CART培訓(xùn)課件講課資料

主講人:張爽2015-4-16CAR-T細(xì)胞治療的介紹目錄123456相關(guān)概念介紹文獻(xiàn)研究未來(lái)展望CAR結(jié)構(gòu)T細(xì)胞活化CAR-T細(xì)胞治療的流程

2.T細(xì)胞活化TCRCD3MHC共刺激因子細(xì)胞因子刺激CARCART細(xì)胞治療的思路承擔(dān)T細(xì)胞識(shí)別抗原的重任，結(jié)構(gòu)T細(xì)胞第一信號(hào)3.CAR結(jié)構(gòu)識(shí)別腫瘤表面抗原的單鏈抗體（scFv）抗原結(jié)合部和免疫受體酪氨酸活化基序構(gòu)成。目前,CAR的信號(hào)域已從第一代的單一信號(hào)分子發(fā)展為包含CD28、CD137等共刺激分子的多信號(hào)結(jié)構(gòu)域(第二、三代),臨床應(yīng)用廣泛。

嵌合抗原受體的演化第一代CAR：由識(shí)別腫瘤表面抗原的單鏈抗體（scFv）抗原結(jié)合部和免疫受體酪氨酸活化基序（通稱為CD3）組成。缺點(diǎn)：T細(xì)胞增值時(shí)間短，細(xì)胞因子分泌率低。第二代、第三代CAR：引入了共刺激的雙信號(hào)序列。目的：提高T細(xì)胞的細(xì)胞毒活性、增值性與存活時(shí)間、促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放。CAR-T細(xì)胞治療優(yōu)勢(shì)1.治療更精準(zhǔn)應(yīng)用基因修飾病人自體的T細(xì)胞，利用抗原抗體結(jié)合的機(jī)制，能克服腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，讓腫瘤細(xì)胞無(wú)所逃遁；

2.多靶向更精準(zhǔn)。CAR既可以利用腫瘤蛋白質(zhì)抗原，又可利用糖脂類非蛋白質(zhì)抗原，擴(kuò)大了腫瘤抗原靶點(diǎn)范圍。CAR-T細(xì)胞作用過(guò)程不受MHC的限制。3.殺瘤范圍更廣鑒于很多腫瘤細(xì)胞表達(dá)相同的腫瘤抗原，針對(duì)某一種腫瘤抗原的CAR基因構(gòu)建一旦完成，便可以被廣泛利用；

4.殺瘤效果更持久促進(jìn)T細(xì)胞增殖與活化的基因序列，能保證T細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)后還可以增殖。免疫記憶功能，可以長(zhǎng)期在體內(nèi)存活。

4.CAR-T細(xì)胞治療流程CAR-T細(xì)胞治療過(guò)程和自體骨髓干細(xì)胞移植相似(Annu.Rev.Med,2014)文獻(xiàn)介紹研究病人的基線特征

方法

自體T細(xì)胞結(jié)合CD19靶向的嵌合抗原受體慢病毒載體（CTL019）復(fù)發(fā)或難治性ALL患者(30名患者)(0.76×10^6-20.6×10^6CTL019cells/kg)免疫應(yīng)答毒性效應(yīng)擴(kuò)增數(shù)持久性CTL019Tcells注入檢測(cè)CTL019細(xì)胞生存率Figure1.圖A注入CTL019細(xì)胞后在6個(gè)月期間的無(wú)事件生存率為67%，完全生存率為78%

(TheNEWENGLANDJOURNALofMEDICINE,2014)CTL019細(xì)胞的持續(xù)性

Figure2.CTL019持久性圖A.：流式檢測(cè)外周血樣中CTL019-陽(yáng)性T細(xì)胞（1-25號(hào)兒童和26-30號(hào)成年人）圖B：通過(guò)Kaplan–Meiercurve曲線檢測(cè)外周血和骨髓，6個(gè)月時(shí)，患者獲得CTL019持續(xù)性的概率為68%(TheNEWENGLANDJOURNALofMEDICINE,2014)CTL019細(xì)胞的擴(kuò)增

Fig.2C通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)CTL019細(xì)胞在體內(nèi)增殖，并可在響應(yīng)患者的血液、骨髓和腦脊液中檢測(cè)到高水平的增值。(TheNEWENGLANDJOURNALofMEDICINE,2014)

不良反應(yīng)

Figure3.B細(xì)胞發(fā)育不全無(wú)復(fù)發(fā)患者B細(xì)胞發(fā)育不全的概率為73%。延遲性B細(xì)胞再生障礙

(TheNEWENGLANDJOURNALofMEDICINE,2014)不良反應(yīng)

Figure4.相關(guān)的細(xì)胞因子釋放癥CTL019細(xì)胞注入病人28天后，IL-6大量釋放。所有患者都有細(xì)胞因子釋放綜合癥，其中27%的患者癥狀較嚴(yán)重，這與輸注之前疾病負(fù)荷較高相關(guān)，這種癥狀經(jīng)抗白細(xì)胞介素6受體抗體——塔西單抗有效治愈。

(TheNEWENGLANDJOURNALofMEDICINE,2014)結(jié)論

嵌合抗原受體——抗CD19修飾的T細(xì)胞療法對(duì)治療復(fù)發(fā)和難治型ALL是有效的。研究中30位接受此類治療的急性淋巴細(xì)胞白血病病人中，有27位病人其癌癥跡象消失，完全緩解率達(dá)到90%,多數(shù)持續(xù)性長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月，6個(gè)月無(wú)癥狀生存率未67%，2例在腦脊液中檢測(cè)到腫瘤細(xì)胞的中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）疾病患者在CART治療后疾病消除，重要的是該組患者無(wú)復(fù)發(fā)。2.CTL019和高緩解率有關(guān)，即使是干細(xì)胞移植失敗的患者也有效。0201細(xì)胞因子風(fēng)暴T細(xì)胞在殺死其它細(xì)胞，會(huì)釋放很多細(xì)胞因子，炎癥反應(yīng)。由于CAR-T殺癌細(xì)胞太快，在局部產(chǎn)生超大量的細(xì)胞因子，如白介素6，引發(fā)起劇烈的免疫反應(yīng)。脫靶效應(yīng)CAR修飾的T細(xì)胞對(duì)靶抗原具有高親和力，識(shí)別并且結(jié)合這部分抗原，導(dǎo)致對(duì)正常組織的異常免疫反應(yīng)，造成器官損害。CAR-T療法的臨床風(fēng)險(xiǎn)誘人的應(yīng)用前景尋找其他分子靶點(diǎn)提高CAR有效性和安全性CAR修飾的T細(xì)胞腫瘤免疫治療理論上的優(yōu)勢(shì)和臨床前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果尋找腫瘤特異性抗原作為分子靶點(diǎn)和開發(fā)適合CA