微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用(2課時(shí))

微生物的培育與運(yùn)用考點(diǎn)1.微生物的分別與培育2.測(cè)定某種微生物的數(shù)量3.研討培育基對(duì)微生物的選擇作用4.討論微生物的利用主要技術(shù)：1.培育基的制備2.高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌3.倒平板操作4.平板劃線操作和稀釋涂布平板法5.運(yùn)用選擇培育基分別某種特定的微生物微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物特點(diǎn)：構(gòu)造都相當(dāng)簡(jiǎn)單,個(gè)體多數(shù)非常微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才干看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞構(gòu)造.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物根底知識(shí)歸納：自養(yǎng)型生物有什么共同特點(diǎn)？營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動(dòng)，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人及動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類。什么是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)？選擇培育基參與青霉素的培育基:分別酵母菌、霉菌等真菌參與高濃度食鹽的培育基:分別金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培育基:分別固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培育基:分別自養(yǎng)型微生物參與青霉素等抗生素的培育基:分別導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞參與氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培育基:分別雜交瘤細(xì)胞4.無(wú)菌技術(shù)消毒方法：〔1〕日常生活經(jīng)常用到的是消毒法；〔2〕對(duì)一些不耐高溫的液體，那么運(yùn)用消毒法〔3〕對(duì)接種室、接種箱或超凈任務(wù)臺(tái)首先噴灑等溶液以加強(qiáng)消毒效果，然后運(yùn)用進(jìn)展物理消毒?！?〕實(shí)驗(yàn)操作者的雙手運(yùn)用進(jìn)展消毒；〔5〕飲水水源用進(jìn)展消毒。煮沸巴氏石炭酸或煤酚皂紫外線酒精氯氣滅菌方法：〔1〕接種環(huán)、接種針、試管口等使滅菌法；〔2〕玻璃器皿、金屬器具等運(yùn)用法，所用器械是；〔3〕培育基、無(wú)菌水等運(yùn)用滅菌法，所用器械是?！?〕外表滅菌和空氣滅菌等運(yùn)用滅菌法，所用器械是。灼燒干熱滅菌箱干熱滅菌高壓蒸汽高壓蒸汽滅菌鍋?zhàn)贤饩€紫外燈小結(jié)：微生物實(shí)驗(yàn)室培育的根本操作程序1、器具的滅菌2、培育基的配制3、培育基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培育7、菌種的保管5.菌種的保管①暫時(shí)保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培育基上，在適宜的溫度下培育。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培育基上轉(zhuǎn)移到新穎的培育基上。②長(zhǎng)期保管的菌種，可以采用甘油管藏的方法。-20℃下保管1.〔09遼寧、寧夏卷〕〔1〕在大腸桿菌培育過(guò)程中，除思索營(yíng)養(yǎng)條件外，還要思索______、______和浸透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、構(gòu)造簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、______、_____________等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研討的實(shí)驗(yàn)資料。〔2〕在微生物培育操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培育基和培育皿進(jìn)展________〔消毒、滅菌〕；操作者的雙手需求進(jìn)展清洗和______；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其緣由是紫外線能使蛋白量變性，還能_____________________。

溫度酸堿度易培育生活周期短滅菌消毒損傷DNA的構(gòu)造

〔3〕假設(shè)用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)踐值，除應(yīng)嚴(yán)厲操作、多次反復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的_______。〔4〕通常，對(duì)獲得的純菌種還可以根據(jù)菌落的外形、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)展初步的____________。比例適宜鑒定(或分類)〔5〕培育大腸桿菌時(shí)，在接種前需求檢測(cè)培育基能否被污染。對(duì)于固體培育基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是__________________________________________________________________________________?！?〕假設(shè)用大腸桿菌進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用過(guò)的培育基及其培育物必需經(jīng)過(guò)_______處置后才干丟棄，以防止培育物的分散。將未接種的培育基(接種無(wú)菌水〕在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，察看培育基上能否有菌落產(chǎn)生.滅菌測(cè)定微生物數(shù)量的方法：1)直接計(jì)數(shù)法：最常用的顯微鏡直接計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、能察看微生物的形狀特征。缺陷：不能區(qū)分死菌和活菌；難以計(jì)數(shù)微小的細(xì)菌。普通用于純培育懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù)。6.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目2〕間接計(jì)數(shù)法：最常用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法運(yùn)用：統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基外表生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌?！擦粢狻常浩胀ㄟx擇菌落數(shù)在30-300的平板進(jìn)展記數(shù)。②操作：a、設(shè)置反復(fù)組：加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的壓服力和準(zhǔn)確性?？瞻讓?duì)照：指不做任何實(shí)驗(yàn)處置的對(duì)象組。對(duì)照的種類本身對(duì)照：指實(shí)驗(yàn)與對(duì)照在同一對(duì)象上進(jìn)展，即不另設(shè)對(duì)照組。如“植物細(xì)胞質(zhì)壁分別和復(fù)原〞實(shí)驗(yàn)，就是典型的本身對(duì)照。本身對(duì)照，方法簡(jiǎn)便，關(guān)鍵是要看清楚實(shí)驗(yàn)處置前后景象變化的差別，實(shí)驗(yàn)處置前的對(duì)象情況為對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)處置后的對(duì)象變化那么為實(shí)驗(yàn)組。條件對(duì)照：指雖給對(duì)象施以某種實(shí)驗(yàn)處置，但這種處置是作為對(duì)照意義的，或者說(shuō)這種處置不是實(shí)驗(yàn)假設(shè)所給定的實(shí)驗(yàn)變量意義的。例如，“動(dòng)物激素飼喂小動(dòng)物〞實(shí)驗(yàn)，采用等組實(shí)驗(yàn)法，其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案是：

甲組：飼喂甲狀腺激素〔實(shí)驗(yàn)組〕；

乙組：飼喂甲狀腺抑制劑〔條件對(duì)照組〕；

丙組：不飼喂藥劑〔空白對(duì)照組〕。

相互對(duì)照：指不另設(shè)對(duì)照組，而是幾個(gè)實(shí)驗(yàn)組相互對(duì)比對(duì)照.如：探求溫度對(duì)酶活性的影響b、對(duì)照原那么：判別培育基中能否有雜菌污染，將未接種的培育基同時(shí)進(jìn)展培育。判別選擇培育基能否具有挑選作用，對(duì)照培育基接種后培育察看菌落數(shù)目。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=〔C/V〕ⅹM2.1升水中大腸桿菌不得超越3個(gè)，即大腸桿菌指數(shù)不得大于3。某人在測(cè)定自來(lái)水中的大腸桿菌群時(shí)，先將5升自來(lái)水水樣濃縮至5毫升，然后各取濃縮水樣1毫升，涂布到4個(gè)培育皿中培育，4次培育后計(jì)數(shù)的菌落數(shù)分別是32、38、35、8。請(qǐng)回答以下問(wèn)題：(1)根據(jù)上述結(jié)果計(jì)算，被檢水樣大腸桿菌指數(shù)為，水樣(是、否)達(dá)標(biāo)。

35否微生物的分別〔一〕挑選菌株自然界挑選：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋覓。(如耐高溫的TaqDNA聚合酶)實(shí)驗(yàn)室挑選：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件〔包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等〕，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。

一、研討思緒選擇培育基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培育基。目的是從眾多微生物中分別所需求的微生物。1.原理：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，只需當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才干被植物利用。尿素細(xì)菌能合成脲酶，在脲酶的作用下尿素被分解成氨。

CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)脲酶實(shí)驗(yàn)方案分別挑選微生物的原理有利于目的菌株生長(zhǎng)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)人為條件微生物計(jì)數(shù)方法與原理稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法對(duì)照設(shè)置與反復(fù)設(shè)置實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)操作結(jié)果與分析土壤中尿素分解菌的分別與計(jì)數(shù)〔2〕實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)方案、資料器具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等?！?〕實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣

樣品系列稀釋

涂布平板與培育

察看并記錄結(jié)果菌落計(jì)數(shù)

閱讀思索3、土壤微生物主要分布在距地表的近土壤中，約為細(xì)菌。4、分別不同的微生物采用不同的，其緣由是，其目的是保證獲得的平板。細(xì)菌稀釋度為，放線菌稀釋度為，真菌稀釋度為。3～8cm中性70％～80％不同微生物在土壤中含量不同菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)104、105、106103、104、105102、103、104稀釋度5、培育不同微生物往往需求不同培育溫度。細(xì)菌普通在℃培育1～2d，放線菌普通在℃培育5～7d，霉菌普通在℃的溫度下培育3～4d。6、在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因而導(dǎo)致脫漏菌落的數(shù)目。

7、菌落的特征包括等方面。30～3725～2825～2824菌落數(shù)目穩(wěn)定培育時(shí)間缺乏外形、大小、隆起程度、顏色〔1〕對(duì)分別的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需求借助的方法。(2)在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反響中，細(xì)菌合成的將尿素分解成了。氨會(huì)使培育基的堿性，pH。因此，我們可以經(jīng)過(guò)檢測(cè)培育基變化來(lái)判別該化學(xué)反響能否發(fā)生。(3)在以為獨(dú)一氮源的培育基中參與指示劑。培育某種細(xì)菌后，假設(shè)pH升高，指示劑將變，闡明該細(xì)菌可以。

三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)生物化學(xué)脲酶氨加強(qiáng)升高pH尿素酚紅紅分解尿素

測(cè)定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾后，將濾膜放到培育基上培育，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)色，經(jīng)過(guò)記數(shù)得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。該實(shí)驗(yàn)中至少應(yīng)取個(gè)水樣。三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)伊紅美藍(lán)深紫三8.〔09安徽卷〕以下是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)〞實(shí)驗(yàn)操作的表達(dá)，其中錯(cuò)誤的選項(xiàng)是A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培育基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1ml，分別涂布于各組平板上C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，370C恒溫培育24-48小時(shí)D.確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)展計(jì)數(shù)D9.(09上海)〔9分〕氯苯化合物是重要的有機(jī)化工原料，緣由不易降解，會(huì)污染環(huán)境。某研討小組按照以下實(shí)驗(yàn)方案〔圖1〕挑選出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培育基配方如表1〔1〕配制Ⅱ號(hào)固體培育基時(shí)，除添加Ⅱ號(hào)液體培育基成分外，還應(yīng)添加1%的_______?！?〕培育基配制時(shí)，滅菌與調(diào)PH的先后順序是?！?〕從用途上來(lái)說(shuō)，Ⅰ號(hào)培育基和Ⅱ號(hào)培育基分別屬于_____培育基和______培育基。在Ⅱ號(hào)培育基中，為SP1菌提供氮源的成分是_______?！?〕在營(yíng)養(yǎng)缺乏或環(huán)境惡劣時(shí)，SP1的菌領(lǐng)會(huì)變成一個(gè)圓形的休眠體，這種休眠體被稱為_(kāi)________。

瓊脂先調(diào)pH，后滅菌普通選擇硝酸銨芽孢

〔4〕將SP1菌接種在含不同濃度氯苯的Ⅲ號(hào)培養(yǎng)液中培育，得到生長(zhǎng)曲線〔如圖2〕。從圖2可知SP1菌在____________培養(yǎng)條件下最早停頓生長(zhǎng)，其緣由是____________。20mg/L氯苯氯苯最早耗盡10.(09湛江一模)生物乙醇是以生物為原料消費(fèi)的可再生能源。我國(guó)利用農(nóng)作物廢棄物(秸稈)消費(fèi)乙醇，其技術(shù)流程為：纖維素酶解→酵母發(fā)酵→蒸餾→廢品。(1)纖維素酶的本錢能否下降，是能否實(shí)現(xiàn)乙醇工業(yè)化消費(fèi)的關(guān)鍵要素。纖維素酶可以從能分解纖維素的細(xì)菌培育液中提取。某同窗設(shè)計(jì)了如下分別土壤中纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣--選擇培育--梯度稀釋--鑒別培育。①最好選擇怎樣的環(huán)境采集土樣?

選擇纖維素豐富的土壤環(huán)境

②以下是一種培育基配方：纖維素粉5g、NaN031g、Na2HP04·7H201.2g、KH2P04O.9g、MgS04·7H20O.5g、KCl0.5g、酵母膏0.5g、水解酵素0.5g(蒸餾水定容到1.0mL)。該培育基可以添加樣品中纖維素分解菌的濃度，其原理是。培育基中纖維素是主要碳源，有利于纖維素分解菌生長(zhǎng)，同時(shí)抑制其他微生物生長(zhǎng)③為了鑒別纖維素分解菌和進(jìn)一步純化菌種，可以在鑒別培育基中參與染液，將挑選獲得的菌液稀釋后用法接種到鑒別培育基上，然后挑選產(chǎn)生的菌落作為菌種進(jìn)展擴(kuò)展培育。④纖維素分解菌培育液中的纖維素酶產(chǎn)量如何呢，可設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)