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文檔簡介

ICS

CCS

B

DB1308

技術(shù)規(guī)程2023-02-25

發(fā)布2023-03-01

實施承德市市場監(jiān)督管理局 發(fā)

布

??本文件按照

第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位:承德市蔬菜技術(shù)推廣站、圍場滿族蒙古族自治縣蔬菜環(huán)保站、興隆縣工商業(yè)聯(lián)合I

培養(yǎng)用水符合

中規(guī)定的三級水，除非另有規(guī)定，在培養(yǎng)過程中僅使用分析純試劑，試

萘乙酸；

g)還原型谷胱甘肽，純度≥99%；L-谷氨酰胺，純度≥99%； L-絲氨酸，純度≥99%；一水嗎啉乙磺酸，純度>99%； 乙醇溶液，75%； 次氯酸鈉溶液，5%；m)

硝酸鈣溶液，25%；秋水仙堿溶液，0.3%；o)

g、煙酸

g、維生素

g、維生素

g、葉酸

D-生物素

g)

流式細(xì)胞儀。

大燒杯：1L；

g)

mm；

B5

g

g

L，

B5

g

L，將培養(yǎng)基

g

L，將培養(yǎng)基

μm

μm

試管、研缽、古式漏

mm～3

mm

先將沖洗干凈的花蕾用乙醇表面消毒

s，期間搖動燒杯，燒杯間不要碰撞。然后使用次氯酸鈉深度消毒

使用無菌水清洗

min，期間搖動燒杯，充分清洗，此步驟重復(fù)操作3次，燒杯間不要碰撞，完成清洗

將消毒過的花蕾放于研缽中，倒入B5液體培養(yǎng)基，液面高出花蕾即可，輕敲研缽，使所有花蕾破裂，花粉釋放出即可，加入B5液體培養(yǎng)基定容到

將研磨好的

花蕾液倒入古式漏斗，經(jīng)400目紗網(wǎng)過濾后，移至

離心管，使用離心機

min，倒掉上清液，倒入

B5液體培養(yǎng)基，將沉淀搖起，定容到10

ml，經(jīng)3次反復(fù)

在純凈的花粉母細(xì)胞液中加入

改良1/2NLN培養(yǎng)基，將沉淀搖起垂懸，定容到

mm

改良1/2NLN培養(yǎng)基稀釋，并添加活性炭懸浮液

在超凈工作臺環(huán)境下，用眼科鑷子將子葉型胚接種至B5固體培養(yǎng)基上。接種后在25℃自然光下培

在超凈工作臺環(huán)境下，取出幼苗，手術(shù)刀去除葉片和根區(qū)，長柄鑷子將剩余組織接種到新的B5固

cm，萌發(fā)

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