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文檔簡介
ICS
CCS
B
DB1308
技術(shù)規(guī)程2023-02-25
發(fā)布2023-03-01
實(shí)施承德市市場監(jiān)督管理局 發(fā)
布
??本文件按照
第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位:承德市蔬菜技術(shù)推廣站、圍場滿族蒙古族自治縣蔬菜環(huán)保站、興隆縣工商業(yè)聯(lián)合I
培養(yǎng)用水符合
中規(guī)定的三級水，除非另有規(guī)定，在培養(yǎng)過程中僅使用分析純試劑，試
萘乙酸；
g)還原型谷胱甘肽，純度≥99%；L-谷氨酰胺，純度≥99%； L-絲氨酸，純度≥99%；一水嗎啉乙磺酸，純度>99%； 乙醇溶液，75%； 次氯酸鈉溶液，5%；m)
硝酸鈣溶液，25%；秋水仙堿溶液，0.3%；o)
g、煙酸
g、維生素
g、維生素
g、葉酸
D-生物素
g)
流式細(xì)胞儀。
大燒杯：1L；
g)
mm；
B5
g
g
L，
B5
g
L，將培養(yǎng)基
g
L，將培養(yǎng)基
μm
μm
試管、研缽、古式漏
mm～3
mm
先將沖洗干凈的花蕾用乙醇表面消毒
s，期間搖動燒杯，燒杯間不要碰撞。然后使用次氯酸鈉深度消毒
使用無菌水清洗
min，期間搖動燒杯，充分清洗，此步驟重復(fù)操作3次，燒杯間不要碰撞，完成清洗
將消毒過的花蕾放于研缽中，倒入B5液體培養(yǎng)基，液面高出花蕾即可，輕敲研缽，使所有花蕾破裂，花粉釋放出即可，加入B5液體培養(yǎng)基定容到
將研磨好的
花蕾液倒入古式漏斗，經(jīng)400目紗網(wǎng)過濾后，移至
離心管，使用離心機(jī)
min，倒掉上清液，倒入
B5液體培養(yǎng)基，將沉淀搖起，定容到10
ml，經(jīng)3次反復(fù)
在純凈的花粉母細(xì)胞液中加入
改良1/2NLN培養(yǎng)基，將沉淀搖起垂懸，定容到
mm
改良1/2NLN培養(yǎng)基稀釋，并添加活性炭懸浮液
在超凈工作臺環(huán)境下，用眼科鑷子將子葉型胚接種至B5固體培養(yǎng)基上。接種后在25℃自然光下培
在超凈工作臺環(huán)境下，取出幼苗，手術(shù)刀去除葉片和根區(qū)，長柄鑷子將剩余組織接種到新的B5固
cm，萌發(fā)
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