級八制實驗動物環(huán)境控制及營養(yǎng)需要

1袁進E-mail:;Tel:南方醫(yī)科大學實驗動物中心&比較醫(yī)學教研室2012.09.11實驗動物的環(huán)境設施和營養(yǎng)需要2第一部分實驗動物環(huán)境設施

主要教學內(nèi)容

實驗動物環(huán)境環(huán)境因素對實驗動物的影響實驗動物設施實驗動物設施運行管理實驗動物管理法規(guī)3

┌────┐↓┌────┐↓┌────┐

│基因型│───∣表現(xiàn)型│───∣演出型│

└────┘└────┘└────┘

動物的基因型、表現(xiàn)型、演出型與環(huán)境之間的關系模式

實現(xiàn)實驗動物標準化應從控制實驗動物的遺傳、

微生物和寄生蟲、營養(yǎng)、環(huán)境等四方面著手。周圍環(huán)境發(fā)育環(huán)境胚胎期、哺乳期生活環(huán)境、實驗環(huán)境生物反應現(xiàn)象，對實驗產(chǎn)生相應反應酶、蛋白質(zhì)、動物形態(tài)基因、染色體、DNA及構象20世紀50年代羅歇爾(Russel)和布魯克(Bruch)4（一）實驗動物環(huán)境(laboratoryanimalenvironment)

指實驗動物周圍客觀存在的，與實驗動物相互依存、相互作用、相互影響、協(xié)調(diào)發(fā)展的一切外部事物的有機體系。一、實驗動物環(huán)境及其對實驗動物的影響

野生動物

實驗動物5

外環(huán)境(outsideenvironment)－指實驗動物飼育和動物實驗設施以外的環(huán)境。外環(huán)境的變化直接影響內(nèi)環(huán)境，因此應重視對外環(huán)境的控制（如選址）。

內(nèi)環(huán)境(insideenvironment)－指實驗動物飼育和動物實驗設施以內(nèi)的環(huán)境，即動物直接生活的環(huán)境，如溫度、濕度、噪音和光照等。它又分為：（二）實驗動物環(huán)境分類6局部微環(huán)境—指特定的、個別的或少數(shù)實驗動物所生活的微小環(huán)境。如：飼養(yǎng)盒（籠）內(nèi)部的各種理化因素。內(nèi)部大體環(huán)境—指放置實驗動物籠架等輔助設施的飼養(yǎng)間和實驗間的各種理化因素。7局部微環(huán)境與內(nèi)部大環(huán)境相比有下列特點：（1）溫度、濕度較高；（2）NH3及臭氣（SO2）濃度高；（3）照度低；（4）CO2含量高、O2含量低；（5）粉塵含量高。8（三）環(huán)境因素對實驗動物的影響

實驗動物的環(huán)境因素可分為五個方面：1.氣候因素:溫度、濕度、氣流、風速等；2.理化因素：CO2、O2、粉塵、臭味、噪音、照度等;3.生物因素：飼養(yǎng)密度、微生物、其它動物等；4.居住因素：房屋、飼養(yǎng)籠具、墊料、食槽等；5.營養(yǎng)因素：蛋白質(zhì)、水、維生素、礦物質(zhì)等。91、溫度（temperature）對實驗動物的影響：不同動物適應的環(huán)境溫度不同。嚙齒類動物普通環(huán)境為18-29℃，屏障環(huán)境為20～26℃

。溫度過高或過低都會實驗動物造成不同程度的影響。生長發(fā)育和生殖：當T過低時，常導致性周期的推遲;

當T>30℃時，♂睪丸萎縮或形成精子能力下降;

性周期紊亂，泌乳能力降低或拒哺;

胎兒初生重下降、生長發(fā)育受阻等。10新陳代謝：當T過低時，多數(shù)動物新陳代謝旺盛、攝食量增加、臟器增大，但青蛙、蛇和地鼠則相反；當T過高時，多數(shù)動物新陳代謝情況與低溫時相反。機體抵抗力：溫度過高或過低都能導致機體抵抗力降低，而患病。

BALB/c小鼠從22℃→12℃內(nèi)，其白細胞數(shù)、血液及脾臟中Ｂ和Ｔ細胞的比率亦出現(xiàn)明顯變動，免疫功能的異常與疾病發(fā)生關系很大。11實驗結果：不同環(huán)境溫度常使同種動物實驗出現(xiàn)不同結果。兩種不同溫度對藥物LD50的影響

藥物15.5℃27℃苯異丙胺（Amphetamine）197.090.0鹽酸脫氧麻黃堿（Methedrine）111.033.2麻黃堿（Ephedrine）477.156.5動物形態(tài)：喜馬拉雅（Himalaya）兔飼養(yǎng)在20℃時，耳、尾、鼻和四肢尖端生長白毛，而在10℃時，則生長黑毛。

122、濕度（humidity）對實驗動物的影響

大多數(shù)實驗動物適宜的相對濕度為40-70%，并以50±5%為最佳。高溫高濕（>80%）：可導致機體代謝紊亂、抵抗力繁殖力下降，發(fā)病率、死亡率增加；易使病原微生物孳生和傳播、飼(墊)料霉變、空氣中細菌數(shù)與氨濃度也明顯增加等。13低溫高濕：動物易患感冒、風濕癥、關節(jié)炎、腸炎、下痢等疾病，同時，飼料轉化率、生長速度也會下降。

濕度過低：室內(nèi)干燥、灰塵飛揚，易引起實驗動物呼吸系統(tǒng)疾病;大鼠發(fā)生“環(huán)尾病”（T:27℃，RH<40%）;某些母鼠拒絕哺乳，甚至吃仔鼠。143、氣流(aircurrent)和風速(airvelocity)對實驗動物的影響

與動物體熱的擴散有很大關系當室溫較高時，氣流有利于對流散熱，對動物生長發(fā)育和健康有良好作用。當室溫較低時，氣流使動物的散熱量增加，加劇的動物寒冷。

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風速過?。嚎諝饬魍ú涣?、動物缺氧、室內(nèi)臭氣充斥、散熱困難、造成不舒適感，甚至發(fā)生疾病和窒息死亡。如:SPF動物長途運輸；風速過大：動物體表散熱量大，動物攝食量增加。因此，適當?shù)膿Q氣次數(shù)可以為動物提供充足的新鮮空氣。國標規(guī)定：屏障環(huán)境：最小換氣次數(shù)在15次/h，風速為<0.2m/s。164、噪聲(noise)對實驗動物的影響來源：施工噪聲、交通噪聲、動物房空調(diào)及通風設備產(chǎn)生的噪聲和動物自身產(chǎn)生的噪聲等。影響：妨礙受精卵著床、使動物繁殖率下降；突然的噪聲可引起豚鼠流產(chǎn)；噪聲過強或持續(xù)不斷可使母鼠咬死/吃掉幼仔，DBA小鼠可發(fā)生聽源性痙攣；可使小鼠的血糖、腎上腺素、心跳數(shù)、呼吸數(shù)和血壓明顯升高。長期受強噪聲的刺激可引起噪聲性耳聾，此外還有神經(jīng)衰弱癥狀、胃腸功能紊亂、內(nèi)分泌失調(diào)等許多非聽覺效應。

國標要求控制在60分貝以下。175、光照(illumination)對實驗動物的影響

1、影響視力:出現(xiàn)視網(wǎng)膜障礙。

2、影響生理及生殖機能:性周期紊亂（延長或縮短）。藍光比紅光更能促進大鼠的性成熟；持續(xù)的黑暗可抑制大鼠的生殖，使卵巢減輕。

國標要求光照以12h明:12h暗或10h明:14h暗為佳186、粉塵(dust)和有害氣體(harmfulgas)的影響

對機體可造成不同程度的危害，也干擾動物實驗。來源：主要來源于飼料、墊料及動物毛和皮屑，以及動物排泄的糞尿。影響：氨氣濃度增高時，可刺激動物眼結膜、鼻腔粘膜和呼吸道粘膜而引起流淚、咳嗽，嚴重者甚至產(chǎn)生急性肺水腫而致動物死亡粉塵可引起實驗動物或飼養(yǎng)人員的變態(tài)反應或哮喘病197、生物因素對實驗動物的影響包括同種生物（飼養(yǎng)密度和動物社會地位的爭斗）、異種生物（細菌、病毒、寄生蟲等）和實驗人員。8、營養(yǎng)因素對實驗動物的影響208、實驗動物設施環(huán)境國家標準

由于環(huán)境因素對實驗動物的生長發(fā)育、繁殖生產(chǎn)以及動物實驗的結果影響很大，為了排除環(huán)境因素對實驗動物的影響，國家科技部于1994年1月首次發(fā)布了《實驗動物設施環(huán)境國家標準》。1999年8月修訂，2000年1月通過復審確認，2001年正式實施（GB14925-2001）。2010年12月23日又發(fā)布了《實驗動物設施環(huán)境（GB14925-2010）

》國家標準新標準，2011年10月1日正式實施。21實驗動物生產(chǎn)間環(huán)境技術指標項目指標小鼠/大鼠豚鼠/地鼠犬/猴/小型豬/兔/貓雞屏障環(huán)境隔離環(huán)境普通環(huán)境屏障環(huán)境隔離環(huán)境普通環(huán)境屏障環(huán)境隔離環(huán)境屏障環(huán)境溫度/℃20~2618~2920~2616~2820~2616~28最大日溫差/℃,≤4相對濕度/％40~70最小換氣次數(shù)/(次/h),≥15208152081520－氣流速度/(m/s),≤0.2相對區(qū)域最小靜壓差/Pa,≥1050－1050－105010空氣潔凈度/級75or7－75or7－75or75or7沉降菌最大平均濃度/(CFU/0.5h90mm平皿),≤3無檢出－無檢出－3無檢出無檢出氨濃度/(mg/m3),≤14噪聲/dB(A),≤60照度/Lx最低工作照度200動物照度15~20100~2005~10晝夜照明交替時間/h12/12或10/1422

動物實驗間環(huán)境技術指標項目指標小鼠/大鼠豚鼠/地鼠犬/猴/小型豬/兔/貓雞屏障環(huán)境隔離環(huán)境普通環(huán)境屏障環(huán)境隔離環(huán)境普通環(huán)境屏障環(huán)境隔離環(huán)境屏障環(huán)境溫度/℃20~2618~2920~2616~2620~2616~26最大日溫差/℃,≤4相對濕度/％40~70最小換氣次數(shù)/(次/h),≥15208152081520－氣流速度/(m/s),≤0.2相對區(qū)域最小靜壓差/Pa,≥1050－1050－105010空氣潔凈度/級75or7－75or7－75or75or7沉降菌最大平均濃度/(CFU/0.5h90mm平皿),≤3無檢出－無檢出－3無檢出無檢出氨濃度/(mg/m3),≤14噪聲/dB(A),≤60照度/Lx最低工作照度200動物照度15~20100~2005~10晝夜照明交替時間/h12/12或10/1423（一）概述1、實驗動物設施(LaboratoryAnimalFacility)：是指進行實驗動物生產(chǎn)（保/育種、繁殖）和從事動物實驗設施的總和。

二、實驗動物設施242、按設施使用功能分類

實驗動物生產(chǎn)設施(ProductionAnimalFacility)：用于實驗動物生產(chǎn)的建筑物及設備的總和。動物實驗設施(AnimalexperimentalFacility):

以研究、試驗、教學、生物制品和藥品，及相關產(chǎn)品生產(chǎn)、檢定等為目的而進行實驗動物試驗的建筑物及設備的總和。

特殊實驗動物設施(SpecialAnimalFacility):

包括感染動物實驗設施（生物安全實驗室）和應用放射性物質(zhì)或有害化學物質(zhì)等進行動物實驗的設施。253、實驗動物設施建設的基本要求：（1）選址要求避開自然疫源地；空氣質(zhì)量及自然環(huán)境較好的區(qū)域；遠離鐵路，碼頭，飛機場，交通要道及工廠，貯倉等污染，噪聲干擾的區(qū)域；與生活區(qū)保持最少50m的距離。主要是控制外環(huán)境對內(nèi)環(huán)境的影響

26TheJacksonLaboratoryNationalResourceCenterforMutantMice(NRCMM)（China）（US）27（2）衛(wèi)生要求

材料應無毒，無放射性；內(nèi)墻表面應光滑平整；陰陽角均為圓弧形，易于清洗、消毒；墻面采用不易脫落，耐腐蝕、無反光、耐沖擊的材料；地面應防滑、耐磨、無滲漏；天花板應耐水、耐腐蝕。28（3）設施建設要求

門窗應有良好的密封性；走廊寬度不小于1.5m；門寬度不小于0.8m；繁育、生產(chǎn)及實驗室空調(diào)系統(tǒng)保持正壓，并合理組織氣流，避免死角、斷流、短路；電源應備有應急電源。29壓差計飼養(yǎng)室潔凈走廊304、設施區(qū)域設置要求前區(qū)的設置:辦公室維修室?guī)旆匡暳霞庸べA存間外走廊（參觀、通道）31飼育區(qū)的設置繁育生產(chǎn)區(qū)動物實驗區(qū)輔助區(qū)動物生產(chǎn)區(qū)動物實驗區(qū)32繁育生產(chǎn)區(qū)的設置：隔離檢疫室緩沖間育種室（保種室）擴大群飼育室生產(chǎn)群飼養(yǎng)室待發(fā)室清潔物品貯藏室清潔走廊污物走廊33動物實驗區(qū)的設置緩沖間獨立動物實驗室（應配有接受、檢疫室）實驗操作室（手術室、熱源室等）清潔物品貯藏室動物飼養(yǎng)室清潔走廊污物走廊34動物手術室動物檢查室35輔助區(qū)的設置倉庫洗消間廢棄物品存放處理間動物尸體冷藏存放間（冰箱）機械設備室（機房）淋浴間更衣、休息室等36洗消室一角37工作服洗滌/風干室潔凈走廊籠具自動清洗籠具消毒滅菌38實驗動物設施入口機房機房39動物尸體冷藏廢棄物收集動物籠具清洗物資倉庫40日本滋賀醫(yī)科大學實驗動物中心大動物廢棄物處理系統(tǒng)41其他設施設置屏障及隔離環(huán)境在壓力變化交界處設有緩沖裝置；生產(chǎn)與實驗區(qū)分開設置；放射性實驗按GB4792實施；烈性傳染病、致癌、劇毒等實驗應在負壓系統(tǒng)(P3/P4)或有防護的設備內(nèi)進行；“三廢”要無害化處理（焚燒爐）。42

（二）實驗動物設施環(huán)境1、實驗動物設施環(huán)境潔凈等級，分為三級，即：潔凈度5級（cleanlinessclass5）（1）352cp/m3≤大于/等于0.5μm的塵粒數(shù)≤3520cp/m3;（2）83cp/m3≤大于/等于1μm的塵粒數(shù)≤832cp/m3;（3）大于/等于5μm的塵粒數(shù)≤29cp/m3;潔凈度7級（cleanlinessclass7）：（1）35200cp/m3≤大于/等于0.5μm的塵粒數(shù)≤352000cp/m3;（2）8320cp/m3≤大于/等于1μm的塵粒數(shù)≤83200cp/m3;（3）293cp/m3≤大于/等于5μm的塵粒數(shù)≤2930cp/m3;潔凈度8級（cleanlinessclass7）：（1）352000cp/m3≤大于/等于0.5μm的塵粒數(shù)≤3520000cp/m3;（2）83200cp/m3≤大于/等于1μm的塵粒數(shù)≤832000cp/m3;（3）2930cp/m3≤大于/等于5μm的塵粒數(shù)≤29300cp/m3;43

2、實驗動物設施環(huán)境的分類：（1）根據(jù)空氣凈化的控制程度分為三類，即：

普通(開放)環(huán)境(opensystem):符合動物居住的基本要求；控制人員和物品、動物的出入；不能完全控制傳染因子；適用于飼育教學等用途的普通級實驗動物；該設施內(nèi)空氣與外界環(huán)境相通，但有必要的防野鼠、蚊蠅設施；潔凈等級未作要求。44普通(開放)環(huán)境(opensystem)示意圖45

屏障環(huán)境（Barriersystem）：符合動物居住的基本要求；嚴格控制人員、物品和空氣的進出：

（1）進入系統(tǒng)的空氣應經(jīng)過初、中、高效三級過濾；（2）進入設備的動物、飼料、水、墊料、實驗用品均需有嚴格的微生物控制；（3）人員須經(jīng)淋浴、更換滅菌服方可進入室內(nèi)。適用于飼育清潔級及無特定病原體(SPF)實驗動物；潔凈等級要求達到7級。46屏障環(huán)境設施平面布局屏障環(huán)境示意圖4748

隔離環(huán)境（Isolationsystem）：采用無菌隔離裝置以保證無菌狀態(tài)或無外來污染物;隔離裝置內(nèi)的空氣、飼料、水、墊料和設備均為無菌，動物和物料的動態(tài)傳遞須經(jīng)特殊的傳遞系統(tǒng);該系統(tǒng)既能保證與外環(huán)境的絕對隔離，又能滿足轉運動物時保持與內(nèi)環(huán)境的一致;該設施適用于飼育SPF、悉生及無菌動物；潔凈等級要求達到5級或7級。49排氣管進氣管隔離器隔離環(huán)境示意圖50

操作時：

工作人員只能通過隔離器上的橡膠手套進行操作；物品通過包裝消毒后，由滅菌渡艙或傳遞窗傳入；動物是經(jīng)由無菌剖腹產(chǎn)的方法進入；進入隔離器的空氣，應經(jīng)高效過濾，保證隔離器內(nèi)空氣潔凈度達5or7級，無菌并維持正壓狀態(tài)。51

改良的屏障設施

－－獨立供氣動物籠系統(tǒng)

（Independentventilationcage，IVC）

該系統(tǒng)采用具有先進水平的微型隔離技術，通過在籠子內(nèi)部輸送經(jīng)過高效過濾的空氣以保證動物免受微生物的污染，可以使動物生活在一個相對隔離的環(huán)境中。在普通環(huán)境下加IVC

就可成為一個清潔級的動物房。

52獨立供氣動物籠系統(tǒng)53

優(yōu)點：

投資低，日常維修及維持費用低。擺放方便自由，動物搬運方便、可靠。單組IVC可同時飼養(yǎng)多個品系動物,進行不同性質(zhì)的動物實驗，不會造成交叉污染，節(jié)省空間及能源。讓人與動物的環(huán)境很好地隔離開來，有效保護工作人員免受過敏源的侵害。適于飼養(yǎng)免疫缺陷動物、遺傳研究用動物及SPF動物.

54（2）按設施環(huán)境的平面布局分類：

無走廊式（NoCorridors）

優(yōu)點：可以最大限度的利用空間，用于飼養(yǎng)品種單一和以實驗為主的動物設施。

缺點：進出路線交叉，設施易受污染物影響。55單走廊式（SingleCorridor）

優(yōu)點：面積利用充分，為動物的生產(chǎn)、實驗提供最大空間；

缺點：無法將污染區(qū)和清潔區(qū)分隔開來，人流、物流交叉，易受到污染。56雙走廊式（DoubleCorridors）

最常用的一種屏障設施類型。優(yōu)點：可有效地分割清潔區(qū)和污物區(qū)，比較容易控制微生物的危害。缺點：是有效利用面積減小。57三走廊式（ThreeCorridors）

最理想的一種屏障設施。優(yōu)點：人、動物、物品進入有專門通道，可有效避免污物和潔凈物品交叉，人、物進出互不影響，可以大量長期飼養(yǎng)實驗動物；缺點：空間利用率低，而且投資大、維持費用高。58（3）按實驗動物設施環(huán)境內(nèi)氣流組織形式分類:亂流式：又稱非單向流潔凈室，是指氣流以不均勻的速度成不平行的流動，伴有回流或渦流的潔凈室?？梢揽克惋L氣流不斷稀釋室內(nèi)空氣，把室內(nèi)污濁氣體逐漸地排出。單向流式：氣流以均勻的截面速度，沿著平行流線以單一方向在整個室截面上通過的潔凈房間，又稱層流室或平行流室。

59頂送側排渦流或亂流垂直單向流60（三）實驗動物設施設備的分類1、動力設備：風機、空調(diào)機組、發(fā)電機、鍋爐、水泵;2、凈化設備：初、中、高級過濾器、傳遞窗、渡槽、高壓滅菌器、紫外線燈、噴霧器；3、實驗用設備：多種多樣；4、飼養(yǎng)設備：動物籠具(架)，盒，隔離器等。61電蒸汽鍋爐中央空調(diào)機組動力設備62傳遞窗渡槽雙扉高壓蒸汽滅菌器凈化設備63初效過濾器中效過濾箱凈化設備64飼養(yǎng)設備65四、實驗動物設施運行管理

（一）設施的人員配備：

設施內(nèi)工作人員應相對固定；設施內(nèi)工作人員應有具備一定專業(yè)知識；設施內(nèi)工作人員專業(yè)應齊全，如繁殖生產(chǎn)、實驗（手術）室管理、動物質(zhì)量監(jiān)測、機械設備管理和維修、后勤保障和清潔人員等。66

（二）飼料、飲水和墊料的管理飼料：動物飼料應符合其營養(yǎng)所需，生產(chǎn)、貯存時間不宜過長、防止霉變，應采取必要的通風、干燥以及防蚊蠅和野鼠措施；清潔級以上動物的飼料應按級別進行消毒或滅菌。飲水：水質(zhì)要求一般按生活飲用水衛(wèi)生標準的要求即可，飲用滅菌水或酸化滅菌水。墊料：應使用無毒、無異味、無油脂、吸濕性強、粉塵少的材料,經(jīng)消毒或滅菌后使用。67

1、空調(diào)凈化、消毒滅菌等設備的維護管理

空調(diào)凈化設備：是維持屏障設施內(nèi)環(huán)境的溫度、濕度、氣壓、風量、換氣次數(shù)和空氣潔凈度在一定范圍。過濾器的定期更換和空調(diào)凈化機組的定期維護保養(yǎng)對屏障設施的安全運行至關重要。一般更換時間：初效過濾器1-2次/周，中效過濾器1-2次/月，高效過濾器1次/年，空調(diào)凈化機組維修1~2次/年。（三）實驗動物設施（屏障環(huán)境）的運行管理68

消毒滅菌設備：包括真空高壓滅菌器和電蒸汽發(fā)生器，二者均為壓力容器，必須配備專職人員和進行定期的壓力部件的試驗，以保證設備的正常運轉。此外還必須設有傳遞倉、藥液渡槽。692、人員、物品進入屏障設施的程序（1）人員進出屏障設施的基本要求和程序所有進出人員應養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習慣；所有進出人員應養(yǎng)成隨手關門的好習慣，并能嚴格遵守“人員入室流程圖”所示的方向和要求單向流動；進入按以下順序，即：更衣-淋浴-更滅菌衣--潔凈走廊--動物實驗室-污染走廊--洗消室--更衣--外部。所有進出人員必須嚴格遵守屏障設施管理規(guī)定。70（2）物品進出屏障設施的基本要求

進入屏障設施內(nèi)的物品傳入方式：雙扉高壓蒸汽滅菌器：耐高壓蒸汽滅菌物品的滅菌。帶紫外線消毒的傳遞窗：不耐高溫高壓、不能藥液浸泡以及內(nèi)包裝已經(jīng)由高壓蒸汽、60CO輻照和環(huán)氧乙烷等滅菌方式滅菌過的物品的滅菌。盛滿消毒液的不銹鋼渡槽：不耐高溫高壓和不便于從傳遞窗傳入的物品的滅菌。71雙扉高壓蒸汽滅菌器傳遞窗渡槽淋浴器72引入的動物應為相應的等級；引進的動物需有明確的動物品種/系、性別、數(shù)量、出生日期和質(zhì)量合格證及遺傳背景資料等；動物到達后應先檢查運輸盒密封材料的完整性；驗收后，按以下順序?qū)游飩魅耄簞游?專用包裝盒)－傳遞窗－檢疫室－清潔走廊－飼育室或?qū)嶒炇遥?實驗后或生產(chǎn)供應)—(經(jīng)包裝)污染走廊—外部。（3）動物進出屏障設施的基本要求73屏障設施人員、物品、動物流程模式圖74

3、屏障設施啟用前的凈化程序除塵―天花、墻壁、地面、門窗、超凈工作臺內(nèi)外、工作車、飼養(yǎng)籠架等的徹底清潔和擦拭。藥液擦拭消毒―用不同濃度的消毒劑依次進行擦拭消毒，兩種消毒液之間應有一定的作用時間。噴霧消毒―用0.2％過氧乙酸對室內(nèi)空氣、設備內(nèi)外表面、飼養(yǎng)籠架等進行徹底噴霧消毒。熏蒸消毒：人員穿戴好防護服后，將

KMnO4和甲醛按比例混合，人員撤出屏障區(qū)后密封門，48小時后開啟送、排風機組，待藥味完全排盡后再進行微生物檢測，合格后即可正式投入使用，否則需重新凈化。75

4、動物運輸管理

動物運輸應符合安全和微生物控制等級要求。不同品種、品系和等級的動物不得混合裝運。動物運輸應配置專用車輛，專人負責，定期消毒、保潔，車輛應裝有空調(diào)設備。運輸籠具須經(jīng)消毒、滅菌后方可回收使用。76SPF級實驗動物運輸車動物運輸車內(nèi)部77

5、污物和動物尸體的處理

實驗動物設施內(nèi)的污物（如：動物糞尿）須經(jīng)無害化處理；動物飼料、墊料和動物尸體則需集中焚燒，實驗過程中偶發(fā)的個別動物死亡，需剖檢后放入雙層塑料袋內(nèi)凍存，積聚到一定數(shù)量后統(tǒng)一集中焚燒，切忌隨意丟棄，以免造成環(huán)境污染。78TakeARest!79五、實驗動物的法規(guī)與科學管理

當前世界各國都有不同的立法形式來管理實驗動物工作，以確保實驗動物質(zhì)量和動物實驗效果，從而保證科研成果水平和產(chǎn)品質(zhì)量。與實驗動物有關的法律條文，一般分兩類：一類是涉及實驗動物質(zhì)量和保護方面的，其目的是保障動物實驗取得可靠結果，另一類是涉及實驗動物進出口及運輸過程中，保護人類和其它動物或環(huán)境免遭動物危害和疾病污染。80（一）國家關于實驗動物主要管理法規(guī)及配套文件《實驗動物管理條例》(2號令)(國務院批準發(fā)布國家科委1988)《實驗動物質(zhì)量管理辦法》(科委、技監(jiān)局1997)《實驗動物許可證管理辦法》

（七部局2001）《實驗動物種子中心管理辦法》

(科技部1998)科技部條財司1998種實施細則》物種子中心引種、供《國家嚙齒類實驗動

科技部條財司1999種子問題的處理意見放過程中有關實驗動《關于當前許可證發(fā)

科技部條財司2000則》檢測機構技術審查準《省級實驗動物質(zhì)量

科技部條財司1999檢測機構審查細則》《省級實驗動物質(zhì)量《關于善待驗動物的指導性意見》《實驗動物出口審批辦法》81第四章實驗動物的應用第十九條

應用實驗動物應當根據(jù)不同的實驗目的，選用相應的合格實驗動物。申報科研課題和鑒定科研成果，應當把應用合格實驗動物作為基本條件。應用不合格實驗動物取得的檢定或者安全評價結果無效，所生產(chǎn)的制品不得使用。國家《實驗動物管理條例》82第二十條

供應用的實驗動物應當具備下列完整的資料：（一）品種、品系及亞系的確切名稱；（二）遺傳背景或其來源；（三）微生物檢測狀況；（四）合格證書；（五）飼育單位負責人簽名。無上述資料的實驗動物不得應用。83國家《實驗動物質(zhì)量管理辦法》

第三章規(guī)定：第九條實驗動物生產(chǎn)和使用，實行許可證制度。實驗動物生產(chǎn)和使用單位，必須取得許可證。實驗動物生產(chǎn)許可證適用于從事實驗動物繁育和商業(yè)性經(jīng)營的單位。實驗動物使用許可證適用于從事科研、藥品檢定、生物制品生產(chǎn)等動物實驗的單位。第十五條

取得許可證的實驗動物生產(chǎn)單位，必須對飼養(yǎng)、繁育的實驗動物按有關國家標準進行質(zhì)量檢測。出售時應提供合格證。84第十六條

實驗動物生產(chǎn)單位，供應或出售不合格實驗動物，或者合格證內(nèi)容填寫不實的，視情節(jié)輕重，可予以警告處分或吊銷許可證；給用戶造成嚴重后果的，應承擔經(jīng)濟和法律責任。第十七條

未取得實驗動物生產(chǎn)許可證的單位，一律不準飼育、繁育和經(jīng)營實驗動物。

未取得實驗動物使用許可證的單位，進行動物實驗和生產(chǎn)藥品和生物制品所使用的實驗動物，一律視為不合格。85第二章生產(chǎn)與使用管理（1）實驗動物的生產(chǎn)、使用實行許可管理制度。（第六條）（2）從事實驗動物生產(chǎn)的單位和個人，應當取得由省科技主管部門頒發(fā)的實驗動物生產(chǎn)許可證；使用實驗動物進行科學研究、實驗和檢測等活動的單位和個人，應當取得由省科技主管部門頒發(fā)的實驗動物使用許可證。（第七條）（3）申請實驗動物生產(chǎn)和使用許可證的單位和個人，符合相應申請條件的，由省科技主管部門頒發(fā)相應的生產(chǎn)、使用許可證。（第八、九條）《廣東省實驗動物管理條例》86第三章生產(chǎn)與使用規(guī)范（1）有生產(chǎn)許可證的單位和個人，對其提供的實驗動物應出具質(zhì)量合格證明；有使用許可證的單位和個人，對在其場所進行的動物實驗應出具動物實驗證明。（第十四條）（2）應用實驗動物進行醫(yī)療衛(wèi)生、藥品等科學研究、實驗、檢測等活動的，應當使用合格的實驗動物，并在有實驗動物使用許可證的場所內(nèi)進行相關活動。違反規(guī)定進行的科學研究、實驗、檢定、評價的結果無效，相關的科研項目不得驗收、鑒定、評獎?！稄V東省實驗動物管理條例》87第三章生產(chǎn)與使用規(guī)范

教學示教時使用實驗動物的，在保證安全的前提下，可在使用許可證規(guī)定以外的場所內(nèi)進行。

（第十五條）（3）運輸實驗動物時，使用的籠器具、運輸工具應當符合安全和微生物控制等級要求，不同品種、品系和等級的實驗動物不得混裝，保證實驗動物達到相應質(zhì)量等級。

（第十七條）（4）從國外引入實驗動物的，應持有供方提供的動物種系名稱、遺傳背景、質(zhì)量狀況及生物學特性等有關資料，依照《中華人民共和國進出境動植物檢疫法》規(guī)定辦理有關手續(xù)。

（第十八條）《廣東省實驗動物管理條例》88第四章生物安全與實驗動物福利（1）實驗動物發(fā)生傳染性疾病時，生產(chǎn)和使用單位及個人應及時隔離、報告等；當發(fā)生人畜共患病時，還應立即報告當?shù)丶部刂茩C構；發(fā)生重大動物疫情的，應當按照國家規(guī)定立即啟動突發(fā)重大動物疫情應急預案。

（第二十二條）（2）在實驗動物生產(chǎn)、使用過程中產(chǎn)生的廢棄物和動物尸體應經(jīng)無害化處理；產(chǎn)生的廢水、廢氣等應經(jīng)處理達標后排放。

（第二十三條）（3）鼓勵共享實驗動物的實驗數(shù)據(jù)和資源，倡導“3R”原則。（第二十七條）《廣東省實驗動物管理條例》89第四章生物安全與實驗動物福利（4）在生產(chǎn)、使用和運輸過程中應當維護實驗動物福利，不得虐待實驗動物；涉及實驗動物倫理與物種安全問題的，應當遵照有關規(guī)定，并符合國際慣例。

（第二十八、二十九條）（5）對動物進行手術時，應進行有效麻醉；需要處死動物時，應實施安死術。（第三十條）（6）開展動物實驗項目時，應制定保證實驗動物福利、符合實驗動物倫理要求的實驗方案；有條件的應當設立實驗動物福利倫理組織，對實驗方案進行審查，對實驗過程進行監(jiān)督管理。（第三十一條）《廣東省實驗動物管理條例》90

管理部門：學?？萍继?/p>

具體監(jiān)督和實施部門：學校實驗動物中心及學校實驗動物管理與倫理委員會

管理的具體內(nèi)容：

實驗設施的建設和使用情況；實驗動物管理法規(guī)的貫徹落實情況；

動物實驗的申請和倫理審查（相關表格）；實驗動物保障供應等。六、南方醫(yī)科大學實驗動物管理91第二部分實驗動物營養(yǎng)需要主要內(nèi)容實驗動物的營養(yǎng)和代謝實驗動物的營養(yǎng)需要實驗動物的飼料92一、實驗動物的營養(yǎng)和代謝93（一）實驗動物所需的營養(yǎng)素

營養(yǎng)素（nutrition）―指生物體為了維持生命而從外界以食物形式攝入的必需物質(zhì)。

實驗動物所需營養(yǎng)素的種類：

到目前為止已知動物機體所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)達50余種，其中最主要的可劃歸六大類，即：

Protein、Lipids、Carbohydrates、Mineral、Vitamin、Water。94水分無氮浸出物飼料中營養(yǎng)成分組成

飼料

干物質(zhì)無機物（粗灰分或礦物質(zhì)）有機物含氮化合物（粗蛋白質(zhì)）無氮化合物乙醚浸出物（粗脂肪）碳水化合物粗纖維95

其中：

作為能量來源：脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)；

作為身體構成成分：蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)；

調(diào)節(jié)身體功能：維生素、礦物質(zhì)。合理搭配這6類50余種營養(yǎng)物質(zhì)，可以滿足實驗動物的各種生理需要。96（一）蛋白質(zhì)（Protein）1、營養(yǎng)學作用：是生命活動的重要物質(zhì)基礎。構成體組織、體細胞的基本原料；

組成生命活性物質(zhì)的原料；

維持動物生命、生長、繁殖不可缺少的物質(zhì)。

97

一般來講，實驗動物體內(nèi)蛋白質(zhì)約占體重的15％～18％。蛋白質(zhì)缺乏可導致動物消化機能減退、生長發(fā)育受阻、繁殖性能下降等現(xiàn)象。因此，在設計動物飼料配方時，就必須充分考慮蛋白質(zhì)的供給量。982、消化與吸收：99

目前已知構成動物體蛋白的AA大約有20種。

其中：

必需氨基酸：動物體內(nèi)不能合成或合成數(shù)量滿足不了動物的需要，必須由飼料供給的氨基酸，稱之為essentialaminoacid（EAA）。即:賴AA

蛋AA

色AA

苯丙AA

亮AA

異亮AA

蘇AA

纈AA

組AA

精AA

100非必需氨基酸：動物體內(nèi)能夠合成，不依賴飼料供給的氨基酸,稱之nonessentialaminoacid

如：丙氨酸絲氨酸門冬氨酸谷氨酸酪氨酸胱氨酸甘氨酸等。

氨基酸平衡與氨基酸失衡

氨基酸平衡：是指日糧氨基酸組分之間的相對含量與動物機體氨基酸需要量之間比值較為一致的相互關系。101（二）脂類（Lipids）依結構的不同，可分為真脂肪和類脂肪兩大類:

真脂肪：是動物體內(nèi)的儲備脂類，又稱甘油三酯，是由1分子脂肪酸＋3分子甘油結合而成。依碳鏈中碳原子的結構不同，脂肪酸可分為：飽和脂肪酸(saturatedfattyacid)：含有—C-C—單鍵的脂肪酸。在室溫下呈固態(tài)，多為動物脂肪，如牛油、羊油、豬油等。102不飽和脂肪酸(unsaturatedfattyacid)：至少含有一個—C=C—雙鍵的脂肪酸。如：亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸（又稱必需脂肪酸）。一般認為，飽和脂肪酸可促進動脈粥樣硬化的發(fā)生，而不飽和脂肪酸可以預防動脈粥樣硬化的發(fā)生。103類脂肪：為動物體內(nèi)的組織脂類，主要包括磷脂、糖脂、固醇。

一般在以植物原料為主的飼料中，必需脂肪酸不易缺乏，故很少另外添加。

104

1、營養(yǎng)學作用:是動物體內(nèi)能量儲存和供應的主要形式，飼料中脂肪含量越高，動物體內(nèi)所含能值也越高。是構成動物組織的重要組成部分，如神經(jīng)、肌肉及血液等均含有脂肪。作為飼料中脂溶性V的溶劑，促進脂溶性V的的消化、吸收和利用。1052、消化與吸收：小腸1063、必需脂肪酸（Essential

Fatty

Acid

）缺乏癥：

是維持哺乳動物正常生長所必需的，而動物又不能合成的脂肪酸，如：亞油酸，亞麻酸。EFA主要來源于植物性飼料，如果飼料中EFA缺乏，可導致幼年動物生長受阻、繁殖性能低下、死亡，以及脂溶性V缺乏等。107（三）碳水化合物（carbohydrates）

是植物性飼料中含量最多的營養(yǎng)物，它主要由碳、氫、氧三種元素構成，包括糖、淀粉、纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等，通常在把碳水化合物分為粗纖維和可溶性碳水化合物（或稱無氮浸出物）兩大類。108粗纖維：由纖維素、半纖維素、多縮戊糖及鑲嵌物質(zhì)所組成，是飼料中最難消化的物質(zhì)。但它是兔、豚鼠等草食性動物卻是必不可少的，如粗纖維含量不足，可造成消化機能紊亂，產(chǎn)生消化道疾病等。

營養(yǎng)功能：（1）粗纖維容積大，吸水量大，且較難消化，可填充胃腸，使動物有飽感；（2）粗纖維對消化道粘膜有刺激作用，可促進胃腸的蠕動和糞便的排泄。109

可溶性碳水化合物:

是一類易溶解的物質(zhì)，包括單糖、雙糖和多糖等，是動物機體能量物質(zhì)的主要來源。

單糖：主要是葡萄糖、果糖、半乳糖。

雙糖：如蔗糖、乳糖等。

多糖：重要的多糖有：糖原、淀粉和纖維。110

1、營養(yǎng)學作用：是動物體內(nèi)能量的主要來源

供能：被消化吸收的葡萄糖大部分氧化分解產(chǎn)生熱能，以維持動物能量所需；貯能：葡萄糖另一部分則形成肝糖元和肌糖元貯存以備急需所用。

參與體內(nèi)生理功能調(diào)節(jié)（如體內(nèi)氧化）。是動物形成體脂肪和組織、器官的重要原料。

1112、消化與吸收：

在口/胃/小腸經(jīng)酶水解，由長鏈→短鏈→雙糖→單糖→由小腸吸收入血→肝臟代謝或被其它器官利用。112（四）礦物質(zhì)（mineral）

礦物質(zhì)在動物體內(nèi)含量很少(占體重的3-5%),是動物生長發(fā)育和繁殖等生命活動中不可缺少的一些金屬和非金屬元素，根據(jù)礦物質(zhì)在動物體內(nèi)含量不同分為：常量元素包括Ca、P、Na、Cl、S等（>BW0.01％）

微量元素包括Fe、Cu、I、Mn、Se等（<BW0.01％）1131、營養(yǎng)學作用：在動物體內(nèi)既不能合成也不能在代謝中消失，只能排泄于體外；含量少但對動物的生命活動卻很重要，是生命過程不可缺少的物質(zhì)。構成體組織、細胞的成分(如鈣、磷是構成骨骼的主要成分)等；對機體的各種生理過程起著重要作用(如鐵參與血液對氧的運送過程)；114維持滲透壓、酸堿平衡和神經(jīng)肌肉的興奮性(如鉀、鈉、氯參與細胞內(nèi)外滲透壓及機體酸堿平衡，鈉大量存在于肌肉中，使肌肉興奮性加強)；構成各種酶、激素、Vitamin、蛋白質(zhì)和核酸的成分等(如硒是谷胱甘肽過氧化物酶的主要成分)。2、缺乏癥：長期缺乏會導致各種缺乏癥，食用過多又會有害。

缺Ca:

幼畜佝僂病

缺Fe:

缺鐵性貧血

缺I:甲狀腺腫大缺Na:

動物發(fā)育遲緩115（五）維生素（vitamin）

1、概念：

為一組化學結構不同、營養(yǎng)作用和生理功能各異的一類微量低分子有機化合物。

2、分類：

脂溶性Vitamin:

VA、VD、VE、VK，可溶于脂肪和脂肪溶劑，不溶于水。116

維生素A

VA僅存在于動物體內(nèi)。在植物性飼料中含有胡蘿卜素(VA原)，當動物體吸收胡蘿卜素后在小腸中胡蘿卜素酶作用下轉化為VA

。

VA的功能：保護粘膜上皮、促進其生長，防治夜盲缺乏癥：干眼病117

維生素D

在動物營養(yǎng)中起重要作用的是VD2和VD3。

主要功能：

調(diào)節(jié)Ca/P代謝，促進Ca/P的吸收與骨骼的形成。缺乏癥：成年雌性動物骨質(zhì)疏松癥生長期動物軟骨病118

維生素E（又稱生育酚）

VE是一組有生物活性的、化學結構類似酚類的化合物（有α、β、γ、δ四種，以α-生育酚的活性最強）。生理功能:1）保持細胞和細胞內(nèi)部結構的完整；

2）VE具有很強的抗氧化功能；

3）VE與動物的生殖機能、免疫機能密切相關。

119水溶性Vitamin:

主要是VB、VC族，體內(nèi)不大量儲存，短時間缺乏或不足均會引起體內(nèi)某些酶活性的改變。

缺乏VC：壞血??；缺乏VB1：心血管紊亂

120維生素的生理功能、缺乏癥和來源維生素生理功能缺乏癥來源脂溶性維生素維生素A維持正常視覺，參與上皮細胞正常視覺損害、夜盲癥、上皮粗糙、肝臟、魚肝油、形成，促進生長發(fā)育角化、骨發(fā)育不良，生長遲緩蛋黃、牛奶

維生素D促進鈣吸收，與骨骼的形成有關軟骨病魚肝油、蛋、苜蓿干草維生素E與胚胎發(fā)育及繁殖有關，保持心血生殖系統(tǒng)損害，睪丸萎縮、肌油脂，如花生油、管系統(tǒng)結構功能的完整性肉麻痹、癱瘓、紅細胞溶血玉米油；綠色植物、蛋、魚肝油

水溶性維生素維生素B1參與糖代謝多發(fā)性神經(jīng)炎谷類、豆類、酵母

維生素B2參與生物氧化、晶狀體及角膜的呼生長停止、脫毛、白內(nèi)障、角麥麩、豆粉、吸過程，維護皮膚粘膜完整性膜血管新生動物內(nèi)臟

維生素C參與糖、蛋白質(zhì)代謝，參與膠原、壞血病新鮮蔬菜齒質(zhì)及骨細胞間質(zhì)生成121（六）水（water）

水的重要性僅次于氧氣，沒有水的存在，任何生命活動都無法進行；水是動物體內(nèi)含量最多的營養(yǎng)物質(zhì)之一（55％～80％），隨年齡的增長和體脂肪的沉積而下降。

水是生命之源122

動物體內(nèi)水分的來源和排出

動物所需水分的來源：外源水(飲水、飼料水);內(nèi)源水(代謝水)。

動物體內(nèi)水分的排出途徑：腎臟（尿）肺（呼吸）皮膚（蒸發(fā)）消化道（糞便）乳腺（乳汁）

123

營養(yǎng)學作用：水是動物機體不可缺少的構成成分。它參與體內(nèi)各種物質(zhì)代謝和體溫調(diào)節(jié)；它是體內(nèi)運送各種營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的載體;水是動物體的基本成分；水是一種潤滑劑。124實驗動物的飲水實驗動物的飲用水應符合衛(wèi)生部門頒發(fā)的人飲用水的質(zhì)量和衛(wèi)生指標。實驗動物飲用水應由新鮮、純凈的水源直接提供。微生物質(zhì)量等級不同的動物應供應與其級別相適應的飲用水，這些飲用水通常都采用高壓、過濾、酸化等滅菌處理措施。對于清潔級及其以上級別的實驗動物來說，其飲用水必須經(jīng)過高溫高壓滅菌處理。亦可應用酸化水（pH2.5-3.0）。125二、實驗動物的營養(yǎng)需要1、營養(yǎng)需要(nutrientrequirement)：為滿足動物維持正常生長和