穿破石中黃酮類化合物提取分離、提取及鑒定

穿破石中黃酮類化合物提取分離、提取及鑒定

破碎石是屬于?？普軐僦参锝Y(jié)構(gòu)的石頭（cudraniakonimet）。錯誤的東西含量高，黃酮類化合物安全、無害，在醫(yī)藥、食品加工等方面得到廣泛應(yīng)用。多項(xiàng)研究表明黃酮類化合物除具有抗菌、消炎、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、利尿等作用外,在抗自由基和抗癌痛等疾病的治療效果更顯著。1材料和方法1.1材料表面1.1.1df-108s集熱式一浴鍋材料UV-1601紫外/可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀),DF-102S集熱式恒溫水浴鍋(鞏義市英峪華儀儀器制造),電子天平,移液管,冷凝回流裝置。1.1.2試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(含結(jié)晶水),95%乙醇(分析純),5%NaNO:,10%A1(NO3)3,4%NaOH等。1.2方法1.2.1提取方法筆者采用有機(jī)溶液提取法,有機(jī)溶液為乙醇溶液。簡單步驟是:把干燥穿破石根研碎,在回流提取,將提取液過濾。1.2.2測量量法用分光光度法測量,研究表明,此方法操作簡便、可靠。1.2.3標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的制備準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品25.00mg(含結(jié)晶水),用30%微熱乙醇溶解,并完全移人50ml容量瓶中,用30%乙醇定容搖勻得濃度為0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。1.2.4加1.2.2回形法準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0、0.5、1.0、2.0、3.0ml分別置于10ml具塞的比試管中,用水稀釋至2.40ml,先加5%NaNO2溶液0.40ml,搖勻,放置6min,然后加10%A1(NO3)3溶液0.40ml,搖勻后放置6min,最后加4%NaOH溶液4.0ml,用水稀釋至10ml刻度,搖勻,放置15min。試劑為空白參比,在510mm波長處測定吸光度,以吸光度和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程。1.2.5總黃酮含量的測定總黃酮含量測定采用亞硝酸鈉一硝酸鋁一氫氧化鈉比色法精確吸取3份1ml樣液于3支具塞試管中,各加5%NaNO:溶液0.40ml,搖勻,放置6min。加10%A1(NO3)溶液0.40ml,搖勻,放置6min.加4%NaOH溶液4.0ml,加對應(yīng)濃度乙醇0.4ml,搖勻,放置10~15min。同時作試劑空白,以試劑空白作對照,在510nm波長處測定吸收度,計(jì)算總黃酮含量。提取率(%)=C×V1×V2×100%/M×1000式中C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出樣品總黃酮的濃度數(shù)值,單位為mg/ml,V1為提取液稀釋的體積,單位為ml;V2為樣液稀釋的體積,單位為ml;M為樣品的質(zhì)量,單位為g。1.2.6單因素考察:單因素對穿破石總黃酮得率的影響單因素試驗(yàn)分別以不同的乙醇濃度(50%、60%、70%、80%、90%)、料液比(1:2、1:3、1:4、1:5、1:6)、提取溫度(室溫60℃、70℃、90℃、100℃)、提取時間(1.0h、2.0h、2.5h、3.0h、4.0h)作為單因素,考察各單因素對穿破石總黃酮得率的影響。1.2.7正交試驗(yàn)正交試驗(yàn)在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,確定正交設(shè)計(jì)的各變量,以總黃酮得率為考察指標(biāo),通過正交分析對提取條件進(jìn)行優(yōu)化。2結(jié)果與分析2.1標(biāo)準(zhǔn)的蘆丁工作曲線由1.2.4所示方法進(jìn)行測定,由圖1可得回歸方程:A=5.736C+0.024R2=0.99942.2單因素試驗(yàn)的結(jié)果2.2.1黃酮總量溫度對黃酮總量的影響以濃度90%,物料比為1:3,回流1小時。如圖2所示由圖可知穿破石黃酮總量溫度的升高而增加,在溫度升到90℃時黃酮總量最高,之后會逐漸降低。2.2.2乙醇濃度對降低黃酮消耗的影響以溫度為70℃,物料比為1:3,回流1小時。如圖3所示如圖所示當(dāng)乙醇濃度為90%時,提取的黃酮總量是最高的。2.2.3提取時間對黃酮含量的影響以溫度90℃,物液比為1:3,回流1小時。如圖4所示由圖4可知,2.5個小時是最佳的提取時間,穿破石總黃酮隨著提取時間的增加而增加。到2.5個小時后,再逐漸減少。2.2.4物液比的提取用15克穿破石分別以1:2,1:3,1:4,1:5,1:6的物液比提取。以70℃、70%乙醇熱回流1h。如圖5所示,物液比在1:2時穿破石黃酮含量最高。2.3熱回流法黃酮的正交試驗(yàn)結(jié)果以表1所示的條件設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn),每組試驗(yàn)以15g原料計(jì),試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。正交試驗(yàn)結(jié)果在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對熱回流法黃酮的主要因素(即物料比、乙醇濃度、提取溫度、提取時間)進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),各水平因素見表1,試驗(yàn)結(jié)果如表2。由表2可知,提取溫度、乙醇濃度、提取時間、物料比、四種因素對黃酮提取量影響的主次順序?yàn)?物料比﹥乙醇濃﹥提取溫度﹥提取時間,而最優(yōu)秀的提取條件組合為:物料比1:2,乙醇濃度80%,提取溫度90℃,提取時間提取溫度90℃,提取時間。2.3最佳條件的合理性和可靠性在優(yōu)化組合條件下,進(jìn)行了三次平行驗(yàn)證性試驗(yàn),以考察最佳條件的合理性和可靠性,結(jié)果如表3所示。由表3可知,在優(yōu)化條件下,三次測量結(jié)果非常接近,說明該提取工藝穩(wěn)定,適合于提取穿破石黃酮類化合物。3乙醇濃度和提取溫度對黃酮提取率