化妝品微生物的檢驗(yàn)流程

艷莊化妝品微生物檢驗(yàn)操作方法文件編號(hào)：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號(hào)：1/51：本方法包括化妝品微生物檢測(cè)的五項(xiàng)指標(biāo)：細(xì)菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、糞大腸菌群、銅綠假單孢菌、金黃色葡萄球菌。2：樣品的采集以及注意事項(xiàng):2.1所采集的樣品，應(yīng)具有代表性，一般視每批化妝品數(shù)量大小，隨機(jī)抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別從兩個(gè)包裝單位以上的樣品中共取10g或10ml,包裝量小于20g的樣品，采集量應(yīng)適量增加，其總量應(yīng)大于16g。2.2供檢驗(yàn)樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)，進(jìn)口產(chǎn)品應(yīng)為市售包裝。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗(yàn)前不得打開，防止樣品被污染。2.3接到樣品后，應(yīng)立即登記，編寫檢驗(yàn)序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求盡快檢測(cè)。如不能及時(shí)檢驗(yàn)，樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。2.4若只有一份樣品而同時(shí)需做幾種分析，如微生物、理化等，則先做微生物檢驗(yàn)，再將剩余樣品作其它的分析。2.5在檢驗(yàn)過程中，從打開包裝到全部檢驗(yàn)操作結(jié)束，均須防止微生物的再污染和擴(kuò)散，所用采樣用具、器皿及材料均應(yīng)事先滅菌，全部操作應(yīng)在無菌室內(nèi)進(jìn)行，或在相應(yīng)條件下，按無菌操作規(guī)定進(jìn)行。3：供檢樣品的制備：3.1液體樣品3.1.1水溶性的液體樣品，量取10ml加到90ml滅菌生理鹽水中，混勻后，制成1：10的檢液。3.1.2油性液體，取樣品10ml，先加5ml滅菌液體石蠟混勻，再加10ml滅菌的吐溫80，在40~44℃水浴中乳化，制成1：10的懸液。3.2膏、霜、乳劑半固體狀樣品3.2.1親水性的樣品，稱取10g，加到滅菌的帶玻璃珠加有90ml滅菌生理鹽水的三角瓶中（也可以在試管中進(jìn)行），充分振蕩混勻，靜置15min，用其上清液作為1：10的檢液。3.2.2疏水性的樣品，稱取10g，放到滅菌的研缽（或試管）中，加10ml滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再加10ml滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70ml滅菌生理鹽水，在40~44℃水浴中充分混合，制成1：10檢液。3.2.3固體樣品，稱取10g，加到90ml滅菌的生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置，取上清液作為1：10的檢液。注：如有均質(zhì)器，上述水溶性膏、霜、粉劑等，可稱10g樣品加到90ml滅菌生理鹽水，均質(zhì)1~2min，疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g樣品，加10ml滅菌液體石蠟，10ml滅菌吐溫80，70ml滅菌生理鹽水，均質(zhì)3~5min確定日期核準(zhǔn)審核擬案艷莊化妝品微生物檢驗(yàn)操作方法文件編號(hào)：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號(hào)：2/54：微生物檢驗(yàn)操作：4.1菌落總數(shù)4.1.1定義：菌落總數(shù)是指化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、PH值、需氧性質(zhì)等），1g(ml)檢樣中所含有菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長(zhǎng)的中溫的需氧性菌落總數(shù)。測(cè)定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)說總評(píng)論的綜合依據(jù)。4.1.2菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序：檢樣↓做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液↓選擇2~3個(gè)適宜稀釋度，各以1ml分別加入滅菌平皿內(nèi)↓每皿內(nèi)加入適量卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂37℃培養(yǎng)48±2h↓菌落計(jì)數(shù)↓報(bào)告4.1.3結(jié)果報(bào)告：應(yīng)選擇菌落數(shù)在30~300個(gè)范圍之內(nèi)的平皿計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后，即為每g(ml)檢樣中所含的細(xì)菌菌落數(shù)。以CFU/g(ml)表示。4.2霉菌和酵母菌4.2.1定義：霉菌和酵母菌總數(shù)是指化妝品檢樣在一定條件培養(yǎng)后1g(ml)化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌菌落總數(shù)，籍以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。本方法根據(jù)霉菌和酵母菌特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性，在虎紅培養(yǎng)基上，置28℃培養(yǎng)72h，計(jì)算所生長(zhǎng)的霉菌和酵母菌數(shù)。4.2.2霉菌和酵母菌檢驗(yàn)程序：確定日期核準(zhǔn)審核擬案艷莊化妝品微生物檢驗(yàn)操作方法文件編號(hào)：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號(hào)：3/5檢樣（1：10）↓若菌較多可做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液↓選擇1~3個(gè)適宜稀釋度各以1ml分別加入滅菌平皿內(nèi)↓每皿內(nèi)加入適量虎紅培養(yǎng)基28℃培養(yǎng)72h↓霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)報(bào)告4.2.3結(jié)果報(bào)告：判定結(jié)果時(shí)，應(yīng)選取菌落數(shù)在5~50個(gè)范圍之內(nèi)的平皿計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后，即為每g(ml)檢樣中所含有的霉菌和酵母菌總數(shù)，以CFU/g(ml)表示。4.3糞大腸菌群4.3.1定義：糞大腸菌群系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌，在44.5℃培養(yǎng)24~48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。改菌來之人和溫血?jiǎng)游锛S便，是重要的衛(wèi)生指示菌。4.3.2糞大腸菌群檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)（1：10）↓乳糖膽鹽發(fā)酵管44±0.5℃，24~48h↓↓↓不產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣↓↓糞大腸菌群陰性↓↓↓報(bào)告EMB平板37℃18~24h蛋白胨水44±0.5℃24h↓↓↓↓觀察靛基質(zhì)反應(yīng)革蘭氏染色典型菌落↓↓↓報(bào)告確定日期核準(zhǔn)審核擬案艷莊化妝品微生物檢驗(yàn)操作方法文件編號(hào)：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號(hào)：4/54.3.3結(jié)果報(bào)告：根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗(yàn)為陽性，則可報(bào)告檢樣中檢出糞大腸菌群。4.4銅綠假單孢菌4.4.1定義：銅綠假單孢菌屬于假單孢菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃條件下能生長(zhǎng)。該菌對(duì)人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等.4.4.2綠膿桿菌檢驗(yàn)程序檢樣（1：10）↓增菌培養(yǎng)：SCDLP37℃培養(yǎng)18~24h↓分離培養(yǎng)：十六烷基三甲基溴化銨瓊脂37℃18~24h↓↓↓↓↓↓↓革蘭氏染色氧化酶試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn)硝酸鹽產(chǎn)生試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn)42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)4.4.3結(jié)果報(bào)告4.4.3.1用十六烷甲基溴化胺瓊脂平板分離的疑似綠膿桿菌菌落，經(jīng)染色色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，氧化酶陽性并產(chǎn)生綠膿菌素的，應(yīng)報(bào)告檢出綠膿桿菌。4.4.3.2如果分離的疑似菌株為革蘭氏陰性并產(chǎn)生綠膿菌色素，而能液化明膠，硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)皆為陽性的，也應(yīng)報(bào)告檢出綠膿桿菌。4.5金黃色葡萄球菌：4.5.1定義：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽孢，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。4.5.2金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序檢樣（1：10）↓增菌培養(yǎng)：SCDLP37℃培養(yǎng)24h↓分離培養(yǎng)：BairdParker平板（或血瓊脂平板）37℃培養(yǎng)24~48h）↓↓↓↓革蘭氏染色甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)4.5.3結(jié)果報(bào)告：4.5.3.1經(jīng)增菌培養(yǎng)后，在分離平板上有典型或可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)染色鏡