微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷一、微生物學(xué)檢驗(yàn)：從樣本到報告二、主要的致病和條件致病微生物三、各系統(tǒng)感染病例及微生物學(xué)檢驗(yàn)四、藥敏試驗(yàn)五、進(jìn)展和展望2023/11/72診斷學(xué)問診體檢病歷器械實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)思維最好的研究依據(jù)，個人專業(yè)技能和臨床經(jīng)驗(yàn)，病人的價值和愿望2023/11/73微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷血液和體液檢驗(yàn)免疫學(xué)檢驗(yàn)生物化學(xué)檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)診斷2023/11/742023/11/75病原微生物感染性疾病的診斷臨床診斷：不同微生物、不同免疫狀態(tài)的宿主以及不同感染部位而不同。器械輔助：物理檢查一般實(shí)驗(yàn)室檢查（如白細(xì)胞計數(shù)和分類計數(shù)）可以協(xié)助進(jìn)行感染性疾病診斷。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷是確診感染性疾病最重要的依據(jù)。一、微生物學(xué)檢驗(yàn)：從樣本到報告一般實(shí)驗(yàn)室檢查樣本采集樣本保存和運(yùn)送增菌分離培養(yǎng)+涂片染色鏡檢涂片染色鏡檢生化反應(yīng)鑒定藥敏試驗(yàn)結(jié)果解釋及報告2023/11/76采集原則：早期、無菌、方法、適量、安全標(biāo)本處理1.對環(huán)境敏感的細(xì)菌保溫立即送檢，其他最好2h內(nèi)2.適宜環(huán)境保存，一般不應(yīng)超過24h3.注意安全防護(hù)4.標(biāo)本切勿污染，容器必須包裝好5.烈性傳染病標(biāo)本，必須按規(guī)定包裝，由專人運(yùn)送6.厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專門的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時可直接用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送

2023/11/77形態(tài)學(xué)檢查1.包括不染色標(biāo)本檢查法和染色標(biāo)本檢查法2.了解有無細(xì)菌及大致菌量3.形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色有助初步識別和分類4.初步診斷，早期診斷和治療2023/11/78不染色標(biāo)本1.直接鏡檢，檢查細(xì)菌的動力及運(yùn)動狀況2.壓滴法和懸滴法有動力：自一處移至另一處，有明顯的方向性位移無動力：布朗運(yùn)動，只在原地顫動而無位置的改變3.有些病原菌可作出初步鑒定疑似霍亂患者，鏡下觀察到來回穿梭似流星狀運(yùn)動的細(xì)菌，制動試驗(yàn)陽性，初步推斷為“疑似O1群霍亂弧菌”。2023/11/79染色標(biāo)本1．革蘭染色（gramstain）革蘭陽性球菌革蘭陰性桿菌2023/11/7102．抗酸染色（acid-faststain）將細(xì)菌分為兩大類：即-抗酸性細(xì)菌-非抗酸性細(xì)菌3．熒光染色敏感性強(qiáng)，效率高。用于結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。4.鞭毛染色有無鞭毛、鞭毛的位置及數(shù)量5.異染顆粒染色用于白喉棒狀桿菌染色。6.芽胞染色：7.墨汁染色:2023/11/711分離培養(yǎng)和鑒定一、培養(yǎng)基的種類和選擇培養(yǎng)基的組成成分、培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)基的選擇二、分離及培養(yǎng)細(xì)菌的分離、細(xì)菌培養(yǎng)方法三、生化反應(yīng)和鑒定碳水化合物的代謝試驗(yàn)蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)2023/11/712培養(yǎng)基（culturemedium）人工方法配制，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。根據(jù)標(biāo)本來源和可能存在的病原菌，確定選用各種分離培養(yǎng)基。伊紅美藍(lán)/麥康凱用于篩選革蘭陰性桿菌。2023/11/7131．平板劃線分離法2．斜面接種法3．液體接種法細(xì)菌的分離4．穿刺接種法5．傾注平板法6．涂布接種法2023/11/714細(xì)菌培養(yǎng)方法

1．需氧培養(yǎng)法

2．二氧化碳培養(yǎng)法

3．厭氧培養(yǎng)法

2023/11/715生化反應(yīng)和鑒定（一）碳水化合物的代謝試驗(yàn)

1.糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)

2．氧化―發(fā)酵試驗(yàn)（O/F試驗(yàn)）（二）蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)1．明膠液化試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒別。2．吲哚(靛基質(zhì))試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。3．硫化氫試驗(yàn)培養(yǎng)基：醋酸鉛培養(yǎng)基應(yīng)用：腸桿菌科中屬及種鑒別2023/11/716（三）碳源和氮源利用試驗(yàn)1．枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)用于腸桿菌科中菌屬間的鑒定。2．丙二酸鹽利用試驗(yàn)?zāi)c桿菌科中屬間及種的鑒別。（四）各種酶類試驗(yàn)1．氧化酶試驗(yàn)主要用于腸桿菌科細(xì)菌與假單胞菌的鑒別。2．過氧化氫酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)）用于革蘭陽性球菌的初步分群。2023/11/717非培養(yǎng)檢測方法一、免疫學(xué)檢測：抗原檢測、抗體檢測二、分子生物學(xué)：核酸雜交、PCR、生物芯片技術(shù)三、毒素：內(nèi)毒素、外毒素四、動物實(shí)驗(yàn)五、蛋白質(zhì)組-質(zhì)譜技術(shù)

2023/11/718樣本采集診斷疾病，獲得含有病原微生物的樣品。無菌采集樣品容器標(biāo)有名字，號碼，日期，時間，藥物。立即送到實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。運(yùn)送延遲最佳的環(huán)境條件選擇性培養(yǎng)基2023/11/719樣本采集接觸血液或其他體液。減少感染風(fēng)險減少院內(nèi)感染的傳播。戴手套，接觸血液和體液，黏膜膜，破損皮膚和處理的物品或表面。沾了病人的血液或體液。每一個病人換手套。立即徹底洗手和其他皮膚表面。2023/11/720樣本采集：傷口、膿汁1。消毒面積，用無菌棉簽蘸無菌生理鹽水。

2。70％乙醇或碘液消毒。

3。如果膿腫自發(fā)破裂，用無菌手術(shù)刀打開。

4。擦拭膿液。

5。無菌棉簽觸摸的膿液，注意不要污染

周圍組織。

6。容器正確標(biāo)簽。2023/11/721樣本采集：血、尿血培養(yǎng)

1，無菌操作。

2。時間和部位。

3。采血量。尿液細(xì)菌培養(yǎng)

1，無菌容器。

2。清洗，中段尿。

3。冷藏4℃-6℃。2023/11/722樣本采集：糞便糞便培養(yǎng)細(xì)菌學(xué)檢查，少量樣本的。無菌拭子插入直腸或糞便。無菌管。

寄生蟲，蟲卵鏡檢。成蟲寄生。2023/11/723Forbacterialisolation,Thetrainedphysicianwillcollectonly3-5mlintoalabeledsterilecontainerForvirusisolation,collect0.5-1.0mlofCSFinadry,sterilecontainer樣本采集：腦脊液2023/11/724Throat/NasalSwabsSpecimensTakenunderdirectvisualizationwithgoodlightingAreasofexudation,membraneformationorinflammationarechoicesites,otherwiserubthetonsillarcryptsForBordetellapertussis,collectnasopharyngealorpernasalswab.Informlabinadvancetopreparefreshculturemediaforthisorganism2023/11/725二、主要的致病和條件致病微生物細(xì)菌病毒真菌正常存在于宿主體內(nèi)的微生物在免疫功能低下、定居部位改變、宿主菌群失調(diào)等特定情況下引起感染。條件：正常微生物存在；免疫力下降條件。變化：寄生部位改變，原寄生部位微生物數(shù)量變化導(dǎo)致失調(diào)。導(dǎo)致機(jī)體的發(fā)病。2023/11/7262023/11/727微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷2023/11/728微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷形態(tài)學(xué)：培養(yǎng)：沙氏瓊脂鑒定：形態(tài)學(xué)；生化；分子生物學(xué)；質(zhì)譜；血清學(xué)；組織病理學(xué)2023/11/729各系統(tǒng)感染病例及微生物學(xué)檢驗(yàn)呼吸道消化道泌尿道皮膚軟組織血液生殖道中樞神經(jīng)系統(tǒng)2023/11/730病例16歲男童，既往健康。喉嚨痛，發(fā)燒38℃，頭痛頸部淋巴結(jié)腫大，咽紅，扁桃體炎性滲出。沒有其他癥狀。2023/11/731鑒別診斷急性咽炎，原因：細(xì)菌和病毒。分枝桿菌、真菌引起急性咽炎不常見。咽炎患者通常有喉嚨痛，發(fā)熱，吞咽疼痛，以及扁桃腺和頸部淋巴結(jié)。需要實(shí)驗(yàn)室測試作出診斷。2023/11/732化膿性鏈球菌：最常見的細(xì)菌引起的咽炎病毒：腺病毒引起咽炎，結(jié)膜炎EB病毒，傳染性單核細(xì)胞增多，主要在15-25歲年齡組其他呼吸道病毒：鼻病毒，冠狀病毒，副流感病毒，流感病毒，柯薩奇病毒，巨細(xì)胞病毒病毒測試實(shí)驗(yàn)室少做。鑒于患者情況，其他常規(guī)檢測同時，A群鏈球菌是最有可能的致病因子。應(yīng)進(jìn)行檢測。包括：快速鏈球菌測試。咽拭子培養(yǎng)：雙拭子。扁桃體和咽后壁區(qū)。注意避免接觸口咽，口腔，舌。2023/11/733結(jié)果快速檢測A鏈：基于特定碳水化合物的N-乙酰。測試敏感性差異很大，特異性達(dá)到95-100％（與培養(yǎng)法相比）。5-10分鐘，培養(yǎng)需要48小時，快速抗原測試廣泛使用。金標(biāo)準(zhǔn)：咽拭子培養(yǎng)，血平板（GAS）靈敏度達(dá)90-95％。18-24小時，35-37℃。檢查后，再培養(yǎng)24h。2023/11/734結(jié)果三種溶血類型：α-溶血是對紅細(xì)胞破壞不完整的綠色溶血環(huán)。β-溶血無色溶血環(huán)。γ-溶血實(shí)際上是沒有溶血。A組鏈球菌是β-溶血，但并非所有的β-溶血菌落是A鏈，β-溶血菌落必需進(jìn)一步測試。其他細(xì)菌生長。2023/11/735過氧化氫酶試驗(yàn)和革蘭染色鏡檢觸酶試驗(yàn)。3％過氧化氫，出現(xiàn)氣泡+。鏈球菌是革蘭陽性球菌，觸酶陰性。葡萄球菌（顯示β-溶血）是團(tuán)塊或集群和革蘭陽性球菌，過氧化氫酶陽性。進(jìn)一步測試。桿菌肽敏感2023/11/736致病和相關(guān)疾病鏈球菌咽炎：氣溶膠或污染食物。重要的病原菌，外毒素，造成中毒性休克。激發(fā)免疫系統(tǒng)。與心臟交叉反應(yīng)，導(dǎo)致心臟瓣膜損害。感染性心內(nèi)膜炎病因。類/風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RF）和急性腎小球腎炎多關(guān)節(jié)腫脹疼痛（遷移性關(guān)節(jié)炎）和心臟雜音（損壞的心臟肌肉和心臟瓣膜）。神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，抖動或抽搐（舞蹈癥）。腎功能障礙，眼瞼腳踝腫脹，高血壓，血液和尿液中的蛋白，尿量↓。2023/11/737治療和預(yù)防及時治療，防止并發(fā)癥，如扁桃體膿腫與急性風(fēng)濕熱用抗生素可縮短癥狀持續(xù)時間?；撔枣溓蚓恃?，可用青霉素治療。兒童用阿莫西林。完整療程。青霉素過敏-紅霉素。不進(jìn)行治療，可能出現(xiàn)心臟瓣膜損害、RF或腎臟損害。2023/11/738其他學(xué)校，適齡兒童，5?14歲，最有可能。分子檢測A鏈：6小時提供結(jié)果，不進(jìn)行培養(yǎng)確認(rèn)，節(jié)省時間。急診部門和診所。

EB病毒傳染性單核細(xì)胞增多癥，皮疹，乏力，肝腫大和/或脾腫大伴隨咽炎。異型淋巴細(xì)胞。血清學(xué)確認(rèn)以EB病毒抗體滴度的四倍增長、EB病毒抗體IgM。青少年和年輕成年人咽炎可能由溶血隱桿菌引起。年輕成年人，可能受感染與C組或G型鏈球菌?？焖俚逆溓蚓?，因抗原每組不同。同樣抗生素治療。白喉很少出現(xiàn)在發(fā)達(dá)國家，足夠免疫接種。2023/11/739病例220歲大學(xué)生，排尿困難，燒灼感，無骨盆疼痛。沒有發(fā)燒，有中度恥骨上壓痛。無側(cè)翼疼痛。鑒別診斷

膀胱炎，癥狀—感染下泌尿道，涉及尿道膀胱。典型癥狀包括排尿疼痛（困難），尿頻，尿急，尿血。大約有50％的女性一生中發(fā)生尿路感染。2023/11/740鑒別診斷淋病奈瑟菌，沙眼衣原體，較普遍性傳播疾病。該患者：急性膀胱炎，尿液培養(yǎng)證實(shí)。無發(fā)燒或側(cè)翼（背部）疼痛。---簡單膀胱炎-復(fù)雜泌尿道感染：涉及到上尿路或腎。（腎盂腎炎，感染腎臟及輸尿管上段）。復(fù)雜泌尿感染危險因素包括妊娠，解剖或功能性尿道異常，糖尿病，免疫抑制。感染原因：糞便菌群。無并發(fā)癥膀胱炎通常是由于一種微生物，大腸桿菌。復(fù)雜性膀胱炎-多菌。2023/11/741病原體腸道革蘭陰性桿菌：大腸埃希菌，最常見原因?？死撞鷮伲横t(yī)院獲得性尿路感染奇異變形桿菌：尿路感染及結(jié)石形成銅綠假單胞菌：醫(yī)院獲得性尿路感染

革蘭陽性球菌：腸球菌，醫(yī)院感染

病毒：腺病毒引起兒童出血性膀胱炎真菌：白假絲酵母菌：糖尿病患者，免疫功能低下的病人，留置導(dǎo)管者分枝桿菌不是尿路感染的主要原因腐生葡萄球菌，無乳鏈球菌（B組鏈球菌）2023/11/742實(shí)驗(yàn)室膿尿（白細(xì)胞尿），血尿（紅細(xì)胞）-復(fù)雜的泌尿道感染。急性膀胱炎患者≥10WBC/mm3非離心標(biāo)本。尿液試紙：非侵入性技術(shù)。篩選測試預(yù)測哪些尿樣本含有很高的細(xì)菌菌落總數(shù)。正常尿液無菌，蛋白質(zhì)，白細(xì)胞，血細(xì)胞，亞硝酸鹽。浸入尿液，立即閱讀。硝酸鹽和白細(xì)胞酯酶+，顯示，細(xì)菌存在；中性粒細(xì)胞存在尿液培養(yǎng)，不論試紙的結(jié)果。2023/11/743培養(yǎng)清潔：肥皂和水三次，中段尿，導(dǎo)管進(jìn)入膀胱、穿刺獲得標(biāo)本，感染。尿液是培養(yǎng)基，立即交實(shí)驗(yàn)室，冷藏保存。室溫1小時可產(chǎn)生篩選假陽性結(jié)果，細(xì)菌培養(yǎng)↑。接種環(huán)0.001或0.01毫升。菌落數(shù)乘以稀釋因子=每毫升尿液菌落總數(shù)。定量結(jié)果，正常無菌。>105CFU/毫升，確定有感染；藥敏試驗(yàn)。超過3種菌數(shù)量相當(dāng)，污染的正常菌群。

2023/11/744結(jié)果尿液培養(yǎng)結(jié)果大于100，選擇性革蘭陰性桿菌落數(shù)乘以1000，總菌落計數(shù)>105/mL。MacConkey紅色，乳糖發(fā)酵。腸桿菌的大腸桿菌，克雷伯桿菌和腸桿菌。吲哚陽性，最有可能是大腸桿菌。完整生化反應(yīng)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果：氨芐青霉素，頭孢唑啉，環(huán)丙沙星，呋喃妥因，甲氧芐啶，復(fù)方新諾明。紙片擴(kuò)散。2023/11/745發(fā)病除新生兒期，女性常見。隨年齡上升。部分患者沒有癥狀，尿液篩檢及尿培養(yǎng)是關(guān)鍵?？芍聰⊙Y。各種因素。先天性解剖異常。糖尿病，妊娠，返流，神經(jīng)功能障礙，腎結(jié)石，腫瘤。醫(yī)院療養(yǎng)院，留置導(dǎo)管是主要因素。上行感染或血行感染。最常見上行感染。血源性感染導(dǎo)致腎膿腫。菌毛附著在宿主細(xì)胞內(nèi)特定受體結(jié)合位點(diǎn)感染。

2023/11/746病例314歲男性，嘔吐，腹部不適，腹瀉，非血性。3天前，參加學(xué)校旅行野餐，叉燒雞肉，馬鈴薯沙拉，烤豆，冰激凌。輕度腹部不適，間歇性痙攣性腹痛，水樣大便每天3至5次。沒有皮疹、尿痛或血尿，沒有寵物，否認(rèn)服用抗生素。39℃。下腹輕度壓痛。糞便潛血陰性。至少50個其他野餐學(xué)生也報告類似癥狀。2023/11/747鑒別診斷急性腹瀉。腹瀉是指不正常的頻率，量。急性腹瀉≤14天，持續(xù)腹瀉>14天；慢性腹瀉≥30天。細(xì)菌或病毒的胃和腸道發(fā)炎（腸胃炎），食物中毒，或者非感染性原因。野餐，傳染性原因如細(xì)菌或病毒性腸胃炎。菌：嗜水氣單胞菌、空腸彎曲桿菌。艱難梭菌、大腸桿菌、[ETEC，EHEC、EPEC，EIEC]、痢疾桿菌。霍亂弧菌、副溶血弧菌、耶爾森菌。病毒：腺病毒（腸道）、星狀病毒真菌和分枝桿菌：不引起急性腹瀉2023/11/748鑒別診斷炎癥性腸?。号Ｄ?、毒物、潰瘍性結(jié)腸炎風(fēng)險因素：病史線索。年齡，生活條件，地理位置，旅行史，飲食習(xí)慣，抗生素使用。零星案件/可能爆發(fā)。臨床線索

發(fā)燒/血性腹瀉？細(xì)菌性，沙門，痢疾，彎曲。

惡心嘔吐？病毒性，毒素/出血大腸埃希菌。

抗生素？艱難梭菌。

突然惡心嘔吐腹瀉發(fā)燒？金葡菌腸毒素。

2023/11/749實(shí)驗(yàn)室糞便常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)識別彎曲，沙門菌，痢疾桿菌，耶爾森菌，嗜水氣單胞菌。O157：H7和霍亂弧菌。O157：H7-毒素。毒素檢測例行-艱難梭菌。常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)沙門菌，痢疾桿菌，空腸彎曲菌是最可能原因。無血便-腸出血性大腸桿菌不太可能，如O157：H7。沒有特定抗病毒療法。輪狀病毒-嬰幼兒腹瀉，例行。冬季、清潔，干燥容器以緊身或螺紋瓶蓋蓋。標(biāo)本在運(yùn)輸過程中可在室溫下保持。2023/11/750結(jié)果選擇性培養(yǎng)基。MacConkey瓊脂-革蘭陰性桿菌。乳糖發(fā)酵能力。硫化氫-沙門菌。O157：H7型接種山梨醇-MacConkey瓊脂。山梨醇陰性隔夜培養(yǎng)，“可疑”菌落，生物化學(xué)。抗血清。藥敏試驗(yàn)。報告相關(guān)部門，發(fā)起流行病學(xué)調(diào)查。2023/11/751其他住院天數(shù)≥3。不可能沙門菌，痢疾桿菌或彎曲桿菌。艱難梭菌最有可能。檢查毒素。艱難梭菌相關(guān)性腹瀉（CDAD）可發(fā)展到偽膜結(jié)腸炎，嚴(yán)重的癥狀，可能需要手術(shù)干預(yù)。服用抗生素，是CDAD風(fēng)險因素。停止濫用抗生素，良好的手部衛(wèi)生和環(huán)境消毒控制和預(yù)防疾病傳染的感染。硫代硫酸鹽-枸櫞酸鹽-膽鹽-蔗糖(TCBS)瓊脂平板發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸，呈黃色2023/11/752病例421歲，水樣腹瀉6個星期，痙攣性腹痛。在過去2周，腹瀉帶血。在危地馬拉參加一個社區(qū)服務(wù)項(xiàng)目6個月。喝了水，吃了在當(dāng)?shù)厣鐓^(qū)的食物，不經(jīng)常飲用煮沸的水。否認(rèn)抗生素+，已采取瘧疾預(yù)防。營養(yǎng)良好，8-10磅重的體重?fù)p失。沒有發(fā)燒。血壓110/80mm汞柱，脈搏84/min和14/min呼吸，肺組織清晰。腹部檢查顯著局部壓痛到右上腹壓痛沒有反跳痛，但沒有肝腫大。2023/11/753鑒別診斷“旅行者腹瀉”是水樣腹瀉，到達(dá)一個新國家首周。伴隨著惡心，嘔吐，腹部痙攣和發(fā)燒，自限性，平均長度3-5天。欠發(fā)達(dá)國家、污染食物或水。感染的原因

菌：氣單胞菌?？漳c彎曲桿菌。腸毒素性大腸桿菌（ETEC），50％的病例類志賀沙門菌。痢疾桿菌?；【?。

病毒：輪狀病毒2023/11/754實(shí)驗(yàn)室病史。旅行史+腹部壓痛，體重減輕。病原：痢疾桿菌，沙門菌，彎曲菌，腸出血性大腸桿菌，EIEC，阿米巴。檢查：培養(yǎng)、寄生蟲，潛血試驗(yàn)。肝功能，腹部超聲或CT。

1。顯微鏡檢查。阿米巴包囊或滋養(yǎng)體2?？贵w檢測（血清）。陽性>90％的病人有侵入疾病?？贵w檢測診斷為阿米巴性肝膿腫。3。抗原檢測（糞便）。商業(yè)化，且測試可在2小時完成抗原。4。結(jié)腸鏡檢查。5。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。2023/11/755病例516歲男性發(fā)燒，嚴(yán)重頭痛，嘔吐，否認(rèn)服用任何違禁藥物或有任何運(yùn)動或外傷頭部受傷?；杌栌?，體溫40℃，血壓120/80毫米汞柱，脈搏80/min，呼吸14/分鐘。脖子僵硬，初步檢查皮膚沒有皮疹。

腰椎穿刺，分散的紅點(diǎn)（瘀斑）出現(xiàn)在背部，軀干和腿2023/11/756鑒別診斷脖子僵硬-腦膜炎。嘔吐是顱內(nèi)壓增高。菌：大腸桿菌和其他腸道革蘭陰性桿菌、流感嗜血桿菌、李斯特菌、腦膜炎奈瑟菌、金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌（B組鏈球菌）、葡萄球菌屬。病毒：蟲媒/腸/單純皰疹病毒（稀有）真菌和分枝桿菌造成慢性腦膜炎。2023/11/757鑒別診斷新生兒（嬰兒<6Weeks）無乳鏈球菌（B組鏈球菌），大腸桿菌和其他腸道革蘭氏陰性菌，李斯特菌，肺炎鏈球菌，腦膜炎奈瑟菌，流感嗜血桿菌。2個月到5歲肺炎鏈球菌，腦膜炎奈瑟菌，流感嗜血桿菌。5-16歲肺炎鏈球菌，腦膜炎奈瑟菌。成人肺炎鏈球菌，腦膜炎奈瑟菌，金黃色葡萄球菌，李斯特菌，流感嗜血桿菌（稀有原因）。老年人（>60歲）肺炎鏈球菌，腦膜炎奈瑟菌，大腸桿菌和其他腸道革蘭氏陰性菌;李斯特菌，金黃色葡萄球菌，鏈球菌，B組相比，其他流感嗜血（稀有）。免疫功能低下患者：任何生物體有可能成為病原體，不應(yīng)被視為污染物。2023/11/758實(shí)驗(yàn)室腦脊液標(biāo)本細(xì)胞計數(shù)，葡萄糖，蛋白質(zhì)分析，腦脊液革蘭染色和細(xì)菌及病毒培養(yǎng)至關(guān)重要。經(jīng)驗(yàn)抗生素已啟動。治療腦膜炎不應(yīng)因診斷而延遲，高發(fā)病率和死亡率。細(xì)菌革蘭染色和培養(yǎng)，腦脊液葡萄糖和蛋白質(zhì)分析，病毒培養(yǎng)或保存在-70?未來使用腦脊液應(yīng)迅速運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室（<15分），盡快測試。細(xì)菌，真菌或寄生蟲測試在運(yùn)輸過程中應(yīng)保持≤2小時。病毒性冰或冷藏。離心用于革蘭染色和培養(yǎng)。2023/11/759結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦脊液白細(xì)胞；細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外革蘭陰性雙球菌。腦膜炎奈瑟菌，C組，最常見的血清型年齡較大的兒童，青少年和成年人。抗生素敏感性測試沒有進(jìn)行。應(yīng)定期檢測β-內(nèi)酰胺酶。2023/11/760標(biāo)本采集腰椎穿刺2023/11/761標(biāo)本采集62腦脊液壓力臥位0.78～1.76kpa，兒童0.4～1.0kpa。腦組織體積或腦脊液量增加，腦脊液壓力升高。壓力測定后收集于3個無菌試管中，第一管細(xì)菌培養(yǎng)第二管免疫學(xué)化學(xué)分析第三管一般性狀及鏡檢。必須立即送驗(yàn)及時檢查，2023/11/76263一般實(shí)驗(yàn)室檢查外觀、有形成分、細(xì)菌直接圖片、蛋白定性定量、葡萄糖定量、氯化物測定。影像學(xué)技術(shù)2023/11/763一般實(shí)驗(yàn)室檢查642023/11/764病例6：性病與性傳播疾病性行為傳染，具有明顯的生殖器官損害癥狀。1975年WHO決定，將各種可通過性行為或類似性行為傳播的疾病，統(tǒng)稱為“性傳播疾病”（SexuallytransmitteddiseasesSTD）中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的性病防治管理辦法規(guī)定：

法定性?。毫懿　⒚范?、艾滋病監(jiān)測性?。悍橇芫阅虻姥住④浵吗?、性病性淋巴肉芽腫、尖銳濕疣、生殖器皰疹廣為流傳，社會病。傳播方式：性行為非性行為接觸血源胎盤產(chǎn)道醫(yī)源性其他途徑2023/11/765患者，男，38歲，因頭痛三月，加重伴右側(cè)肢體乏力三天入院。患者于三個月前在外地開會時感頭痛，似于前額部明顯，不劇能忍，無惡心、嘔吐，無發(fā)熱咳嗽，無胸悶胸痛，未予重視，也未求診，當(dāng)晚未參加會議活動，休息后第二天感覺頭痛緩解。此后近三月內(nèi)間歇發(fā)作五六次，每次持續(xù)約一天到二天自行緩解，只有一次較劇伴輕微惡心自服散利痛一顆后緩解，仍一直無發(fā)熱咳嗽等表現(xiàn)。三天前與朋友們玩牌時，感頭痛復(fù)發(fā)，經(jīng)休息后不能緩解，同時出現(xiàn)右側(cè)肢體乏力，右手明顯感到握力減弱。至今未見明顯緩解，來院就診。2023/11/766患者平時體健，否認(rèn)高血壓、糖尿病、無肝炎結(jié)核史，煙一天20支左右，酒少量。平時常有熬夜史，平時也常有頭痛史數(shù)年。入院檢查：體檢神志清，僅右上下肢肌力四級，病理征未引出，頸抵抗可疑，其他心肝肺腎檢查均無陽性體征。血尿糞三大常規(guī)、肝腎功能、血脂血糖正常，心電圖、胸片、心超、腹部B超正常，腦CT示左頂葉低密度病灶，注入造影劑后有環(huán)形增強(qiáng)，腦MRI示同部位占位，但提示炎癥。2023/11/767該病人入院三天后病情未見明顯緩解,作為疑難病全院討論,主要考慮如下:

1、腦膿腫：但膿腫從何而來，沒有炎癥表現(xiàn)，僅CT提示，依據(jù)不足。

2、腦腫瘤：結(jié)合患者年齡，目前不能排除，但影象學(xué)沒有明確支持。

3、腦囊蟲病：目前沒有依據(jù)，但同樣也不能排除。

4、結(jié)核病：患者結(jié)核毒血癥狀不明顯，其他部位也未發(fā)現(xiàn)。

5、其他未明病因的感染性疾病。2023/11/768臨床表現(xiàn)異常太少，診斷不能明確，在與家屬溝通時，家屬表示：不管他了，誰叫他這么花心。提示是不是該查STD方面的問題，如梅毒和艾滋病，第二天梅毒血清試驗(yàn)陽性，但這與顱內(nèi)病變有沒有關(guān)系呢，當(dāng)天下午做了腰穿，確定腦脊液VDRL陽性，至此，神經(jīng)型梅毒診斷成立，即與大劑量青霉素丙磺舒治療，第三天下午，頭痛明顯緩解，第四天開始肢體肌力有所恢復(fù)，一周后感覺右側(cè)肢體乏力明顯好轉(zhuǎn)，不再頭痛，復(fù)查CT，左頂葉低密度灶明顯縮小。繼予上述治療二十天后腦CT未見病灶，頭痛及肢體癥狀消失，痊愈出院。2023/11/769蒼白密螺旋體蒼白亞種（梅毒螺旋體）

T.pallidum

subsp.pallidum梵高，尼采，叔本華，貝多芬、莫扎特、舒伯特、福樓拜、莫泊桑、林肯、載淳法國人叫它“那不勒斯病”，德國人和波蘭人叫它“法國病”，俄羅斯人叫它“波蘭病”，土耳其人和阿拉伯人叫它“基督徒病”，印度人叫他“葡萄牙病”，嶺南以北的中國人叫他“廣東瘡”，日本人則叫它“中國瘡”。2023/11/770梅毒螺旋體梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產(chǎn)生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。在STD中雖發(fā)病率不高，但危險性較大。蒼白螺旋體：是一種小而纖細(xì)，呈螺旋狀的微生物。煮沸，干燥，肥皂及一般消毒劑勻可將其殺滅。根據(jù)傳染途徑，可將梅毒分為獲得性梅毒（后天梅毒）和胎傳梅毒（失天梅毒）；根據(jù)病情發(fā)展，可分為早期梅毒和晚期梅毒。

一般認(rèn)為梅毒感染后1y內(nèi)，包括梅毒潛伏、一期梅毒、二期梅毒統(tǒng)稱為早期梅毒。

2023/11/771臨床表現(xiàn)一期梅毒主要癥狀為硬下疳。通常在螺旋體侵入人體后10一90天，平均3周。二期梅毒系一期梅毒未治療或治療不規(guī)范，梅毒螺旋體由淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血液循環(huán)大量繁殖播散而出現(xiàn)的癥狀。梅毒疹可自行消退。三期梅毒：2一4年后，約1／3患者發(fā)生三期梅毒?？汕址竷?nèi)臟，特別是心血管及中樞系統(tǒng)等重要器官，危及生命。主動脈瘤破裂常是患者猝死的主要原因2023/11/772實(shí)驗(yàn)室1、暗視野顯微鏡檢查/DFA-TP/銀染色2、非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)（1）VDRL(性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn))：需滅活（2）USR(不加熱的血清反應(yīng)素試驗(yàn))

（3）RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn))3、梅毒螺旋體血清試驗(yàn)（1）TPHA(梅毒螺旋體血凝試驗(yàn))1966年（2）FT---ABS(熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn))1963年4、腦脊液檢查：對神經(jīng)梅毒的診斷，治療及預(yù)后有幫助。5．PCR檢測梅毒螺旋體2023/11/773病例7患者,女性,30歲,因”乏力,納差,腹脹,尿黃1個多月”入院.患者于1個多月前無明顯誘因下開始反復(fù)乏力,納差,腹脹,尿黃,當(dāng)時無畏寒,發(fā)熱,無腹痛腹瀉,無惡心嘔吐,無反酸噯氣.既往史:3年前因上消化道出血曾入住本院,輸血及血漿1000ML，入院查體:T36.8C,P76次/分,R20/分,BP110/80MMHG.神志清楚,精神差,臉色黃,鞏膜輕度黃染,蜘蛛痣(+),心肺未見異常,肝肋下2厘米,有觸及痛,脾肋下未觸及.輔助檢查:RBC4.56x1012/L,HB110g/L,WBC8x109/L.尿常規(guī):BIL(+),URO(+),余正常.大便常規(guī)正常.

肝功能:血ALT182U/L,AST102U/L,

2023/11/774診斷思路1、主訴癥狀：近期出現(xiàn)的無其他原因可解釋的乏力,納差,腹脹,尿黃1月余。----懷疑尿黃是黃疸引起。做尿常規(guī)確診。無畏寒，發(fā)熱，無腹痛腹瀉，無惡心嘔吐，無反酸噯氣----排除消化道疾病。2、體格檢查。異常體征：A.肝腫大，伴有觸痛或叩痛。

B.臉色黃，鞏膜黃染。----有黃疸癥狀，懷疑肝炎。3、流行病學(xué)：是否曾接受過血及血制品或曾有其他醫(yī)源性感染，生活中的密切接觸，尤其是性接觸。----3年前曾接受輸血，懷疑從輸血途徑感染乙肝病毒或丙肝病毒。4、懷疑患者病毒性肝炎，進(jìn)行微生物學(xué)檢查：尿常規(guī):BIL(+),URO(+)；----確診黃疸。肝功能:ALT182U/L,AST102U/L---升高2023/11/775病毒學(xué)檢查：HBsAg(+),HBeAg(+),抗HBs(-),抗HBe(-),HBVDNA(+).抗HCV(+),RNA定量為3×107綜上推斷患者感染類型為：慢性乙型病毒性肝炎合并丙型病毒性肝炎抗原抗體系統(tǒng)：

HBsAg與抗-HBs；HBeAg與抗-HBeHBc（HBcAg）與抗HBcAgELISA核酸檢測2023/11/776virusload–NAamplification不同臨床樣本的檢驗(yàn)程序血液樣本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)、真菌學(xué)檢驗(yàn)、病毒學(xué)檢驗(yàn)?zāi)X脊液細(xì)菌真菌學(xué)檢驗(yàn)體液樣本檢驗(yàn)?zāi)蛞簶颖緳z驗(yàn)呼吸道樣本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)、真菌學(xué)檢驗(yàn)胃腸道樣本檢驗(yàn)生殖道樣本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)、病毒學(xué)檢驗(yàn)皮膚軟組織樣本檢驗(yàn)2023/11/778血液樣本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)2023/11/779血液樣本真菌學(xué)檢驗(yàn)2023/11/780血液樣本病毒學(xué)檢驗(yàn)2023/11/781腦脊液細(xì)菌真菌檢驗(yàn)2023/11/782體液檢驗(yàn)2023/11/783尿液檢驗(yàn)2023/11/784呼吸道細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)2023/11/785呼吸道真菌學(xué)檢驗(yàn)2023/11/786胃腸道樣本檢驗(yàn)2023/11/787生殖道樣本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)2023/11/788生殖道樣本病毒學(xué)檢驗(yàn)2023/11/789皮膚軟組織樣本檢驗(yàn)2023/11/790四、藥敏試驗(yàn)1、指導(dǎo)醫(yī)生及有關(guān)專業(yè)人員合理用藥2、指導(dǎo)藥物學(xué)家研究開發(fā)新藥類型抗菌模式作用靶位作用機(jī)制Ⅰ抑菌（bacteriostatic）細(xì)胞質(zhì)可逆性抑制：1)

轉(zhuǎn)錄2)

翻譯3)細(xì)胞代謝Ⅱ殺菌（bactericidal）染色體不可逆地阻遏基因復(fù)制Ⅲ溶菌（bacteriolytic）細(xì)胞壁使細(xì)胞溶解2023/11/791①可預(yù)測抗菌治療的效果，“敏感”治療可能有效；“耐藥”肯定失??；②指導(dǎo)醫(yī)生選擇使用抗生素，AST的結(jié)果為“耐藥”，即應(yīng)更換藥物；③提供所選擇藥物的依據(jù)；④監(jiān)測耐藥性，分析耐藥菌變遷，掌握耐藥菌感染病流行病學(xué)，控制和預(yù)防耐藥菌感染發(fā)生和流行。藥敏試驗(yàn)意義2023/11/792抗菌藥物選擇A、B、C、U四組,A組為常規(guī)首選藥敏試驗(yàn)藥物,B組為臨床使用主要抗菌藥：①對A組同類抗生素耐藥；②標(biāo)本來源不同，如三代頭孢菌素使用于腦脊液中的腸桿菌；③多種細(xì)菌感染；④多部位感染；⑤感染流行的控制；⑤對A組抗生素過敏、耐受或無反應(yīng)。C組藥物用于對A組藥物耐藥的流行菌株或?qū)組藥物過敏的病人和某些不常見細(xì)菌（如腸外分離的沙門菌屬或耐萬古霉素腸球菌）。U組僅用于尿道中分離的細(xì)菌。2023/11/793藥敏試驗(yàn)方法：稀釋法瓊脂選擇法是將藥物混勻于瓊脂培養(yǎng)基中，配制含不同濃度藥物平板，使用多頭接種器接種細(xì)菌，經(jīng)孵育后觀察細(xì)菌生長情況，以抑制細(xì)菌生長的瓊脂平板所含藥物濃度測得MIC。結(jié)果判斷將平板置于暗色、無反光表面上判斷試驗(yàn)終點(diǎn)，以抑制細(xì)菌生長的藥物稀釋度為終點(diǎn)濃度（磺胺可見少許散在細(xì)菌生長）。試驗(yàn)菌的結(jié)果報告可用MIC（μg/ml）或用敏感（S）、中介（I）和耐藥（R）報告。2023/11/794宏量稀釋法Minimalinhibitoryconcentration(MIC)Referencemethod.Addstandardinoculumtodilutionsofantibiotic.Incubateovernight.MICislowestconcentrationthatinhibitsgrowth(canalsobeperformedbyagardilution).Interpretation(SorR)isbasedonachievabledruglevels104cfu4210.50.250.120mg/ml2023/11/795微量稀釋法2023/11/796藥敏試驗(yàn)方法：擴(kuò)散法將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。1．抗菌藥物紙片選擇直徑為6．35mm，吸水量為20μl的專用藥敏紙片用逐片加樣或浸泡方法使每片含藥量達(dá)規(guī)定所示。含藥紙片密封貯存2℃－8℃

且不超過1周。2．培養(yǎng)基水解酪蛋白（MH）培養(yǎng)基是兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，4℃保存。2023/11/797（三）細(xì)菌接種用0．5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌液濃度，在瓊脂表面均勻涂片,在15min內(nèi)接種完畢。將含藥紙片緊貼于瓊脂表面,35℃孵育18h后閱讀結(jié)果。（四）結(jié)果判斷和報告用精確度為1mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)，作出“敏感”,“耐藥”和“中介”的判斷。2023/11/7982023/11/7992023/11/7100藥敏試驗(yàn)方法：E試驗(yàn)E試條是一條5mm×50mm的無孔試劑載體，一面固定有預(yù)先制備的，濃度呈連續(xù)指數(shù)增長稀釋抗菌藥，另一面有讀數(shù)和判別的刻度。將E試條放在細(xì)菌接種過的瓊脂平板上孵育過夜，圍繞試條明顯可見橢圓形抑菌圈，圈的邊緣與試條交點(diǎn)的刻度濃度即為抗菌藥抑制細(xì)菌的特定濃度，又稱抑制濃度（IC），它與MIC呈高度相關(guān)。2023/11/7101藥敏試驗(yàn)結(jié)果解釋“敏感”即表示測試菌可被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制；“耐藥”即表示測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效。“中介”者提示該細(xì)菌對常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。2023/11/7102聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)?zāi)康脑谟冢孩僦委熁旌闲愿腥?；②預(yù)防或推遲細(xì)菌抗生素耐藥性的發(fā)生；③聯(lián)合用藥可以減少劑量以避免達(dá)到毒性劑量；④聯(lián)合用藥比出現(xiàn)4種結(jié)果：①無關(guān)作用小，兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨(dú)活性；②桔抗作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于單獨(dú)抗菌活性；③累加作用，兩種藥物聯(lián)合作用時的活性等于兩種單獨(dú)抗菌活性之和；④協(xié)同作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨(dú)作用的總和。2023/11/7103（二）聯(lián)合抑菌試驗(yàn)棋盤稀釋法是常用的定量方法，首先分別測定擬聯(lián)合的抗菌