1.055～1.063

女性約為1.051～1.060；

與紅細胞的百分比有關血漿的比重約在1.025～1.030之間，與蛋白濃度有關。血漿滲量（滲透壓）：

290～310mOsm/kg·H2O。（6）pH血液pH值為7.35～7.45（7）凝固性與凝血因子激活有關3.血液的功能（1）運輸功能氧氣和營養(yǎng)成分（2）協(xié)調(diào)功能

（3）維護機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定（4）防御功能二、血液標本的采集1.毛細血管采血法采血部位：左手中指或無名指指端內(nèi)側為宜，嬰幼兒大趾及足底內(nèi)外側緣部采血，嚴重燒傷的患者選擇皮膚完整處采血。采血器材：帶刃三棱針或一次性使用“專用采血針”為好穿刺深度：3mm采血順序：血小板計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白細胞計數(shù)、血型鑒定。如圖2.靜脈采血法

通常采用肘部靜脈三、血液標本的抗凝抗凝：

用物理或化學的方法，除掉或抑制血液中某些凝血因子以阻止血液凝固的方法抗凝劑：

能阻止血液凝固的化學試劑常用化學抗凝劑：1.枸櫞酸鈉（trisodiumcitrate）也稱檸檬酸鈉配成109mmol/L或106mmol/L的溶液?？鼓恚鸿蹤此徕c與血液中的鈣離子形成可溶性螯合物，阻止血液凝固。

Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5O7-+3Na+枸櫞酸鈉用于血栓與止血檢驗（1:9）及紅細胞沉降率（1:4）等的測定，也多用于配制血液保養(yǎng)液。2.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽EDTA鹽有二鈉、二鉀和三鉀鹽，與血液中的鈣離子結合形成螯合物，從而阻止血液凝固。

Na2C10H12O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na+對血細胞形態(tài)和血小板計數(shù)影響較小，適用于多項血液檢查，尤其是血小板計數(shù)。但其影響血小板聚集和白細胞吞噬功能，故不適于血栓與止血檢查及血小板功能檢查。3.草酸鈉與血液中的鈣離子形成草酸鈣沉淀阻止血液凝固。

Na2C2O4+Ca2+→CaC2O4↓+2Na+4.雙草酸鹽抗凝劑草酸鉀可使紅細胞，草酸銨則可使紅細胞，按適當比例混合不影響紅細胞形態(tài)和體積，可用于血細胞比容、血細胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)等項目雙草酸鹽作用于RBC形態(tài)變化示意圖草酸鉀草酸銨可使RBC縮小可使RBC脹大草酸鉀:草酸銨RBC形態(tài)、體積無變化適用于測Hct。5.肝素肝素能阻止凝血酶形成和抑制血小板聚集肝素具有抗凝能力強，不影響血細胞體積，不引起溶血肝素會引起白細胞聚集，使血涂片染色產(chǎn)生藍色背景，不能用于白細胞計數(shù)和分類計數(shù)

四、血涂片的制備

好的血涂片：厚薄適宜、頭體尾分明、染色良好良好血涂片尾體頭1.載玻片的清潔

新玻片常用濃度約1mol/LHCl浸泡24h后用清水徹底沖洗，干燥后備用。用過的載玻片可放入含適量肥皂或其它洗滌劑的清水中煮沸20min，趁熱將血膜刷洗干凈，再用清水反復沖洗干燥備用。使用載玻片時，切勿用手觸及玻片表面，以保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩2.血涂片的制備如圖影響因素：涂片的厚薄與血滴的大小、推片與載片之間的角度、推片時的速度及血細胞比容有關。①血滴大、角度大、速度快則血膜越厚；反之則血膜越薄。血膜分布不勻主要是推片邊緣不齊、用力不勻和載玻片不清潔所致②血細胞比容高于正常時，血液粘度較高，保持較小的角度，可得滿意結果；相反，血細胞比容低于正常時，血液較稀，則用較大角度。五、血細胞常用的染色方法（一）瑞氏染色法1.瑞氏染粉

由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復合染料。伊紅為鈉鹽，有色部分為陰離子。美藍為氯鹽，有色部分為陽離子。美藍和伊紅的水溶液混合后，產(chǎn)生一種不溶于水的伊紅化美藍（ME）中性沉淀，即瑞氏染料。將適量的ME溶解于甲醇中，即成為瑞氏染液。甲醇的作用：一方面使ME溶解，并解離為M+和E-。這兩種有色離子可以選擇性地與細胞內(nèi)不同成分結合而著色。另一方面因其具有強大的脫水作用，可將細胞固定為一定形態(tài)。當細胞發(fā)生凝固時，蛋白質(zhì)被沉淀為顆粒狀或者網(wǎng)狀結構，增加細胞結構的表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。2.細胞的著色原理既有化學的親合作用，又有物理的吸附作用。不同的細胞由于其所含化學成分不一樣，化學性質(zhì)各不相同，對染料的親合力也不一樣。①細胞中的堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結合染成紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)，如血紅蛋白及嗜酸性粒細胞胞質(zhì)中的嗜酸性顆粒等為堿性物質(zhì)，與酸性伊紅結合而染成紅色。

②細胞中的酸性物質(zhì)可與染液中的堿性染料美藍結合而染成藍色，該物質(zhì)又稱嗜堿性物質(zhì)，如淋巴細胞胞質(zhì)及嗜堿性粒細胞胞質(zhì)內(nèi)的顆粒為酸性物質(zhì)，可與堿性染料美藍結合染成藍色。③中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅美藍均可結合，染淡紫紅色為中性物質(zhì)。④原始紅細胞和早幼紅細胞的胞質(zhì)和細胞核的核仁中含有較多的酸性物質(zhì)，與美藍親合力強，故染成較濃厚的藍色；隨著細胞的發(fā)育，中幼紅細胞階段既含有酸性物質(zhì)，又含有堿性物質(zhì)，既能與堿性染料美藍結合，又能與酸性染料伊紅結合，故染成紅藍色或灰紅色；當紅細胞完全成熟，酸性物質(zhì)徹底消失后，只與伊紅結合，則染成粉紅色。3.pH對細胞染色的影響細胞著色對氫離子濃度十分敏感，蛋白質(zhì)帶正電荷即在酸性環(huán)境中正電荷增多，易與酸性伊紅結合，染色偏紅；相反，當環(huán)境的pH＞Pi即在堿性環(huán)境中負電荷增多，則易與美藍結合染色偏藍。使用清潔中性的玻片，優(yōu)質(zhì)的甲醇配制染液以及常用緩沖液（pH6.4～6.8）來調(diào)節(jié)染色時的pH值4.瑞氏染液的質(zhì)量評價除用血液片實際染色評價外，采用吸光度比值（RA）作為瑞氏染液的質(zhì)量評價指標,瑞氏染液的成熟指數(shù)以RA（A650nm/A525nm）=1.3±0.1為宜。新配制的瑞氏染液往往偏堿，染色效果較差，需在室溫或37℃下存放一定時間，待染液“成熟”。染液成熟的過程主要是美藍逐漸轉變?yōu)樘烨郆的過程。在密封條件下，貯存時間愈久，轉化的天青B愈多，染色效果愈好。5.染色結果分析在正常情況下，血膜外觀呈淡紫紅色。顯微鏡下，紅細胞呈粉紅色。白細胞胞質(zhì)中顆粒清楚，并顯示出各種細胞特有的色彩，細胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結構清楚。染色偏酸則紅細胞和嗜酸性粒細胞顆粒偏紅，白細胞核呈淡藍色或不著色。染色偏堿則所有細胞呈灰藍色，顆粒深暗；嗜酸性粒細胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或藍色；中性顆粒偏粗，染成紫黑色。

紅細胞檢查一、紅細胞計數(shù)-----基本項目(redbloodcellcount，RBC)

[檢測原理]

1．手工顯微鏡法:稀釋、計數(shù)、換算。

一、紅細胞計數(shù)-----基本項目(redbloodcellcount，RBC)

[檢測原理]

2．血液分析儀法:電阻抗法，

流式細胞術激光檢測法。顯微鏡計數(shù)法1.原理2.試劑a.Hayem稀釋液：較傳統(tǒng)稀釋液氯化鈉---調(diào)節(jié)滲透濃度，硫酸鈉---調(diào)節(jié)滲透濃度，防止紅細胞聚集，氯化高汞---防腐劑，有毒缺點：a.如遇高球蛋白血癥或自身凝集素增高患者，紅細胞易凝集或形成串錢狀，影響計數(shù)。

b.枸櫞酸鈉稀釋液：應用廣泛

c.普通生理鹽水:急診3.操作

a.取小試管一支，準確加入紅細胞稀釋液2.0ml。

b.毛細血管采血，取血10ul，稀釋200倍。

c.混勻，充池，靜置2min后以低倍鏡計數(shù)中間大方格的四角和中央5個中方格內(nèi)的紅細胞4.計算紅細胞數(shù)/L=5個中方格內(nèi)紅細胞×5×10×200×106/L

或×1012/L5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)1005.報告方式

RBC（/L）=.×1012/L6.注意事項

a.紅細胞數(shù)量較多，在計數(shù)時應按計數(shù)原則計數(shù)

b.防止血液凝固，并要充分混勻7.正常參考值男性:（4.00-5.50）×1012/L女性:（3.50-5.00）×1012/L新生兒:（6.00-7.00）×1012/L示教方法學評價

[質(zhì)量保證]

參考值

①成年：男性(4.09～5.74)X1012/L，女性(3.68～5.13)X1012/L。②新生兒(5.2～6.4)X1012/L。③嬰兒(4.0～4.3)X1012／L。④兒童(4.0～4.5)X1012／L。

1．生理性變化

(1)年齡與性別的差異：

(2)精神、激素因素：

(3)劇烈體力運動和勞動：

(4)氣壓降低：

(5)妊娠中、后期：臨床意義

2．病理性變化(1)增多：

1)相對性增多：血液濃縮如嘔吐、高熱、腹瀉等

2)絕對性增多：①繼發(fā)性增多：組織缺氧：EPO代償性增高，心肺疾病、先心、異常Hb等；

EPO非代償性增高：如腎癌、肝癌、子宮肌瘤、卵巢癌等。②原發(fā)性增多：如真紅、良性家族性紅細胞增多癥等臨床意義

2．病理性減少通過紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定或血細胞比容測定就可確定有無貧血。按病因，可將貧血分成紅細胞生成障礙、過度破壞丟失(失血)。臨床意義

2．病理性減少

1)紅細胞生成減少：骨髓功能衰竭的再生障礙性貧血造血物質(zhì)缺乏或利用障礙腎性貧血缺鐵性貧血鐵粒幼細胞貧血巨幼細胞貧血臨床意義

2．病理性減少2)紅細胞破壞過多：①紅細胞內(nèi)在缺陷：膜缺陷遺傳性球形紅細胞酶缺陷G-6-PD缺乏癥血紅蛋白異常地貧②紅細胞外在異常：免疫反應如新生兒溶血病機械性損傷如紅細胞破碎綜合征高溫燒傷、藥物和毒物、瘧疾和細菌所致溶貧、脾功能亢進所致溶血性貧血。臨床意義

2．病理性減少3)紅細胞丟失(失血)：如急性、慢性失血性貧血。藥物引起貧血：①抑制骨髓的藥物如阿司匹林②維生素B12、葉酸吸收如口服避孕藥、異煙肼③鐵吸收障礙藥物如皮質(zhì)類固醇④溶血的藥物如頭孢類、氨基甙類抗生素

臨床意義

紅細胞計數(shù)醫(yī)學決定水平：①高于6.8×1012／L，應采取相應的治療措施。②低于3.5×1012／L

為診斷貧血的界限，應尋找原因。③低于1.5×1012／L

應考慮輸血。二、血紅蛋白測定(hemoglobinconcentrationdetermination)

血紅蛋白(血色素，Hb或HGB)是一種微紅色的膠體物質(zhì)，分子量為64458。是一種呼吸載體，每克血紅蛋白可攜帶氧1.34毫升．成人紅細胞總量約有600g血紅蛋白，可攜氧800毫升。(一)血紅蛋白分子結構及成分

FEPFe++血紅素珠蛋白Hb(一)血紅蛋白分子結構及成分組成Hb的多肽鏈兩大類：①α類鏈：αζ和θ鏈；②非α鏈：βδγε鏈。

α鏈由141個氨基酸組成，

β鏈由146

個氨基酸組成。(一)血紅蛋白分子結構及成分每個Hb分子由2條α類肽鏈和2條β類肽鏈組成，每條珠蛋白肽鏈含有1個亞鐵血紅素。(一)血紅蛋白分子結構及成分在正常狀態(tài)，機體有99％Hb的鐵原子呈Fe2+狀態(tài)，稱為還原Hb，1％的Fe3+為高鐵血紅蛋白，只有亞鐵狀態(tài)的Hb才能與氧結合，此時稱氧合血紅蛋白

(二)血紅蛋白的合成激素的調(diào)節(jié)①紅細胞生成素，②雄激素。在人體不同生長時期，Hb種類與比例不同：出生后不久β與γ鏈合成大致等，出生后3個月HbA（α2β2）＞95%，

HbF（α2γ2）≤1％。出生后HbA2（α2δ2）占Hb總量的2～3％。

氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法

除了硫化血紅蛋白外各種血紅蛋白

高鐵氰化鉀氧化

高鐵血紅蛋白，

CN-結合穩(wěn)定的棕紅色復合物氰化高鐵血紅蛋白。540nm處有一吸收波峰，用分光光度計測定換算成每升血液中的血紅蛋白濃度，或制備標準曲線供查閱。檢測原理

氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法

反應在18-25℃中進行，加入非離子表面活性劑可加快紅細胞的溶解，減少脂蛋白沉淀產(chǎn)生的溶液渾濁。

檢測原理方法學評價方法學評價常用的比色法氰化高鐵血紅蛋白(hemiglobincyanide，

HiCN)測定法十二烷基硫酸鈉(sodiumdodecylsulfatehemoglobin，

SDS-Hb)測定法堿羥血紅蛋白(alkalinehaematindetergent，

AHD575)測定法、疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)測定法溴代十六烷基三甲銨(cetyltrimethylammoniumbromide，

CTAB)測定法等。國際血液學標準化委員會(ICSH)推薦HiCN測定法作為Hb測定標準法。

[質(zhì)量保證]采血部位不同的采血部位結果不同，靜脈血比毛細血管血的結果低10％～15％。

[參考值]①成年：男性：131—172g／L；女性：113—151g／L；②新生兒：180—190g／L。③嬰兒110—120g／L④兒童120—140g／L

⑤老年(70歲以上)：男性：94—122g／L；女性：87—112g／L。

[臨床意義]臨床意義和紅細胞計數(shù)相似，但對貧血程度的判斷上優(yōu)于紅細胞計數(shù)。

[臨床意義]需注意：①在某些病理情況下，血紅蛋白和紅細胞的濃度不一定能正確反映全身紅細胞總容量的多少。②

在某些貧血，RBC和Hb減少不一致，同時測RBC和Hb

，對診斷更有意義。

①血液總容量改變：大量失血早期②全身血漿容量改變：失水或水潴留血液濃縮或稀釋影響因素

1．顯微鏡分析法采用人工顯微鏡法血涂片染色觀察，是儀器法校準的參考方法和檢測的復核方法。

2．計算機圖像分析建立統(tǒng)計模型，以正常紅細胞形態(tài)為參比、作出分析，可用于與紅細胞形態(tài)變化疾病的輔助診斷。3.血液分析儀法提供紅細胞數(shù)量及其他相關參數(shù)，對異常結果報警，但不能提供確切信息，需用鏡檢血涂片核實。

檢測原理及方法學評價

1.有合格的血液細胞形態(tài)檢驗人員2.選擇細胞分布均勻區(qū)域進行鏡檢3.注意完整規(guī)范的檢查順序低倍鏡細胞分布和染色油鏡細胞形態(tài),是否存在其他異常細胞4．減少人為影響因素全片瀏覽質(zhì)量保證復習題一、名詞解釋紅細胞計數(shù)紅細胞顯微鏡計數(shù)二、填空：原始紅細胞經(jīng)（）、（）、（）、（）各階段，最終發(fā)育為成熟紅細胞，入血后紅細胞的平均壽命為（）天。三、是非

1.一般情況下，紅細胞計數(shù)包括白細胞。

2.網(wǎng)織紅細胞屬完全成熟紅細胞。

小結我們本節(jié)課所講的內(nèi)容主要是紅細胞的計數(shù)和血紅蛋白的測定方法，我們不僅要掌握紅細胞的發(fā)育階段，還要掌握紅細胞計數(shù)的原理及正常參考范圍