原子吸收光譜法測(cè)定全血中微量元素

原子吸收光譜法測(cè)定全血中微量元素

人體含有各種必要的、不需要的和有害的微金屬元素。準(zhǔn)確檢測(cè)這些微量元素,有利于控制人體體液的離子平衡,保障身體健康,指導(dǎo)人們的膳食結(jié)構(gòu)。檢測(cè)人體內(nèi)微量元素的樣本可以是唾液、體液、尿液、血液、頭發(fā)和組織器官。血液樣本能全面反映人體內(nèi)微量元素含量情況,取樣方便,已成為檢測(cè)人體內(nèi)微量元素最主要的樣本。微波消解樣品快速、完全、元素?zé)o揮發(fā)性損失、玷污小,目前在分析領(lǐng)域越來(lái)越受到重視和應(yīng)用。本文采用微波消解全血樣,消解液定容至一定體積后直接上機(jī)火焰法測(cè)銅、鋅;消解液稀釋20倍后上機(jī)火焰法測(cè)鐵、鎂;消解液用25g/L鑭溶液稀釋5倍后上機(jī)火焰法測(cè)鈣;消解液直接上機(jī)石墨爐法測(cè)鉛;消解液稀釋10倍后上機(jī)石墨爐法測(cè)鎘,用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。結(jié)果滿意。1材料和方法1.1銅的氧化預(yù)處理AA6800原子吸收光譜儀(日本島津),附ASC6100自動(dòng)進(jìn)樣器;MK-Ⅱ型壓力自控微波溶樣系統(tǒng)(上海新科微波技術(shù)研究所);旋轉(zhuǎn)振蕩器;1000mlGILSON微量移液器。鑭溶液(25g/L):稱取氧化鑭25g,加75ml鹽酸于1L容量瓶中,用去離子水定容。磷酸二氫銨(20g/L):稱取磷酸二氫銨20g,以水溶解稀釋至1000ml。必要時(shí)用氨水(1+1)和鹽酸(1+1)調(diào)節(jié)pH值,用二硫腙去除磷酸二氫銨液中殘留的鉛。鐵、鋅、鈣、鎂、銅、鉛和鎘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.00mg/ml):由北京標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究所購(gòu)得。硝酸(1%,v/v)。水為重蒸去離子水,硝酸為工藝超純,其它試劑為優(yōu)級(jí)純。1.2顯示工作條件1.2.1火焰法測(cè)定見(jiàn)表1。1.2.2石墨法測(cè)定1.2.2.峰面積積分測(cè)定測(cè)定波長(zhǎng)283.3nm,燈電流10mA,光譜通帶1.0nm,氬氣作保護(hù)氣,峰面積積分測(cè)定,氘燈扣背景。石墨爐升溫程序:干燥110℃,斜坡升溫20s,保持10s;灰化850℃,斜坡升溫25s,保持15s;原子化1550℃,瞬間升溫,保持2s;去殘2100℃,瞬間升溫,保持2s。原子化時(shí)停氣。1.2.2.峰面積積分測(cè)定測(cè)定波長(zhǎng)228.8nm,燈電流8mA,光譜通帶1.0nm,氬氣作保護(hù)氣,峰面積積分測(cè)定,氘燈扣背景。石墨爐升溫程序:干燥110℃,斜坡升溫20s,保持5s;灰化700℃,斜坡升溫20s,保持13s;原子化1500℃,瞬間升溫,保持2s;去殘2100℃,瞬間升溫,保持2s。原子化時(shí)停氣。1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋成標(biāo)準(zhǔn)使用液系列,見(jiàn)表2。1.4微波消解和標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定全血樣(抽靜脈血,用60g/LEDTA-2Na抗凝,置于冰箱中)于旋轉(zhuǎn)振蕩器上振蕩混勻,用微量移液器吸取血樣1000μl置于聚四氟乙烯內(nèi)膽中,加入5mlHNO3,混勻,先放入電熱預(yù)消解器上進(jìn)行預(yù)消解,再加2mlH2O2混勻,蓋上內(nèi)蓋進(jìn)行微波消解1檔3min,2檔3min。消解至無(wú)色,于預(yù)消解器上脫硝后自然冷卻,用硝酸定容至10ml。同時(shí)做空白試驗(yàn)。取此消解液直接上機(jī)火焰法測(cè)Cu、Zn,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。取此消解液直接上機(jī)石墨爐法測(cè)Pb,自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣,進(jìn)樣量:10μl消解液+5μl磷酸二氫銨,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。此消解液用硝酸溶液稀釋10倍后石墨爐法測(cè)Cd,進(jìn)樣量:10μl消解液+5μl磷酸二氫銨,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。取此消解液0.50ml,用硝酸溶液稀釋定容至10ml,上機(jī)火焰法測(cè)Fe、Mg,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。取此消解液1.00ml,用鑭溶液稀釋定容至5ml,上機(jī)火焰法測(cè)Ca,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。2結(jié)果與討論2.1消解溶劑的選擇試驗(yàn)用HNO3、H2SO4、HClO4、HCl分別與H2O2混合作為消解混合酸。結(jié)果表明,僅HCl消解效果不佳?？紤]到H2SO4介質(zhì)存在對(duì)原子吸收測(cè)定影響很大,而HClO4直接與有機(jī)物接觸有爆炸的危險(xiǎn),本法選擇HNO3和H2O2混合作為消解用酸。試驗(yàn)表明,5mlHNO3+2mlH2O2微波1檔3min,2檔3min能很好地消解全血樣。2.2條件選擇2.2.1灰化溫度的影響由于全血樣組成復(fù)雜,不加基體改進(jìn)劑直接測(cè)定干擾很大,測(cè)定結(jié)果很不理想。鉛、鎘均屬于易揮發(fā)元素,如不加基體改進(jìn)劑,灰化溫度鉛高于450℃,鎘高于350℃損失會(huì)很大。加入基體改進(jìn)劑磷酸二氫銨20g/L后,鉛的灰化溫度可提高到850℃,鎘的灰化溫度可提高到700℃而元素不損失。在此灰化溫度下,樣品中大部分干擾成分被消除。試驗(yàn)表明,樣品消解液進(jìn)樣量10μl,20g/L磷酸二氫銨進(jìn)樣量5μl,吸光度最大且穩(wěn)定而背景吸收最小。2.2.2擴(kuò)大線性范圍鋅鎂在火焰原子吸收靈敏線上測(cè)量靈敏度很高,以至于線性范圍太窄,影響測(cè)量。旋轉(zhuǎn)燃燒頭150以適當(dāng)降低儀器靈敏度擴(kuò)大線性范圍。這樣,鋅在0～1.6μg/ml,鎂在0～0.80μg/ml成線性關(guān)系。2.2.3劑能生成磷酸介質(zhì)中存在的磷酸根等雜質(zhì)干擾鈣的測(cè)定,釋放劑鑭能與其生成更穩(wěn)定的磷酸鑭而有效地把鈣釋放出來(lái)。試驗(yàn)表明,用25g/L鑭溶液稀釋血樣消解液能很好地消除干擾成分對(duì)鈣的測(cè)定。2.2.4譜線干擾的測(cè)定鐵的靈敏線附近譜線很復(fù)雜,容易出現(xiàn)光譜干擾,適當(dāng)減小狹縫可濾去一些不必要的譜線以提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。本法測(cè)鐵選擇光譜通帶為0.2nm,結(jié)果理想。2.3建立待測(cè)組線性回歸以標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度(Y)對(duì)相應(yīng)的濃度(X)進(jìn)行線性回歸,得7種待測(cè)組分的回歸方程及相關(guān)系數(shù)。方法檢出限以空白液重復(fù)測(cè)量所得標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍為準(zhǔn),方法檢出限乘以稀釋倍數(shù)便得原始血樣的最低檢測(cè)濃度,見(jiàn)表3。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的消解取同一血樣3份,在其中2份中分別加入一定量的待測(cè)元素標(biāo)準(zhǔn)液,按