文案文件分類號(hào)mz12469udc

宮角組織中，閉合組極顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。TLR4基因在閉合型子宮蓄膿犬的子（P<0.01）。PRWBC數(shù)量、雌二醇及孕酮水平的升高。CHE為主，卵巢為持久黃體或卵巢囊腫。TLR2、TLR4、ER、PR關(guān)鍵詞：犬；子宮蓄膿；血液指標(biāo)；病理變化；Toll樣受體InfluenceofInfluenceofPyometraonHematology,TissueStructureandRelevantGenesofDogs'OvaryandUterinePyometraisacommonclinicalobstetricsdiseaseinelderlydogs.ItnotonlydamagesthereproductivesystembutalsocausesharmtootherorgansandevenleadstothedeathofthesickThecasesareinvestigatedandstudied,whichwerediagnosedinYangZhouUniversityAnimalHospitalfrom2012to2014.Therewere23caseswithopen-cervixpyometraand15caseswithclosed-cervixtypepyometra.18casesofhealthyfemaledogs,whichwereadministratedwithovariohysterectomyoperation,werestudiedasthecontrolgroup.Researchinvolvedthegeneralclinicalmaterialsofpyometra(ageofonset,species,bodytemperatureinthefirstconsultation,timebetweentheendofthelastestrusandonset,reproductivehistory,etc.),hematology,sexhormonechange,andthehistopathologicalandIHCchangesofuterinehorn,bodyandovary.ThegeneexpressionofTLR2,TLR4,ER-α,andPRinreproductivetissueaboveweredetectedbyqPCR.Theresultsoftheresearchareasfollows:Theaverageageofonsetofpyometrais8.63±2.95years.Theincidenceofthoseattheageofover7yearswasashighas84.21%.PomeraniansandPekingesemoreintendedtosufferthediseasewithmorbidityas23.68%and18.42%respectively.Thebodytemperatureofopen-cervixpyometraandclosed-cervixpyometrawere39.07±0.99℃and39.03±0.81℃respectivelyinthefirstdiagnosis.Mostofthesickdogsshowedsymptomsintwomonthsafterestrus.Inallthestatisticalcases,21.11%dogshavethereproductivehistory,whichwaslowerthanthatofthedogswithoutreproductivehistory.Peripheralbloodanduterineveinbloodwerecollectedtoconducthematologicalandserumsexhormonetests.Theresultsasfollows:Inclosed-cervixtypepyometragroup,thenumbers,includingleukocytes,monocytes,andneutrophilicgranulocytes,weresignificantlyhigherthanthatinthecontrolgroup(P<0.01).TheaverageMCVinthegroupofpyometrawaslowerthanthatinthecontrolgroupwithsignificantdifference(P<0.05).TheaverageMCVinthegroupofpyometrawaslowerthanthatinthecontrolgroupwithaextremelysignificantdifferenceThelevelofestrogeninperipheralanduterinebloodwereasfollows:Closed-cervixpyometragroupwaspyometragroupwashighest,otherwasopen-cervixpyometragourp,controlgroupwaslowest..Inserumoftheuterineblood,derivedfromclosed-cervixtypepyometragroup,thelevelofestrogenwasextremelysignificantlyhigherthanthatincontrolgroup(P<0.01).Changesofprogesteroneinperipheralbloodwassimilartothatinuterineblood,whichwassignificantlyhigherthancontrolgroup(P<0.05).Histopathologicalchangeoftheuterusandovaryofthedogswithpyometra:PyometrahappenedusuallywithCHE.Laminapropriaofuterinehornsthickenswithuterineglandsdilation.Theepitheliumoftheuterineglandswasdestroyedwhenextremelydilation,andthecavitiesofglandswerefilledwithleukocytesandsecretoryproteins.PlentyofWBCgatheredaroundtheendometriumsandsomeepithelialcellsdevelopednecrosisandshed.Congestionofbloodvesselinmuscularlayerwassometimesobserved.Theresultsofproteindetectionwereasfollows:ERexpressioninmuscularlayersofuterinebodyandovarywaslower,butincreasedinstromaofendometriumanduterinehornglands.PRexpressioninmuscularlayersofuterinehornandbodywaslower,butincreasedinendometriumandovary.TheexpressionofTLR2andTLR4inuterinebody,hornandovaryindogswithpyometrawerehigherthanthatincontrolgroup,butnosignificantdifferencewasobserved.Comparedwiththehealthydogs,therelativeexpressionofTLR2geneinovariantissueswassignificantlyhigherintheopen-cervixpyometragroup(P<0.05),andintheclose-cervixpyometragroupextremelysignificantlyincreased(P<0.01).Intheuterushorntissue,TLR2inclose-cervixpyometragroupwasextremelysignificantlyhigherthanthatinthecontrolgroup(P<0.01).TherelativeexpressionofTLR4geneinuterushornandovaryinclose-cervixpyometragroupwasextremelysignificantlyhigherthanthatincontrolgroup(P<0.01),andthatintheovaryofopengroupsignificantlyhigherthanthatincontrolgroup(P<0.05).TherelativeexpressionofER-αgeneinhornofuterusoftheopengroupwassignificantlyhigher(P<0.05)andthatinclose-cervixpyometragroupwasextremelysignificantlyhigher(P<0.01)thanthatincontrolgroup.TherelativeexpressionofPRgeneinuterinehornoftheopen-groupwassignificantlyhigher(P<0.05)andthatclose-cervixpyometragroupwassignificantlyhigher(P<0.01)thanthatincontrolConclusion:Inclinic,caninepyometramaycausetheincreaseoftheWBC,estradiolandprogesterone,andthedamageofrenalfunction.CHEwasobviousandoftenobservedpathologicalchange,andpersistentcorpusluteumorovariancystwerefoundintheovaries.VrelativeexpressionVrelativeexpressionofgeneandproteingeneexpressionofTLR2,TLR4,ER,andPRincreasedinthetwopyometragroupsinsomeextent.Keywords:Dog.pyometra.bloodindex.pathologicalchange.摘摘 目 符號(hào)說 文獻(xiàn)綜 母犬生殖器官的形態(tài)及功 解剖學(xué)結(jié) 組織學(xué)結(jié) 母犬生殖周期變化及相關(guān)激素的特 母犬的生殖周 雌激素和孕 犬子宮蓄膿的發(fā)病原 細(xì)菌感 年齡、發(fā)情周期的影 TOLL樣受 子宮蓄膿的臨床癥狀及病理變 臨床癥 生殖系統(tǒng)的病理變 其他臟器的病理變 診 臨床診 血常 超聲檢 X光檢 治療及預(yù) 保守治療及預(yù) 手術(shù)治療及預(yù) 目的及意 11.11.22341211.11.223412免疫組化法檢測組織中相關(guān)蛋白的表免疫組化法檢測組織中相關(guān)蛋白的表 免疫組化數(shù)據(jù)的采集及分 3結(jié) 子宮蓄膿病例的子宮和卵巢病理解剖學(xué)特 子宮和卵巢的病理組織學(xué)變 ER、PR、TLR4和TLR2的表 4討 TOLL樣受體在生殖器官的表達(dá)變 ER、PR在生殖器官的表達(dá)變 試驗(yàn)三患子宮蓄膿犬的生殖器官中ER、PR、TLR2及TLR4基因mRNA表達(dá)的研 1材 試驗(yàn)動(dòng) 主要儀 主要試 相關(guān)試劑的配 2方 樣品采 熒光定量PCR方法檢測相關(guān)基因的mRNA表 基因相對(duì)表達(dá)量的計(jì) 數(shù)據(jù)處 3結(jié) TLR2基因mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié) TLR4基因mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié) ER-α基因mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié) PR基因mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié) 4討 TOLL樣受體基因相對(duì)表達(dá)量的變 ER及PR基因相對(duì)表達(dá)量的變 全文結(jié) 參考文 致致 揚(yáng)州大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明和版權(quán)使用授權(quán) XCysticHyperplasiaofEndometriumCReactiveEstrogenHeat-Shock克Kynurenic2,3-LipoteichoicXCysticHyperplasiaofEndometriumCReactiveEstrogenHeat-Shock克Kynurenic2,3-LipoteichoicAcidMedroxyprogesteroneAcetatePathogenAssociatedMolecularPolymeraseChainRotatePerReverseTollLikeReceptorsTollLikeReceptorsReverseTollLikeReceptorsTollLikeReceptorsTumorNecrosisFactor-TollLikeUropathogenicVirulenceInsulin-LikeGrowth11母犬生殖器官的形態(tài)及功11母犬生殖器官的形態(tài)及功 解剖學(xué)結(jié)3mm左右的卵泡，而黃體期則為明顯的黃體隆起，當(dāng)進(jìn)入到乏情期又恢復(fù)到表面平滑的1~3cm處，右側(cè)卵巢則位于右側(cè)最后肋骨尾側(cè)，并1.2組織學(xué)結(jié)體細(xì)胞同樣也為具有分泌功能的單層柱狀上皮細(xì)胞[3]。子宮肌層是由內(nèi)環(huán)外縱的平滑肌2和閉鎖卵泡[6]2母犬2和閉鎖卵泡[6]2母犬生殖周期變化及相關(guān)激素的特2.1母犬的生殖周80[,]]49個(gè)月。這一時(shí)期平均會(huì)持續(xù)9天[10]。血液中雌二醇的濃度也從最初5~15pg/mL上升至最高峰母犬開始出現(xiàn)明顯的接受爬跨的行為，結(jié)束持續(xù)約7~13天的發(fā)情前期[11]。開始排卵。LH2ng/mL升5ng/mL時(shí)，開始排卵，排卵前卵泡已經(jīng)黃體化，此時(shí)卵泡中孕酮水平較高，且排出卵2個(gè)月[14]。在內(nèi)分泌水平上，體期持續(xù)很長一段時(shí)間，所以母犬的發(fā)情后期持續(xù)時(shí)間也很長[10]。LH值達(dá)到峰值之后的乏情期：乏情期指母犬的生殖器官處于休止?fàn)顟B(tài)。此時(shí)血液中孕酮濃度將低于1-3 雌3 雌激素和孕2.2.1雌二醇及其受體卵巢的卵泡膜及顆粒細(xì)胞是分泌雌激素的主要來源，其中活性最高的為雌二醇[18]80ER就已被科學(xué)家發(fā)現(xiàn)[19]ER-αER-β兩個(gè)亞ERE2ER量隨之下降[20]Vermeirsch[21]對(duì)60例健康犬的研究發(fā)現(xiàn)，子宮角內(nèi)ER-α表達(dá)量與血清孕酮水平呈負(fù)相關(guān)，且ER-α表達(dá)了基質(zhì)細(xì)胞在發(fā)情周期中的重要作用。而從發(fā)情前期至發(fā)情后期，卵巢中ER-α基因的mRNA表達(dá)量與血漿中E2水平呈正相關(guān)[21]。E2通過降低TLR3的信號(hào)級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)從而明顯抑制促炎性細(xì)胞因子及抗病毒細(xì)胞因子的達(dá)量的升高[24]ER-αTLR4信號(hào)通路負(fù)調(diào)控，促進(jìn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及炎2.2.2孕酮及其受體在免疫方面，孕酮發(fā)揮重要的作用。Leigh[26]等發(fā)現(xiàn)，孕酮通過上調(diào)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑4健康犬孕酮受體(progesteronereceptor，PR)在子宮內(nèi)膜和腺管上皮細(xì)胞、子宮基質(zhì)細(xì)4健康犬孕酮受體(progesteronereceptor，PR)在子宮內(nèi)膜和腺管上皮細(xì)胞、子宮基質(zhì)細(xì)刺激子宮時(shí)，PR有顯著的升高[19]。PR在組織內(nèi)的表達(dá)受到雌激素和孕酮的共同支配，其PR的表達(dá)量呈正相關(guān)。固有PR的表達(dá)在發(fā)情前期較高，隨著發(fā)情期的到來而下降，表達(dá)的降PR的表達(dá)量顯著高于腺體上皮細(xì)胞，說明了孕酮對(duì)于兩種上皮細(xì)胞的可能存在不同的3犬子宮蓄膿的發(fā)病原 細(xì)菌感Hagman[28]7084Hniques[2]33個(gè)毒力因子irulenceftors，V)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)這些菌株攜帶致病的毒力因子，這與犬子宮蓄膿的臨床癥狀及伴發(fā)的毒血癥或敗血癥的情況相吻合。與健康犬糞便中分離的菌株n3]3種以上的致腎盂腎炎毒力因子ropathogenicvirulencefactors，）的比例顯著高于健康犬組。UVF毒力基因可提高這些大腸桿菌菌株對(duì)于犬生殖道的侵襲性和致病uis[1]23 年齡、發(fā)情周期的影544544個(gè)月[34]，其中發(fā)病率最高的是在間情期前期。TLRs。TLRs可以特異性識(shí)別和結(jié)合病原相關(guān)分子模式（pathogenassociatedmolecular天然免疫的紐帶。越來越多的研究表明，TLRs在抗感染中產(chǎn)生重要的影響，特別是負(fù)反TLRs分為兩類：第一類在細(xì)胞表面表達(dá)（TLR1、2、4、5、610），它們主要識(shí)別從微生物衍生而來的化合物，第二類（TLR3、7、8和9）表達(dá)于胞內(nèi)，它們識(shí)別核酸及核苷酸類的衍生物[38]。在雌性家畜中，TLRs受體不僅參與排卵，受精，懷孕和[39]。在在在犬的整個(gè)發(fā)情周期中，Silva[41]TLR1-TLR7TLR9基因在子宮內(nèi)膜內(nèi)均有轉(zhuǎn)錄，說明TLRs介導(dǎo)的免疫監(jiān)視是犬子宮防御機(jī)制的重要組成之一。3.3.1Toll4（Tolllikereceptors4，TLR4）TLRs相關(guān)蛋白，分內(nèi)源性這兩種配體，其中外源性配體包括細(xì)胞內(nèi)毒素和革蘭氏陰性菌脂多糖熱休克蛋白60（heat-shockprotein60,Hsp60）Hsp70等[40]。Chotimanukul[44]等發(fā)現(xiàn)TLR4在不同發(fā)情周期的健康犬及子宮蓄膿犬的子宮角內(nèi)膜上TLR4在子宮內(nèi)膜上表達(dá)極顯著升高。TLR4表達(dá)量的升高可能與細(xì)菌入侵感染，犬子宮內(nèi)腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)的刺激下，子宮內(nèi)膜TLR466TLR4Toll2（Tolllikereceptors2，TLR2）可以識(shí)別革蘭氏陽性菌胞壁成分肽聚糖TLR2不僅僅在天然免疫中發(fā)揮重要的作用，也是連接天然免疫和獲得性免疫的關(guān)鍵點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)犬與人TLR2基因核苷酸同源性達(dá)到88%[48]。TLR2在機(jī)體免疫系統(tǒng)的第一線防疫中分布廣泛，單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和BTLR2+，外周血白細(xì)胞及脾臟中更是高水平的表達(dá)，在樹突細(xì)胞上也有TNF-αTNF-αLPS分別刺激下，子宮TLR2LPS后，Chen[46]等在兔子宮體和子宮角發(fā)TLR2的基因表達(dá)都有顯著上調(diào)。Silva[41]當(dāng)犬患有子宮蓄膿時(shí)，TLR2基因在子宮內(nèi)膜上的表達(dá)較間情期健康犬而言極顯著升高。TLR2表達(dá)量的升高可能與細(xì)菌入侵感染，4子宮蓄膿的臨床癥狀及病理變 臨床癥 生殖系統(tǒng)的病理變內(nèi)膜囊性增生（Cystichyperplasiaofendometrium,CHE），7CHE時(shí)，平滑肌及內(nèi)膜間基質(zhì)幾乎不可見，子宮腺體極度擴(kuò)張，腺體上皮細(xì)胞扁平化。 其他7CHE時(shí)，平滑肌及內(nèi)膜間基質(zhì)幾乎不可見，子宮腺體極度擴(kuò)張，腺體上皮細(xì)胞扁平化。 其他臟器的病理變縮、梗死、局限性出血、血管內(nèi)血栓等變化，而肝臟多表現(xiàn)為非特異性退行性炎性變化[53]5診 臨床診 血常8同時(shí)常見正色素性紅細(xì)胞貧血，紅細(xì)胞壓積范圍為21%~48%。8同時(shí)常見正色素性紅細(xì)胞貧血，紅細(xì)胞壓積范圍為21%~48%。 超聲檢 X光檢查也是診斷犬子宮蓄膿的方法之一。當(dāng)處于非孕期或未發(fā)生病變時(shí)，子宮在平40天時(shí)胎兒尚未骨化，子宮內(nèi)含有羊水等內(nèi)容物，在平片6治療及預(yù) 保守治療及預(yù)9Ros[67]9Ros[67]9年關(guān)于廣譜抗生素聯(lián)合前列腺素保守治療的回溯性研究中發(fā)現(xiàn)，675%（21/28）48%（10/21），平均復(fù)82.5（33/40[60]、76%(13/17)[61]82%(24/29)[64]。244.5年統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，年輕組（治療時(shí)小于五歲）63%（7/11）[68]。說明在一定的條件下，可以選擇保守治療來保持犬的繁殖能力。 手術(shù)治療往往可能并發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS）及多器官功能障礙綜合征（multipleorgandysfunctionsyndromeMODS）等，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致感染宮卵巢切除術(shù)(Ovariohysterectomy,OHE)療法的病例，死亡率低于3.3%[71]。由于并發(fā)癥與炎癥在施行OHE后并不少見，而且在早期通常很難與正常的術(shù)后恢復(fù)區(qū)分開來，因此需要借助炎癥標(biāo)志物進(jìn)行早期診斷。這些炎癥標(biāo)志物主要包括：C反應(yīng)蛋白（Creactiveprotein,CRP）、胰島素樣生長因子（Insulin-likegrowthfactor,IGF-1）、色KYNKYNA2,3-雙加氧酶（Indoleamine23-dioxygenase,IDO）等。研究比較健康犬絕育前后及子宮蓄膿犬卵巢子宮摘除前后的這些炎癥指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，在健康犬施行絕育術(shù)時(shí)，術(shù)后3天這10KYNA稍高外其余指標(biāo)都恢復(fù)正常[72]OHE的子宮蓄膿的病例中，IGF-13天起開始逐漸升高且高于術(shù)前，IGF-1的升高表明在施行OHE后炎癥情況有所好轉(zhuǎn)。D?browski[73]等在發(fā)生術(shù)后并發(fā)癥的病例中發(fā)現(xiàn)，CRP保持高水平，提示術(shù)后炎癥的發(fā)生。術(shù)后動(dòng)態(tài)監(jiān)測這些炎癥介7目的及意7目的及意1試驗(yàn)材 病例1試驗(yàn)材 病例來源及分開放型子宮蓄膿組及閉合型子宮蓄膿組：經(jīng)檢查確診為子宮蓄膿且無其他疾病的病犬。根據(jù)外陰是否有分泌物流出分為開放型和閉合型兩組。所有子宮蓄膿病例均經(jīng)臨床檢561823 主要儀器及試份有限公司）；酶標(biāo)儀(Biotek,USA）；恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；電美生物工程有限公司），移液器（EppendorfGermany）2試驗(yàn)方 犬基本情 血液樣本的采頭靜脈采集犬外周靜脈血，術(shù)中無菌采集子宮靜脈血，其中一部分置于5003730min，3500rpm10min，分離血清，-20℃保存。以備酶標(biāo)儀檢測：血清中雌激素（E2）和孕酮（P4）的含量 ELISA法檢測外周血中雌激素和孕酮的含標(biāo)準(zhǔn)品50μL，其余每個(gè)檢測孔直接加待測樣本50μL。3715min，觀察顯色情況，最后每孔加終止液50μL終止顯色?？譕D值。CurveExpert1.3 數(shù)據(jù)處3試驗(yàn)結(jié) 臨床病例基本情況統(tǒng)計(jì)分Table1-1StatisticsonageofOnsetofcanine23567891010222222111213432213001-138213歲均有發(fā)病。2歲發(fā)病的28.95%9~34.21%121Table1-1StatisticsonageofOnsetofcanine23567891010222222111213432213001-138213歲均有發(fā)病。2歲發(fā)病的28.95%9~34.21%1218.63±2.95Table1-2Breedsvarietiesofcaninepyometra加多斯吉雜喜雪品種西施博美京巴可卡松獅蘇牧德牧古牧314121111000000205150003111112519271114111112638623333333336西施及雜交犬發(fā)病率緊隨其后分別為13.16%10.53%。雪納瑞犬和吉娃娃犬發(fā)病率僅為Fig1-1TheinitialtreatmenttemperatureofcaninepyometraFig1-1Theinitialtreatmenttemperatureofcaninepyometra39.03±0.81Table1-3Thetimeintervalbetweenthelastestrustimeandtheonset間隔時(shí)間（天1127642352029025.26%0.5~21-4患子宮蓄膿犬的生育情生育情況（次0121-4患子宮蓄膿犬的生育情生育情況（次0123033250000根據(jù)表1-4統(tǒng)計(jì)得出，在本次試驗(yàn)收集43例子宮蓄膿病例中例總數(shù)78.89%。而余下有生育史的病例生1~2胎，并且生育時(shí)間與發(fā)病時(shí)間間年以上 試驗(yàn)犬血常規(guī)及血液生化指標(biāo)的測定結(jié)血液學(xué)檢查結(jié)1-2血液學(xué)白細(xì)胞的變A．犬血液白細(xì)胞計(jì)C．犬血液單核細(xì)胞計(jì)B．犬血液淋巴細(xì)胞計(jì)D．犬血液中性粒細(xì)胞計(jì)Fig1-2ThechangeofbloodwhiteA．TheamountofWBCinbloodofC．TheamountofmonocyteinbloodofB．TheamountoflymphocyteinbloodofD．Theamountofneutrophilinbloodof注：*表示與對(duì)照組相比，差異顯著（P<0.05）；**表示與對(duì)照組相比，差異極顯著（P<0.01），下同高于正常范圍。閉合組白細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)量均高于對(duì)照組且差異極顯著（P<0.01）。開放組白細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)量均1-31-3Fig1-3TheotherchangeofbloodroutineexaminationA．TheamountofRBCinbloodofC．CaninemeanplateletB．Caninebloodmeancorpuscular5.02±1.41（×1012/L），67.97±4.62（fL），相較于對(duì)照組差異顯著（P<0.05）；閉合組平均紅細(xì)胞容積最67.35±4.87（fL），顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；開放組與閉合組間沒有顯著差異。本試驗(yàn)中，對(duì)照組最低為7.10±0.62（fL）；開放組和閉合組平均血小板容積分別為1-4Fig1-4Fig1-4Changesofestrogenlevelin1-5Fig1-5Changesofprogesteronelevelin1-5中可以看出，子宮血及外周血中孕酮的含量從低至高依次為對(duì)照組、開放組及4討 犬品種與4討 犬品種與子宮蓄膿的關(guān) 發(fā)病年齡、生育史與子宮蓄膿的關(guān)1025%。在9187.95個(gè)月；對(duì)柯利犬、羅威那犬200例比格犬的追蹤調(diào)查，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)子宮蓄膿的平均發(fā)病年齡為9.36±0.38歲，4歲以上的發(fā)病率達(dá)20%Bigliardi及Dow的報(bào)道相吻合，說明生育可以降低子宮蓄膿疾病的發(fā)病率。 血液學(xué)變化與子宮蓄膿關(guān)錢存忠[79]、周偉偉錢存忠[79]、周偉偉[80]、D?browski[72]的研究中都發(fā)現(xiàn)子宮蓄膿犬的白細(xì)胞都相對(duì)健 發(fā)情周期與子宮蓄膿的關(guān)卵巢分泌的類固醇激素包括雌激素和孕酮，它們是調(diào)控母犬生殖周期的重要的性激有研究者發(fā)現(xiàn)對(duì)患有子宮蓄膿的母犬僅摘除卵巢后5~7天達(dá)到臨床恢復(fù)，并且在長達(dá)10時(shí)期甚至孕期發(fā)生[81]，但通常它發(fā)生于前一次發(fā)情開始后12周內(nèi)，平均時(shí)間間隔為5.710~35天下降到最低顯并保持至下一個(gè)發(fā)情周期，并且在子宮蓄 激素含量變化與子宮蓄膿的關(guān)孕酮往往是通過降低淋巴細(xì)胞的增殖能力抑制子宮的免疫反應(yīng)[85]Silva[86]等研究發(fā)現(xiàn)，處于發(fā)情后期的子宮蓄膿母犬血清孕酮的平均濃度忠[88]等一項(xiàng)對(duì)近80一項(xiàng)對(duì)近80只不同發(fā)情周期的子宮蓄膿犬和健康犬外周血血清雌二醇和孕酮含量的變化子宮蓄膿犬血清孕酮均處于高濃度[87]，這也與本試驗(yàn)的結(jié)果相類似1材 試驗(yàn)動(dòng) 主要儀1材 試驗(yàn)動(dòng) 主要儀（LeicaGermany（LeicaGermany 主要試兔抗-ER，兔抗-PR，DAB顯色劑（武漢博士德公司）；粘附防脫載玻片（江蘇世泰器材 相關(guān)試劑的配1004.5516.38NaH2PO4·2H2ONa2HPO4·12H0.01M0.01MpH=6.00.21AB液：枸櫞酸 1.47A9mLB41mL450mLApH6.05050501方2 樣品的采集和固及血液后，放入中性福爾馬林中固定，24h后，更換固定液。 沖洗、脫水和透70%酒精（過夜）80%酒精（3h）95%I（1.5h）95%II（1.5h）→無水織呈透明狀為止） 浸蠟與包需切面，完畢后放入–20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?切需切面，完畢后放入–20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?切片、烤架上，于恒溫干燥箱中602hHE染色及免疫組化染色。 組織切片染II→90%酒精（1min）80%酒精（1min）70%酒精（1min）（3min）→0.5%氨水返藍(lán)（1min）（30~50s）（3 免疫組化法檢測組織中相關(guān)蛋白的表10min；pH=6.0，0.01M99洗滌：同步驟滴加一抗：甩去多余的封閉液，不洗直接滴加（1:100稀釋）兔抗-ER（或兔4℃孵育過夜；洗滌：同步驟洗滌：同步驟DABDAB5~10min，鏡下觀察至出DABDAB5~10min，鏡下觀察至出2 免疫組化數(shù)據(jù)的采集及分3結(jié) 子宮蓄膿病例的子宮和卵巢病理解剖學(xué)特1例?；奸_放型子宮蓄膿犬，雙側(cè)子宮角擴(kuò)張程度小，一般直徑在1~8cm之間；而閉合型子宮蓄時(shí)可見一側(cè)卵巢為卵巢囊腫，另一側(cè)為卵巢萎縮（2-1）2-12-1Figure2-1TheanatomyofCanineuterusandA．B．Healthyuterusandovaryofcanine,uterusis“Y”type,thebodyandhornofuterineisnarrow,ovariansurfacesmoothlikesoybeans；C．D．Open-cervixpyometracanine’suterusandovary,bilateraluterinehorncanine’suterusandovary,extremeexpansionofbothluterinehornasausagelike,vesselangerrose,ovarianlobulationandpersistentcorpusluteum.子宮壁內(nèi)側(cè)布滿大小不一的透明囊泡（2-2）2-2子宮壁內(nèi)側(cè)布滿大小不一的透明囊泡（2-2）2-2Figure2-2anatomicstructureofcanineuterineA．B．Theuterinehornsofopencervix-pyometra,uterushornendometrialthickness,endometrialcystichyperplasia,somepartsbreakagehemorrhage；C．D．Theuterinehornsofclosed-cervixpyometra,hornofuterusthicknessslightly,theendometrialtherearealargenumberofcystichyperplasia. 子宮和卵巢的病理組織學(xué)變體腔體較小。子宮角及子宮體肌層完整，肌纖維排列緊密（2-3）程度的卵泡或黃體。卵巢皮質(zhì)較厚，血管豐富、結(jié)構(gòu)完整（2-3）2-32-3Figure2-3Histologyofnormalcanineuterusandovaryuterinehorn，endometrialcompleteandglandssmall,intactmuscularlayerclosely；D．Healthycanineuterusbody(4×),thecavityisnarrowandstructure；E．F．Healthycanineuterusbody(40×),endometrialcomplete,fewerglands,musclelayercompleteanddenselyarranged；G．Healthydogovary(4×),themajorityofovariancorpusluteum,ovariancortexisthin,fewfollicle；H．I．Healthydogovary(40×),lutealandfollicularofdifferentdevelopmentdegree.CHE的病例，常出現(xiàn)子宮內(nèi)膜固有層2-42-4Figure2-4Histologyofopen-cervixpyometracanineA．Open-cervixpyometrauterushorn(4×),endometrialdamage,glandexpansion；B．Open-cervixpyometrauterushorn(40×),alotofsecretionofuterinecavity,alargenumberofinflammatorycellsandredbloodcells；C．Open-cervixpyometrauterushorn(40×),dilatedglandwithsomeinflammatorycellsandsecretion；D．Open-cervixpyometrauterusbody(4×),glandsexpandedsignificantly,endometrialsheddingbreakage；E．Open-cervixpyometrauterusbody(40×),endometrialsheddingisincomplete；F．Open-cervixpyometrauterusbody(40×),glandepithelialcellsflatandfall,glandsextremelydilated.2-5Figure2-5Histologyofclosed-cervixpyometracanineA．Closed-cervixpyometrauterushorn(4×),uterinewallthinning,slightlydilatedglands；B．Closed-cervixpyometrauterushorn(40×),endometrialepithelialcellsheddingnecrosis,alargenumberofinflammatorycellsinthecavity；C．Closed-cervixpyometrauterushorn(40×),uterineglandexpansion,infiltrationofinflammatorycellsinstromaandglands；D．Closed-cervixpyometrauterusbody(4×),muscularlayerrelativelycompletewithcysticendometrialhyperplasia；E．Closed-cervixpyometrauterusbody(40×),glandsextremelydilated,glandularepitheliumflatandalmostlossofnormalcellstructure,inflammatorycellinfiltration；F．Closed-cervixpyometrauterusbody(40×),musclelayercomplete,musclefiberarrangedin列松散（2-4，2-5)。Figure3-6HistologyofpyometracanineatresiaCPyometraluteumDPyometra(4×),ovarianbranchleaf,ovariancortexfolliclesless；E．Pyometracanineovarian(40×),follicularatresia；F．PyometracanineovarianF．Pyometracanineovarian(40×),ovariancyst,cysthyperemiawithinflammatory ER、PR、TLR4TLR2的表表達(dá)（2-7）2-7ER、PR、TLR2和TLR4Figure2-7TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4ofnormalcanineuterinehornofTLR4innormalcanineuterinehorn(40×)．腺體及肌層低表達(dá)；ER在內(nèi)膜及腺體低表達(dá)，肌層高表達(dá)；PR在內(nèi)膜及腺體高表達(dá)，肌層低表達(dá)（2-8）。2-8ER、2-8ER、PR、TLR2和TLR4常絕育犬子宮體ER的表達(dá)(40×)；G．H．正常絕育犬子宮體PR的表達(dá)(40×)。Figure2-8TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4ofnormalcanineuterinebodyofTLR4innormalcanineuterinebody(40×)．在正常犬卵巢組織中，ER在卵泡及黃體內(nèi)低表達(dá)；PR在卵泡高表達(dá)，黃體低表達(dá)；TLR4在黃體及卵泡低表達(dá)（2-9）2-9ER、PR、TLR2和TLR4AER(40×)B．正常犬子卵巢PR的表達(dá)(40×)CTLR2(40×)；D．正常犬卵巢TLR4的表達(dá)(40×)Figure2-9TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4ofnormalcanineA．TheexpressionofERinnormalcanineovary(40×);B．TheexpressionofPRinnormalcanineovary(40×);C．TheexpressionofTLR2innormalcanineovary(40×);D．TheexpressionofTLR4innormalcanineovary圖2-10圖2-10開放型子宮蓄膿犬ER、PR、TLR2和TLR4子宮角的表達(dá)A．B．CER(40×)；D．E．F．開放型子宮蓄膿犬子宮角內(nèi)膜PR的表達(dá)(40×)；G．H．ITLR2的表達(dá)(40×)；J．K．L．開放型子宮蓄膿犬子宮角內(nèi)膜TLR4的表達(dá)(40×)。Figure2-10TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4inopen-cervixpyometrauterushornhorn(40×)；J．K．L．TheexpressionofTLR4inopen-cervixpyometrauterushorn(40×).在開放型子宮蓄膿犬的子宮角上，ER達(dá)；TLR4在內(nèi)膜和腺體上皮強(qiáng)表達(dá)，在肌層弱表達(dá)（圖2-10）。2-11開放型子宮蓄膿犬2-11開放型子宮蓄膿犬ER、PR、TLR2TLR4A．B．CER(40×)；D．E．FPR的表TLR4的表達(dá)(40×)。Figure2-11TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4inopen-cervixpyometrauterusbodyA．B．C．TheexpressionofERincanineuterusbodywithopencervix-pyometra(40×)；D．E．F．TheexpressionofPRincanineuterusbodywithopencervix-pyometra40×)；G．H．I．TheexpressionofTLR2withopencervix-pyometra(40×).在開放型子宮蓄膿犬子宮體的表達(dá)規(guī)律與子宮角相似，ER在內(nèi)膜上皮細(xì)胞弱表達(dá)，而在腺體及肌層不表達(dá)；PR在內(nèi)膜上皮細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)，腺體及肌層有表達(dá)；TLR22-12開放型子宮蓄膿犬ER、PR2-12開放型子宮蓄膿犬ER、PR、TLR2TLR4AER(40×)；BPR的表達(dá)(40×)；C．開放型子宮蓄膿犬卵巢TLR2的表達(dá)(40×)；D．開放型子宮蓄膿犬卵巢TLR4的表達(dá)(40×)。Figure2-12TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4inopen-cervixpyometraA．TheexpressionofERinopen-cervixpyometraovary(40×)；B．TheexpressionofPRinopen-cervixpyometraovary(40×)；C．TheexpressionofTLR2inopen-cervixpyometraovary(40×)；D．TheexpressionofTLR4inopen-cervixpyometraovary(40×).達(dá)；TLR2TLR4在卵泡內(nèi)高表達(dá)，黃體內(nèi)低表達(dá)（2-12）在閉合型蓄膿犬子宮角上，ER在腺體上皮細(xì)胞有表達(dá)，內(nèi)膜上皮及肌層不表達(dá)；PR在內(nèi)膜及腺體上皮細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)，在肌層弱表達(dá)；TLR2在內(nèi)膜上弱表達(dá)，腺體及肌層基本不表達(dá)；TLR4在內(nèi)膜、腺體上皮及肌層均強(qiáng)表達(dá)（圖2-12）。在閉合型蓄膿犬子宮體上，ER在內(nèi)膜及腺體上皮細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)，肌層弱表達(dá)；PR在內(nèi)在內(nèi)膜、腺體上皮及肌層均強(qiáng)表達(dá)（2-14）。在閉合型子宮蓄膿犬卵巢組織中，ER在卵泡及黃體內(nèi)幾乎不表達(dá)；PR較低（2-13）。圖2-12閉合型子宮蓄膿犬ER圖2-12閉合型子宮蓄膿犬ER、PR、TLR2和TLR4子宮角的表達(dá)A．B．CER(40×)；D．E．FPR的表TLR4的表達(dá)(40×)。Figure2-12TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4inclosed-cervixpyometrauterushornA．B．C．TheexpressionofERinclosed-cervixpyometrauterushorn40×)；D．E．F．Theexpressionofuterushorn(40×)；J．K．L．TheexpressionofTLR4inclosed-cervixpyometrauterushorn2-13閉合型子宮蓄膿犬ER、PR、TLR2、TLR4Figure2-13TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4inclosed-cervixpyometraA．TheexpressionofERinclosed-cervixpyometraovary(40×)；B．TheexpressionofPRinclosed-cervixofTLR4inclosed-cervixpyometraovary(40×).圖2-14閉合型子宮蓄膿犬ER、PR、TLR2和TLR4子宮體的表達(dá)A．B．CER(40×)；D．E．FPR的表達(dá)(40×)；G．H．ITLR2的表達(dá)(40×)；J．K．L．閉合型子宮蓄膿犬子宮體TLR4的表達(dá)(40×)。Figure2-14TheexpressionofER、PR、TLR2andTLR4inclosed-cervixpyometrauterusbodyA．B．C．TheexpressionofERinclosed-cervixpyometrauterusbody40×)；D．E．F．Theexpressionofuterusbody(40×)；J．K．L．TheexpressionofTLR4inclosed-cervixpyometrauterusbodyAER的平均陽性強(qiáng)度；BER的平均陽性強(qiáng)度；C．子宮體ERFigure2-15ERFigure2-15ERaveragepositiveexpressionintensityofcaninereproductiveA．ERaveragepositiveexpressionintensityinovary；B．ERaveragepositiveexpressionintensityinuterushorn；C．ERaveragepositiveexpressionintensityinuterusbody.ER的平均陽性表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)ER的表達(dá)量，三組ER表達(dá)高于健康犬。兩組子宮蓄膿組子ER表達(dá)量，在內(nèi)膜及腺體間質(zhì)中表達(dá)強(qiáng)于健康犬，并且腺體間質(zhì)表達(dá)更強(qiáng)，而在肌層的表達(dá)則表現(xiàn)為健康犬表達(dá)強(qiáng)度高于兩組子宮蓄膿犬。ER在子宮體肌層及內(nèi)膜中的均強(qiáng)于健康犬（2-15）。PR2-16犬生殖器官中PR2-16犬生殖器官中PRA．卵巢PR的平均陽性強(qiáng)度；B．子宮角PR的平均陽性強(qiáng)度；C．子宮體PRFigure2-16PRaveragepositiveexpressionintensityofcaninereproductiveA．PRaveragepositiveexpressionintensityinovary；B．PRaveragepositiveexpressionintensityinuterushorn；C．PRaveragepositiveexpressionintensityinuterusbody.達(dá)表現(xiàn)為兩組子宮蓄膿犬表達(dá)高于健康犬（2-16）。TLR22-17犬生殖器官中TLR22-17犬生殖器官中TLR2Figure2-17TLR2averagepositiveexpressionintensityofcaninereproductiveorgansA．TLR2averagepositiveexpressionintensityinovary；B．TLR2averagepositiveexpressionintensityinuterushorn；C．TLR2averagepositiveexpressionintensityinuterusbody.TLR2的平均陽性表達(dá)強(qiáng)度健康犬（2-17）。TLR4體三組表達(dá)強(qiáng)度無差異性；卵泡則表現(xiàn)為健康犬表達(dá)低于兩組子宮蓄膿。TLR42-18犬生殖器官中TLR4Figure2-18TLR4averagepositiveexpressionintensityofcaninereproductiveA．TLR4averagepositiveexpressionintensityinovary；B．TLR4averagepositiveexpressionintensityinuterushorn；C．TLR4averagepositiveexpressionintensityinuterusbody.4討 TOLL樣受體在生殖器官的表達(dá)變Toll樣受體是一種模式識(shí)別受體，能夠特異性的識(shí)別病原微生物進(jìn)化中的保守抗原分肽聚糖和胞壁酸（TLR2），脂多糖（TLR4），鞭毛（TLR5），單鏈病毒RNA（TLR7，TLRs廣泛存在于免疫系統(tǒng)，大量表達(dá)于各種上皮和內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成天然免疫的第一道TLRs的表達(dá)也隨之發(fā)生變化[41]。Silva[41]的研究發(fā)現(xiàn)，在健康犬的不同發(fā)情階段，TLR2TLR4均在子宮不同細(xì)胞上有廣泛表達(dá)，TLR2TLR4Silva[41]也驗(yàn)中三組試驗(yàn)組子宮角及子宮體的TLR2表達(dá)強(qiáng)度低于TLR4的結(jié)果相類似。肺炎克雷伯氏菌等是臨床上常被分離到的細(xì)菌，其中大腸桿菌分離率最高。TLR2TLR4TLR4受體在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞上的表達(dá)要強(qiáng)于TLR2，同時(shí)腺體上皮的表達(dá)也與內(nèi)膜上皮相似[41]TOLL受體表達(dá)強(qiáng)烈的部位都能觀察到淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)Chotimanukul[27]同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，在子宮蓄膿犬中，內(nèi)膜上皮細(xì)胞TLR4的表達(dá)最強(qiáng)，本試驗(yàn)在子宮蓄膿犬子宮體及子宮角中也表現(xiàn)為內(nèi)膜上皮細(xì)胞TLR4的表達(dá)最強(qiáng)。 ER、PR在生殖器官的表達(dá)變Vermeirsch[21]通過免疫組化染色法在正常犬子宮角和子宮體的內(nèi)膜上皮細(xì)胞、腺顯高于腺體內(nèi)膜細(xì)胞。與此同時(shí)，發(fā)情后期及乏情期內(nèi)膜上皮及基質(zhì)的顯高于腺體內(nèi)膜細(xì)胞。與此同時(shí)，發(fā)情后期及乏情期內(nèi)膜上皮及基質(zhì)的PR表達(dá)強(qiáng)度的升高[27]PR表達(dá)強(qiáng)度的升高及子宮免疫力的下降，PRER的表達(dá)強(qiáng)度與血清孕酮含量也呈負(fù)相關(guān)，通常子宮角的ER在發(fā)情前期表達(dá)最高，隨后迅速下降并在發(fā)情后期保持低表達(dá)強(qiáng)度。子宮體的情況與子宮角相反，它在發(fā)情期及發(fā)情后期有較高的ER表達(dá)強(qiáng)處于發(fā)情后期或乏情期的子宮蓄膿犬不論是否伴有CHE都表現(xiàn)出相似的病理學(xué)變化。ERER的表達(dá)水平較低，但是當(dāng)發(fā)生CHE時(shí)，其對(duì)雌激素的敏感性增加導(dǎo)致子宮腺體的不斷增生生長。正常犬ER表達(dá)與血清孕酮含量呈負(fù)相關(guān)，子宮蓄膿犬缺乏這樣調(diào)節(jié)機(jī)制，說明子宮ER水平表達(dá)調(diào)節(jié)的異?？赡芘c子宮蓄膿的發(fā)病有關(guān)[98]CHEERPR的表達(dá)并不相似[99]病犬子宮角PR表達(dá)強(qiáng)度的變化表現(xiàn)為除內(nèi)膜上皮細(xì)胞外，子宮蓄膿犬的表達(dá)強(qiáng)于正常PR表達(dá)強(qiáng)度的增強(qiáng)使得子宮腺體分泌增加，更多的粘液蓄積在子宮腔內(nèi)，可以觀察到CHE的發(fā)生[100]，受體功能的異?？赡懿攀菍?dǎo)致CHE產(chǎn)生的直接原因[98]。本試驗(yàn)中兩組子宮蓄膿病例的子宮角及子宮體基質(zhì)腺體細(xì)胞ER表達(dá)水平高于健康TLRsTLRs受體是先天性免疫的重要組成部分，對(duì)子宮抵御致病微生物產(chǎn)生重要的影響。1材,USA）；Milli-QAcademic超純水系統(tǒng)（MerckMilliporeUSA）；NanoDrop2000分光光度計(jì)(ThermoFisherScientificUSA)；ABI7500PCR儀(AppliedBiosystems,DPC（大連寶生物有限公司）；氯仿，異丙醇（中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司（上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司Aaroseriz（南京生興生物公司；w（賽百威公司ADAMark生物有限公司）。1.4相關(guān)試劑的配0.1%RNAEDTA-Na2·2H12118.6,EDTA-Na2·2H12118.6,2方 樣品采稱重后放入無RNA酶的凍存管中，立即投入液氮內(nèi)速凍，以備后續(xù)處理。 熒光定量PCR方法檢測相關(guān)基因的mRNA表引物序列（5ˊtoF:TGTCCCCACCCCCAATGTATCR:CTCCGATGCCTGCTTCACTACCTTF:AGTGGCCAGAAAAGCTGAAAR:ATCCAGTTGCTCCTTCGAGAF:CAAAATCCCCAACAACATCCR:TGGTTTAGGCCCTGATATGCF:GGGGAGGGCAGGAATGAAGTR:AGGGACAAGGCTGGGCTGTTF:TGATTCAGATGCCAGCCAGAGR:GGACCATGCCAGCCTGACER-2.2.2RNA100mg1mLTrizol5~10min4℃，12000g5min15~10min4℃，12000g5min1mLTrizol0.2mL412000g15min1.5mL1mLTrizol0.5mL30s，然后置于冰盒上靜置10min。412000g10minRNA1(8)小心棄去上清液，然后置于冰盒上或真空干燥min，注意不要干燥過分，cDNA合成200μLRNAEP試使用gDNAEraserRNaseFree211upto10(2)反轉(zhuǎn)錄反試使用5×PrimeScriptRBuffer2PrimeScriptRRTPrimerDNA基因組去除反應(yīng)RNaseFree41110upto20反應(yīng)溫度:3715min；85 5s；4PCR體積反應(yīng)溫度:3715min；85 5s；4PCR體積SYBRPremixExTaqTMROXReferenceDyeIIDN40基因相對(duì)表達(dá)量的計(jì)CtCt平均值)—(Ct 數(shù)據(jù)處3結(jié) TLR2基因3結(jié) TLR2基因mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié)3-1TLR2基因相對(duì)表達(dá)量對(duì)照組最低，子宮蓄膿開放組顯TLR2相對(duì)表達(dá)量的變化與卵巢組織相似，但僅閉合組極顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。TLR2基因相對(duì)表達(dá)的變化為子宮蓄膿開放組最高，對(duì)照組次之，子宮蓄膿Figure3-1TherelativeexpressionofTLR2geneinthereproductive TLR4基因mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié)TLR4基因相對(duì)表達(dá)量在不同生殖器官組織內(nèi)變化不盡相同。子宮角及卵巢組織中TLR4的基因相對(duì)表達(dá)均表現(xiàn)為對(duì)照組表達(dá)量最低，開放型子宮蓄膿組稍高，閉合型子宮蓄組表達(dá)均極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），且在卵巢組織中開放組的表達(dá)較對(duì)照組顯著降低（P<0.05）對(duì)照組表達(dá)量最低，但三組之間沒有顯著差異（FigureFigure3-2TherelativeexpressionofTLR4geneinthereproductive ER-α基因mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié)ER-α基因相對(duì)表達(dá)量的變化表現(xiàn)為子宮蓄膿開放組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），子宮蓄膿組表達(dá)最低?？傮w而言，閉合型子宮蓄膿組各組織中ER-α基因相對(duì)表達(dá)量均處于相對(duì)較Figure3-3TherelativeexpressionofER-αFigure3-3TherelativeexpressionofER-αgeneinthereproductivemRNA相對(duì)表達(dá)量檢測結(jié)3-4生殖器官中PRFigure3-4TherelativeexpressionofPRgeneinthereproductive子宮角組織中PR基因相對(duì)表達(dá)量表現(xiàn)為開放型子宮蓄膿組較對(duì)照組顯著升高（P<0.05），閉合型子宮蓄膿組較對(duì)照組極顯著升高（P<0.01）PR基因相對(duì)PR基因相對(duì)表達(dá)量變化不大。總體而言閉合型子宮蓄膿組生殖器官中PR基因相對(duì)表達(dá)量較高（圖3-4）。4討 TOLL樣受體基因相對(duì)表達(dá)量的變Silva[41]TLR1-TLR7TLR9TLRs介導(dǎo)的免疫監(jiān)在正常犬的發(fā)情周期中，Silva[86]TLR2TLR4在子宮角內(nèi)膜上均表現(xiàn)在發(fā)情后期TLR2TLR4Schaefer[103]及Davies[104]在人類的月經(jīng)周期及牛的發(fā)情期中均發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)存在TLR1-10基因的轉(zhuǎn)錄，這提示了子宮內(nèi)炎癥可能激活這些基因的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄。TOLLLPSTLR2、4受體識(shí)別。Chen[46]通過LPSTLR2基因的相對(duì)表達(dá)量在輸卵管、子宮角與子宮體表達(dá)升高，而TLR4基因的相對(duì)表達(dá)量在卵巢、子宮角和子宮體有所升高。生殖系統(tǒng)中TLR2、4的表達(dá)變化顯示，具有同源性或者解剖位置相近的器官組織中可能具有類似的TLRs表達(dá)模式。SIRS[106]TLR4TLR2及TLR4的激活產(chǎn)生了一系列的細(xì)胞因子參與調(diào)控子宮的特異及非特異性免疫反應(yīng)。而在子宮蓄膿病例中，TLR2TLR4的高水平表達(dá)可能產(chǎn)生過量的細(xì)胞調(diào)控因子導(dǎo)致嚴(yán)重的全試驗(yàn)中TLR2、4的表達(dá)變化與Chen[46]、Silva[86]及之前的研究結(jié)果相類似。整體而言表TLR4TLR2的表達(dá)，這可能是由 ERPR基因相對(duì)表達(dá)量的變mRNA表達(dá)量也隨之增加。在卵巢組織中，ER-α的基因相對(duì)表達(dá)量從發(fā)情前期至發(fā)ER-α基因的相對(duì)表達(dá)量相對(duì)較低，這一變化與Blendinger[107]的研究相類似。PRER的表達(dá)水平則與子PR相對(duì)表達(dá)量閉合型子宮蓄膿犬和京巴犬為本試驗(yàn)中的高發(fā)品種；子宮蓄膿犬初次就診體溫均高于39℃；大部分病例發(fā)病是在發(fā)情之后2個(gè)月內(nèi)；有生育史的犬占總發(fā)病數(shù)的21.11%?；甲訉m蓄膿犬白細(xì)胞、孕酮及TLR2TLR4ER、PR陽ER-α、PR、TLR2參考文包玉清.寵物解剖及組織胚胎參考文包玉清.寵物解剖及組織胚胎[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社2008159-王鋒.動(dòng)物繁殖學(xué)實(shí)驗(yàn)教程[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社2006.4,5,安鐵沫.犬解剖學(xué)[M].吉林:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,2003.81-朱坤熹主編.獸醫(yī)病理解剖學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000.218-董長生.家畜解剖學(xué)[M].第三版.北京:中國農(nóng)業(yè)出社2001.314-趙興緒.獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)[M]北京:中國農(nóng)業(yè)出版社2008.90-HoffmannB,RiesenbeckA,KleinR.Reproductiveendocrinologyofbitches[J].AnimalReproductionScience,1996,42(1–4):275-288.范泉水,齊桂鳳,陸明昌.犬的發(fā)情周期及最佳受孕時(shí)間[J].云南畜牧獸醫(yī)(4):16-ConcannonPW.Reproductivecyclesofthedomesticbitch[J].AnimalReproductionScience,2011,124(3–4):200-210.邢華.創(chuàng)建轉(zhuǎn)基因犬的相關(guān)基礎(chǔ)研究[D].揚(yáng)州大學(xué)李厚達(dá).實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)(第二版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社2003:265-秦清明,程浩,周勁松等.犬發(fā)情周期的人工模擬和陰道細(xì)胞觀察[J].中國獸醫(yī)雜志,2010,46(4):33-34.王新蕾,邵義祥,高瑞霖,王鵬.自然發(fā)情母犬的雌孕激素變化規(guī)律初探[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2008,18(2):28-31.張洪海,馬承寶,劉國世,賈麗玲,張生.犬科動(dòng)物繁殖生物技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國畜牧雜志,2005,12:54-57.OkkensAC,KooistraHS.Anoestrusinthedog:afascinatingstory[J].ReproductioninDomesticAnimals(Print),2006,41(4),291-296.Po-yinChu,C.S.Lee,P.J.Wright.Degenerationandapoptosisofendometrialcellsinthebitch[J].Theriogenology,2006,66(6-7),1545-1549.MhyreAJ,DorsaDM.Estrogenactivatesrapidsignalinginthebrain:RoleofestrogenreceptorαandestrogenreceptorβinneuronsandGLIA[J].Neuroscience,2006,138,GreenS,WlaterP,KumarV,etal.HumanoestrogenreceptorcDNA:sequence,andhomologyandhomologytoV-erb-A[J].Nature,1986,320,134-[20]LesseyBA,WahawisanR,GorellTA.Hormonalregulationofcytoplasmicestrogenandprogesteronereceptorsinthebeagleuterusandoviduct[J].MolecularandCellularEndocrinology,1981,21(2),171-180.[21]HVermeirsch,PSimoens,HLauwers,etal.Immunohistochemicaldetectionofestrogenreceptorsinthecanineuterusandtheirrelationtosexsteroidhormonelevels[J].Theriogenology,1999,514,42-SilvaLD,OnclinK,VerstegenJP.Cervicalopeninginrelationtoprogesteroneandoestradiolduringheatinbeaglebitches[J].Journalofreproductionandfertility,1995,104,LesmeisterMargaretJ,JorgensonRebeccaL,YoungStevenL,etal.17Beta-estradiolsuppressesTLR3-inducedcytokineandchemokineproductioninendometrialepithelialcells[J].ReproductiveBiologyandEndocrinology,2005,3,74.RettewJenniferA,HuetYvetteM,MarriottIan.EstrogensaugmentcellsurfaceTLR4expressiononmurinemacrophagesandregulatesepsissusceptibilityinvivo[J].Endocrinology,2009,150(8),3877-3884.CalippeBertrand,Douin-EchinardVictorine,DelpyLaurent,etal.17Beta-estradiolpromotesTLR4-triggeredproinflammatorymediatorproductionthroughdirectestrogenreceptoralphasignalinginmacrophagesinvivo[J].JournalofImmunology,2010,185(2),JonesLeighA,AnthonyJean-Paul,HenriquezFionaL,etal.Toll-likereceptor-4-mediatedmacrophageactivationisdifferentiallyregulatedbyprogesteroneviatheglucocorticoidandprogesteronereceptors[J].Immunology,2008,125(1):59-69.[27]H.Vermeirsch,P.Simoens,A.Hellemans,etal.Immunohistochemicaldetectionofprogesteronereceptorsinthecanineuterusandtheirrelationtosexsteroidhormonelevels[J].Theri