紅細(xì)胞血型 法醫(yī)學(xué)

李建金中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)物證教研室紅細(xì)胞血型導(dǎo)錄血型的概念A(yù)BO血型Lewis血型MNSs血型Rh血型其他血型系統(tǒng)一、血型的概念血型〔bloodgroup〕：是人類血液由遺傳控制的個(gè)體性狀之一，是血液的遺傳學(xué)標(biāo)記。狹義：紅細(xì)胞膜上抗原類型廣義：紅細(xì)胞血型：ABO/MN/P/Rh等血清型：Hp/Gc/Tf/Gm/Km等酶型：PGM1/EsD/GPT/ACP等白細(xì)胞血型、血小板血型、唾液型等人類血型系統(tǒng)一覽血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)年代血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)年代

ABO1901

MN1927P1927

Rh1939Lutheran1945Kell1946

Lewis1946Duffy1950Kidd1951Diego1955

rt1956I1956Xg1962Donbrock1965Colton1967UI1968EN1969Ahonen1972OK1987LKE19871、命名〔一〕抗原的命名1.用大寫字母命名，如ABM2.用大小寫字母命名，如Kk與Ss3.有些亞型抗原用右下角碼表示，如A1A24.有些血型抗原用一大一小兩個(gè)字母后加右上角碼命名，如LeaLeb5.有些血型抗原在頭兩個(gè)字母后加數(shù)字表示，如SC1SC2〔二〕抗體的命名一般在抗原前加“抗〞與半字線，如抗－A；有些紅細(xì)胞抗體以最先從血清中查出該抗體的患者的名字命名，如Kell〔三〕基因及基因型的命名一般用斜體表示，如ABHBloodtypesdiscovered紅細(xì)胞血型抗原抗原(Antigen〕 能與TCR/BCR結(jié)合，啟動(dòng)免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體或效應(yīng)淋巴細(xì)胞，并能與相應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。紅細(xì)胞抗原實(shí)質(zhì)：紅細(xì)胞膜抗原分布：大局部位于紅細(xì)胞膜上ABH抗原除了位于紅細(xì)胞膜上以外，還廣泛分布于人體組織，體液及分泌液中Lewis抗原原始存在于人血漿中，后被吸附到紅細(xì)胞膜上紅細(xì)胞血型抗原紅細(xì)胞血型抗原根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為3類

類型型特異性決定族例

糖脂質(zhì)寡糖ABHP膜內(nèi)蛋白蛋白質(zhì)RhKell糖蛋白蛋白質(zhì)寡糖MNSs紅細(xì)胞膜抗原紅細(xì)胞血型抗體免疫球蛋白〔Immunoglobulin，Ig〕IgG、IgM、IgA、IgD、IgE結(jié)構(gòu)：四肽鏈對(duì)稱結(jié)構(gòu)兩條重鏈〔H〕和兩條輕鏈〔L〕氨基端高度可變區(qū)結(jié)合抗原部位羧基端恒定區(qū)決定自身性質(zhì)

氨基端羧基端紅細(xì)胞血型抗體五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖IgGIgEIgDIgAIgM紅細(xì)胞血型抗體分類：天然抗體：抗Ａ，抗Ｂ免疫抗體：抗M抗體寒冷抗體〔鹽水抗體／完全抗體〕溫暖抗體〔不完全抗體〕注：不完全抗體與抗原發(fā)生凝集是不可見的，需另參加相應(yīng)的完全抗體觀察有無(wú)遮斷作用，來(lái)判斷不完全抗體是否與抗原發(fā)生了凝集，這就是中和試驗(yàn)的根本原理。紅細(xì)胞血型抗體免疫抗體溫度升高時(shí)〔370C〕抗體滴度高只能局部被可溶性血型物質(zhì)中和分子量16萬(wàn)能通過胎盤通常在鹽水中不發(fā)生聚集，僅在酶處理或白蛋白溶液中發(fā)生聚集天然抗體溫度低時(shí)抗體滴度高容易被可溶性血型物質(zhì)中和分子量100萬(wàn)不能通過胎盤在鹽水中與相應(yīng)紅細(xì)胞發(fā)生聚集紅細(xì)胞凝集反響致敏抗體的特異性結(jié)合部位與抗原決定族結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合即致敏。這種結(jié)合是可逆的。凝集：結(jié)合了抗體的紅細(xì)胞形成網(wǎng)狀團(tuán)塊

紅細(xì)胞被致敏后，可以發(fā)生凝集反響，也可以不發(fā)生凝集反響。取決于抗體的特征、抗原決定族的多少與部位、以及紅細(xì)胞動(dòng)電位的大小。凝集凝集反響(agglutinationreaction)

ABOBLOODGROUP［目的要求］1.掌握ABO血型系統(tǒng)的基因結(jié)構(gòu)與抗原生成的遺傳途徑2.熟悉ABO血型系統(tǒng)亞型的DNA根底與血清學(xué)特征

3.了解血型抗原的種類與分類ABO抗原的生物合成

BiosynthesisofantigenA抗原和B抗原的合成是以H物質(zhì)為前提的,O型紅細(xì)胞也有H物質(zhì)但不能產(chǎn)生A抗原和B抗原

血型前體物質(zhì)

H物質(zhì)

A，B抗原19號(hào)染色體FUT基因座a2-FUT轉(zhuǎn)移酶抗原生物合成

basicmaterial

HantigenAantigenBantigen

等位基因

ABO基因座:9q34，有7個(gè)外顯子基因間單堿基的突變決定了ABO血型系統(tǒng)的三個(gè)等位基因〔A，B，O〕

A基因和B基因?yàn)楣诧@性相對(duì)于O基因而言為顯性phenotypeABABOgenotypeAA、AOBB、BOABOO基因共顯性BLOODTYPES

血型紅細(xì)胞抗原血清抗體

AAAnti-BBBAnti-AABAandB—O—Anti-AandAnti-B亞型與變異型

Subtypeandmutation1、A亞型：A抗原主要有A1、A2二種亞型。2、Cis-AB型：AB型人與O型人生出AB型小孩。3、獲得性B抗原：A型個(gè)體檢測(cè)出弱B抗原，多見于腸癌，感染。獲得性B是一過性的，程度隨病情變化而變化。原因：細(xì)菌等微生物產(chǎn)生的酶使A抗原特異性單糖結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，使其具有了B抗原性。4、O型的人與B型的人生出A型的孩子。

Cis-AB型的血清學(xué)特點(diǎn)：

1.A抗原多為A2

2.B抗原多為弱B

3.細(xì)胞上H抗原的量高于正常的A2B型4.血清中含有弱抗－B，可識(shí)別自身缺乏的B抗原5.分泌型個(gè)體唾液中分泌正常的A、H物質(zhì)和少量的B物質(zhì)Cis-AB型的產(chǎn)生的原因：

1.A、B基因不等互換2.ABO基因發(fā)生單堿基錯(cuò)義突變分型方法*血清學(xué)分型正定型〔directgrouping)利用的抗A抗B分別與待測(cè)紅細(xì)胞反響觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象。反定型(reversegrouping)利用的紅細(xì)胞與待測(cè)血清反響來(lái)推測(cè)紅細(xì)胞血型分型方法PCR-RFLPPCR-SSPPCR-ASODNA分型方法特異性強(qiáng)，重復(fù)性好、結(jié)果易于判定1、PCR-RFLP

〔限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性〕限制性內(nèi)切酶特異識(shí)別并酶切DNA雙鏈位點(diǎn)，長(zhǎng)生不同數(shù)量長(zhǎng)度的片段。經(jīng)電泳別離確定基因型〔酶譜〕。限制性內(nèi)切酶

PCR-SSP1234567812345678引物特異性3、PCR-ASO

〔等位基因特異性寡核苷酸〕探針法將目的DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后與不同等位基因序列的寡核苷酸探針雜交，放射自顯影、顯色或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)結(jié)果。ACTGASO探針H抗原與分泌型紅細(xì)胞外表ABO抗原的前身物質(zhì)是H抗原，除稀有的孟買型紅細(xì)胞外，所有人紅細(xì)胞外表都有H抗原除可在紅細(xì)胞上檢出H抗原外，在大多數(shù)人的體液、分泌液中也能檢出H抗原，此稱“分泌型〞H抗原與分泌型分泌型〔secretors,sec)O分泌型唾液中只含H物質(zhì)；A分泌型中含A與H物質(zhì)；B型分泌液中含B與H物質(zhì)；AB型中含ABH物質(zhì)一般認(rèn)為只要唾液中查到H物質(zhì)者均屬于分泌型非分泌型〔nonsecretors,non-sec，nS)體液中〔唾液〕不能檢出H物質(zhì)的稱為非分泌型分泌型和非分泌型分泌狀態(tài)受一對(duì)等位基因Se與se控制。純合子SeSe與雜合子Sese均分泌ABH物質(zhì)到分泌液中，稱為ABH分泌型；純合子sese不分泌ABH至分泌液中，稱為ABH非分泌型。結(jié)構(gòu)基因雙結(jié)構(gòu)基因：指第19號(hào)染色體兩個(gè)緊密連鎖的基因座FUT1〔H〕和FUT2〔Se〕FUT1FUT2產(chǎn)物α2-L-FUTα2-FUT底物Ⅱ型糖鏈I型糖鏈作用產(chǎn)生H物質(zhì)只作用于分泌腺細(xì)胞基因型和表型FUT1基因座HhHHHhhhHH無(wú)HFUT2基因座SeseSeSeSesesese分泌型非分泌型H抗原缺失表型1952年在印度孟買發(fā)現(xiàn)一種特殊的血型．這種紅細(xì)胞既無(wú)A抗原和B抗原，也無(wú)H抗原。他們的基因型為hh，不能產(chǎn)生H物質(zhì)，即使有IA和(或)IB基因，也不能形成A抗原或(和)B抗原．但I(xiàn)AIB基因可向后代遺傳，這種特殊的型,稱為孟買型孟買型〔Oh型〕血清學(xué)特點(diǎn)：紅細(xì)胞及唾液中無(wú)ABH抗原，不被抗A抗B抗H抗體所凝集血清中有抗A抗、B抗、及抗H凝集素，可分別凝集ABO型細(xì)胞孟買型產(chǎn)生機(jī)制：FUT1基因錯(cuò)義突變及FUT2基因缺失對(duì)于Oh型如僅用抗A與抗B抗體檢測(cè)易誤判為O型，在親權(quán)鑒定時(shí)應(yīng)給與充分注意群體遺傳學(xué)ABO血型系統(tǒng)按孟德爾定律遺傳，子代ABO基因型中，一個(gè)基因來(lái)自生父，一基因來(lái)自生母，在法科學(xué)中可用于解決親子鑒定的問題假設(shè)遇基因融合決定的表現(xiàn)型時(shí)，很容易得出錯(cuò)誤的鑒定結(jié)論〔三〕InheritanceofABO從父母的血型，可推測(cè)子代的血型，從而有助于做親子鑒定。也可從父子、母子的血型，推測(cè)父母的血型。

fathermotherphenotypeABBgenotypeABBB、BOABBO

phenotypeABAOBBBOgenotypeABABBLewis血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)歷史：1946年Mourant在一個(gè)名叫Lewis的病人血清中首先發(fā)現(xiàn)一種天然抗體，大約與22%的英國(guó)人紅細(xì)胞發(fā)生反響，被稱為抗-Lea。1948年Andresen發(fā)現(xiàn)了抗-Leb抗體。

紅細(xì)胞的Lewis表型紅細(xì)胞的Lewis表現(xiàn)型：Le(a+b-)Le(a-b+)Le(a-b-)Le(a+b+)Lewis血型系統(tǒng)的ISBT的命名：

編號(hào)系統(tǒng)名ISBT標(biāo)記名基因名染色體定位007LewisLEFUT319p13.3

這兩種抗體將人類的紅細(xì)胞分成四種表現(xiàn)型Lewis血型特征一、這是一種存在于唾液與血漿中的可溶性抗原，紅細(xì)胞獲得Lewis表型是通過從血漿吸附Lewis物質(zhì)于紅細(xì)胞上二、紅細(xì)胞Lewis表型受ABH分泌狀態(tài)影響，雖然Lewis基因和分泌基因是獨(dú)立遺傳的三、Lewis表型可受ABO表型的影響，即A1可減低Leb以及Lea

唾液中Lewis物質(zhì)與紅細(xì)胞Lewis表現(xiàn)型的關(guān)系

凡唾液或血清中含有Lea物質(zhì)而不含Leb物質(zhì)者，紅細(xì)胞上只有Lea，為L(zhǎng)e(a+b-)型；當(dāng)唾液中含少量的Lea物質(zhì)者，含大量的Leb物質(zhì)時(shí)，紅細(xì)胞上只有只有Leb，為L(zhǎng)e〔a-b+〕型

lele純合子不產(chǎn)生Lea與Leb抗原，紅細(xì)胞為L(zhǎng)e〔a-b-〕型

Lewis抗原產(chǎn)生的遺傳途徑人類19號(hào)染色體上存在著三個(gè)基因座：FUT1〔H〕、FUT2〔SE〕、FUT3〔LE〕FUT3〔LE〕基因座上有一對(duì)等位基因：LE/le

Lewis抗原產(chǎn)生的遺傳途徑當(dāng)Le基因存在時(shí)，產(chǎn)生唾液中的Lea抗原；當(dāng)同時(shí)又有Se與H基因存在時(shí)，那么產(chǎn)生Leb抗原

lele純合子不產(chǎn)生Lea與Leb抗原。Se基因是調(diào)節(jié)基因，能使分泌細(xì)胞中的H基因執(zhí)行功能，與Le基因作用，產(chǎn)生Leb抗原。Lewis當(dāng)FUT1基因不表達(dá)時(shí)，那么是Le(a+b-)型當(dāng)同時(shí)FUT3基因不表達(dá)時(shí)，那么產(chǎn)生Le〔a-b-〕型Le(a-b+)型很少產(chǎn)生抗－Lea，因?yàn)檫@種人的唾液及血清中含Lea物質(zhì)。產(chǎn)生抗－Lea的Le〔a-b-〕型都是分泌型抗－Leb是一種弱抗體，產(chǎn)生抗－Leb個(gè)體是非分泌型MNSs血型用人紅細(xì)胞免疫家兔，獲得一對(duì)抗人紅細(xì)胞的抗體：抗M、抗N；相應(yīng)抗原：M、N。M和N是等位基因,常顯MM、MN、NN3種基因型鑒定用凝集試驗(yàn)后又發(fā)現(xiàn)一對(duì)抗體：抗S、抗s；相應(yīng)抗原：S、s。M紅細(xì)胞有弱類N活性。M、N與S、s基因呈連鎖遺傳，控制10種基因型。MNSs血型MNSs血型MN抗原決定簇由血型糖蛋白A〔glycophorinA，GPA〕攜帶Ss抗原決定簇由血型糖蛋白B〔glycophorinB,GPB〕攜帶GPA與MN血型抗原GPA分子量為31000，約一半糖類物質(zhì)為唾液酸。GPA攜帶MN抗原，M與N抗原是由GPA第1位與第5位氨基酸所決定的第1位氨基酸第5位氨基酸M抗原SerGlyN抗原LeuGluGPB與Ss血型抗原GPB相對(duì)分子量為20000，含72個(gè)氨基酸GPB攜帶Ss抗原；S抗原在GPB上第29位是Met，s抗原是Thr編碼GPA、GPB的基因結(jié)構(gòu)染色體定位于4q28-31，是緊密連鎖的基因復(fù)合體，分別為GYPA與GYPB，分別有7個(gè)和5個(gè)外顯子M和N為共顯性等位基因，S和s也為共顯性等位基因MNSs系統(tǒng)有４種單倍型：MS、Ms、NS、Ns，可以構(gòu)成10種基因型和９種表現(xiàn)型用4種抗血清判定MNSs型抗M抗N抗S抗s表型基因型＋－＋－MSMS/MS＋－＋＋MSsMS/Ms＋－－＋MsMs/Ms＋＋＋－MNSMS/NS＋＋＋＋MNSsMS/NsMs/NS＋＋－＋MNsMs/Ns－＋＋－NSNS/NS－＋＋＋NSsNS/Ns－＋－＋NsNs/NsRh血型系統(tǒng)Levine和Steetson〔1939〕在一死產(chǎn)兒母親體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種新的紅細(xì)胞抗體這類抗體存在于所有獼猴〔rhesusmonkey)的紅細(xì)胞上，故命名為Rh因子，將凡能與rhesus血清其反響的人的紅細(xì)胞成為Rh陽(yáng)性。不能反響的稱為Rh陰性最復(fù)雜的一個(gè)系統(tǒng)，其重要性僅次于ABO系統(tǒng)

Rh抗原有40多種，其中以D、e、e、C、c最為常見。臨床習(xí)慣地稱含D抗原的紅細(xì)胞為Rh

陽(yáng)性，不含D的為陰性，但從血清學(xué)角度看，Rh陰性只有一種，即ccdeeRH血型系統(tǒng)Rh抗原結(jié)構(gòu)紅細(xì)胞膜上的與Rh血型有關(guān)的蛋白統(tǒng)稱為Rh蛋白家族Rh蛋白家族為四聚體，約170kD2個(gè)RH蛋白分子〔RhD、RhCcEe)2個(gè)Rh相關(guān)糖蛋白〔RhAG〕RHD蛋白〔30kD)表達(dá)D抗原RHCE蛋白〔30kD〕同時(shí)表達(dá)CcEe四種抗原基因座：lp36.2-p34。雙結(jié)構(gòu)基因模型：二個(gè)亞基因座RHD和RHCE緊密連鎖，高度同源兩個(gè)基因座分別編碼D抗原和CcEe抗原假設(shè)出現(xiàn)Rh抗原不正常表達(dá)，那么可能是發(fā)生了基因突變或兩基因座不等交換等位基因結(jié)構(gòu)與命名RH血型的命名有四種命名法Wiener命名法；Fisher-Race命名法Rosenfield數(shù)字命名法ISBT數(shù)字命名法ISBT數(shù)字命名法：D、C、E、c、e抗原分別為RH1、RH2、RH3、RH4、RH5

〔三〕抗原變異體、復(fù)合抗體、缺失型抗原變異體Du抗原：能與IgG抗D發(fā)生反響，而不能與IgM抗D發(fā)生凝集的D(+)個(gè)體的抗原是D抗原量的減少，而非質(zhì)的變化；具有D抗原所有的表位，但表達(dá)很弱；由RhD基因發(fā)生突變，D蛋白跨膜區(qū)與細(xì)胞膜內(nèi)區(qū)氨基酸發(fā)生置換而產(chǎn)生

易引起RhD陰性的判斷〔三〕抗原變異體、復(fù)合抗體、缺失型復(fù)合抗原RHCE基因可以編碼ce、Ce、CE及cE四種復(fù)合抗原；編碼復(fù)合抗原的復(fù)合基因必須是以順式位于同一條染色體上復(fù)合抗體只能與具有相對(duì)應(yīng)的復(fù)合抗原的紅細(xì)胞發(fā)生反響復(fù)合抗原的法醫(yī)學(xué)意義為利用復(fù)合抗體可以推測(cè)Rh血型的基因型〔三〕抗原變異體、復(fù)合抗體、缺失型Rh缺失型：D--：只有D抗原，缺乏C、c、E、e抗原。其D抗原活性強(qiáng)，能與不完全抗D抗體在鹽水中反響原因：〔１〕有完整的RHD基因和RHCE基因，但RHCE基因非活化或發(fā)生剪切部位基因突變〔２〕RHD基因正常，而RHCE基因只有外顯子１和10Rh缺失型Rhnull型：外表5種抗原都缺乏，不能與任何抗血清發(fā)生反響?！玻薄痴{(diào)節(jié)型〔regulatortype)具有Rh結(jié)構(gòu)基因，但基因被抑制，不能編碼Rh抗原。可能與RhAG基因發(fā)生非活化突變產(chǎn)生截短蛋白有關(guān)〔２〕無(wú)效基因型Rh基因缺失；RHCE基因突變導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄提前終止群體遺傳學(xué)基因復(fù)合物DCe、dce、DcE、Dce、dcE、dCe、DCE、dDE這八種單倍型，可以組成36種基因型，18種表現(xiàn)型不同人種間差異很大：白種人Dce復(fù)合體最多見，而黑種人dce最多見

Rh血型鑒定Rh表型可用特殊具的有抗D、C、c\E\和e抗血清測(cè)試來(lái)鑒定。抗人球蛋白試驗(yàn)〔coomb’stest〕或酶介質(zhì)法溶血性輸血反響〔Rh陽(yáng)性，或D陽(yáng)性〕恒河猴〔Macacusrhesus〕RBC家兔抗恒河猴RBC抗體〔免疫血清〕+人RBC凝集反響〔+〕人RBC恒河猴RBCRHCE基因〔+〕RHD基因〔+〕RHCE基因〔+〕RHD基因〔-〕共同抗原，稱Rh抗原。D抗原〔+〕Rh+D抗原〔－〕Rh-

Rh血型系統(tǒng)Rh血型遺傳舉例其他紅細(xì)胞血型系統(tǒng)P血型系統(tǒng)Duffy血型系統(tǒng)Kidd血型系統(tǒng)Xg血型系統(tǒng)P血型系統(tǒng)Landsteiner與Levine(1927)用人類紅細(xì)胞免疫家兔，除去種屬凝集素后，與人類血液做凝集試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)只有一局部人的血液發(fā)生凝集，另一局部無(wú)凝集，這種個(gè)體差異不能用ABO及MN系統(tǒng)來(lái)解釋，由此發(fā)現(xiàn)了新的血型系統(tǒng)P血型系統(tǒng)P1為顯性基因，P2為隱性基因用抗P1血清區(qū)分P1、P2型，發(fā)生凝集為P1型不凝集為P2型P抗原特異性決定簇是多糖P1等位基因頻率在中國(guó)群體中約在0.12~0.34之間與抗-P1血清的反應(yīng)