HIV抗體檢測方法(2016年10月)

HIV抗體檢測十堰市疾病預(yù)防控制中心劉經(jīng)鳳2016年10月規(guī)范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》（中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，

WS293-有效版本）《艾滋病病毒抗體快速檢測技術(shù)手冊》（中國疾病預(yù)防控制中心，2011年版）HIV抗體檢測實(shí)驗(yàn)室要求

應(yīng)符合國家對實(shí)驗(yàn)室生物安全的有關(guān)要求

實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定HIV抗體檢測的目的和要點(diǎn)HIV抗體檢測的目的HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。HIV抗體檢測的要點(diǎn)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。結(jié)果判定以試劑盒說明書為標(biāo)準(zhǔn)。HIV抗體檢測的目的和要點(diǎn)篩查試驗(yàn)有反應(yīng)，須作補(bǔ)充試驗(yàn)。

補(bǔ)充試驗(yàn)是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。補(bǔ)充試驗(yàn)包括抗體確證試驗(yàn)（免疫印跡試驗(yàn)，條帶/線性免疫試驗(yàn)，特定條件*下的替代檢測，免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)）和核酸試驗(yàn)（核酸定性和核酸定量試驗(yàn)）。HIV抗體檢測的目的和要點(diǎn)篩查試驗(yàn)無反應(yīng)，不應(yīng)做補(bǔ)充試驗(yàn)。對篩查及補(bǔ)充試驗(yàn)對象均應(yīng)做好咨詢工作。常規(guī)HIV抗體檢測方法試劑和樣品試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的方法及試劑。樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（CIA/IFA）

：采用發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀

測定結(jié)果快速檢測（RT）及其它檢測試驗(yàn)

(1)明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)

(2)免疫滲濾試驗(yàn)(3)免疫層析試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

HIV抗體檢測試劑（第三代）：檢測HIV-1/2抗體

HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑（第四代）：可同時(shí)檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體用酶標(biāo)儀測定結(jié)果

有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定ELISA試驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）測定的重復(fù)性差1.加樣本及試劑量不準(zhǔn)2.加樣過快，孔間發(fā)生污染3.加錯樣本4.加樣本和試劑時(shí)，加在孔壁上部非包被區(qū)5.溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致6.酶標(biāo)儀濾光片問題ELISA試驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）白板（陽性對照不顯色）1.漏加酶結(jié)合物2.洗液配制問題，量筒不干凈含酶抑制物3.漏加顯色劑A或B4.終止液當(dāng)顯色劑使用全部板孔都有顯色1.洗板不干凈2.加底物的吸頭被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于儀器或加樣頭造成的交叉污染ELISA測定中的干擾因素內(nèi)源性干擾因素外源性干擾因素內(nèi)源性干擾因素

人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗體、自身抗體、溶菌酶、磷脂、藥物小分子等外源性干擾因素

常常是由于血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、凝集不全、反復(fù)凍融等酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確性高、價(jià)格低廉、判斷結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)客觀、結(jié)果便于記錄和保存

用途：流行病學(xué)監(jiān)測及臨床大量標(biāo)本的檢測化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)采用發(fā)光或熒光底物既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體

酶或熒光標(biāo)記的HIV抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物用發(fā)光儀或熒光儀測定結(jié)果全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果快速檢測（RT）及其它檢測試驗(yàn)質(zhì)控病人條條快速檢測（RT）及其它檢測試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn):快速單份標(biāo)本檢測不需額外試劑或設(shè)備操作簡便缺點(diǎn):肉眼判斷較主觀價(jià)格較貴結(jié)果不易保存（建議拍照保存）HIV篩查試劑的選擇檢測目的實(shí)驗(yàn)設(shè)施條件價(jià)格

其他：檢測數(shù)量、標(biāo)本用量、復(fù)檢問題、習(xí)慣等等HIV抗體篩查結(jié)果的意義及處理未感染或暴露于HIV病毒注意窗口期感染或暴露于HIV病毒非特異性反應(yīng)陰性：真陰性假陰性陽性：真陽性假陽性操作失誤

處理：篩查試驗(yàn)無反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測均無反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)”；報(bào)告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報(bào)告。HIV抗體確證試驗(yàn)確證試驗(yàn)的試劑：必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。確證樣品：可采用血清、血漿、濾紙干血斑確證試驗(yàn)方法：免疫印跡試驗(yàn)(WB)和條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA）。國內(nèi)常用的確證試驗(yàn)方法是WB和RIBA。HIV確證試劑產(chǎn)品公司試劑原理新加坡MP亞太私人醫(yī)藥有限公司人類免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗體檢測試劑盒（免疫印跡法）WB杭州澳亞生物技術(shù)有限公司人類免疫缺陷病毒抗體確證試劑盒（免疫印跡法）WB上海英旻泰生物技術(shù)有限公司人類免疫缺陷病毒(HIV

1+2型)抗體檢測試劑盒(免疫印跡法)WB北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司人類免疫缺陷病毒(HIV

1+2型)抗體檢測試劑盒(重組免疫印跡法)RIBAAbbottSlot

immunoblot

stripRIBAInnogeneticsINNO-LIA

HIV

I/II

ScoreRIBAHIV抗體WB確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（MP）a

bcdgp160

gp120p66p55

p51gp41p39p31P24p17血清對照

HIV-2特異帶a強(qiáng)陽性對照（HIV-1和HIV-2）b弱陽性對照（HIV-1）c陰性對照d典型的HIV-2血清陽性反應(yīng)MP確證試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)：WB不確定結(jié)果

原因：HIV感染

期、HIV感染晚期、非特異性反應(yīng)、污染

依據(jù)：流行病學(xué)資料；臨床表現(xiàn)；WB條帶等

處理：核酸檢測、2-4周后隨訪、帶型消失或無進(jìn)展、出現(xiàn)新帶型、重采血HIV抗體

母親HIV抗體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒，出生時(shí)新生兒和嬰兒早期抗體陽性，不一定是感染

出生時(shí)母親的抗體，80~90%在生后9~12個月消失，出生后18個月基本上全部消失

18個月后兒童HIV抗體仍然陽性，視為自身感染產(chǎn)生的抗體18個月以下嬰幼兒的HIV診斷嬰幼兒HIV感染的抗體檢測適用于：HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒；

母親HIV感染狀態(tài)不詳，兒童出現(xiàn)HIV相關(guān)臨床表現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染的兒童。嬰兒12個月時(shí)進(jìn)行HIV抗體檢測陰性排除感染，納入正常兒童保??；陽性者繼續(xù)追蹤隨訪，至18個月再次進(jìn)行HIV抗體檢測，結(jié)果陰性排除感染。結(jié)果報(bào)告篩查報(bào)告HIV抗體篩查試驗(yàn)報(bào)告使用附表1（HIV抗體篩查檢測報(bào)告）。篩查試驗(yàn)無反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測均無反應(yīng)報(bào)告為

“HIV抗體陰性”，結(jié)果報(bào)告

復(fù)檢檢測均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)”；報(bào)告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報(bào)告。

HIV抗體篩查報(bào)告需由一名檢驗(yàn)人員和一名審核者簽字。結(jié)果報(bào)告確證報(bào)告

符合HIV-1抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告

“HIV-1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報(bào)告。

符合HIV-2抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告

“HIV-2抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報(bào)告。結(jié)果報(bào)告

符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進(jìn)一步做HIV核酸檢測或2-4周后隨訪，盡早明確診斷。

符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告

“HIV抗體不確定”，在備注中應(yīng)注明

“2-4周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測。

HIV抗體確證檢測報(bào)告應(yīng)在收到樣品后的

7個工作日內(nèi)發(fā)出。質(zhì)量控制

酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制試劑盒內(nèi)部對照室內(nèi)質(zhì)控品Levey-Jennings質(zhì)控圖室內(nèi)質(zhì)控其他方式—“即刻法”質(zhì)控質(zhì)量控制

快速法抗體檢測質(zhì)控試劑內(nèi)對照室內(nèi)質(zhì)控品對照開展抗體相關(guān)檢測的實(shí)驗(yàn)室須參加有資質(zhì)機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證，或室間比對。艾滋病抗體快速檢測質(zhì)量控制依據(jù)艾滋病病毒抗體快速檢測技術(shù)手冊（2011年版）第8章艾滋病抗體快速檢測質(zhì)量控制檢測前質(zhì)控：樣品要求唯一編號，檢測前應(yīng)仔細(xì)核對。檢測點(diǎn)的環(huán)境溫濕度應(yīng)符合檢測試劑盒說明書的要求，并做好相關(guān)的記錄。保證試劑在有效期內(nèi)使用。艾滋病抗體快速檢測質(zhì)量控制檢測過程質(zhì)控：做好實(shí)驗(yàn)過程中相關(guān)信息的記錄：樣品、檢測試劑、操 作者等。保存在冰箱的試劑需在室溫平衡后再使用；剩余的試劑 條應(yīng)立即封存冷藏；室溫性下保存的試劑也應(yīng)避免高 溫。按照試劑廠家提供的說明書嚴(yán)格操作。（時(shí)間）判定結(jié)果時(shí)，質(zhì)控帶必須出現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)才能成立，否則需 要重做并查找原因。艾滋病抗體快速檢測質(zhì)量控制檢測后質(zhì)控：判讀結(jié)果時(shí)應(yīng)保證光線充足。對難以判讀的條帶建議又兩人判讀。復(fù)核樣品編號后填寫實(shí)驗(yàn)結(jié)果。清潔并處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。發(fā)放規(guī)范的檢測報(bào)告，整理實(shí)驗(yàn)過程中的各項(xiàng)記錄存檔。試劑-1有反應(yīng)無反應(yīng)試劑1雙份或雙孔檢測或兩種試劑均有反應(yīng)一有反應(yīng),一無反應(yīng)均無反應(yīng)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)報(bào)告HIV抗體陰性圖2使用抗體檢測試劑的檢測流程陽性免疫印跡試驗(yàn)（WB/RIBA）陰性不確定核酸試驗(yàn)或2-4周后隨訪出現(xiàn)HIV-2指示帶根據(jù)情況進(jìn)一步檢測HIV-2報(bào)告HIV-1抗體陰性報(bào)告HIV-1抗體陽性圖5免疫印跡試劑（WB/RIBA）試驗(yàn)流程HIV1/2抗體或抗原抗體聯(lián)合檢測試驗(yàn)無反應(yīng)有反應(yīng)方案1相同樣本相同試驗(yàn)雙孔復(fù)試方案2復(fù)試結(jié)果無反應(yīng)

-,-復(fù)試結(jié)果有反應(yīng)-,+；+,+陰性報(bào)告血液檢測合格反應(yīng)性報(bào)告血液檢測不合格。

如需進(jìn)一步檢測，參照臨床診斷檢

測策略圖9血液抗原抗體篩查